CN115282221A - 一种治疗特发性肺纤维化的中药组合物及其应用 - Google Patents
一种治疗特发性肺纤维化的中药组合物及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115282221A CN115282221A CN202210881713.8A CN202210881713A CN115282221A CN 115282221 A CN115282221 A CN 115282221A CN 202210881713 A CN202210881713 A CN 202210881713A CN 115282221 A CN115282221 A CN 115282221A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- parts
- chinese medicine
- traditional chinese
- group
- medicine composition
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
- A61K36/481—Astragalus (milkvetch)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
- A61K36/07—Basidiomycota, e.g. Cryptococcus
- A61K36/076—Poria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/25—Araliaceae (Ginseng family), e.g. ivy, aralia, schefflera or tetrapanax
- A61K36/258—Panax (ginseng)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/28—Asteraceae or Compositae (Aster or Sunflower family), e.g. chamomile, feverfew, yarrow or echinacea
- A61K36/284—Atractylodes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/34—Campanulaceae (Bellflower family)
- A61K36/344—Codonopsis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/42—Cucurbitaceae (Cucumber family)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
- A61K36/484—Glycyrrhiza (licorice)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/75—Rutaceae (Rue family)
- A61K36/752—Citrus, e.g. lime, orange or lemon
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
- A61K36/888—Araceae (Arum family), e.g. caladium, calla lily or skunk cabbage
- A61K36/8888—Pinellia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Botany (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了一种治疗特发性肺纤维化的中药组合物,是由以下重量份的组分制成:黄芪10~30份、党参10~30份、白术6~15份、茯苓10~30份、生甘草6~15份、陈皮3~9份、法半夏6~15份、橘络6~15份、丝瓜络3~9份、三七1~3份。本发明的中药组合物具有健脾益气、化痰通络的功效。试验证明,本发明的中药组合物具有抗肺纤维化的作用,可用于治疗特发性肺纤维化,疗效显著。
Description
技术领域
本发明属于中药组合物技术领域,具体地说,涉及一种治疗特发性肺纤维化的中药组合物及其应用。
背景技术
肺纤维化是以成纤维细胞增殖及大量细胞外基质聚集并伴炎症损伤、组织结构破坏为特征的一大类肺疾病的终末期改变,也就是正常的肺泡组织被损坏后经过异常修复导致结构异常(疤痕形成)。绝大部分肺纤维化病人病因不明(特发性),这组疾病称为特发性间质性肺炎(IIP),是间质性肺病中一大类。而特发性间质性肺炎(IIP)中最常见的以肺纤维化病变为主要表现形式的疾病类型为特发性肺纤维化(IPF),是一种能导致肺功能进行性丧失的严重的间质性肺疾病。肺纤维化严重影响人体呼吸功能,表现为干咳、进行性呼吸困难(自觉气不够用),且随着病情和肺部损伤的加重,患者呼吸功能不断恶化。特发性肺纤维化发病率和死亡率逐年增加,诊断后的平均生存期仅2.8年,死亡率高于大多数肿瘤,被称为一种“类肿瘤疾病”。
特发性肺纤维化(Idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)又称为隐源性致纤维化性肺泡炎(Cryptogenic fibrosing alveolitis,CFA)是一种慢性、进行性、纤维化性间质性疾病,病变部位局限在肺脏。该病病理特征主要表现为成纤维细胞灶(Fibroblasticfoci)的出现导致大量细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)沉积,胶原积聚,肺泡结构破坏,最终导致正常肺组织结构破坏。临床表现为进行性呼吸困难并伴有刺激性干咳,肺功能为限制性通气障碍,病情一般持续恶化,最终因呼吸衰竭而死亡(孔勤,陈民利.特发性肺纤维化发病机制的研究进展.中国比较医学杂志.2012,22(8):74-80.)。
关于特发性肺纤维化的确切病因及发病机制,目前尚不清楚。虽然已有多种药物开展了针对特发性肺纤维化的基础及临床试验,但治疗效果并不理想。兼之该病病因及发病机制目前还无法确定,诊断受到限制并缺乏有效的药物,导致特发性肺纤维化患者预后不佳。
特发性肺纤维化尚无有效的治疗药物,早期用于治疗肺纤维化的糖皮质激素、N-乙酰半胱氨酸和环磷酰胺等药物,因疗效差、副作用大,已被否定。新药尼达尼布及吡非尼酮仅能延缓用力肺活量(forced vital capacity,FVC)下降速率,且价格昂贵,有一定的副作用。因此,急需发现一种有效的能够治疗特发性肺纤维化的药物。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗特发性肺纤维化的中药组合物。
本发明的另一个目的是提供一种所述中药组合物在制备治疗特发性肺纤维化的药物中的应用。
为了实现上述目的,本发明采用的技术方案如下:
本发明的第一方面提供了一种治疗特发性肺纤维化的中药组合物,是由以下重量份的组分制成:黄芪10~30份、党参10~30份、白术6~15份、茯苓10~30份、生甘草6~15份、陈皮3~9份、法半夏6~15份、橘络6~15份、丝瓜络3~9份、三七1~3份。
较优选的,所述治疗特发性肺纤维化的中药组合物是由以下重量份的组分制成:黄芪15份、党参15份、白术9份、茯苓15份、生甘草9份、陈皮6份、法半夏9份、橘络9份、丝瓜络6份、三七2份。
较优选的,所述治疗特发性肺纤维化的中药组合物是由以下重量份的组分制成:黄芪10份、党参10份、白术6份、茯苓10份、生甘草6份、陈皮3份、法半夏6份、橘络6份、丝瓜络3份、三七1份。
较优选的,所述治疗特发性肺纤维化的中药组合物是由以下重量份的组分制成:黄芪30份、党参30份、白术15份、茯苓30份、生甘草15份、陈皮9份、法半夏15份、橘络15份、丝瓜络9份、三七3份。
较优选的,所述治疗特发性肺纤维化的中药组合物是由以下重量份的组分制成:黄芪20份、党参20份、白术10份、茯苓20份、生甘草10份、陈皮6份、法半夏10份、橘络10份、丝瓜络6份、三七2份。
较优选的,所述治疗特发性肺纤维化的中药组合物是由以下重量份的组分制成:黄芪30份、党参30份、白术15份、茯苓30份、生甘草15份、陈皮9份、法半夏15份、橘络6份、丝瓜络3份、三七1份。
本发明的治疗特发性肺纤维化的中药组合物采用本领域常规制备方法制备成药剂学上所说常见剂型即可,如汤剂、颗粒剂、片剂、冲剂、散剂、胶囊剂、膏剂、口服液或滴丸剂等。
本发明的第二方面提供了一种所述中药组合物在制备治疗特发性肺纤维化的药物中的应用。
临床研究表明本发明的治疗特发性肺纤维化的中药组合物是中医临床治疗脾虚络瘀型特发性肺纤维化的有效经验方,基础研究发现该中药组合物可减轻模型大鼠肺纤维化程度,其机制可能与抗氧化、调节细胞因子、促进自噬有关。本发明的治疗特发性肺纤维化的中药组合物中,党参益气生津、补益中气,黄芪补中州以资脾肺、宣养肺气以实卫固表,两者同为君药;白术健脾益气、燥湿和中,茯苓健脾补中渗湿,橘络、三七通畅气络血络,共为臣药;法半夏、陈皮理气健脾、燥湿化痰,丝瓜络通胸胁风湿痹阻,三者为佐药;生甘草补脾益气、调和诸药,为使药。诸药合用,共奏健脾益气、化痰通络之功。
本发明的组方中各项药物的性味、归经和功用及常用剂量如下:
党参:性味甘,平;归脾、肺经;补中益气,生津养血;常用剂量10-30g。
黄芪:性味甘,微温;归脾、肺经;补气升阳,益卫固表;常用剂量10-30g。
白术:性味苦、甘,温;归脾、胃经;补气健脾,渗湿利水;常用剂量10-15g。
茯苓:性味甘,微温;归脾、肺经;利水渗湿,健脾安神;常用剂量10-30g。
