CN114886996B - 一种经阴道治疗宫颈炎的生肤油溶液及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物新适应症技术领域，具体公开了一种生肤油溶液的制备方法以及其在经阴道治疗宫颈炎中的应用。本发明的生肤油溶液的制备方法为：1）生肤油醇提物冻干粉的制备：按一定重量份比例分别取黄芩、黄连、黄柏、大黄、黄芪等14种原材料分别加入容器中，再向容器中加入体积分数为60%‑80%的乙醇溶液，经浸泡，超声提取，过滤，浓缩，冷冻干燥得到；2）将生肤油醇提取物冻干粉末以及蛋黄卵磷脂溶于麻油中，制备得到油相，再将油相滴入由Tween 80及甘油溶于超纯水得到的水相中，搅拌后高速剪切、高压均质，得到。本发明的生肤油溶液具有较好的“清热解毒、清热凉血、益气活血、祛腐生肌”之功效，对由湿热下注导致的轻度或中度宫颈炎效果较好。

Description

一种经阴道治疗宫颈炎的生肤油溶液及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于药物新适应症技术领域，具体涉及一种生肤油溶液的制备方法以及其在经阴道治疗宫颈炎中的应用。

背景技术

宫颈炎是女性生殖器官中最常见且发病率较高的一种妇科炎症性疾病(已婚妇女发病率达50％以上)，多因性交、分娩、流产或手术引起的子宫颈裂伤或外翻，受到病原菌的侵袭所致。宫颈阴道部的鳞状上皮厚，对炎症的抵抗力强，而宫颈管的柱状上皮薄，抵抗力弱，易受细菌、病毒等感染。宫颈炎的临床主要表现为阴道分泌物增多、宫颈出血、水肿以及宫颈肥大、宫颈息肉及宫颈糜烂等。如果其迁延不愈或反复发作，会给患者造成很大的生理、心理之负担，甚至恶变成癌，已经给众多的女性带来了极大的困扰。近年来采用口服抗生素、激光、微波、冷冻等单纯的西医治疗，往往仅能够对于患者的临床症状进行控制，不仅治疗周期长、费用高，而且并不能够根治该疾患。

宫颈炎属于中医的“带下”、“腹痛”的范畴，被认为与湿邪淫毒有关，并影响到了患者的任脉以及带脉，进而出现了带脉失约、任脉不固而发病。依据临床的辨证论治，通常考虑“利湿止带”和“祛腐生肌”治法，采用血竭、白芷、莪术、苦参等中药研磨成粉，以栓剂、喷敷、带线棉球上药、凝胶等局部涂抹方式进行宫颈敷药，以及阴道灌洗等实施救治，使药物通过阴道黏膜吸收进入局部组织或全身血液循环达到治疗目的。不难发现，现有的中医局部用药虽有一定效果，但是制备工艺粗糙、不规范，导致其治疗结果的客观性、准确性、可信性备受质疑。

随着全球的纳米科技正在迅猛发展，纳米材料相比于传统的药物，具有更高的生物利用度、更好的溶解性、靶向性及缓控释性等，因此可以提高药效，降低不良反应，这使其在药物传输、靶向治疗等领域得到广泛应用(肝脏诱癌剂及其制备方法.ZL201610024291.7；纳米六神丸溶液及制备方法.ZL201610859484.4)。申请人的前期研究证实了生肤油在针对烧烫伤(三黄生肤油对家兔Ⅲ度烫伤创面的作用.中华烧伤杂志.2013,29:50-54；一种治疗烧烫伤的外用生肤油及其制备方法和应用.ZL201210426168.X)、糖尿病性足溃疡(三黄生肤油对糖尿病大鼠末梢循环障碍和足溃疡的作用及其机制.中华烧伤杂志.2016,32:168-175；外用生肤油在制备预防或治疗糖尿病性末梢循环障碍及足溃疡的药物中的应用.ZL201510512874.X)和溃疡性结肠炎(一种治疗溃疡性结肠炎的生肤油在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的应用.ZL201910267391.6)等防治过程中，发现其不仅能有效预防伤后创面感染，迅速止痛消肿的同时也能较好地促进并加速创面愈合，缩短创面愈合时间。因此，设计将生肤油纳米化，期望它在对于慢性宫颈炎的治疗能相较于临床常用或一线治疗药物，达到更好的效果。

发明内容

针对背景中现有技术手段治疗宫颈炎中遇到的患病部位为生殖道的特殊性(易感染、更反复)、治疗效果差等问题，本发明提供了一种能够对宫颈炎有更好的防治作用的生肤油及制备方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种生肤油溶液，其特征在于：所述生肤油溶液的溶质是生肤油醇提物冻干粉末。

