CN114958688B - 一种产酶菌 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种产酶菌。本发明提供了白蚁菌属(Isoptericola sp.)R17，其保藏号为CGMCC No.24684。上述白蚁菌或其菌悬液或其培养液或其发酵产物在如下1)‑4)中至少一种中的应用也是本发明保护的范围：1)作为或制备蛋白酶；2)水解蛋白；3)作为或制备淀粉酶；4)水解淀粉；5)作为或制备脂肪酶；6)水解脂肪；7)作为或制备β‑葡萄糖苷酶；8)水解七叶苷。本发明的实验证明了，本发明发现了菌株R17为白蚁菌属新种Isoptericola sp.，其具有水解蛋白、水解淀粉、水解脂肪和水解七叶苷的功能。

Description

一种产酶菌
技术领域
本发明生物技术领域，涉及一种产酶菌。
背景技术
白蚁菌属(Isoptericola)目前有12个有效描述种。同属菌株相关专利CN201410108595.2和CN202010178189.9报道了该属菌株能够产5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶(EPSPS)；CN201110379770.8和CN202010159005.4报道了该属菌株能够产褐藻胶裂解酶；CN201110315399.9报道该属菌株发酵液能够抑制H1N1等病毒；CN201711146282.6报道了该属菌株具有产生硝酸还原酶，还原银离子，进而合成纳米银的能力；CN201811458273.5报道了该属菌株具有拮抗、解磷、分泌吲哚乙酸、产ACC脱氨酶、耐盐等能力。
发明内容
本发明的一个目的是提供白蚁菌属(Isoptericola sp.)R17。
本发明提供的白蚁菌属(Isoptericola sp.)R17，其保藏号为CGMCC No.24684。
上述白蚁菌或其菌悬液或其培养液或其发酵产物在如下至少一种中的应用也是本发明保护的范围：
1)作为或制备蛋白酶；
2)水解蛋白；
3)作为或制备淀粉酶；
4)水解淀粉；
5)作为或制备脂肪酶；
6)水解脂肪；
7)作为或制备β-葡萄糖苷酶；
8)水解七叶苷。
本发明另一个目的是提供一种产品。
本发明提供的产品，其包括上述白蚁菌或其菌悬液或其培养液或其发酵产物。
上述产品具有如下1)-4)中至少一种功能：
1)水解蛋白；
2)水解淀粉；
3)水解脂肪；
4)水解七叶苷。
本发明还有一个目的是提供如下方法。
本发明提供了一种水解蛋白的方法，包括如下步骤：将含有蛋白的待测样本在上述白蚁菌或其菌悬液或其培养液或其发酵产物作用下，实现水解。在本发明的实施例中，以脱脂奶粉作为含有蛋白的待测样本。
或，本发明提供了一种水解淀粉的方法，包括如下步骤：将含有淀粉的待测样本在上述白蚁菌或其菌悬液或其培养液或其发酵产物作用下，实现水解。在本发明的实施例中，以可溶性淀粉作为含有淀粉的待测样本。
或，一种水解脂肪的方法，包括如下步骤：将含有脂肪的待测样本在上述白蚁菌或其菌悬液或其培养液或其发酵产物作用下，实现水解。在本发明的实施例中，以脂肪源(2％聚乙烯醇水溶液与三丁酸甘油酯按1:9混合而成)作为含有脂肪的待测样本。
或，一种水解七叶苷的方法，包括如下步骤：将含有七叶苷的待测样本在上述白蚁菌或其菌悬液或其培养液或其发酵产物作用下，实现水解。在本发明的实施例中，以七叶苷作为含有七叶苷的待测样本。
本发明的实验证明了，本发明发现了菌株R17为白蚁菌属新种Isoptericola sp.，其具有水解蛋白、水解淀粉和水解脂肪的功能。
保藏说明
菌种名称：白蚁菌属
拉丁名：Isoptericola sp.