橘络:性味甘、苦,平;归肝、肺经;行气通络,化痰止咳;常用剂量3-6g。
三七:性味甘、微苦,温;归肝、胃经;化瘀止血,消肿定痛;常用剂量3-10g。
法半夏:性味辛,温;归脾、胃、肺经;燥湿化痰,降逆止呕;常用剂量3-10g。
陈皮:性味辛、苦,温;归肝、胃经;理气健脾,燥湿化痰;常用剂量3-10g。
丝瓜络:性味甘,平;归肺、胃、肝经;祛风通络,化痰解毒;常用剂量6-10g。
生甘草:性味甘,平;归心、肺、脾、胃经;益气补中,清热解毒;常用剂量3-10g。
由于采用上述技术方案,本发明具有以下优点和有益效果:
本发明的中药组合物具有健脾益气、化痰通络的功效。试验证明,本发明的中药组合物具有抗肺纤维化的作用,可用于治疗特发性肺纤维化,疗效显著。
本发明的中药组合物临床治疗脾虚络瘀型IPF能使中医证候积分减少9.77(P<0.001),且优于NAC(P<0.05);减少喘息积分(P<0.05)、减少咳嗽积分(P<0.01);减少HRCT总评分(P<0.05),使6MWT增加4.62m(P<0.05);减少SGRQ总分的疗效优于NAC(P<0.05);使SGRQ单项症状评分减少2.45(P<0.05);降低TNF-α(P<0.01),且优于NAC(P<0.05);本发明的中药组合物中医临床总有效率为73.08%。
动物研究发现,与模型组相比,本发明的中药组合物高剂量组肺系数减小(P<0.05),本发明的中药组合物各组病理状态均改善,本发明的中药组合物中、高剂量组HYP、MDA和MPO降低,SOD、GSH、IFN-γ升高(P<0.001,P<0.01,P<0.05),本发明的中药组合物各组IL-6、IL-17、TNF-α降低(P<0.001,P<0.01,P<0.05),本发明的中药组合物中剂量组p62降低(P<0.05),本发明的中药组合物高剂量组becline-1升高(P<0.05)。
附图说明
图1是特发性肺纤维化病人的临床研究流程示意图。
图2是两组治疗前后中医证候积分比较(x±s)的示意图,其中,A是两组中医证候积分治疗前后比较示意图;B是两组中医证候积分治疗前后差值比较示意图。
图3是各组大鼠肺组织HE染色结果示意图(×400)。
图4是各组大鼠肺组织Masson染色(×400)结果示意图。
图5是Western blot测定各组大鼠肺组织p62、becline-1表达条带示意图。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明,下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解,下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的,不应以此限制本发明的保护范围。
实施例1
一种治疗特发性肺纤维化的中药组合物,是由以下重量份的组分制成:黄芪15g、党参15g、白术9g、茯苓15g、生甘草9g、陈皮6g、法半夏9g、橘络9g、丝瓜络6g、三七2g。
实施例2
一种治疗特发性肺纤维化的中药组合物,是由以下重量份的组分制成:黄芪10g、党参10g、白术6g、茯苓10g、生甘草6g、陈皮3g、法半夏6g、橘络6g、丝瓜络3g、三七1g。
实施例3
一种治疗特发性肺纤维化的中药组合物,是由以下重量份的组分制成:黄芪30g、党参30g、白术15g、茯苓30g、生甘草15g、陈皮9g、法半夏15g、橘络15g、丝瓜络9g、三七3g。
实施例4
一种治疗特发性肺纤维化的中药组合物,是由以下重量份的组分制成:黄芪20g、党参20g、白术10g、茯苓20g、生甘草10g、陈皮6g、法半夏10g、橘络10g、丝瓜络6g、三七2g。
实施例5
一种治疗特发性肺纤维化的中药组合物,是由以下重量份的组分制成:黄芪30g、党参30g、白术15g、茯苓30g、生甘草15g、陈皮9g、法半夏15g、橘络6g、丝瓜络3g、三七1g。
实施例6
一种治疗特发性肺纤维化的中药组合物,是由以下重量份的组分制成:黄芪15g、党参15g、白术9g、茯苓15g、生甘草9g、陈皮6g、法半夏9g、橘络9g、丝瓜络6g、三七2g。
中药组合物水煎剂的制备方法,包括以下步骤:
加水煎煮2次,第一次加入600mL水,煎煮30min,煎煮至200mL,得第一煎煮液;第二次加入400mL水,煎煮20min,煎煮至200mL,得第二煎煮液;合并第一和第二煎煮液得到水煎剂。
实施例7
一种治疗特发性肺纤维化的中药组合物,是由以下重量份的组分制成:黄芪15g、党参15g、白术9g、茯苓15g、生甘草9g、陈皮6g、法半夏9g、橘络9g、丝瓜络6g、三七2g。
中药组合物颗粒剂的制备方法,包括以下步骤:
加水煎煮2次,第一次加入600mL水,煎煮30min,煎煮至200mL,得第一煎煮液;第二次加入400mL水,煎煮20min,煎煮至200mL,得第二煎煮液;合并第一和第二煎煮液;过滤,滤液浓缩,待冷却至室温,取上清液浓缩成清膏。取清膏、糊精及其他药物辅剂制成颗粒剂。
实施例8
一种治疗特发性肺纤维化的中药组合物,是由以下重量份的组分制成:黄芪10g、党参10g、白术6g、茯苓10g、生甘草6g、陈皮3g、法半夏6g、橘络6g、丝瓜络3g、三七1g。
中药组合物汤剂的制备方法,包括以下步骤:
加水煎煮2次,第一次加入600mL水,煎煮30min,煎煮至200mL,得第一煎煮液;第二次加入400mL水,煎煮20min,煎煮至200mL,得第二煎煮液;合并第一和第二煎煮液。
实施例9
一种治疗特发性肺纤维化的中药组合物,是由以下重量份的组分制成:黄芪15g、党参15g、白术9g、茯苓15g、生甘草9g、陈皮6g、法半夏9g、橘络9g、丝瓜络6g、三七2g。
中药组合物片剂的制备方法,包括以下步骤:
加水煎煮2次,第一次加入600mL水,煎煮30min,煎煮至200mL,得第一煎煮液;第二次加入400mL水,煎煮20min,煎煮至200mL,得第二煎煮液;合并第一和第二煎煮液;过滤,滤液浓缩,待冷却至室温,取上清液浓缩至稠浸膏,加入药物辅剂,真空干燥,粉碎制粒,压制成片剂。
实施例10
一种治疗特发性肺纤维化的中药组合物,是由以下重量份的组分制成:黄芪15g、党参15g、白术9g、茯苓15g、生甘草9g、陈皮6g、法半夏9g、橘络9g、丝瓜络6g、三七2g。
中药组合物胶囊的制备方法,包括以下步骤:
加水煎煮2次,第一次加入600mL水,煎煮30min,煎煮至200mL,得第一煎煮液;第二次加入400mL水,煎煮20min,煎煮至200mL,得第二煎煮液;合并第一和第二煎煮液;过滤,滤液浓缩,待冷却至室温,取上清液浓缩至稠浸膏,加入药物辅剂,真空干燥,粉碎制粒,填充装胶囊。
实施例11
本发明的中药组合物治疗特发性肺纤维化脾虚络瘀型的临床研究
1方法与设计
1.1研究设计
本临床研究属于前瞻性设计,采用随机分组、平行对照的方法。特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)病例为2019年2月至2021年5月上海中医药大学附属曙光医院的就诊患者。所有参加此研究的病例均出于病人自愿,并经知情告知。本项研究由上海中医药大学附属曙光医院伦理委员会批准(伦理批准编号2019-792-147-01)。
本临床研究的主要疗效指标是高分辨率计算机断层扫描(high resolutioncomputed tomography,HRCT)评分,次要疗效指标包括中医证候积分、六分钟步行测试(6-minute walk test,6MWT)、圣乔治呼吸问卷(St.George’s respiratory questionnaire,SGRQ)、细胞因子。
1.2诊断标准
1.2.1西医诊断标准
参照2018年最新国际IPF诊断指南。(1)除外其他已知原因的间质性肺疾病(如家庭环境、职业环境暴露、结缔组织病等),加上第2或3条;(2)HRCT表现为UIP型;(3)HRCT分型和肺活检组织病理学分型符合特定的组合。
1.2.2中医诊断标准
证属脾虚络瘀型IPF的证型诊断标准。参照国家中医药管理局制定《24个专业92个病种中医诊疗方案》中“肺痿病(肺纤维化)中医临床路径(2017年版)”、《中药新药临床研究指导原则》(2002)拟定:
主症:气短喘憋、和(或)胸闷,动则加重,干咳,体倦乏力,口唇或爪甲紫暗。
次症:①少痰或咳吐浊唾涎沫;②食少纳呆;③食后或午后腹胀;④肌肤甲错;⑤杵状指。
舌脉:舌体胖或有齿印,舌质暗或有瘀点、瘀斑;脉沉细或涩。
具备主症,具备次症2项以上,结合舌脉可诊断。
1.3纳入标准
①符合IPF西医诊断标准;②符合脾虚络瘀型中医诊断标准;③疾病严重程度为轻度至中度;④年龄49-85岁,男女不限;⑤自愿并签署知情同意。
1.4排除标准
①处于急性加重或晚期危重者;②患有其他原发性肺部疾病(如支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺癌);③合并心血管、肾、肝等严重原发性疾病者;④精神病患者;⑤合并出血、发热等急性病症者;⑥妊娠或哺乳期妇女;⑦已知对试验用药物成分过敏者;⑧近3个月参加其他临床研究者;⑨不愿接受试验治疗者。
1.5试验中出现不良反应的处理
①发生严重不良反应时,试验应被及时中止;②出现严重并发症或病情恶化,应立即采取措施。
1.6样本量的确定
临床研究病例数应用EPlinfo软件计算,设定按标准差相等,S1=S2=2.0。按文献检索和以往的初步研究结果,以中医证候积分为主要疗效指标,中医辨证论治可降低中医证候积分;同时推算出N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)组(以下简称“对照组”)为0.3,本发明的中药组合物组(以下简称“中药组”)为0.7,采用双侧差异性检验,一类错误(α)定为0.05,二类错误(β)定为0.2,按中药组和对照组1:1的比例,代入公式n=(Zα/2)2π(1-π)/E2,计算出中药组和对照组各24例。考虑存在15%的脱落率可能,故最终需纳入58例,中药组和对照组各29例。