作为优选，本发明所采用的生肤油溶液是生肤油醇提物水包油制剂；所述生肤油醇提物水包油制剂中生肤油醇提物的含量不大于30mg/ml，优选为30mg/ml。

一种用于制备如前所述的生肤油溶液的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

1)将生肤油醇提物冻干粉末以及蛋黄卵磷脂溶于食用植物油中，制备得到油相；所述蛋黄卵磷脂的终浓度是6％(W/V)；所述食用植物油选自芝麻籽油和椰油中的至少一种。

2)将Tween 80以及甘油溶于超纯水中，制备得到水相；所述Tween 80的终浓度是1.25％(V/V)；所述甘油的终浓度是2.81％(V/V)；

3)在60℃恒温水浴的条件下，将步骤1)制备得到的油相滴入步骤2)制备得到的水相中，在1200r/min的条件下搅拌15min；所述油相与水相的体积比是1：4；

4)在10000rpm的条件下高剪切2min，然后在1000bar的条件下高压均质6次得到生肤油醇提物的水包油制剂，即生肤油溶液；生肤油醇提物水包油制剂的zeta电位分布均匀，平均电位为－60mV-－40mV，粒径主要分布在50～300nm范围内，分布范围较窄，且无多重散射现象。

本发明的发明构思如下：

申请人的前期研究证实了外用生肤油(黄芩、黄连、黄柏、大黄等清热燥湿，泻火解毒，益气脱毒生肌，为君；黄芪、当归、地榆、乳香、没药等活血行气，化瘀止痛，凉血止血，达行气活血通络，消肿止痛，为臣；地黄、白芨、白芷、白薇等敛阴生肌，解毒疗疮，消肿排脓，可使前药清热不伤阴，解毒不耗气，用为佐；冰片和食用植物油调和诸药共奏脱毒与生肌之功为使)在针对烧烫伤、糖尿病性足溃疡和溃疡性结肠炎等疑难疾患的防治过程中，发现其不仅能有效预防伤后创面感染，迅速止痛消肿的同时也能较好地促进并加速创面愈合，缩短创面愈合时间；也发现了合理地使用脂质纳米技术，包被致癌药物(肝脏诱癌剂及其制备方法.ZL201610024291.7)或治疗癌症药物(纳米六神丸溶液及制备方法.ZL201610859484.4)，从而发挥各自更好的靶向作用。那么，生肤油能否可以被制成较小尺寸的制剂甚至为纳米制剂，并针对宫颈炎恶劣的发病环境而发挥疗效，甚至比市场上高知名度的药物(比如甲硝唑呋喃唑酮栓)的效果还要好呢？因此，后期对生肤油溶液防治宫颈炎进行了大量的科学实验研究，通过建立化学药物诱导的宫颈炎模型，研究生肤油溶液对相应病症的治疗作用。研究结果表明给药后生肤油不仅能对模型动物宫颈炎有明显的治疗作用，而且其治疗效果明显优于临床治疗的阳性对照药甲硝唑呋喃唑酮栓。再者，临床上保守治疗测试结果也表明经阴道给予生肤油溶液涂抹处置能够快速缓解临床上多有的湿热下注导致的慢性宫颈炎之疾苦(粘稠状白带多，伴外阴瘙痒，或腰骶部有重坠感，经期以及性生活后明显加重；阴窥镜下可见宫颈糜烂；自愿者亦都是尝试过自购或到妇科门诊保守治疗，在确定治疗效果不理想后自愿选用了本发明的生肤油醇提物水包油制剂)。

为了实现第一个目的，本发明采用了如下技术措施：

一种防治宫颈炎的生肤油溶液，由以下重量份配比的原材料制备而成：黄芩10-30重量份、黄连10-30重量份、黄柏10-30重量份、大黄10-30重量份、黄芪10-30重量份、当归10-30重量份、地榆10-30重量份、乳香10-30重量份、没药10-30重量份、地黄10-30重量份、白芨10-30重量份、白芷10-30重量份、白薇10-30重量份、冰片3-8重量份。

为了实现第二个目的，本发明采用了如下技术措施：

一种上述经阴道给药且防治宫颈炎的生肤油溶液之制备方法，其步骤如下：本发明提供了一种生肤油溶液，生肤油溶液的溶质是生肤油醇提物冻干粉末，生肤油溶液是生肤油醇提物水包油制剂；其中生肤油醇提物的水包油制剂中生肤油醇提物的含量不大于30mg/ml。

其中，生肤油醇提物冻干粉末的制备方式是按一定重量份比例取生肤油14种原材料(各原料的重量份为：黄芩10-30重量份、黄连10-30重量份、黄柏10-30重量份、大黄10-30重量份、黄芪10-30重量份、当归10-30重量份、地榆10-30重量份、乳香10-30重量份、没药10-30重量份、地黄10-30重量份、白芨10-30重量份、白芷10-30重量份、白薇10-30重量份、冰片3-8重量份)共500g，除冰片外其余药物均研细(过200目筛)后置10L不锈钢桶中，加体积分数为60％-80％的乙醇4L-5L，浸泡2-3h，超声提取2-3次，每次2-3h，并将两次过滤的上清液经多级闪蒸仪快速浓缩，再经冷冻干燥得到生肤油醇提取物(得率为13.8％-15.6％)。