菌株编号：R17
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称：CGMCC
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期：2022年4月15日
保藏中心登记入册编号：CGMCC No.24684
附图说明
图1为R17系统发育树。
图2为R17在NCBI上BLAST比对结果。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中的百分比如无特殊说明，均为质量体积百分含量，g：ml，且均为体系中的终浓度。
实施例1、白蚁菌属R17菌株的分离鉴定
1、菌株R17分离
菌株R17采用常规方法分离自张家口盐碱土。
2、形态鉴定
R17在LB(10g/L NaCl、10g/L蛋白胨、5g/L酵母粉，余量为水，pH 7-8)固体培养基上形成细小的浅青色菌落，革兰氏阳性，杆状。
3、分子鉴定
将活化的R17接种在含有2％氯化钠和0.6％硫酸镁的液体LB培养基中，30℃、150rpm振荡培养24h，得到菌液。
取1ml新鲜培养的菌液4℃、8000rpm离心5min，收集菌体于2ml离心管中，采用DNA提取试剂盒提取DNA。电泳检测后，采用通用引物8F/1492R进行PCR扩增。
PCR产物电泳检测后，测定16S rDNA的基因序列，为序列表中序列1。
经过比对后，R17属于白蚁菌属(Isoptericola)，但跟已有菌株的相似性很低，具体如下：
使用软件MEGA与白蚁菌属模式株以及专利CN202010178189.9、CN201110379770.8、CN202010159005.4、CN201110315399.9、CN201811458273.5等报道的菌株构建系统发育树如图1。
另外其它专利CN201410108595.2菌株来源为Isoptericola variabilis，CN201711146282.6菌株明显属于图1中的Ⅱ区，与在Ⅰ区的R17明显不同。R17与Ezbiocloud数据库比对最接近的菌株Isoptericola halotolerans、Isoptericola rhizophila和Isoptericola chiayiensis的相似性分别只有98.67％、98.38％和98.12％。
使用NCBI数据库BLAST比对结果如图2，与Isoptericola halotolerans strainJM-T22最高相似性只有98.92％。
因此，综上表明R17菌株属于一种新发现的属于白蚁菌属新种。
菌株R17于2020年4月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，保藏机构简称：CGMCC，保藏编号为CGMCC No.24684，分类命名为白蚁菌属Isoptericola sp.。
实施例2、白蚁菌属R17菌株的功能研究
1、R17 CGMCC No.24684蛋白酶活性检测
蛋白酶固体培养基：在去离子水中加入5％脱脂奶粉和1.5％琼脂，灭菌后倒固体平板。
将活化的R17菌液(在LB培养基中培养得到的菌液)接种在含有2％氯化钠和0.6％硫酸镁的液体LB培养基中，30℃、150rpm振荡培养24h，得到菌液(约为2×108cfu/ml)。
取5μl新鲜的菌液点接在蛋白酶固体培养基上，30℃静置培养48h。
观测，结果显示R17菌落周围出现明显的透明圈，透明圈与菌落的圈径比为11/7＝1.57，说明菌株R17具有较好的蛋白酶活性。
2、R17 CGMCC No.24684淀粉酶活性检测
淀粉固体培养基：在LB液体培养基中加入2％氯化钠、0.6％硫酸镁、0.2％可溶性淀粉和1.5％琼脂，灭菌后倒固体平板。
将活化的R17菌液接种在含有2％氯化钠和0.6％硫酸镁的液体LB培养基中，30℃、150rpm振荡培养24h，得到菌液(约为2×108cfu/ml)。
取5μl新鲜的菌液点接在淀粉固体培养基上，30℃静置培养48h，加卢氏典液显色。
观测，结果显示R17菌落周围出现明显的透明圈，透明圈与菌落的圈径比为15/6＝2.5，说明菌株R17具有较好的淀粉酶活性。
3、R17 CGMCC No.24684脂肪酶活性检测
固体培养基：在LB液体培养基中加入2％氯化钠、0.6％硫酸镁、2％脂肪源(2％聚乙烯醇水溶液(体积百分含量)与三丁酸甘油酯按1:9混合而成)和1.5％琼脂，灭菌后倒固体平板。
将活化的R17菌液接种在含有2％氯化钠和0.6％硫酸镁的液体LB培养基中，30℃、150rpm振荡培养24h，得到菌液(约为2×108cfu/ml)。
取5μl新鲜的菌液点接在脂肪固体培养基上，30℃静置培养48h。
观测，结果显示R17菌落周围出现明显的透明圈，透明圈与菌落的圈径比为10/4＝2.5，说明菌株R17具有较好的脂肪酶活性。
4、R17 CGMCC No.24684的β-葡萄糖苷酶活性检测
固体培养基：在LB培养基中加入2％氯化钠、0.6％硫酸镁、0.05％七叶苷、0.25％柠檬酸高铁铵和1.5％琼脂，灭菌后倒固体平板。
将活化的R17菌液接种在含有2％氯化钠和0.6％硫酸镁的液体LB培养基中，30℃、150rpm振荡培养24h，得到菌液(约为2×108cfu/ml)。
取5μl新鲜的菌液点接在上述固体培养基上，30℃静置培养48h。
观测，结果显示R17菌落周围出现明显的黑色沉淀圈，黑色沉淀圈与菌落的圈径比为12/5＝2.4，说明菌株R17具有较好的β-葡萄糖苷酶活性。
SEQUENCE LISTING
<110>北京大学
<120> 一种产酶菌
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1386
<212> DNA
<213> Isoptericola sp.