1.7临床分组
采用区组随机方法制定随机分配方案,采用统计产品与服务解决方案(Statistical Product and Service Solutions,SPSS)25.0软件[国际商业机器(International Business Machines,IBM)公司,USA],生成随机数字表,进行区组随机,按1:1比例制成随机分配表。根据随机分配方案,将58例患者分入中药组29例和对照组29例。通过随机分配表制成分配卡装入密闭信封,按其进入临床试验的先后次序,拆开号码相同的信封,按信封内卡片规定的编号进行治疗。
1.8治疗方案
根据2016年《IPF诊断和治疗中国专家共识》,两组患者均予常规氧疗、肺康复等非药物治疗,NAC属于酌情使用的药物。此外,尼达尼布和吡非尼酮亦属于酌情使用的药物,但其价格昂贵、副作用较大、患者依从性一般。综合考虑上述因素,并结合其他文献报道,本研究选用NAC作为对照组用药。
中药组:本发明的中药组合物(黄芪15g、党参15g、白术9g、茯苓15g、生甘草9g、陈皮6g、法半夏9g、橘络9g、丝瓜络6g、三七2g),制成颗粒剂,规格10.7g/袋,每日2次,每次2袋,开水冲服。
对照组:NAC,海南赞邦制药有限公司(批号1001311),0.6g/次,每日3次,口服。
观察期:3个月,在治疗前后各观察指标一次。治疗前2周内及治疗期间不可服用其他中药制剂。
记录患者其他合并疾病及用药情况。
1.9观察指标
中医证候积分作为主要疗效指标,次要疗效指标包括HRCT评分、6MWT、SGRQ。以上指标均参照了《24个专业92个病种中医诊疗方案》中“肺痿病(肺纤维化)中医诊疗方案(2017年版)”、《中药新药临床研究指导原则》(2002)及其他参考文献。
1.9.1主要疗效指标
中医证候积分作为主要疗效指标,其标准参考《24个专业92个病种中医诊疗方案》中“肺痿病(肺纤维化)中医诊疗方案(2017年版)”,包括主症(喘息、憋气、胸闷、气短、Velcro啰音、咳嗽)、次症(咯痰)、或见症(黄痰、发热、咽痒、恶风、汗出、疲倦、心慌、唇甲紫暗、杵状指、舌象、脉象)。积分越高,提示症状越明显。
1.9.2次要疗效指标
(1)HRCT评分
应用GE公司螺旋CT机进行肺脏高分辨率薄层扫描,根据参考文献的IPF患者HRCT三层面评分法,选取相应的三个层面图像分析,针对每个层面的肺受累程度进行直观评估。
HRCT影像由患者在仰卧位吸气末时采集,层厚/层距5mm/1mm,重建1mm层厚图像。在适合观察肺实质(窗位-600至-700HU;窗宽1200至1500HU)的窗口设置下拍摄图像。由两位具有15年以上的高级职称呼吸科及放射科医师分别独立读片。读片医师仅知IPF的诊断,而不知患者的临床症状及其他检查结果。HRCT影像共分为6个肺区:左上肺区、右上肺区、左中肺区、右中肺区、左下肺区、右下肺区。读片医师对每个区域分别进行直观和独立的肺异常受累程度评估,包括磨玻璃影、实变、牵拉性支气管扩张或细支气管扩张、蜂窝肺。每个区域的评分是异常区域占据肺实质的百分比,每个区域均按①-⑥级分级。
上肺区:气管隆突水平的肺区;中肺区:左肺上叶支气管水平的肺区;下肺区:下肺静脉水平的肺区。
①正常(异常区域以外的幸免区域)(L1);②磨玻璃影不伴牵拉性支气管扩张或细支气管扩张(L2);③实变不伴牵拉性支气管扩张或细支气管扩张(L3);④磨玻璃影伴牵拉性支气管扩张或细支气管扩张(L4);⑤实变伴牵拉性支气管扩张或细支气管扩张(L5);⑥蜂窝肺(L6)。
6个肺区的上述评分取平均值,计为L1、L2、L3、L4、L5、L6。HRCT总评分(TL)=L1+L2×2+L3×3+L4×4+L5×5+L6×6。TL分数越高,提示影像学的纤维化程度越重。
(2)6MWT
患者沿着呼吸科病区平坦地面上的30m直线尽快行走6min。试验环境安静、通风、温度湿度适宜,试验前后记录患者血压、心率、呼吸频率及指氧饱和度,试验过程中备有硝酸甘油、吸氧装置等抢救措施。患者出现头晕、胸闷、呼吸困难、冷汗、面色苍白等症状则立即停止。最终结果用6min测定的步行距离表示。6min步行距离越小,提示心肺功能及运动耐量越差。
(3)SGRQ
SGRQ评分是测量健康相关生活质量最常用的工具,由症状、活动、影响三部分评分组成。SGRQ由患者在安静的情况下自主填写。
SGRQ计算方法采用加权平均方法,经过处理后得出最后分值,总分波动范围为0-100分。分数的高低代表着整体损伤的多少,其中100表示最差可能的健康状况,0表示最佳可能的健康状况。
(4)IL-6、TNF-α、IFN-γ
抽取3mL外周静脉血,以离心半径15cm,3000r/min离心10min,分离血清,于24h内采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)含量。分别采用IL-6的ELISA试剂盒(晶美生物工程有限公司,批号20200921)、TNF-α的ELISA试剂盒(晶美生物工程有限公司,批号20201876)、IFN-γ的ELISA试剂盒(晶美生物工程有限公司,批号20200321)。指标参考范围:IL-6(0.00-12.40)pg/ml、TNF-α(0.00-16.50)pg/ml、IFN-γ(0.00-23.10)pg/ml。
1.10安全性指标
安全性指标包括心电图、血常规、尿常规、肝肾功能(丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、肌酐、尿素氮)及不良反应。
使用仪器及方法:ECG-6511型心电图机(上海光电医用电子仪器有限公司);血常规分析仪(希森美康),电阻抗法;尿常规分析仪(希森美康),干化学法;生化分析仪(AbbottAeroset),化学发光法。
1.11疗效评价标准
1.11.1中医证候积分和中医临床总有效率
比较两组患者治疗前和治疗后的中医证候积分和各单项主症(喘息、憋气、胸闷、气短、Velcro啰音、咳嗽)积分,进行统计学处理。
中医临床总有效率参考《中药新药临床研究指导原则》(2002),采用尼莫地平法。中医证候积分减少率=(治疗前中医证候积分-治疗后中医证候积分)/治疗前中医证候积分×100%。
显效:临床症状、体征明显改善,中医证候积分减少≥70%;
有效:临床症状、体征均有好转,中医证候积分减少≥30%;
无效:临床症状、体征均无明显改善,甚或加重,中医证候积分减少<30%。
中医临床总有效率=(显效+有效)/总数×100%。
1.11.2HRCT评分
分别比较两组患者治疗前和治疗后的HRCT各项评分(L1、L2、L3、L4、L5、L6、TL),进行统计学处理。
1.11.36MWT
比较两组患者治疗前和治疗后的6MWT,进行统计学处理。
1.11.4生活质量疗效
比较两组患者治疗前和治疗后的SGRQ总分、症状积分、活动积分、影响积分,进行统计学处理。
1.11.5IL-6、TNF-α、IFN-γ
分别比较两组患者治疗前和治疗后的血清IL-6、TNF-α、IFN-γ含量,进行统计学处理。
1.11.6安全性评价标准
1级:安全,无任何不良反应;2级:比较安全,如有不良反应,不需做任何处理可继续给药;3级:有安全问题,有症候,有中度程度的不良反应,做处理后可继续给药;4级:因不良反应中止试验。
1.12统计分析
采用SPSS 25.0软件(IBM公司,USA)。计数资料采用例数和百分率表示,比较采用卡方检验。针对计量资料,正态分布者采用均数±标准差(x±s)描述,非正态分布采用中位数(四分位间距)[M(P25,P75)]描述;对于正态分布且方差齐性者,比较采用t检验;对于非正态分布或方差不齐者,比较采用秩和检验。以P<0.05为差异有统计学意义。采用GraphPadPrism 8软件(GraphPad software LLC,USA)作图。
2结果
2.1一般资料及基线数据分析
经纳入标准和排除标准的筛选,本研究共纳入患者58例,按随机数字表法分为中药组和对照组各29例。临床观察过程中,中药组脱落3例(2例因自觉疗效欠佳而退出,1例因搬迁至外地而失访),中药组脱落率为10.3%;对照组脱落4例(2例因自觉疗效欠佳而退出,2例因电话号码有误而失访),对照组脱落率为13.8%。最终共有51例患者完成该临床试验,其中中药组26例、对照组25例。见图1所示,图1是特发性肺纤维化病人的临床研究流程示意图,其中,IPF:idiopathic pulmonary fibrosis,特发性肺纤维化。
从图中可以看出,在中药组26例患者中,男性15例、女性11例;在对照组25例患者中,男性16例、女性9例。中药组和对照组患者年龄分别是(69.15±6.55)岁和(69.56±10.42)岁,差异无统计学意义(P=0.630)。中药组和对照组患者IPF病程的中位数分别是39m和36m,差异无统计学意义(P=0.940)。两组身高、体重、体重指数(body mass index,BMI)、体温、呼吸频率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。两组上述各项基线资料均具有可比性,见表1所示。
表1两组一般资料比较
注:统计方法:卡方检验、秩和检验、独立样本t检验。BMI:body mass index,体重指数。
2.2中医证候积分、单项主症积分、中医临床总有效率的比较
2.2.1中医证候积分的比较
治疗前,中药组中医证候积分为37.92±9.92,对照组中医证候积分为38.00±13.49,差异无统计学意义(P=0.873),中药组和对照组治疗前的中医证候积分具有可比性。