接着，本发明还提供了一种用生肤油提物冻干粉末制备生肤油溶液的方法，该方法包括以下步骤：①将生肤油醇提物冻干粉末以及蛋黄卵磷脂溶于食用植物油中，制备得到油相；蛋黄卵磷脂的终浓度是6％(W/V；g/ml)；②将Tween 80以及甘油溶于超纯水中，制备得到水相；Tween 80的终浓度是1.25％(V/V)；甘油的终浓度是2.81％(V/V)；③在60℃恒温水浴的条件下，将步骤1)制备得到的油相滴入步骤2)制备得到的水相中，在1200r/min的条件下搅拌15min；油相与水相的体积比是1：4；④在10000rpm的条件下高剪切2min，然后在1000bar的条件下高压均质6次即得到生肤油醇提物水包油制剂。其粒径主要分布在50～300nm范围内，分布范围较窄，且无多重散射现象。

为了实现本发明的第三个目的，本发明还采用了如下技术措施：

本发明同时也提供了上述经阴道给药之生肤油在制备防治宫颈炎药物中的应用，具体在制备治疗临床多有的湿热下注导致的(粘稠状白带多，伴外阴瘙痒，或腰骶部有重坠感，性生活后明显加重；阴窥镜下可见宫颈糜烂)轻、中度宫颈炎药物中的应用。

本发明各中药原料的组方原则如下：黄芩、黄连、黄柏、大黄清热燥湿，泻火解毒；黄芪、当归、地榆、乳香、没药活血化瘀，消肿止痛；地黄、白芨、白芷、白薇敛阴生肌，祛腐疗疮，消肿排脓；冰片调和诸药共奏脱毒与生肌之功。

本发明中宫颈炎大鼠模型建立和指标评估如下：

除空白对照组给予等量生理盐水外，用l mL注射器接灌胃针头插入大鼠阴道深处约1cm处，注入25％苯酚胶浆0.25mL后，用棉球固定阴道口；上述处置每天1次，连续7天，建立苯酚胶浆诱导的子宫颈炎模型。造模过程中注意观察动物阴道有无白色分泌物，有无红肿和充血现象，若出现上述现象则造模成功。造模同时给药，上午给予造模药物，下午给予治疗药物。治疗组将SD大鼠固定，头部朝下，每天用灌胃针头轻轻插入大鼠阴道深处约2cm处给予相应受试物(生理盐水或生肤油或阳性药)1次。

给药期间，每天称量大鼠体重、观察阴道口红肿情况以及脓性分泌物流出量等，每日用相机拍照记录大鼠阴道口红肿程度及分泌物变化情况，连续7天。给药7天后，取阴道至子宫角处组织，将脏器用纱布包裹，置于福尔马林溶液中固定24h后；组织流水冲洗0.5h左右；取组织厚度为3mm；将所取组织放入脱水机中脱水；石蜡包埋后制得组织蜡块。HE常规染色。光学显微镜下观察，观察阴道至子宫组织形态学变化及黏膜、黏膜下间质形态学的炎性改变，对患部组织进行病理学评分。

与现有技术相比，本发明具有以下优点和效果：

1)研究结果表明生肤油溶液对化学药物(采用l mL注射器接灌胃针头插入大鼠阴道深处约1cm处，注入25％苯酚胶浆0.25mL)诱发的大鼠宫颈炎有较好的防治作用。在造模开始第5天模型组大鼠阴道口均出现红肿现象，并且在第7天开始就有大量的分泌物。从HE染色结果看，模型组大鼠患部黏膜上皮有异常增生并伴有明显的坏死组织脱落，阴道壁变厚，固有层出现严重充血和水肿，伴有大量炎细胞浸润。相比模型组，阳性药甲硝唑呋喃唑酮栓组大鼠阴道口的红肿以及分泌物情况有轻微缓解，其患部组织黏膜上皮有部分坏死组织脱落，阴道壁变厚，固有层出现轻度充血和水肿，伴有较多炎细胞浸润。与模型组和阳性药组比较，给药期间生肤油溶液处理大鼠后阴道口无明显红肿，仅在第7天时有少量分泌物。而且从患部病理组织的切片来看，黏膜上皮无坏死组织脱落，阴道黏膜上皮细胞增厚较轻，固有层充血和水肿以及炎细胞浸润程度均明显减轻，尤其是实施例生肤油①组阴道组织切片中黏膜完整、粘膜下组织基本恢复正常。2)临床自愿者测试结果也表明生肤油溶液对轻、中度宫颈炎的改善效果相当不错。

本发明中生肤油溶液防治宫颈炎具有以下优势：①药物成本低；②药物稳定性强；③给药方便、痛苦少；④治疗效果较市场知名度高的一线治疗药物甲硝唑呋喃唑酮栓要更为快且好。

附图说明

图1为实施例1制备的生肤油溶液的粒径、电镜和zeta电位图。生肤油溶液的粒径分布在60～220nm范围内，分布范围较窄，且无多重散射现象；其zeta电位分布均匀，平均为－43.5mV。A图中左上角图为电镜图，其中的标尺为0.2μm。

图2为实施例2制备的生肤油溶液的粒径、电镜和zeta电位图。生肤油溶液的粒径分布在50～300nm范围内，分布范围较窄，且无多重散射现象；其zeta电位分布均匀，平均为－53.8mV。A图中左上角图为电镜图，其中的标尺为0.2μm。

