CN114965795A - 一种基于超高效液相色谱法同时检测夏枯草中的迷迭香酸和熊果酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种同时检测夏枯草中的迷迭香酸和熊果酸的超高效液相色谱分析方法。夏枯草是一种“食药两用”物质，作为食品，夏枯草以蔬菜、煲汤、凉茶等形式食用，受到消费者的青睐；作为中药，它具有降压、降血糖、降血脂、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抑制胰脂肪酶活性等功效。然而，近年来出现了有关夏枯草不良反应的报道，安全性受到人们的关注。研究表明，夏枯草中酚酸类的迷迭香酸和萜类中的熊果酸含量直接影响夏枯草的品质。本发明采用PSA吸附剂对夏枯草的提取液进行净化，结合超高效液相色谱分析技术，提供了一种同时检测夏枯草中的迷迭香酸和熊果酸分析新方法，仪器检测限分别为0.02 mg/L和0.14 mg/L，对保障夏枯草的品质及其安全性具有重要的现实意义。
Description
技术领域
本发明涉及一种基于超高效液相色谱法检测夏枯草中的迷迭香酸和熊果酸的方法，属于分析技术领域。
背景技术
夏枯草是一种传统的“食药两用”物质，作为食品，夏枯草以蔬菜、煲汤、凉茶等形式食用，受到消费者的青睐。夏枯草除食用价值之外，还具有清肝明目、消肿散结、凉血止血等功效，是常见传统的中药之一。现代研究表明，夏枯草具有降压、降血糖、降血脂、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抑制胰脂肪酶活性等功效。
随着夏枯草的广泛应用，其安全性也受到人们的广泛关注，有关其不良反应的报道逐渐增多，如因服用夏枯草而导致皮肤瘙痒、丘疹，甚至因过敏性休克而昏倒等。现有研究表明，夏枯草中酚酸类的迷迭香酸和萜类中的熊果酸含量较高，影响夏枯草的品质。因此，研究构建夏枯草中迷迭香酸和熊果酸同时分析新方法，对保障夏枯草的品质及其安全性具有重要的现实意义。
目前，文献中关于夏枯草中迷迭香酸和熊果酸的检测，通常是采取简单的溶剂提取，然后直接采用高效毛细管电泳或液相色谱进行测定。样品前处理仅有提取过程，而没有净化过程，但由于夏枯草基质较为复杂，共提物给测定带来的干扰以及对色谱柱或者仪器的损伤是不可忽视的。
发明内容
本发明的目的是提供一种快速、简便、灵敏的超高效液相色谱-二极管阵列法以同时检测夏枯草中的迷迭香酸和熊果酸。
本发明的技术方案：一种基于超高效液相色谱法检测夏枯草中的迷迭香酸和熊果酸的方法。夏枯草中的迷迭香酸和熊果酸用50%乙醇溶液超声提取，将提取液用50%乙醇水溶液稀释，采用PSA振荡吸附净化，离心后取上清液过膜，采用UHPLC-PDA检测。
本发明主要包括以下几个步骤：超高效液相色谱条件；迷迭香酸和熊果酸的同时检测；样品的前处理；样品的检测。
一种基于超高效液相色谱法检测夏枯草中的迷迭香酸和熊果酸的方法，其特征在于：主要包括以下几个步骤：
（1）超高效液相色谱条件
本发明中所使用的仪器是Acquity UPLC H-Class Plus超高效液相色谱仪（美国waters公司），配有Acquity四元梯度泵、Acquity FTN自动进样器、Acquity柱温箱和Acquity FDA二极管阵列检测器。色谱条件：色谱柱：ACQUITY UPLC ® HSS T3 (2.1 mm×100 mm，1.7 μm)；柱温：30 ℃；进样量：5 μL；流动相：A相为水（含0.1 %乙酸），B相为乙腈。梯度洗脱程序：0 min，10 % B；8~12 min，100 % B；12.1~14 min，10 % B；流速：0.3 mL/min；检测波长：迷迭香酸和熊果酸检测波长分别为330 nm和210 nm。
（2）迷迭香酸和熊果酸的同时检测
采用甲醇为溶剂，配制一系列质量浓度的迷迭香酸和熊果酸的混合标准工作液，在选择的实验条件下进行测定。以峰面积 (y) 对质量浓度 (x) 进行线性回归，得到线性方程。迷迭香酸（2-200 mg/L）和熊果酸（1-100 mg/L）线性关系良好（R2>0.9994）。迷迭香酸和熊果酸的检出限（LOD）分别为0.02和0.14 mg/L，定量限（LOQ）分别为0.05和0.48 mg/L。。
（3）样品的前处理
将夏枯草样品放置于50 ℃烘箱中干燥12 h，粉碎过24目筛。准确称取0.2 g（精确至0.001 g）夏枯草样品置于50 mL离心管中，加入10 mL 50%乙醇溶液，涡旋混匀后，室温下超声提取20 min，10000 r/min离心分离10 min。取提取液1 mL，加2 mL 50%乙醇水溶液，PSA吸附剂6 mg，振荡吸附30 min，10000 r/min离心10 min。取上清液1 mL，经0.22 μm有机微孔滤膜过滤后，待测。
（4）样品的检测
称取0.2 g（精确至0.001 g）夏枯草样品，分别添加高、中、低三个不同浓度水平的迷迭香酸和熊果酸混合标准溶液，按上述样品前处理方法对样品进行处理后，进行UHPLC-PDA分析，计算样品加标回收率。
本发明的有益效果：本发明设计了一种超高效液相色谱法检测夏枯草中的迷迭香酸和熊果酸的方法，可简便、快速、灵敏地检测夏枯草中的迷迭香酸和熊果酸，为保障夏枯草的品质及其安全性评估提供技术手段。