与治疗前相比,中药组治疗后中医证候积分减少9.77(P<0.001),对照组治疗后中医证候积分减少4.16(P=0.019)。中药组中医证候积分治疗前后差值为9.77±9.66,对照组中医证候积分治疗前后差值为4.16±8.28,中药组高于对照组(P=0.030)。见图2所示,图2是两组治疗前后中医证候积分比较的示意图,其中,A是两组中医证候积分治疗前后比较示意图;B是两组中医证候积分治疗前后差值比较示意图。统计方法:独立样本t检验、配对t检验。提示本发明的中药组合物在减少IPF患者中医证候积方面有确切疗效,且优于NAC。
2.2.2单项主症积分的比较
治疗前,中药组和对照组各单项主症积分(喘息、憋气、胸闷、气短、Velcro啰音、咳嗽)比较,差异均无统计学意义(P>0.05),两组治疗前的各单项主症积分均具有可比性。
与治疗前相比,中药组治疗后喘息积分减少(P=0.034)、咳嗽积分减少(P=0.004)。与治疗前相比,中药组憋气、胸闷、气短、Velcro啰音积分治疗后的差异无统计学意义(P>0.05),对照组各单项主症积分治疗后的差异无统计学意义(P>0.05)。两组各单项主症积分治疗前后差值比较,差异均无统计学意义(P>0.05),见表2所示:
表2两组治疗前后单项主症积分比较[M(P25,P75)]
注:与治疗前比较,▲P<0.05,▲▲P<0.01。统计方法:秩和检验。
2.2.3中医临床总有效率的比较
经过治疗,中药组无效者7例、有效者17例、显效者2例,总有效率73.08%,对照组无效者14例、有效者10例、显效者1例,总有效率44.00%。中药组中医临床总有效率高于对照组(P=0.037),见表3所示。
表3两组治疗前后中医临床总有效率比较
注:统计方法:秩和检验。
2.3HRCT评分的比较
治疗前,中药组和对照组HRCT的6个肺区各单项评分(L1、L2、L3、L4、L5、L6)及HRCT总评分(TL)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。两组治疗前的HRCT单项评分及总评分均具有可比性。
中药组治疗前TL为193.89±51.13,治疗后TL为192.22±52.43,中药组治疗后TL较治疗前减少(P=0.040)。
与治疗前相比,中药组治疗后L3、L4、L5均有减少趋势(P>0.05),中药组治疗后L1、L2均有增加趋势(P>0.05),对照组治疗后L1、L4均有减少趋势(P>0.05),对照组治疗后L2、L5、L6、TL均有增加趋势(P>0.05)。两组各单项评分和TL治疗前后差值比较,差异无均统计学意义(P>0.05),见表4所示。
注:与治疗前比较,▲P<0.05。统计方法:独立样本t检验、配对t检验。HRCT:highresolution computed tomography,高分辨率计算机断层扫描。
2.46MWT的比较
治疗前,中药组6MWT为(418.27±66.27)m,对照组6MWT为(417.60±84.00)m,中药组和对照组比较差异无统计学意义(P=0.975)。两组治疗前的6MWT具有可比性。
与治疗前相比,中药组治疗后6MWT增加4.62m(P=0.042),对照组治疗后6MWT有增加趋势(P=0.819)。两组6MWT治疗前后差值比较,中药组有高于对照组的趋势(P=0.301),见表5所示。
组别 | n | 治疗前 | 治疗后 | 差值 |
中药组 | 26 | 418.27±66.27 | 423.27±67.75<sup>▲</sup> | 4.62±22.62 |
对照组 | 25 | 417.60±84.00 | 418.40±87.10 | 0.80±17.30 |
t值 | 0.032 | - | 1.046 | |
P值 | 0.975 | - | 0.301 |
注:与治疗前比较,▲P<0.05。统计方法:独立样本t检验、配对t检验。6MWT:6-minute walk test,六分钟步行测试。
2.5SGRQ评分的比较
2.5.1SGRQ总分的比较
治疗前,中药组SGRQ总分为39.25±15.17,对照组SGRQ总分为37.30±20.99,中药组和对照组比较差异均无统计学意义(P=0.705)。两组治疗前SGRQ总分具有可比性。
与治疗前相比,中药组治疗后SGRQ总分有减少趋势(P=0.064),对照组治疗后SGRQ总分有增加趋势(P=0.057)。中药组SGRQ总分治疗前后差值为3.35±0.54,对照组SGRQ总分治疗前后差值为-0.25±0.09,中药组高于对照组(P=0.031),见表6所示。
组别 | n | 治疗前 | 治疗后 | 差值 |
中药组 | 26 | 39.25±15.17 | 36.23±12.17 | 3.35±0.54<sup>*</sup> |
对照组 | 25 | 37.30±20.99 | 37.46±15.99 | -0.25±0.09 |
t值 | 0.380 | - | 0.246 | |
P值 | 0.705 | - | 0.031 |
注:与对照组比较,*P<0.05。统计方法:独立样本t检验、配对t检验。SGRQ:St.George’s respiratory questionnaire,圣乔治呼吸问卷。
2.5.2SGRQ单项评分的比较
治疗前,中药组和对照组SGRQ症状评分的中位数分别是40.77和40.57,中药组和对照组SGRQ活动评分别为35.39±15.73和37.75±16.02;中药组和对照组SGRQ影响评分的中位数分别是38.71和41.67,差异均无统计学意义(P>0.05)。两组治疗前的SGRQ单项评分(症状评分、活动评分、影响评分)均具有可比性。
与治疗前相比,中药组治疗后SGRQ症状评分减少2.45(P=0.039),对照组治疗后SGRQ症状评分有减少趋势(P=0.059),中药组治疗后SGRQ活动评分有减少趋势(P=0.342),对照组治疗后SGRQ活动评分有增加趋势(P=0.432),中药组治疗后SGRQ影响评分有增加趋势(P=0.414),对照组治疗后SGRQ影响评分有减少趋势(P=0.231)。
两组SGRQ症状评分治疗前后差值比较,中药组有高于对照组的趋势(P=0.077);两组SGRQ活动评分治疗前后差值比较,中药组有高于对照组的趋势(P=0.667);两组SGRQ影响评分治疗前后差值比较,中药组有低于对照组的趋势(P=0.193),见表7所示。
表7两组治疗前后SGRQ单项评分比较
注:与治疗前比较,▲P<0.05。统计方法:秩和检验、独立样本t检验、配对t检验。SGRQ:St.George’s respiratory questionnaire,圣乔治呼吸问卷。
2.6IL-6、TNF-α、IFN-γ的比较
治疗前,中药组和对照组IL-6、TNF-α、IFN-γ差异均无统计学意义(P>0.05),均具有可比性。
与治疗前相比,中药组治疗后TNF-α降低1.32pg/ml(P=0.008),对照组治疗后TNF-α有降低趋势(P=0.110)。中药组的TNF-α治疗前后差值高于对照组(P=0.012)。
尽管中药组的IFN-γ治疗前后差值高于对照组(P=0.009),但中药组治疗后的IFN-γ较治疗前未显示出升高的趋势(P>0.05)。两组治疗后IL-6较治疗前均未显示出明确的降低效果(P>0.05),中药组IL-6治疗前后差值也未显示出高于对照组(P>0.05),见表8所示。
注:※治疗前后均完成细胞因子检测的的实际例数。中药组6例及对照组9例细胞因子指标存在缺失,故未计入。与治疗前比较,▲▲P<0.01。与对照组比较,*P<0.05,**P<0.01。统计方法:秩和检验、独立样本t检验、配对t检验。IL-6:interleukin-6,白介素-6;TNF-α:tumor necrosis factor-α,肿瘤坏死因子-α;IFN-γ:interferon-γ,干扰素-γ。
2.7安全性分析
两组患者治疗前血常规、尿常规、丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、肌酐、尿素氮比较,差异均无统计学意义(P>0.05);上述安全性指标,两组治疗前后比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。
中药组治疗前有2例心动过速、1例心动过缓、2例ST-T段改变;对照组治疗前有3例心动过速、1例ST-T段改变。治疗期间,上述治疗前的心电图异常均无变化。
治疗过程中,两组所有患者均未出现与治疗相关的血常规、尿常规、肝肾功能、心电图异常,未发生不良反应,未出现严重不良事件。
3结论及分析
通过本次临床研究,最终发现本发明的中药组合物治疗脾虚络瘀型IPF能减少中医证候积分和HRCT总评分,提高运动耐力和生活质量,其机制可能与下调TNF-α有关。本研究较为客观地评价了本发明的中药组合物治疗IPF患者的临床疗效。
本发明的中药组合物临床治疗脾虚络瘀型IPF能使中医证候积分减少9.77(P<0.001),且优于NAC(P<0.05),提示本发明的中药组合物在减少IPF患者中医证候积方面有确切疗效,且优于NAC。
本发明的中药组合物可减少喘息积分(P<0.05)、减少咳嗽积分(P<0.01),提示本发明的中药组合物在减轻IPF患者喘息和咳嗽症状方面均有明确疗效。
本发明的中药组合物可减少HRCT总评分(P<0.05),提示本发明的中药组合物可降低HRCT总评分,即减轻IPF患者影像学肺纤维化程度。
本发明的中药组合物可使6MWT增加4.62m(P<0.05),提示本发明的中药组合物在增加6MWT方面有明确疗效。
本发明的中药组合物可减少SGRQ总分的疗效优于NAC(P<0.05),提示本发明的中药组合物在提高IPF患者生活质量方面的疗效优于对照组;可使SGRQ单项症状评分减少2.45(P<0.05),提示本发明的中药组合物在减轻IPF患者呼吸系统症状方面的疗效确切。
本发明的中药组合物可降低TNF-α(P<0.01),且优于NAC(P<0.05),提示本发明的中药组合物可以降低IPF患者TNF-α,且疗效优于NAC。
实施例12