<400> 1
tgcagtcgaa cggtgaagcc cagcttgctg ggtggatcag tggcgaacgg gtgagtaaca 60
cgtgagcaac ctgccctcca ctttgggata agccttggaa acgaggtcta ataccaaata 120
tgagcatgcg acgcatgtcg tgtgttggaa agtttttcgg tgggggatgg gctcgcggcc 180
tatcagcttg ttggtggggt aatggcctac caaggcgtcg acgggtagcc ggcctgagag 240
ggcgaccggc cacactggga ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg cagcagtggg 300
gaatattgca caatgggcga aagcctgatg cagcgacgcc gcgtgaggga tgacggcctt 360
cgggttgtaa acctctttca gcagggaaga aggcttcggt tgacggtacc tgcagaagaa 420
gcgccggcta actacgtgcc agcagccgcg gtaatacgta gggcgcaagc gttgtccgga 480
attattgggc gtaaagagct cgtaggcggt ctgtcgcgtc tggtgtgaaa acccgaggct 540
caacctcggg cttgcatcgg gtacgggcag actagagtgc ggtaggggag actggaattc 600
ctggtgtagc ggtggaatgc gcagatatca ggaggaacac cgatggcgaa ggcaggtctc 660
tgggccgcaa ctgacgctga ggagcgaaag catggggagc gaacaggatt agataccctg 720
gtagtccatg ccgtaaacgt tgggcactag gtgtggggct cattccacga gttccgtgcc 780
gcagctaacg cattaagtgc cccgcctggg gagtacggcc gcaaggctaa aactcaaagg 840
aattgacggg ggcccgcaca agcggcggag catgcggatt aattcgatgc aacgcgaaga 900
accttaccaa ggcttgacat gcactggacg ctgccagaga tggtggttcc gcaaggtcgg 960
tgcacaggtg gtgcatggtt gtcgtcagct cgtgtcgtga gatgttgggt taagtcccgc 1020
aacgagcgca accctcgtcc catgttgcca gcgggttatg ccggggactc atgggagact 1080
gccggggtca actcggagga aggcggggat gacgtcaaat catcatgccc cttatgtctt 1140
gggcttcacg catgctacaa tgcccggtac agagggctgc gataccgtaa ggtggagcga 1200
atcccaaaaa gccggtctca gttcggattg gggtctgcaa ctcgacccca tgaagtcgga 1260
gtcgctagta atcgcagatc agcaacgctg cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca 1320
ccgcccgtca agtcacgaaa gttggtaaca cccgaagctc atggcctaac cggtttccgg 1380
ggggag 1386

Claims (7)

1.白蚁菌属（Isoptericola sp.）R17，其保藏号为CGMCC No. 24684。
2.权利要求1所述的白蚁菌或其菌悬液在如下至少一种中的应用：
1）制备蛋白酶；
2）水解蛋白；
3）制备淀粉酶；
4）水解淀粉；
5）制备脂肪酶；
6）水解脂肪；
7）制备β-葡萄糖苷酶；
8）水解七叶苷。
3.一种产品，其包括权利要求1所述的白蚁菌或其菌悬液。
4.一种水解蛋白的方法，包括如下步骤：将含有蛋白的待测样本在权利要求1所述的白蚁菌或其菌悬液或其培养液作用下，实现水解。
5.一种水解淀粉的方法，包括如下步骤：将含有淀粉的待测样本在权利要求1所述的白蚁菌或其菌悬液或其培养液作用下，实现水解。
6.一种水解脂肪的方法，包括如下步骤：将含有脂肪的待测样本在权利要求1所述的白蚁菌或其菌悬液或其培养液作用下，实现水解。
7.一种水解七叶苷的方法，包括如下步骤：将含有七叶苷的待测样本在权利要求1所述的白蚁菌或其菌悬液或其培养液作用下，实现水解。
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