图3为实施例1、2制备的生肤油溶液对宫颈炎模型大鼠的体重的改善影响图(Mean±SEM，n＝4)。

图4为实施例1、2制备的生肤油溶液对宫颈炎模型大鼠的阴道口红肿、炎性分泌物等大体观的改善影响图。A为阴道口大体观代表图；B为各组大鼠阴道红肿、分泌物等变化的阴道口炎症评分图。

图5为实施例1、2制备的生肤油溶液对宫颈炎模型大鼠的阴道组织病理结构的改善影响图。A为HE染色代表图；B为各组大鼠阴道组织结构病理变化(阴道炎症)的评分图。

图6为实施例1制备的经阴道给药之生肤油溶液对轻度宫颈炎(34岁龙女士半年来常出现内裤上粘稠状附着物且有臭味，伴外阴瘙痒)的修复影响图。其中，A和B的左上为生理盐水润洗宫颈后的阴道镜表现图；A和B的右上与右下分别为醋酸涂抹试验宫颈阴道镜滤光镜下表现图和醋酸涂抹试验宫颈阴道镜表现图；A和B的左下为碘涂抹试验宫颈阴道镜表现图。

图7为实施例1制备的经阴道给药之生肤油溶液对中度宫颈炎(42岁王女士近两年来内裤贴阴处见粘稠状白带且量较多、味重，伴外阴瘙痒和腰骶部重坠感，性生活后明显加重)的修复影响图。其中，A和B的左上为生理盐水润洗宫颈后的阴道镜表现图；A和B的右上与右下分别为醋酸涂抹试验宫颈阴道镜滤光镜下表现图和醋酸涂抹试验宫颈阴道镜表现图；A和B的左下为碘涂抹试验宫颈阴道镜表现图。

需要说明的是：本申请文件中为了简明方便，实施例1制备的生肤油溶液简称为生肤油①组，实施例2制备的生肤油溶液简称为生肤油②组。

具体实施方式

下面申请人将结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步的详细说明，目的在于使本领域技术人员对本申请有更加清楚的理解和认识。

本发明实施例中所用黄芩、黄连、黄柏、大黄、黄芪、当归、地榆、乳香、没药、地黄、白芨、白芷和白薇13味中药材干粉末均为过200目筛。

实施例1：生肤油溶液①的制备与表征

1)生肤油溶液的制备

生肤油醇提物冻干粉制备：取生肤油原材料(黄芩、大黄、黄连、黄柏的干粉末各90g，黄芪、当归、地榆、地黄、乳香、没药、白芷、白薇、白芨的干粉末各30g，冰片9g)639g，搅拌均匀后置10L不锈钢桶中，加60v/v％乙醇6.4L，浸泡3h，超声提取2次，每次2h，并将两次过滤的上清液经多级闪蒸仪快速浓缩，再经冷冻干燥得到生肤油醇提取物冻干粉末(88.2g)。

生肤油溶液的配制：①将生肤油醇提物冻干粉末以及蛋黄卵磷脂溶于芝麻籽油中制备得到油相，蛋黄卵磷脂的终浓度是6％(W/V)。②将Tween 80以及甘油溶于超纯水中制备得到水相，Tween 80的终浓度是1.25％(V/V)，甘油的终浓度是2.81％(V/V)。③在60℃恒温水浴的条件下，将油相滴入水相中，在1200r/min的条件下搅拌15min，油相与水相的体积比是1：4。④在10000rpm的条件下高剪切2min，然后在1000bar的条件下高压均质6次即得到生肤油溶液，所得生肤油溶液中的生肤油醇提物的含量等于30mg/ml。

2)生肤油溶液的粒径、zeta电位和电镜之表征

测定生肤油溶液的粒径时，将样品用超纯水稀释，使得其count rate在200～300Kcps(1,000counts per second)之间，然后用激光粒度仪测定粒径及多分散指数，散射角90°，温度25℃；zeta电位测定时，用0.9％(w/w)的氯化钠溶液将生肤油溶液的电导率调至50S/cm。如图1所示，实施例1制备的生肤油溶液①的粒径主要分布在60～220nm范围内，分布范围较窄，平均粒径在120nm左右，且无多重散射现象，而且其zeta电位分布均匀，平均为-43.5mV。通过场发射扫描电镜观察生肤油的微观形貌。先用超纯水将新制备的实施例1制备的生肤油溶液①稀释50倍，再将其超声分散1min，取数滴其稀释液滴在400目碳包覆的铜网上，使铜网底部的滤纸对水滴进行5min的吸附。待铜网自然干燥后，于场发射扫描电镜(HITACHI，SU8010，加速电压35kV)下观察微观形貌。

实施例2：生肤油溶液②的制备与表征

1)生肤油溶液的制备

生肤油醇提物冻干粉制备：取生肤油原材料(黄芪、当归、地榆、乳香、没药、地黄、白芷、白薇、白芨的干粉末各90g和黄芩、大黄、黄连、黄柏的干粉末各30g，冰片24g)954g，搅拌均匀后置10L不锈钢桶中，加80v/v％乙醇9.5L，浸泡3h，超声提取2次，每次2h，并将两次过滤的上清液经多级闪蒸仪快速浓缩，再经冷冻干燥得到生肤油醇提取物冻干粉末(148.8g)。