本发明的中药组合物治疗特发性肺纤维化的基础研究
1实验材料
1.1实验动物
SPF级雄性SD大鼠54只,体质量(200±20)g,购于上海西普尔-必凯实验动物有限责任公司,许可证号码:SCXK(沪)2018-0016。SD大鼠饲养于上海中医药大学动物实验中心。饲养条件为室温20-25℃,湿度40-70%,标准饲料,大鼠自由饮食和饮水。SD大鼠在无病原体的SPF级动物房内适养1周。
1.2实验用药及试剂仪器
用药:本发明的中药组合物(黄芪15g、党参15g、白术9g、茯苓15g、生甘草9g、陈皮6g、法半夏9g、橘络9g、丝瓜络6g、三七2g),制成颗粒剂;NAC 0.2g/片,海南赞邦制药有限公司(批号1001311)。
试剂:注射用盐酸博莱霉素(bleomycin,BLM)15mg/支(日本化药株式会社,批号970592)、地西泮注射液5mg/ml(上海旭东海普药业有限公司,批号200505)、盐酸氯氨酮注射液50mg/ml(上海中西药业股份有限公司新冈制药厂,批号200405)、4%多聚甲醛固定液(凯基生物,批号2020190)、磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline,PBS)、乙醇(永华化学股份有限公司,批号20200801)、二甲苯(天津恒兴试剂有限公司,批号20200108)、苏木素-伊红(hematoxylin eosin,HE)染色试剂盒(上海碧云天生物科技有限公司,批号110516180358)、马松(Masson)染色试剂盒(北京索莱宝科技有限公司,批号20200721)、羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)的ELISA试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号20200185)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号A023-6)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号A011-2)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号A009-1)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的ELISA试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号20204256)、IL-6的ELISA试剂盒(晶美生物工程有限公司,批号20206437)、IL-17的ELISA试剂盒(晶美生物工程有限公司,批号20200475)、TNF-α的ELISA试剂盒(晶美生物工程有限公司,批号20201876)、IFN-γ的ELISA试剂盒(晶美生物工程有限公司,批号20200321)、蛋白2(protein62,p62)抗体(Abcam公司,货号ab76425)、becline-1抗体(Abcam公司,货号ab75879)等。
仪器:轮转切片机(Leizi Jung RM 2035,Germany);荧光倒置显微镜(OlympusBX-6,Japan);病理图像分析仪(DM2500&QWin&DFC420C Leica,Germany);生化分析仪(Abbott,Aeroset);722分光光度仪(上海第三分析仪器厂);蛋白凝胶电泳仪(Bio-Rad,USA);高速冷冻离心机(5430R Eppendorf,Germany)。
2实验方法
2.1大鼠分组
通过随机数字表法将54只SD大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组、中药组合物低剂量组、NAC组,每组9只。
2.2大鼠模型制备
采用BLM气管内注入法复制大鼠肺纤维化模型。予地西泮(20mg/kg体质量)和盐酸氯氨酮(20mg/kg体质量)腹腔注射麻醉。待麻醉后将大鼠仰卧固定,消毒后在颈部沿正中线切开皮肤,逐层钝性分离软组织,暴露气管。在肉眼直视下,将已抽取BLM溶液(8mg/kg体质量)的连有塑料导管的1ml注射器插入气管,慢慢注入0.3ml BLM溶液,随即将大鼠直立旋转,辅助大鼠作直立、旋转等动作,以便药物在肺内均匀分布。缝合切口,局部皮肤作抗感染处理。以大鼠出现体毛暗淡或无光泽,竖毛,活动受限,伴蜷缩,反应迟缓、体质量增长缓慢或下降等现象认定模型制作初步成功。
假手术组动物造模方法同上,仅用生理盐水替换BLM进行气管内注入。
2.3药物干预
据“人和动物按体表面积折算的等效剂量比值表”折算,本发明的中药组合物高、中、低剂量组大鼠给药剂量分别为20.8g/kg、10.4g/kg、5.2g/kg,加水配置成高、中、低剂量浓度分别为2.08g/ml、1.04g/ml、0.52g/ml;NAC按成人0.6g/日,大鼠给药剂量为0.063g/kg;假手术组和模型组予10ml/kg生理盐水。以上给药方式均为灌胃。造模第2天起给药,每日1次,药物干预4周,药物干预结束后即进行指标观察及检测。
2.4大鼠取材及称重
先将大鼠称重并记录体质量。予盐酸氯胺酮(30mg/kg体质量)腹腔注射麻醉,大鼠仰卧固定,暴露腹腔,分离腹主动脉,注射器抽取腹主动脉血2-3ml,置于无菌抗凝管内,分装血液,4℃静置12h,待凝血坚固后血清析出,1000r/min离心4min,收集血清。
取血后立即延长切口打开胸腔,于近甲状软骨处切断气管,将心肺完整取出。先将心脏和胸腺摘除干净并取出完整肺脏组织,用生理盐水将取出的肺脏冲洗干净,滤纸吸干,微量天平称重。
取下左侧肺脏,一部分放入装有预冷生理盐水的烧杯漂洗,置于4%多聚甲醛固定液,12h后更换固定液,以用于石蜡切片后的病理染色;另一部分肺切成0.5㎜3大小组织,用4%多聚甲醛固定液和PBS固定保存。将右侧肺放入无菌样品管中,置于-80℃冰箱保存待测。
计算肺系数:肺系数=肺重(g)/体质量(g)。
2.5大鼠一般状态观察
观察各组大鼠造模后第7天的精神、活动、体毛、反应、饮食、体质量情况。
2.6大鼠肺组织HE染色和Masson染色观察
HE染色可反映肺组织肺泡炎程度,Masson染色可反映肺组织纤维化程度。
脱水及透明:经水洗的肺组织依次经70%、80%、95%Ⅰ、95%Ⅱ、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ,每一级乙醇脱水时间均为30min;肺组织经二甲苯Ⅰ、Ⅱ各透明处理30min。
浸蜡和包埋:将肺组织浸入1/2石蜡+1/2二甲苯15min,再浸入石蜡Ⅰ、Ⅱ各20min;在包埋器内倒入融化的石蜡,将浸过蜡的肺组织置入其中,待石蜡表层凝固时将包埋器迅速放入冷水中冷却,待石蜡完全凝固变硬后取出石蜡。
切片和黏片:修整取出的石蜡,安装于切片机,按5μm厚度切片;在50℃温水中,将切片光面朝下漂浮于水面,待其皱褶完全展平,将载玻片插入水中,将蜡片捞至载玻片的适当位置处。
HE染色:石蜡切片烤干,浸入二甲苯Ⅰ20min,二甲苯Ⅱ2min,脱去石蜡;放入无水乙醇Ⅰ、Ⅱ各1min后,依次浸入95%、80%、70%、50%乙醇各1min;再入蒸馏水中洗1min。切片浸入苏木精液6min,自来水蓝化冲洗30min,蒸馏水洗,入伊红染液复染3min,依次经95%乙醇Ⅰ、Ⅱ中脱水兼分化伊红颜色各1min,入无水乙醇彻底脱水4min。二甲苯Ⅰ、Ⅱ各透明1min后,擦去载玻片四周的二甲苯,在载玻片上滴加中性树胶1滴,加盖玻片封固。显微镜下观察。
Masson染色:石蜡切片脱蜡,入水同前。苏木素液染5min,1%盐酸乙醇分化;流水冲洗使蓝化,蒸馏水洗;丽春红酸性复红液中染5min,蒸馏水洗;1%磷钼酸中处理3min,直接入醋酸苯胺蓝液中染色5min,1%醋酸处理1min,95%乙醇和无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固同上。显微镜下观察。
2.7ELISA法测定大鼠肺组织HYP
采用ELISA法检测肺组织HYP的相对含量,按照HYP的ELISA试剂盒说明书检测。
提取:取0.5g肺组织样品于玻璃管,加入0.5ml组织提取液,置于110℃烘箱,水解6h,16000rpm,25℃,离心20min,离心半径10cm,用提取液定容至5ml,取上清测定。
包被过程:将所用抗原用包被稀释液稀释到适当浓度,每孔抗原加入100μl,置4℃,24h,弃去孔中液体。
封闭酶标反应孔:5%小牛血清置37℃封闭40min。封闭时将封闭液加满各反应孔,并去除各孔中的气泡,封闭结束后用洗涤液满孔洗涤3遍,每遍3min。
加入待检测样品:将稀释好的样品加入酶标反应孔中,每样品至少加双孔,每孔100μl,置37℃,40min。用洗涤液满孔洗涤3遍,每遍3min。
加入酶标抗体:37℃,30min,每孔加100μl,洗涤同前。
加入底物液:加入过氧化氢尿素溶液,每孔100μl,置37℃,避光3min,加入终止液显色。
终止反应:每孔加入终止液50μl,20min内开始测定。
结果判断:先进行空白孔系统调零,用测定标本孔的吸收值与一组阴性标本测定孔平均值的比值表示,当比值大于2时作为抗体的效价。用标准品配置不同浓度标准液,通过不同浓度标准液与其OD值的关系绘制标准曲线,将待测样品OD值带入标准曲线方程。
将HYP含量与肺组织匀浆的总蛋白(total protein,TP)含量相比,再与对照组相比,以最终比值作为HYP的相对含量。
2.8比色法和ELISA法测定大鼠MDA、SOD、GSH、MPO
2.8.1比色法测定大鼠肺组织MDA、SOD、GSH
采用比色法检测肺组织MDA的相对含量,按照MDA检测试剂盒说明书检测。