附图说明
图1为迷迭香酸和熊果酸混合标准溶液的色谱分离图
1: 迷迭香酸；2: 熊果酸（浓度均为5 mg/L）
a: 检测波长为330 nm；b: 检测波长为210 nm。
具体实施方式
实施例1：
采用Acquity UPLC H-Class Plus超高效液相色谱仪（美国waters公司），配有Acquity四元梯度泵、Acquity FTN自动进样器、Acquity柱温箱和Acquity FDA二极管阵列检测器。色谱条件：色谱柱：ACQUITY UPLC ® HSS T3 (2.1 mm×100 mm，1.7 μm)；柱温：30℃；进样量：5 μL；流动相A：水 (含0.1%乙酸)，流动相B：乙腈，梯度洗脱，洗脱程序见表1；流速：0.3 mL/min；检测波长：迷迭香酸和熊果酸检测波长分别为330 nm和210 nm。
实施例2：
配制一系列质量浓度的迷迭香酸和熊果酸的混合标准溶液，在选择的实验条件下进行测定。以峰面积 (y) 对质量浓度 (x) 进行线性拟合，获得工作曲线，结果如表2所示。分析物的线性相关系数大于0.9994，表明具有良好的线性关系。迷迭香酸和熊果酸的LODs（S/N=3）分别为0.02 mg/L和0.14 mg/L，LOQs (S/N=10)分别为0.05 mg/L和0.48 mg/L。
实施例3：
样品前处理：将夏枯草样品放置于50 ℃烘箱中干燥12 h，粉碎过24目筛。准确称取0.2 g（精确至0.001 g）夏枯草样品置于50 mL离心管中，加入10 mL 50%乙醇溶液，涡旋混匀后，室温下超声提取20 min，10000 r/min离心分离10 min。取提取液1 mL，加2 mL 50%乙醇水溶液，PSA吸附剂6 mg，振荡吸附30 min，10000 r/min离心10 min。取上清液1 mL，经0.22 μm有机微孔滤膜过滤后，待测。
实施例4：
称取0.2 g（精确至0.001 g）夏枯草粉末样品，分别添加三个不同浓度水平的迷迭香酸和熊果酸混合标准溶液，按上述样品前处理方法对样品进行处理后，进行UHPLC-PDA分析，计算样品加标回收率和精密度，结果见表3。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所做的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本领域的普通技术人员来说，可以根据本发明的技术方案和发明构思，作出相应改变和替代，而且性能或用途相同，都应当视为本发明的保护范围。
Claims (2)
1.一种基于超高效液相色谱法同时检测夏枯草中的迷迭香酸和熊果酸的方法，其特征在于：主要包括以下几个步骤：
（1）超高效液相色谱条件；
（2）迷迭香酸和熊果酸的同时检测；
（3）样品的前处理；
（4）样品的检测。
2.一种基于超高效液相色谱法同时检测夏枯草中的迷迭香酸和熊果酸的方法，其特征在于：主要包括以下几个步骤：
（1）超高效液相色谱条件
本发明中所使用的仪器是Acquity UPLC H-Class Plus超高效液相色谱仪（美国waters公司），配有Acquity四元梯度泵、Acquity FTN自动进样器、Acquity柱温箱和Acquity FDA二极管阵列检测器；色谱条件：色谱柱：ACQUITY UPLC ® HSS T3 (2.1 mm×100 mm，1.7 μm)；柱温：30 ℃；进样量：5 μL；流动相：A相为水（含0.1 %乙酸），B相为乙腈；梯度洗脱程序：0 min，10 % B；8~12 min，100 %B；12.1~14 min，10 % B；流速：0.3 mL/min；检测波长：迷迭香酸和熊果酸检测波长分别为330 nm和210 nm；
（2）迷迭香酸和熊果酸的同时检测
采用甲醇为溶剂，配制一系列质量浓度的迷迭香酸和熊果酸的混合标准工作液，在选择的实验条件下进行测定；以峰面积 (y) 对质量浓度 (x) 进行线性回归，得到线性方程；迷迭香酸（2-200 mg/L）和熊果酸（1-100 mg/L）线性关系良好（R2>0.9994）；迷迭香酸和熊果酸的检出限（LOD）分别为0.02和0.14 mg/L，定量限（LOQ）分别为0.05和0.48 mg/L；
（3）样品的前处理
将夏枯草样品放置于50 ℃烘箱中干燥12 h，粉碎过24目筛；准确称取0.2 g（精确至0.001 g）夏枯草样品置于50 mL离心管中，加入10 mL 50%乙醇溶液，涡旋混匀后，室温下超声提取20 min，10000 r/min离心分离10 min；取提取液1 mL，加2 mL 50%乙醇水溶液，PSA吸附剂6 mg，震荡吸附30 min，10000 r/min离心10 min；取上清液1 mL，经0.22 μm有机微孔滤膜过滤后，待测；
（4）样品的检测
称取0.2 g（精确至0.001 g）夏枯草样品，分别添加高、中、低三个不同浓度水平的迷迭香酸和熊果酸混合标准溶液，按上述样品前处理方法对样品进行处理后，进行UHPLC-PDA分析，计算样品加标回收率。
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