生肤油溶液的配制：①将生肤油醇提物冻干粉末以及蛋黄卵磷脂溶于芝麻籽油中制备得到油相，蛋黄卵磷脂的终浓度是6％(W/V)。②将Tween 80以及甘油溶于超纯水中制备得到水相，Tween 80的终浓度是1.25％(V/V)，甘油的终浓度是2.81％(V/V)。③在60℃恒温水浴的条件下，将油相滴入水相中，在1200r/min的条件下搅拌15min，油相与水相的体积比是1：4。④在10000rpm的条件下高剪切2min，然后在1000bar的条件下高压均质6次即得到生肤油溶液，所得生肤油溶液中的生肤油醇提物的含量等于30mg/ml。

2)生肤油溶液的粒径、zeta电位和电镜之表征

测定生肤油溶液的粒径时，将样品用超纯水稀释，使得其count rate在200～300Kcps(1,000counts per second)之间，然后用激光粒度仪测定粒径及多分散指数，散射角90°，温度25℃；zeta电位测定时，用0.9％(w/w)的氯化钠溶液将生肤油溶液的电导率调至50S/cm。如图2所示，实施例2制备的生肤油溶液②的粒径主要分布在50～300nm范围内，分布范围较窄，平均粒径在180nm左右，且无多重散射现象，而且其zeta电位分布均匀，平均为-53.8mV。通过场发射扫描电镜观察生肤油的微观形貌。先用超纯水将新制备的实施例2制备的生肤油溶液②稀释50倍，再将其超声分散1min，取数滴其稀释液滴在400目碳包覆的铜网上，使铜网底部的滤纸对水滴进行5min的吸附。待铜网自然干燥后，于场发射扫描电镜(HITACHI，SU8010，加速电压35kV)下观察微观形貌。

实施例3实施例1、2制备的生肤油溶液对宫颈炎模型大鼠的体重的影响

受试动物为SPF级SD(6周龄)雌性大鼠20只(由辽宁长生生物技术股份有限公司提供)。自由饮水饮食，饲养间温度保持在25±1℃，明暗周期为12小时。

1)分组与给药

将20只大鼠均分为5组，每组4只：空白对照组、模型组、阳性药组、实施例生肤油①组，实施例生肤油②组。除空白对照组外，其他4组均采用大鼠阴道深部注入苯酚胶浆方法建立子宫颈炎模型(参照七叶皂苷凝胶对宫颈炎大鼠的治疗作用.分子影像学杂志.2019,42(3):364-368)，用l mL注射器接灌胃针头插入大鼠阴道深处约1cm处，注入25％苯酚胶浆0.25mL，注入苯酚胶浆后，棉球固定阴道口，每天1次，共7天。造模过程中注意观察动物阴道有无白色分泌物，有无红肿和充血现象，若出现上述现象则造模成功。造模同时给药，上午给予造模药物，下午给予治疗药物。治疗组将SD大鼠固定，头部朝下，用灌胃针头轻轻插入大鼠阴道深处约2cm处给予相应药物，实施例生肤油①、②组给予0.25ml相应生肤油溶液，每天1次；阳性药组经阴道置入0.25ml甲硝唑呋喃唑酮栓(哈药集团；给药前事先温化成液态)治疗，每天1次；空白对照组及模型组给予等量生理盐水，每天1次。并称量大鼠体质量，连续7天。

2)大鼠体重测定

于实验第1、7天时使用电子天平对大鼠进行体重测量，记录大鼠体重。

3)实验结果

连续7天给药后，对模型大鼠体重进行测定，结果如图3所示。图3数据表明，与实验前相比，模型组及阳性药组大鼠体重略有下降，而空白组和生肤油处置的大鼠体重呈上升趋势，但各组大鼠体重之间无显著性差异，说明短期宫颈炎模型对大鼠体重无明显影响，使用生肤油治疗对模型大鼠的体重也无影响。

实施例4实施例1、2制备的生肤油溶液对宫颈炎模型大鼠阴道口大体观的影响

受试动物为SPF级SD(6周龄)大鼠20只(由辽宁长生生物技术股份有限公司提供)。自由饮水饮食，饲养间温度保持在25±1℃，明暗周期为12小时。

1)分组与给药

将20只大鼠均分为5组，每组4只：空白对照组、模型组、阳性药组、实施例生肤油①组，实施例生肤油②组。采用大鼠阴道深部注入苯酚胶浆方法建立子宫颈炎模型(参照论文“七叶皂苷凝胶对宫颈炎大鼠的治疗作用.分子影像学杂志.2019,42(3):364-368”，建立本发明动物模型)，用l mL注射器接灌胃针头插入大鼠阴道深处约1cm处，注入25％苯酚胶浆0.25mL，注入苯酚胶浆后，棉球固定阴道口，每天1次，共7天。造模过程中注意观察动物阴道有无白色分泌物，有无红肿和充血现象，若出现上述现象则造模成功。造模同时给药，上午给予造模药物，下午给予治疗药物。治疗组将SD大鼠固定，头部朝下，用灌胃针头轻轻插入大鼠阴道深处约2cm处给予相应药物，实施例生肤油①、②组给予0.25ml相应生肤油溶液，每天1次；阳性药组给予阴道置入0.25ml甲硝唑呋喃唑酮栓(哈药集团；给药前事先温化成液态)治疗，每天1次；空白对照组及模型组给予等量生理盐水，每天1次。并观察阴道口红肿情况以及脓性分泌物流出量等，每日用相机拍照记录大鼠阴道口红肿程度及分泌物变化情况，连续7天。