取10ug肺组织,混匀标准管、标准空白管、测定管、测定空白管,水浴加热40min,取出后流水冷却,4000rpm,离心10min,取上清液,蒸馏水调零,测各管吸光度值。按说明书公式计算肺组织中MDA含量。将MDA含量与肺组织匀浆的TP含量相比,再与对照组相比,以最终比值作为MDA的相对含量。
SOD检测步骤同上。将SOD含量与对照组相比,以最终比值作为SOD的相对含量。
GSH检测步骤同上。将GSH含量与肺组织匀浆的TP含量相比,再与对照组相比,以最终比值作为GSH的相对含量。
2.8.2ELISA法测定大鼠血清MPO
采用ELISA法检测血清MPO的相对含量,按照MPO的ELISA试剂盒说明书检测。
具体ELISA步骤同2.7。
将MPO含量与对照组相比,以最终比值作为MPO的相对含量。
2.9ELISA法测定大鼠血清IL-6、IL-17、TNF-α、IFN-γ
采用ELISA法检测IL-6、IL-17、TNF-α、IFN-γ的相对含量,按照各指标的ELISA试剂盒说明书检测。
具体ELISA步骤同2.7。
将各指标含量与对照组相比,以最终比值作为各指标的相对含量。
2.10Western blot测定大鼠肺组织p62、becline-1
采用蛋白质印迹(Western blot)测定肺组织自噬相关蛋白p62、becline-1。
组织匀浆的制备:肺组织标本从-80℃冰箱取出,称重,按0.5mg/L加入裂解液匀浆,静置10min,1:2加抽提试剂混匀;4℃静置10min,12000r/min离心10min;取上清液,提取中间分离相,1%SDS溶解。
蛋白含量测定:使用BCA蛋白浓度测定试剂盒进行蛋白定量分析。
确认上样量:根据样品的实际蛋白含量,保证每个样品上样量为80μg。
样品处理:按稀释液与上样缓冲液4:1的比例,加入上样缓冲液,95℃水浴中变性处理5min,取出待冷却。
SDS-PAGE蛋白凝胶电泳:安装电泳装置,配置10%的分离胶,用蒸馏水液封,待凝后去掉蒸馏水;配置4%堆积胶,灌胶至平板顶部,插入梳子;待凝后拔出梳子,倒入电泳缓冲液,按30μg/孔上样;接通电源开始电泳,开始60V电泳约45min,此时样品被压成一条线,再改为100V电泳90min,停止电泳。
转膜:取胶,放入转移缓冲液15min;裁剪大小略小于胶的两块膜,浸入去离子水中摇晃5min,放入转移缓冲液;裁剪大小略小于胶的厚滤纸4张,放入转移缓冲液;按顺序安装好转膜装置(黑色版-海绵-1层厚滤纸-凝胶-膜-1层厚滤纸-海绵-透明板),完全排除气泡,在转膜装置周围加冰块以保证低温条件;按400mA恒流转膜90min;去除转移缓冲液,洗膜5min,37℃用5%脱脂牛奶封闭1h。
加入一抗和二抗:一抗p62、becline-1别按1:1000的浓度稀释,滴加一抗于盒中,将膜覆盖在一抗上,4℃孵育过夜;取膜,用PBST洗涤4次,每次10min;分别加入二抗p62、becline-1(稀释浓度按1:8000),滴加二抗于盒中,将膜覆盖在一抗上,37℃孵育45min;取膜,用PBST在摇床上洗涤4次,每次10min。
显色及分析:使用超敏发光液显色,Bio-Rad蛋白凝胶电泳仪拍照,再进行目的条带光密度值的定量分析。
2.11统计分析
实验数据经正态性检验后以均数±标准差表示。采用SPSS 25.0软件(IBM公司,USA),多组(模型组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组、中药组合物低剂量组、NAC组、假手术组)组间比较经方差齐性检验后采用单因素方差分析,两组间比较经q检验;假手术组与模型组的组间比较采用独立样本t检验。以P<0.05差异有统计学意义。采用GraphPadPrism 8软件(GraphPad software LLC,USA)作图。
3结果
3.1大鼠一般状态的比较
54只进入模型制备的大鼠,造模过程中死亡8只,存活46只。造模死亡率为14.81%。造模后各组大鼠剩余情况:假手术组8只、模型组8只、中药组合物低剂量组7只、中药组合物中剂量组8只、中药组合物高剂量组8只、NAC组7只。造模后饲养及药物干预过程中死亡2只,存活44只。观察检测前各组大鼠剩余情况:假手术组8只、模型组8只、中药组合物低剂量组6只、中药组合物中剂量组8只、中药组合物高剂量组7只、NAC组7只。围绕每组的平均体重,每组各选取6只进行指标观察及检测,合计36只。
造模后第7天,假手术组大鼠精神状态佳,活动正常,体毛润泽,反应灵敏,饮食正常;模型组大鼠精神状态差,活动受限,伴蜷缩,体毛暗淡,伴竖毛,反应迟缓,饮食偏少;其余给药组大鼠一般状态均介于假手术组与模型组之间。
3.2肺重、体质量和肺系数的比较
与假手术组相比,模型组肺重增大(P<0.001);与模型组相比,中药组合物各组及NAC组肺重均有减小趋势(P>0.05);与NAC组相比,中药组合物低、中剂量组均有增大趋势(P>0.05),中药组合物高剂量组有减小趋势(P=1.000)。
与假手术组相比,模型组体质量减小(P<0.001);与模型组相比,中药组合物低剂量组体质量增大(P=0.011),中药组合物中剂量组体质量增大(P=0.011),中药组合物高剂量组体质量增大(P=0.027),NAC组体质量有增大趋势(P=0.085);与NAC组相比,中药组合物低剂量组体质量增大(P=0.026),中药组合物中、高剂量组体质量均有增大趋势(P>0.05)。
与假手术组相比,模型组肺系数增大(P<0.001);与模型组相比,中药组合物高剂量组肺系数减小(P=0.018),中药组合物低、中剂量组肺系数均有减小趋势(P>0.05),NAC组肺系数减小(P=0.039);与NAC组相比,中药组合物低剂量组肺系数增大(P=0.001),中药组合物中剂量组肺系数均有增大趋势(P=0.870),中药组合物高剂量组肺系数有减小趋势(P=0.305),见表9所示。
组别 | 肺重(g) | 体质量(g) | 肺系数(g/kg) |
假手术组 | 1.90±0.19 | 340.39±27.11 | 5.60±0.54 |
模型组 | 3.38±0.11<sup>△△△</sup> | 241.13±18.99<sup>△△△</sup> | 14.08±1.17<sup>△△△</sup> |
中药组合物低剂量组 | 3.32±0.02 | 285.19±7.46<sup>*#</sup> | 13.18±0.28<sup>##</sup> |
中药组合物中剂量组 | 3.27±0.02 | 284.83±8.97<sup>*</sup> | 12.20±0.30 |
中药组合物高剂量组 | 3.21±0.03 | 277.92±9.43<sup>*</sup> | 11.53±0.26<sup>*</sup> |
NAC组 | 3.23±0.09 | 270.08±1.60 | 11.95±0.36<sup>*</sup> |
F值 | 6.206 | 16.959 | 18.390 |
P值 | 0.001 | <0.001 | <0.001 |
注:与假手术组比较,△△△P<0.001;与模型组比较,*P<0.05;与NAC组相比,#P<0.05,##P<0.01。统计方法:单因素方差分析(模型组、中药组合物低剂量组、中药组合物中剂量组、中药组合物高剂量组、NAC组)、独立样本t检验(假手术组、模型组)。NAC:N-acetylcysteine,N-乙酰半胱氨酸。
3.3HE染色和Masson染色的比较
3.3.1HE染色的比较
大鼠肺组织HE染色结果显示,假手术组呈现正常的肺泡结构,无明显病理改变。模型组可见肺泡结构紊乱且破坏明显,肺泡间隔明显增厚,肺血管壁外周聚集局灶性炎细胞,伴有外膜小血管扩张,大量炎细胞浸润于肺泡间隔及支气管壁。中药组合物各组和NAC组被破坏的细胞结构及浸润的炎细胞,均有一定程度的减轻,其中中药组合物高剂量组和NAC组减轻程度最明显。见图3所示,图3是各组大鼠肺组织HE染色结果示意图(×400)。注:NAC:N-acetylcysteine,N-乙酰半胱氨酸。
3.3.2Masson染色的比较
大鼠肺组织Masson染色结果显示,假手术组见支气管周围少许蓝绿色胶原纤维,无明显胶原沉积等纤维化改变。模型组见支气管周围及肺泡间隔大量蓝绿色胶原纤维增生和沉积,呈现出条片状纤维化区域。中药组合物各组和NAC组的蓝绿色胶原纤维增生沉积等纤维化程度均有一定的减轻,条片状纤维化区域缩小,其中中药组合物高剂量组和NAC组改善程度最明显。见图4所示,图4是各组大鼠肺组织Masson染色(×400)结果示意图。
3.4HYP的比较
大鼠肺组织经ELISA检测,与假手术组相比,模型组HYP升高(P<0.001);与模型组相比,中药组合物中、高剂量组HYP均降低(P<0.001),中药组合物低剂量组HYP有降低趋势(P=0.268),NAC组HYP降低(P<0.001);与NAC组相比,中药组合物低剂量组HYP升高(P<0.001),中药组合物中、高剂量组HYP均有升高趋势(P>0.05),见表10所示:
注:与假手术组比较,△△△P<0.001;与模型组比较,***P<0.001;与NAC组相比,###P<0.001。统计方法:单因素方差分析(模型组、中药组合物低剂量组、中药组合物中剂量组、中药组合物高剂量组、NAC组)、独立样本t检验(假手术组、模型组)。HYP:hydroxyproline,羟脯氨酸;NAC:N-acetylcysteine,N-乙酰半胱氨酸。
3.5MDA、SOD、GSH、MPO的比较
3.5.1MDA的比较
大鼠肺组织经比色法检测,与假手术组相比,模型组MDA升高(P<0.001);与模型组相比,中药组合物中、高剂量组MDA均降低(P<0.001),中药组合物低剂量组MDA有降低趋势(P=0.060),NAC组MDA降低(P<0.001);与NAC组相比,中药组合物各组MDA均升高(P<0.001),见表11所示。