2)大鼠阴道口大体观构观察

于实验的第1、3、5、7天拍照记录大鼠阴道口的分泌物及红肿情况。对实验期间所有大鼠的阴道口红肿及分泌物情况进行评分(参照论文“七叶皂苷凝胶对宫颈炎大鼠的治疗作用.分子影像学杂志.2019,42(3):364-368”，设立本发明的评分标准)。阴道口红肿评分标准分为无(0分)、轻度(1分)、中度(2分)和重度(3分)等四级；阴道分泌物评分标准分为无(0分)、少量(1分)、中量(2分)、大量(3分)等四级。阴道口红肿及分泌物两个指标进行评分后，各以权重50％计算，得到阴道口炎症评分。

3)实验结果

连续7天给药后，对模型大鼠阴道大体观进行观察。如图4所示，空白组(0.00±0.00)阴道口表面光滑，无红肿与分泌物；与空白组相比，见模型组大鼠阴道或宫颈黏膜在3天后出现不同程度的红肿(1.40±0.24)，并有少量分泌物流出，质地粘稠；在第5天、7天出现明显的充血水肿和间质增生，使阴道及宫颈肥大(2.50±0.24，p<0.001；5.60±0.24，p<0.001)，并且伴大量黄色脓性分泌物流出，阴道黏膜变性或脱落。与模型组和阳性药组(第5天时为2.00±0.37；第7天时为4.20±0.37，p<0.001)相比，生肤油组大鼠阴道红肿明显较轻，分泌物明显减少，质稀、色清(生肤油②组在第5天时为2.00±0.32；在第7天时为3.20±0.37，p<0.001)。尤其是生肤油①组(第5天时为1.50±0.37，p<0.05；第7天时为2.40±0.24，p<0.001)效果最为显著，在实验第7天时基本没有异常分泌物，红肿也基本消退。

实施例5实施例1、2制备的生肤油溶液对宫颈炎模型大鼠阴道组织结构的影响

受试动物为SPF级SD(6周龄)大鼠20只(由辽宁长生生物技术股份有限公司提供)。自由饮水饮食，饲养间温度保持在25±1℃，明暗周期为12小时。

1)分组与给药

将20只大鼠均分为5组，每组4只：空白对照组、模型组、阳性药组、实施例生肤油①组，实施例生肤油②组。采用大鼠阴道深部注入苯酚胶浆方法建立子宫颈炎模型(七叶皂苷凝胶对宫颈炎大鼠的治疗作用.分子影像学杂志.2019,42(3):364-368)，用l mL注射器接灌胃针头插入大鼠阴道深处约1cm处，注入25％苯酚胶浆0.25mL，注入苯酚胶浆后，棉球固定阴道口，每天1次，共7天。造模过程中注意观察动物阴道有无白色分泌物，有无红肿和充血现象，若出现上述现象则造模成功。造模同时给药，上午给予造模药物，下午给予治疗药物。治疗组将SD大鼠固定，头部朝下，用灌胃针头轻轻插入大鼠阴道深处约2cm处给予相应药物，实施例生肤油①、②组给予0.25ml相应生肤油溶液，每天1次；阳性药组给予阴道置入0.25ml甲硝唑呋喃唑酮栓(哈药集团；给药前事先温化成液态)治疗，每天1次；空白对照组及模型组给予等量生理盐水，每天1次。

2)大鼠阴道组织结构观察

于实验的第1、3、5、7天拍照记录大鼠阴道口的分泌物及红肿情况；给药7天后，用二氧化碳处死大鼠，取阴道至子宫角处组织，将脏器用纱布包裹，置于福尔马林溶液中固定24h后；组织流水冲洗0.5h左右；取组织厚度为3mm；将所取组织放入脱水机中脱水；石蜡包埋后制得组织蜡块，进行HE常规染色。光学显微镜下观察，观察阴道至子宫组织形态学变化及黏膜、黏膜下间质形态学的炎性改变。本部分对大鼠阴道组织炎性病理学评分标准(参照Acta Cir Bras.2021；36(10):e361006，设立本发明的评分标准)为：无炎性浸润(0分)；有轻度炎性浸润且伴随轻微水肿(1分)；有中度炎性浸润且伴随水肿(2分)；有重度炎性浸润且伴随明显水肿(3分)以及无充血、血管扩张(0分)；有轻度充血、血管扩张(1分)；有中度充血、血管扩张(2分)；有严重充血、血管扩张(3分)，以上两个指标进行评分后，各以权重50％计算，得到阴道炎症评分。