注:与假手术组比较,△△△P<0.001;与模型组比较,***P<0.001;与NAC组相比,###P<0.001。统计方法:单因素方差分析(模型组、中药组合物低剂量组、中药组合物中剂量组、中药组合物高剂量组、NAC组)、独立样本t检验(假手术组、模型组)。MDA:malondialdehyde,丙二醛;NAC:N-acetylcysteine,N-乙酰半胱氨酸。
3.5.2SOD的比较
大鼠肺组织经比色法检测,与假手术组相比,模型组SOD降低(P<0.001);与模型组相比,中药组合物中剂量组SOD升高(P=0.039),中药组合物高剂量组SOD升高(P=0.002),中药组合物低剂量组SOD有升高趋势(P=0.051),NAC组SOD升高(P<0.001);与NAC组相比,中药组合物低剂量组SOD降低(P=0.001),中药组合物中剂量组SOD降低(P=0.027),中药组合物高剂量组SOD有降低趋势(P=0.074),见表12所示。
注:与假手术组比较,△△△P<0.001;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;与NAC组相比,#P<0.05,##P<0.01。统计方法:单因素方差分析(模型组、中药组合物低剂量组、中药组合物中剂量组、中药组合物高剂量组、NAC组)、独立样本t检验(假手术组、模型组)。SOD:superoxide dismutase,超氧化物歧化酶;NAC:N-acetylcysteine,N-乙酰半胱氨酸。
3.5.3GSH的比较
大鼠肺组织经比色法检测,与假手术组相比,模型组GSH降低(P<0.001);与模型组相比,中药组合物中剂量组GSH升高(P=0.003),中药组合物高剂量组GSH升高(P<0.001),中药组合物低剂量组GSH有升高趋势(P=0.058),NAC组GSH升高(P<0.001);与NAC组相比,中药组合物低、中剂量组GSH均降低(P<0.001),中药组合物高剂量组GSH有降低趋势(P=0.419),见表13所示。
注:与假手术组比较,△△△P<0.001;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;与NAC组相比,#P<0.05,##P<0.01。统计方法:单因素方差分析(模型组、中药组合物低剂量组、中药组合物中剂量组、中药组合物高剂量组、NAC组)、独立样本t检验(假手术组、模型组)。GSH:glutathione,谷胱甘肽;NAC:N-acetylcysteine,N-乙酰半胱氨酸。
3.5.4MPO的比较
大鼠血清经比色法检测,与假手术组相比,模型组MPO升高(P<0.001);与模型组相比,中药组合物中剂量组MPO降低(P=0.038),中药组合物高剂量组MPO降低(P=0.002),中药组合物低剂量组MPO有降低趋势(P=0.157),NAC组MPO降低(P<0.001);与NAC组相比,中药组合物低、中剂量组MPO升高(P<0.001),中药组合物高剂量组MPO升高(P=0.003),见表14所示。
注:与假手术组比较,△△△P<0.001;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;与NAC组相比,##P<0.01,###P<0.001。统计方法:单因素方差分析(模型组、中药组合物低剂量组、中药组合物中剂量组、中药组合物高剂量组、NAC组)、独立样本t检验(假手术组、模型组)。MPO:myeloperoxidase,髓过氧化物酶;NAC:N-acetylcysteine,N-乙酰半胱氨酸。
3.6IL-6、IL-17、TNF-α、IFN-γ的比较
3.6.1IL-6的比较
大鼠血清经ELISA检测,与假手术组相比,模型组IL-6升高(P=0.004);与模型组相比,中药组合物低剂量组IL-6降低(P=0.001),中药组合物中、高剂量组IL-6均降低(P<0.001),NAC组IL-6降低(P<0.001);与NAC组相比,中药组合物低剂量组IL-6升高(P=0.006),中药组合物中剂量组IL-6有升高趋势(P=0.081),中药组合物高剂量组IL-6有降低趋势(P=0.179),见表15所示。
注:与假手术组比较,△△P<0.01;与模型组比较,**P<0.01,***P<0.001;与NAC组相比,##P<0.01。统计方法:单因素方差分析(模型组、中药组合物低剂量组、中药组合物中剂量组、中药组合物高剂量组、NAC组)、独立样本t检验(假手术组、模型组)。IL-6:interleukin-6,白介素-6;NAC:N-acetylcysteine,N-乙酰半胱氨酸。
3.6.2IL-17的比较
大鼠血清经ELISA检测,与假手术组相比,模型组IL-17升高(P=0.004);与模型组相比,中药组合物低剂量组IL-17降低(P=0.012),中药组合物中、高剂量组IL-17均降低(P<0.001),NAC组IL-17降低(P<0.001);与NAC组相比,中药组合物低剂量组IL-17升高(P=0.022),中药组合物中剂量组IL-17均有升高趋势(P=0.568),中药组合物高剂量组IL-17均有降低趋势(P=0.484),见表16所示。
注:与假手术组比较,△△P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,***P<0.001;与NAC组相比,#P<0.05。统计方法:单因素方差分析(模型组、中药组合物低剂量组、中药组合物中剂量组、中药组合物高剂量组、NAC组)、独立样本t检验(假手术组、模型组)。IL-17:interleukin-17,白介素-17;NAC:N-acetylcysteine,N-乙酰半胱氨酸。
3.6.3TNF-α的比较
大鼠血清经ELISA检测,与假手术组相比,模型组TNF-α升高(P=0.004);与模型组相比,中药组合物低剂量组TNF-α降低(P=0.033),中药组合物中剂量组TNF-α降低(P=0.005),中药组合物高剂量组TNF-α降低(P=0.001),NAC组TNF-α降低(P=0.001);与NAC组相比,中药组合物低剂量组TNF-α升高(P=0.002),中药组合物中剂量组TNF-α升高(P=0.005),中药组合物高剂量组TNF-α有升高趋势(P=0.736),见表17所示。
注:与假手术组比较,△△P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01;与NAC组相比,##P<0.01。统计方法:单因素方差分析(模型组、中药组合物低剂量组、中药组合物中剂量组、中药组合物高剂量组、NAC组)、独立样本t检验(假手术组、模型组)。TNF-α:tumornecrosis factor-α,肿瘤坏死因子-α;NAC:N-acetylcysteine,N-乙酰半胱氨酸。
3.6.4IFN-γ的比较
大鼠血清经ELISA检测,与假手术组相比,模型组IFN-γ降低(P<0.001);与模型组相比,中药组合物低剂量组IFN-γ有升高趋势(P=0.291),中药组合物中剂量组IFN-γ升高(P<0.001),中药组合物高剂量组IFN-γ升高(P=0.001),NAC组IFN-γ升高(P=0.001);与NAC组相比,中药组合物低剂量组IFN-γ降低(P=0.001),中药组合物中剂量组IFN-γ降低(P=0.025),见表18所示。
注:与假手术组比较,△△△P<0.001;与模型组比较,**P<0.01,***P<0.001;与NAC组相比,#P<0.05,##P<0.01。统计方法:单因素方差分析(模型组、中药组合物低剂量组、中药组合物中剂量组、中药组合物高剂量组、NAC组)、独立样本t检验(假手术组、模型组)。IFN-γ:interferon-γ,干扰素-γ;NAC:N-acetylcysteine,N-乙酰半胱氨酸。
3.7p62、becline-1的比较
大鼠肺组织经Western blot检测,与假手术组相比,模型组p62升高(P=0.030);与模型组相比,中药组合物中剂量组p62降低(P=0.040),中药组合物低、高剂量组及NAC组p62均有降低趋势(P>0.05);与NAC组相比,中药组合物各组p62均有升高趋势(P>0.05)。
与假手术组相比,模型组becline-1降低(P=0.041);与模型组相比,中药组合物高剂量组becline-1升高(P=0.015),中药组合物低、中剂量组及NAC组becline-1均有升高趋势(P>0.05);与NAC组相比,中药组合物各组becline-1均有降低趋势(P>0.05)。见图5和表19。图5是Western blot测定各组大鼠肺组织p62、becline-1表达条带示意图。注:P62:protein62,蛋白62;NAC:N-acetylcysteine,N-乙酰半胱氨酸。
注:与假手术组比较,△P<0.05;与模型组比较,*P<0.05。统计方法:单因素方差分析、独立样本t检验。p62:protein62,蛋白62;NAC:N-acetylcysteine,N-乙酰半胱氨酸。
动物研究发现,与模型组相比,本发明的中药组合物高剂量组肺系数减小(P<0.05),说明本发明的中药组合物高剂量组可减小肺纤维化大鼠的肺系数。
本发明的中药组合物各组病理状态均改善,说明本发明的中药组合物在改善肺纤维化大鼠肺组织病理方面具有一定的作用。
本发明的中药组合物中、高剂量组HYP、MDA和MPO降低,SOD、GSH、IFN-γ升高(P<0.001,P<0.01,P<0.05),本发明的中药组合物各组IL-6、IL-17、TNF-α降低(P<0.001,P<0.01,P<0.05),本发明的中药组合物中剂量组p62降低(P<0.05),本发明的中药组合物高剂量组becline-1升高(P<0.05),说明本发明的中药组合物中、高剂量组能减轻模型大鼠的肺纤维化程度,本发明的中药组合物抗肺纤维化的机制可能与抗氧化、调节细胞炎症因子有关,并证实本发明的中药组合物可在一定程度上促进自噬从而抑制肺纤维化。