3)实验结果

连续7天给药后，将所有受试动物按科学实验的伦理要求处死，并取其宫颈部位的病变组织进行病理分析。如图5所示结果，通过HE染色进行病理学检查，空白组(0.00±0.00)黏膜上皮光滑、无坏死组织脱落，未见充血水肿及炎细胞浸润；模型组(5.80±0.20，p<0.001)阴道壁变厚，黏膜上皮异常增生并伴有明显的坏死组织脱落，固有层出现充血和水肿，炎细胞弥漫浸润，见个别脓细胞灶形成，小血管扩张、充血，见黏膜变性坏死形成溃疡；阳性药组黏膜上皮有部分坏死组织脱落，阴道壁变厚，固有层出现充血和水肿，炎细胞浸润，小血管扩张，黏膜糜烂减轻，与模型组相比存在显著性差异(4.00±0.32，p<0.01)；与模型组相比，生肤油组病理组织切片中，炎细胞浸润均不同程度减少，固有层无明显异常，小血管扩张充血明显减轻，阴道黏膜上皮细胞不同程度增厚，黏膜变性坏死或溃疡逐渐愈合。(生肤油②组：3.00±0.32，p<0.001)，尤其是实施例生肤油①组(2.40±0.24，p<0.001)阴道组织切片中黏膜完整、粘膜下组织基本恢复正常。

实施例6实施例1制备的生肤油溶液①治疗轻度宫颈炎(内裤贴阴处常见粘稠状白带，伴外阴瘙痒)典型案例一

(1)治疗方法

34岁龙女士，半年来常出现内裤上粘稠状附着物且有臭味，伴外阴瘙痒。曾到药店咨询药师后自购妇炎洁清洗了一段时间，自觉问题并未轻减，于是到当地医院就诊。当值医师在阴窥镜下可见患者宫颈处明显糜烂，并认为龙女士的病情为轻度宫颈炎，建议其选择定期来院进行阴道局部塞药的保守治疗，并自愿尝试生肤油。在家人的帮助下，润洗患处后，取臀高头低的翘臀姿势，将5毫升实施例1制备的生肤油溶液①经阴道滴在宫颈处。每两天一次，每次滴加生肤油溶液后保持翘臀姿势不少于30分钟，连续6次(一个疗程)。一个疗程后再行窥阴镜检查并拍照记录。除了阴道内给予生肤油溶液处置之外，同时也每天在其外阴部薄薄涂抹一层实施例1制备的生肤油溶液①1次。

(2)治疗结果

患者使用前内裤上粘稠状附着物且有臭味，伴外阴瘙痒。患者窥阴镜下检查结果(图6A)如下：经生理盐水润洗处置宫颈后，仍可宫颈管口略见轻度红肿(图6A左上)；醋酸涂抹宫颈试验后，可见醋白上皮肿胀，边缘浓厚、间断呈明显白色，稍隆起于宫颈，且可见粗点状血管，形态不清晰(图6A右上和图6A右下)；碘涂抹宫颈试验后(图6A左下)，大部分宫颈呈芥末黄色。综合四个小图，可得Reid阴道镜评估为1分，阴道镜诊断为轻度炎症。

治疗后产生明显好转，首先患友自觉外瘙痒逐渐减轻，一周后基本消失。其内裤上的附着物也由粘稠转为稀薄状，且气味变淡。一个疗程后窥阴镜下检查结果(图6B)如下：患友宫颈管口红肿基本消退(图6B左上)；醋白上皮亮白，薄而光滑，边界清楚，无凸起(图6B右上、图6B右下)；碘试验后宫颈口芥末黄色区域明显缩小，新生鳞状上皮着色较浅且不均匀，柱状上皮、宫颈腺开口处不着色(图6B左下)。综合四个小图，可得Reid阴道镜评估为2分，阴道镜诊断为宫颈上皮低度病变CINI(轻度炎症)。建议后期保持阴道卫生，定期复查。实施例7实施例1制备的生肤油溶液①治疗中度宫颈炎(内裤贴阴处见粘稠状白带且量较多，伴外阴瘙痒和腰骶部重坠感，性生活后明显加重)典型案例二(1)治疗方法

42岁王女士，近两年来时不时发现内裤上粘稠状附着物，偶有外阴瘙痒，没有太在意；近几个月来且有恶臭味，伴明显的腰骶部重坠感，性生活后明显加重。曾到当地医院妇科就诊，并予以甲硝唑呋喃唑酮栓回家自行睡前置入治疗。每次1粒，每日1次，连续使用6天为一个疗程。使用两个疗程后(期间性生活处于节制状态)自觉白带量略有减少，恶臭味减轻，瘙痒也有所减轻，就停用甲硝唑呋喃唑酮栓。直到上月性生活频繁再开后症状又明显了。于是再次到医院就诊。当值医师在阴窥镜下可见患者宫颈处严重糜烂，认为王女士的病情为中度宫颈炎，建议其选择定期来院进行阴道局部塞药的保守治疗，并自愿尝试生肤油。在家人的帮助下，润洗患处后，取臀高头低的翘臀姿势，将5毫升实施例1制备的生肤油溶液①经阴道滴在宫颈处。每两天一次，每次滴加生肤油后保持翘臀姿势不少于30分钟，连续6次(一个疗程)。一个疗程后再行窥阴镜检查并拍照记录。除了阴道内给予生肤油溶液处置之外，同时也每天在其外阴部薄薄涂抹一层实施例1制备的生肤油溶液①1次。

(2)治疗结果

患者使用前内裤上粘稠状附着物且有恶臭味，伴明显的外阴瘙痒、腰骶部重坠感，性生活后明显加重。窥阴镜下检查结果(图7A)如下：生理盐水润洗处置宫颈后明显可见宫颈管内有大量白带外溢(图7A左上)；醋酸涂抹宫颈试验后，可见醋白上皮边缘稍隆起于宫颈，上皮肿胀充血，见镶嵌血管粗大变形，突出于表面，血管间距离增大，基底深红(图7A右上和图7A右下)；碘涂抹宫颈试验后大面积呈芥末黄色(7A左下)。综合四个小图，可得Reid阴道镜评估为4分，阴道镜诊断为宫颈上皮低度病变CINII(中度炎症)。

在使用生肤油溶液期间，首先自觉外瘙痒明显减轻，一周后基本消失。内裤上的粘稠附着物也减少，且恶臭气味明显变淡，腰骶部重坠感在躺卧休息后明显减轻。一个疗程后窥阴镜下检查结果(图7B)如下：治疗后，隐约可见宫颈管内有少量白带覆盖(图7B左上)；醋白上皮红肿区域明显缩小，见镶嵌血管，肿胀充血减轻(图7B右上、图7B右下)；碘试验后芥末黄色区域明显缩小(图7B左下)。综合四个小图，可得Reid阴道镜评估为2分，阴道镜诊断为宫颈上皮低度病变CINI(轻度炎症)。医生建议其坚持必要的治疗，同时保持良好的阴道卫生。

Claims (5)

1.一种生肤油制剂在制备防治宫颈炎药物中的应用，其特征在于，所述生肤油制剂是生肤油醇提物水包油制剂；所述生肤油醇提物水包油制剂中生肤油醇提物的含量为30mg/ml；所述生肤油醇提物水包油制剂的制备方法为：

将生肤油醇提取物冻干粉末以及蛋黄卵磷脂溶于食用植物油中，制备得到油相，并按油相与水相体积比为1：4的比例，将油相滴入由Tween80及甘油溶于超纯水制备得到的水相中，搅拌后高速剪切、高压均质，得到；所得生肤油醇提物水包油制剂的zeta电位分布均匀；粒径为50～300nm；

所述生肤油醇提物冻干粉末的制备方法为：按一定重量份比例分别取生肤油13种原料药材的干粉末和冰片一起加入容器中，再向容器中加入体积分数为60％-80％的乙醇溶液，浸泡2-3h，经超声提取至少一次，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到生肤油醇提取物冻干粉；

所述生肤油13种原料药材为：黄芩、黄连、黄柏、大黄、黄芪、当归、地榆、乳香、没药、地黄、白芨、白芷、白薇；各原料药材和冰片的重量份配比如下：黄芩10-30重量份、黄连10-30重量份、黄柏10-30重量份、大黄10-30重量份、黄芪10-30重量份、当归10-30重量份、地榆10-30重量份、乳香10-30重量份、没药10-30重量份、地黄10-30重量份、白芨10-30重量份、白芷10-30重量份、白薇10-30重量份、冰片3-8重量份；

所述生肤油14种原材料的总重量与体积分数为60％-80％的乙醇溶液的用量关系为：500g：(4-5)L。

2.根据权利要求1所述的一种生肤油制剂在制备防治宫颈炎药物中的应用，其特征在于，所述生肤油醇提物水包油制剂的制备方法，包括以下步骤：

1)将生肤油醇提物冻干粉末以及蛋黄卵磷脂溶于芝麻籽油中，制备得到油相；所述蛋黄卵磷脂的终浓度是6％W/V；

2)将Tween80以及甘油溶于超纯水中，制备得到水相；所述Tween80的终浓度是1.25％V/V；所述甘油的终浓度是2.81％V/V；

3)在60℃恒温水浴的条件下，将步骤1)制备得到的油相滴入步骤2)制备得到的水相中，在1200r/min的条件下搅拌15min；所述油相与水相的体积比是1：4；

4)在10000rpm的条件下高剪切2min，然后在1000bar的条件下高压均质6次，得到生肤油醇提物的水包油制剂。

3.根据权利要求1-2任一所述的一种生肤油制剂在制备防治宫颈炎药物中的应用，其特征在于，所述宫颈炎是由湿热下注导致的轻度或中度宫颈炎。

4.根据权利要求1-2任一所述的一种生肤油制剂在制备防治宫颈炎药物中的应用，其特征在于，所述黄芩、黄连、黄柏、大黄、黄芪、当归、地榆、乳香、没药、地黄、白芨、白芷和白薇13味中药材干粉末均为过200目筛。

5.根据权利要求1所述的一种生肤油制剂在制备防治宫颈炎药物中的应用，其特征在于，所述食用植物油选自芝麻籽油和椰油中的至少一种。

Images