以上所述仅是本发明的较佳实施例而已,并非对本发明作任何形式上的限制,虽然本发明已以较佳实施例揭露如上,然而并非用以限定本发明,任何熟悉本专利的技术人员在不脱离本发明技术方案范围内,当可利用上述提示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例,但凡是未脱离本发明技术方案的内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明方案的范围内。
Claims (8)
1.一种治疗特发性肺纤维化的中药组合物,其特征在于,是由以下重量份的组分制成:黄芪10~30份、党参10~30份、白术6~15份、茯苓10~30份、生甘草6~15份、陈皮3~9份、法半夏6~15份、橘络6~15份、丝瓜络3~9份、三七1~3份。
2.根据权利要求1所述的治疗特发性肺纤维化的中药组合物,其特征在于,所述治疗特发性肺纤维化的中药组合物是由以下重量份的组分制成:黄芪15份、党参15份、白术9份、茯苓15份、生甘草9份、陈皮6份、法半夏9份、橘络9份、丝瓜络6份、三七2份。
3.根据权利要求1所述的治疗特发性肺纤维化的中药组合物,其特征在于,所述治疗特发性肺纤维化的中药组合物是由以下重量份的组分制成:黄芪10份、党参10份、白术6份、茯苓10份、生甘草6份、陈皮3份、法半夏6份、橘络6份、丝瓜络3份、三七1份。
4.根据权利要求1所述的治疗特发性肺纤维化的中药组合物,其特征在于,所述治疗特发性肺纤维化的中药组合物是由以下重量份的组分制成:黄芪30份、党参30份、白术15份、茯苓30份、生甘草15份、陈皮9份、法半夏15份、橘络15份、丝瓜络9份、三七3份。
5.根据权利要求1所述的治疗特发性肺纤维化的中药组合物,其特征在于,所述治疗特发性肺纤维化的中药组合物是由以下重量份的组分制成:黄芪20份、党参20份、白术10份、茯苓20份、生甘草10份、陈皮6份、法半夏10份、橘络10份、丝瓜络6份、三七2份。
6.根据权利要求1所述的治疗特发性肺纤维化的中药组合物,其特征在于,所述治疗特发性肺纤维化的中药组合物是由以下重量份的组分制成:黄芪30份、党参30份、白术15份、茯苓30份、生甘草15份、陈皮9份、法半夏15份、橘络6份、丝瓜络3份、三七1份。
7.根据权利要求1所述的治疗特发性肺纤维化的中药组合物,其特征在于,所述治疗特发性肺纤维化的中药组合物制备成药剂学上所说常见剂型。
8.一种权利要求1至7任一项所述的中药组合物在制备治疗特发性肺纤维化的药物中的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210881713.8A CN115282221B (zh) | 2022-07-26 | 2022-07-26 | 一种治疗特发性肺纤维化的中药组合物及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210881713.8A CN115282221B (zh) | 2022-07-26 | 2022-07-26 | 一种治疗特发性肺纤维化的中药组合物及其应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN115282221A true CN115282221A (zh) | 2022-11-04 |
CN115282221B CN115282221B (zh) | 2023-09-15 |
Family
ID=83824936
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210881713.8A Active CN115282221B (zh) | 2022-07-26 | 2022-07-26 | 一种治疗特发性肺纤维化的中药组合物及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN115282221B (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN117257866A (zh) * | 2023-04-18 | 2023-12-22 | 上海中医药大学附属曙光医院 | 一种治疗社区获得性肺炎的中药组合物和用途 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101053619A (zh) * | 2006-04-14 | 2007-10-17 | 李戎 | 一种治疗肺纤维化的药物 |
CN110946922A (zh) * | 2019-12-27 | 2020-04-03 | 上海中医药大学附属曙光医院 | 一种治疗肺纤维化的中药组合物及其应用 |
-
2022
- 2022-07-26 CN CN202210881713.8A patent/CN115282221B/zh active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101053619A (zh) * | 2006-04-14 | 2007-10-17 | 李戎 | 一种治疗肺纤维化的药物 |
CN110946922A (zh) * | 2019-12-27 | 2020-04-03 | 上海中医药大学附属曙光医院 | 一种治疗肺纤维化的中药组合物及其应用 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
张瑞明;: "苏日克老师用中医药治疗特发性肺纤维化经验", vol. 33, no. 25, pages 20 * |
阎小燕;朱雪;卢绪香;: "张伟教授从培土生金法论治间质性肺炎经验总结", vol. 30, no. 12, pages 1725 * |
高艳荣;张炜;: "从气虚络痹论特发性肺纤维化所致慢性缺氧的治疗", no. 09, pages 1328 - 1331 * |
黄利华;: "化纤汤防治肺纤维化的实验研究", no. 04, pages 412 - 414 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN117257866A (zh) * | 2023-04-18 | 2023-12-22 | 上海中医药大学附属曙光医院 | 一种治疗社区获得性肺炎的中药组合物和用途 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN115282221B (zh) | 2023-09-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
WO2022036779A1 (zh) | 化湿败毒颗粒及其制备方法和抗病毒药物 | |
CN115282221B (zh) | 一种治疗特发性肺纤维化的中药组合物及其应用 | |
CN1437982A (zh) | 一种治疗支原体肺炎的药物组合物及其制备方法和质量控制方法 | |
CN110292607B (zh) | 治疗高血压病并发左心室肥厚的中药组合物及制备方法 | |
CN113694109A (zh) | 一种复方黄柏药物制剂、制备方法及应用 | |
CN103301353A (zh) | 一种治疗萎缩性阴道炎的药物组合物 | |
CN111920905A (zh) | 一种中药组合物及其用途 | |
CN117838827B (zh) | 一种治疗慢性心力衰竭的中药组合物及制备方法 | |
CN116392561B (zh) | 一种治疗湿热犯肺所致咳嗽的中药组合物及其制备方法 | |
JP6708916B1 (ja) | 補気調節用チワン族医薬品組成物及びその調製方法 | |
CN108355124A (zh) | 一种治疗气道粘液高分泌的中药组合物及其应用 | |
CN114451551B (zh) | 一种温阳益气膏方及其应用 | |
CN114982713B (zh) | 2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型的构建方法、评价方法及应用 | |
CN113876844B (zh) | 一种用于治疗慢性气管炎的纯中药藏药及其制备方法和应用 | |
CN114470110B (zh) | 一种有止痛作用的抗鼻炎中药组合物 | |
CN115990220A (zh) | 一种止咳的中药组合物及其应用、治疗咳嗽寒饮伏肺证的颗粒剂及其制备方法 | |
CN116832133A (zh) | 一种用于治疗脂肪肝的中药组合物及制备方法 | |
JP2008539175A (ja) | 急性および慢性気管支炎を治療するための医薬を調合する際の魔芋(こんにゃく芋)およびその抽出物の利用 | |
CN117503898A (zh) | 一种治疗哮喘的中药组合物及其应用 | |
CN117503823A (zh) | 一种防治慢性心力衰竭的中药有效组分组合物 | |
Wang et al. | Analysis of the Therapeutic Effect of Shengmai Yin Chinese Herbal Medicine in Pneumonia | |
CN117442698A (zh) | 中药组合物在制备用于外邪疠气的药物中的应用 | |
CN111214633A (zh) | 一种治疗传染性乙型肝炎的配方 | |
CN108542962A (zh) | 一种治疗肺纤维化的中药组合物及其制备方法 | |
CN117883543A (zh) | 一种中药组合物及其制剂和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |