CN114796366A - 一种中药组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种中药组合物及其应用。所述中药组合物按重量份计包含以下组分:龙胆花2.5‑10份、泽泻5‑20份、黄芪5‑20份、山楂5‑20份和陈皮2.5‑10份。所述中药组合物以龙胆花为君药,以泽泻和黄芪共为臣药,以山楂和陈皮共为佐药。经过组分的合理复配和用量的优化,使得本发明中药组合物能有效降低非酒精性脂肪肝模型小鼠肝脏M1型巨噬细胞的比例,调节Th17/Treg细胞比例,改善非酒精性脂肪肝模型小鼠肝脏的炎症状态,并且能降低肝脏重量、血清甘油三酯和总胆固醇含量、血清丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶水平,对非酒精性脂肪肝疗效显著。
Description
技术领域
本发明属于中医药技术领域,具体涉及一种中药组合物及其应用。
背景技术
非酒精性脂肪肝是一种与肥胖、胰岛素抵抗等多种代谢性疾病密切相关的临床病理综合征,最新国际专家共识声明将其定义为代谢相关脂肪性肝病。流行病学调查显示,非酒精性脂肪肝全球患病率高达25%,其中约30%可进展为非酒精性脂肪肝,严重危害人类健康并对社会造成巨大经济负担。
对于非酒精性脂肪肝的预防与治疗,目前指南推荐以改变不良生活方式为主,辅以针对代谢综合征的药物治疗(具体包括奥利司他等减肥药,二甲双胍、吡格列酮、利拉鲁肽等降糖药,贝特类、他汀等降脂药),对于体重严重超标者推荐减肥手术,对于合并肝损伤的患者提供针对肝损伤的药物治疗(具体包括维生素E、奥贝胆酸等),并通过饮食宣教控制减少附加打击以免肝损伤加重(具体指避免过量饮酒、极低热卡饮食减肥,以及可能有肝毒性的中西药物,慎用保健品)。与此同时,我国非酒精性脂肪肝中医诊疗专家共识意见中针对临床常见证型提出了相应的用药指导原则,并推荐了当飞利肝宁胶囊、化滞柔肝颗粒、血脂康胶囊、护肝片、绞股蓝总苷片、茵栀黄颗粒、水飞蓟宾胶囊等用于非酒精性脂肪肝的预防与治疗。
在目前现有的治疗方案中,改变不良生活方式、控制体重是基础,患者密切参与的生活方式干预至关重要。然而,对部分患者来说,自我健康管理的效果有限,且长期坚持的积极性难以维持。减肥手术对多数非酒精性脂肪肝早期以糖脂代谢异常为主的患者并不适用,且患者需要考虑其手术禁忌症和术后并发症。而指南中所提到的治疗药物,则主要用于减肥、降糖、降脂、保肝等对应性处理,且多数具有不同方面、不同程度的不良反应。
得益于中医药治疗系统性和低毒副作用的特点,部分中药和提取物已被推荐用于非酒精性脂肪肝的预防与治疗,然而,这些药物的治疗效果仍需进一步的临床试验证实。与此同时,由于中医药治疗“辨病施治”与“辨证论治”相结合的特点,虽然现有的药物在用于治疗非酒精性脂肪肝时各有特色,然而,目前仍存在大量的技术缺口。因此,对于新药的研发仍是该领域的迫切需求。
发明内容
基于此,本发明的目的在于提供一种中药组合物,所述中药组合物能明显改善非酒精性脂肪肝模型小鼠肝脏的炎症状态、降低肝脏重量、降低血清甘油三酯和总胆固醇含量、降低血清丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶水平,对非酒精性脂肪肝疗效显著。
为达到上述目的,本发明采用如下技术方案。
一种中药组合物,所述中药组合物按重量份计包含以下组分:龙胆花2.5-10份、泽泻5-20份、黄芪5-20份、山楂5-20份和陈皮2.5-10份。
在其中一些实施例中,所述中药组合物中龙胆花、泽泻、黄芪、山楂和陈皮的重量比为1:2:2:2:1。
本发明还提供了上述中药组合物在制备治疗肝脏炎症的药物中的应用。
在其中一些实施例中,所述肝脏炎症为非酒精性脂肪肝引起的肝脏炎症。
本发明还提供了上述中药组合物在制备治疗非酒精性脂肪肝的药物中的应用。
本发明还提供了一种治疗肝脏炎症和/或非酒精性脂肪肝的药物,所述药物包含上述中药组合物及药物学上可接受的辅料。
在其中一些实施例中,所述药物的剂型为汤剂、胶囊剂、颗粒剂、溶液剂、丸剂。
在其中一些实施例中,所述药物的剂型为汤剂。
在其中一些实施例中,所述药物的制备方法包括以下步骤:按配方将药材混合,加入药材总重量6-10倍量的水浸泡,煎煮,过滤后;于药材残渣中再次加入6-10倍量的水煎煮,过滤;将两次滤液合并,即得所述中药组合物。
在其中一些实施例中,所述浸泡时间为0.5~1h。
在其中一些实施例中,所述煎煮时间为0.5~1h。
本发明中药组合物创新性地以龙胆花为君药,以泽泻和黄芪共为臣药,以山楂和陈皮共为佐药。发明人经过研究发现,泽泻利湿泄热、化浊降脂;黄芪益气、健脾利湿,两者共为臣药,即能助龙胆花行清肝利湿之功,又可补益中焦之气;佐以山楂行气化浊、消食降脂,一方面可助泽泻、黄芪行气祛湿、化浊降脂,另一方面又能以其酸甘之药性防龙胆花苦寒伤阴之害;陈皮理气燥湿、健脾化痰,与黄芪、山楂共奏健脾理气、化浊降脂之效。全方诸药合用,针对疾病“早-中期”湿热蕴结兼有脾虚肝郁之证,功效清肝利湿、健脾理气、化浊降脂,体现了中医“标本兼治”的治疗理念。
经过组分的合理复配和用量的优化,使得本发明中药组合物能有效降低非酒精性脂肪肝模型小鼠肝脏M1型巨噬细胞的比例,调节Th17/Treg细胞比例,改善非酒精性脂肪肝模型小鼠肝脏的炎症状态,并且能降低肝脏重量、血清甘油三酯和总胆固醇含量、血清丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶水平,对非酒精性脂肪肝疗效显著。
附图说明
图1为液相色谱-质谱联用检测实施例2中药组合物的阴离子色谱图。
图2为液相色谱-质谱联用检测实施例2中药组合物的阳离子色谱图。
图3为各组中药组合物改善高脂饮食诱导的模型小鼠体重增加的实验结果。
图4为各组中药组合物改善高脂饮食诱导的模型小鼠肝脏脂肪变的实验结果。
图5为各组中药组合物对高脂饮食诱导的模型小鼠肝脏组织TNF-α基因表达水平的影响实验结果。
图6为各组中药组合物对高脂饮食诱导的模型小鼠肝脏组织IL-1β基因表达水平的影响实验结果。
图7为各组中药组合物降低高脂饮食诱导的模型小鼠血清甘油三酯含量的实验结果。
图8为各组中药组合物降低高脂饮食诱导的模型小鼠总胆固醇含量的实验结果。
图9为各组中药组合物降低高脂饮食诱导的模型小鼠血清丙氨酸氨基转移酶的实验结果。
图10为各组中药组合物降低高脂饮食诱导的模型小鼠血清门冬氨酸氨基转移酶的实验结果。
图11为各组中药组合物降低高脂饮食诱导的模型小鼠促炎性巨噬细胞比例的实验结果。
图12为各组中药组合物调节高脂饮食诱导的模型小鼠Th17/Treg细胞比例的实验结果。
具体实施方式
本发明下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂,均为市售产品。
除非另有定义,本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的,不用于限制本发明。
本发明的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形,意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列出的步骤或模块,而是可选地还包括没有列出的步骤,或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤。
下面结合具体实施例进行说明。
实施例1
本实施例提供一种中药组合物,所述中药组合物包含以下组分:龙胆花2.5克、泽泻5克、黄芪5克、山楂5克和陈皮2.5克。
本实施例还提供了上述中药组合物制备获得的汤剂药物,其制备方法如下:
按上述中药组合物配方取生药材进行混合,加入药材总重量10倍量的水浸泡30分钟,煎煮30分钟,过滤后,于原料药残渣中再次加入10倍量的水煎煮30分钟后,过滤。将两次滤液合并混匀,分两袋灌装封袋即得中药汤剂,每袋约150毫升。于40-70℃下减压浓缩至药液浓度为0.5克原料药/毫升可用于动物实验。
实施例2
本实施例提供一种中药组合物,所述中药组合物包含以下组分:龙胆花5克、泽泻10克、黄芪10克、山楂10克和陈皮5克。
本实施例还提供了上述中药组合物制备获得的汤剂药物,其制备方法如下:
按上述中药组合物配方取生药材进行混合,加入药材总重量8倍量的水浸泡30分钟,煎煮30分钟,过滤后,于原料药残渣中再次加入8倍量的水煎煮30分钟后,过滤。将两次滤液合并混匀,分两袋灌装封袋即得中药汤剂,每袋约150毫升。于40-70℃下减压浓缩至药液浓度为1克原料药/毫升可用于动物实验。
实施例3
本实施例提供一种中药组合物,所述中药组合物包含以下组分:龙胆花10克、泽泻20克、黄芪20克、山楂20克和陈皮10克。
本实施例还提供了上述中药组合物制备获得的汤剂药物,其制备方法如下:
按上述中药组合物配方取生药材进行混合,加入药材总重量6倍量的水浸泡30分钟,煎煮30分钟,过滤后,于原料药残渣中再次加入6倍量的水煎煮30分钟后,过滤。将两次滤液合并混匀,分两袋灌装封袋即得中药汤剂,每袋约150毫升。于40-70℃下减压浓缩至药液浓度为2克原料药/毫升可用于动物实验。
对照例1
本对比例提供一种中药组合物,所述中药组合物包含以下组分:龙胆草5克、泽泻10克、黄芪10克、山楂10克和陈皮5克。
本对照例还提供了上述中药组合物制备获得的汤剂药物,其制备方法如下:
按上述中药组合物配方取生药材进行混合,加入药材总重量8倍量的水浸泡30分钟,煎煮30分钟,过滤后,于原料药残渣中再次加入8倍量的水煎煮30分钟后,过滤。将两次滤液合并混匀,分两袋灌装封袋即得中药汤剂,每袋约150毫升。于40-70℃下减压浓缩至药液浓度为1克原料药/毫升用于动物实验。
对本发明中药组合物的成分进行分析
取实施例2中的汤剂进行液相色谱-质谱联用非靶标代谢组学检测,具体步骤如下:
1.样本制备:样品涡旋混匀30秒,12000rpm离心15分钟;取上清300微升加入1000微升提取液(甲醇:水=4:1,内标浓度为10微克/毫升);涡旋混匀30秒,冰水浴超声5分钟;静置1小时后,12000rpm离心15分钟;取上清过0.22微米滤膜后进样瓶中上机检测。
2.上机检测:液相色谱-质谱联用分析在安捷伦超高效液相色谱1290UPLC系统上进行,所使用的色谱柱为购自Waters的UPLC BEH C18色谱柱,柱温设置为55℃,进样量设置为5微升,流速设置为0.5毫升/分钟。所使用的流动相为0.1%甲酸水溶液(A)和0.1%甲酸乙腈溶液(B),流动相梯度程序为:0-11分钟,85-25%A;11-12分钟,25-2%A;12-14分钟,2-2%A;14-14.1分钟,2-85%A;14.1-15分钟,85-85%A;15-16分钟,85-85%A。
3.数据采集:基于IDA采集模式,采用Q精密聚焦质谱仪和Xcalibur软件进行质谱数据采集。在每个采集周期中,质量范围为100至1500,并对每个周期的前三个进行筛选,进一步采集相应数据。鞘层气体流速:45Arb,辅助气体流速:15Arb,毛细管温度:400℃,分辨率:70000,碰撞能量:15/30/45,在NCE模式下,喷射电压:4.0kV(正)或-3.6kV(负)。
检测结果如图1和图2所示,本发明所述中药组合物中含有丰富的药理活性成分,提示能够发挥多种药效功能。其中,阴离子中检测出142种化合物,阳离子中检测出243种化合物,包含了龙胆苦苷、黄芪甲苷、橙皮苷、熊果酸、齐墩果酸等主要药理成分。
对实施例1~3和对照例1中药组合物的治疗效果进行验证
构建高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝小鼠模型,并分别给予实施例1~3和对照例1中的复方中药汤剂进行灌胃治疗,观察各实施例及对照例的干预疗效。具体步骤如下:
1.动物模型:选取6-8周龄雄性正常C57BL/6小鼠,SPF级适应性饲养1周。小鼠称重、剪脚趾编号,按随机数字表法进行实验分组,共分4组,每组8只。正常组给予普通对照饲料,其余各组均给予高脂饲料(Research Diets,D09100310)。小鼠自由进食饮食,饲养12周。
2.给药干预:治疗组分别给与实施例1、2、3中的复方中药汤剂(参照《中药药理研究方法学》,并依据人与动物体表面积换算率进行实验小鼠给药剂量的计算,2.6、5.2、10.4克/千克/天)作为低、中、高剂量灌胃治疗(即实施例1对应低剂量组,实施例2对应中剂量组,实施例3对应高剂量组),对照组按照实施例2(即中剂量组)的给药量给予对照例1灌胃治疗。
3.检测指标:(1)定期观察小鼠精神状态、活动度,每周记录体重;(2)实验结束时观察小鼠肝脏组织形态、颜色、质地,测量体重、肝重、肝体比;(3)血清生化分析检测总胆固醇、甘油三酯、丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶等血脂、肝功能水平;(4)实时荧光定量PCR检测小鼠肝脏组织TNF-α、IL-1β等炎性因子的基因表达情况,针对TNF-α基因的检测引物如下:TNF-α-F:5'-CCCTCACACTCAGATCATCTT-3'(SEQ ID NO:1)和TNF-α-R:5'-GCTACGACGTGGGCTACAG-3'(SEQ ID NO:2);针对IL-1β基因的检测引物如下:IL-1β-F:5'-AGTTGACGGACCCCAAAAG-3'(SEQ ID NO:3)和IL-1β-R:5'-AGCTGGATGCTCTCATCAGG-3'(SEQID NO:4);(5)流式细胞术检测小鼠肝脏促炎性巨噬细胞(免疫表型为CD86+CD206-)的比例以及Th17细胞(免疫表型为CD45+IL-17A+Foxp3-)和Treg细胞(免疫表型为CD45+IL-17A-Foxp3+)的比例。
4.统计分析:采用GraphPad Prism 7.0软件处理数据,数据以均数±标准差表示。指标的组间比较,采用单因素方差分析,P<0.05表示有显著性差异。
图3为各组复方中药汤剂对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝小鼠体重的影响。小鼠造模期间精神状态良好,行动灵活,进食饮水如常。实验开始时,各组小鼠体重之间无明显差异(P>0.05)。造模前5周,各组小鼠体重均迅速增长,差异同样无统计学意义(P>0.05);造模第6周起,正常组小鼠体重增长速度开始变慢,其余各组小鼠体重仍持续增长,其中高脂组小鼠体重增长最快;至实验结束时,正常组小鼠体重基本稳定,高脂组小鼠体重仍持续增长,与正常组相比差异具有统计学意义(P<0.001);实施例1~3和对照例1处理组小鼠体重同样持续增长,但其增长幅度较高脂组明显降低。其中,中剂量治疗组小鼠体重增长最为缓慢,与高脂组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。
图4为各组中药汤剂对高脂饮食诱导的模型小鼠肝脏脂肪变的影响。实验结束时,对小鼠肝脏称重,与正常组相比,高脂组肝脏重量显著增加(P<0.001);而与高脂组相比,中、高剂量治疗组能明显降低差异小鼠肝脏重量,差异具有统计学意义(P<0.05);对照例1处理组小鼠肝脏重量与高脂组相比下降无统计学差异;对照例1处理组小鼠肝脏重量高于实施例2处理组。
图5和图6为各组复方中药汤剂对高脂饮食诱导的模型小鼠肝脏炎症反应的影响。与正常组相比,高脂组小鼠肝脏组织TNF-α和IL-1β的基因表达水平均显著升高(P<0.001);而与高脂组相比,中、高剂量治疗组能明显降低小鼠肝脏组织TNF-α和IL-1β的基因表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05);与高脂组相比,对照例1处理组下降无统计学差异;且对照例1处理组小鼠肝脏组织TNF-α和IL-1β的基因表达水平均高于实施例2处理组。
图7和图8为各组复方中药汤剂对高脂饮食诱导的模型小鼠血脂的影响。与正常组相比,高脂组小鼠血清甘油三酯含量显著升高(P<0.001);而与高脂组相比,实施例1~3和对照例1处理组小鼠血清甘油三酯含量均显著下降(P<0.05),但实施例2处理组小鼠血清甘油三酯的含量明显低于对照例1处理组(P<0.05)。与正常组相比,高脂组小鼠血清总胆固醇含量显著升高(P<0.01);而与高脂组相比,只有中、低剂量治疗组小鼠血清总胆固醇含量明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05);与高脂组相比,对照例1处理组小鼠血清总胆固醇含量下降无统计学差异,且对照例1处理组小鼠血清总胆固醇含量明显高于实施例2处理组。
图9和图10为各组复方中药汤剂改善高脂饮食诱导的小鼠肝功能水平。与正常组相比,高脂组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶水平均显著升高(P<0.001);而与高脂组相比,实施例1~3和对照例1处理组小鼠血清肝功能指标含量均显著下降(P<0.01),但是,与对照例1处理组相比,实施例2小鼠血清肝功能指标下降更明显。
图11为各组复方中药汤剂对促炎性巨噬细胞的影响。与正常组相比,高脂组小鼠肝脏促炎性巨噬细胞比例明显增加,而与高脂组相比,实施例1~3处理组肝脏中促炎性巨噬细胞的比例均明显降低;与高脂组相比,对照例1处理组巨噬细胞比例稍有下降;与对照例1处理组相比,实施例2处理组促炎性巨噬细胞的比例明显下降,表明其能更好地改善模型小鼠肝脏免疫炎症状态。
图12为各组复方中药汤剂对Th17/Treg细胞比例的影响。结果表明,与正常组相比,高脂组小鼠肝脏中Th17细胞比例明显增加,而与高脂组相比,实施例1~3和对照例1处理组肝脏中促炎性巨噬细胞的比例均明显降低;与对照例1处理组相比,实施例2处理组Th17细胞的比例下降更为明显,表明其能更好地改善模型小鼠肝脏免疫炎症状态。
上述结果表明,本发明中药组合物(实施例1~3中药组合物)能有效降低非酒精性脂肪肝模型小鼠肝脏M1型巨噬细胞的比例,调节Th17/Treg细胞比例,改善非酒精性脂肪肝模型小鼠肝脏的炎症状态,并且能降低肝脏重量、血清甘油三酯和总胆固醇含量、血清丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶水平,对非酒精性脂肪肝疗效显著。
与使用龙胆草为君药的对照例1相比,本发明中药组合物对非酒精性脂肪肝的治疗效果更明显,尤其是能更好地改善肝脏炎症状态,以及降低血清甘油三酯和总胆固醇的含量。说明以龙胆花为君药,以泽泻和黄芪共为臣药,以山楂和陈皮共为佐药进行复配,汤剂中某些组分之间可以产生协同作用,从而取得更好地清肝利湿、健脾理气、化浊降脂效果。
此外,将所述中药组合物中的臣药或佐药替换为类似功效的组分,例如将泽泻替换为茯苓,或将黄芪替换为党参,在其他组分及各组分用量均不变的情况下,制备得到的中药组合物对非酒精性脂肪肝的治疗效果亦有较明显地下降(具体数据省略),进一步说明本发明中药组合物之间相辅相成、协同增效。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对以上实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,只要这些技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
序列表
<110> 广州中医药大学第一附属医院
<120> 一种中药组合物及其应用
<130> 2022-03-29
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 1
ccctcacact cagatcatct t 21
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 2
gctacgacgt gggctacag 19
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 3
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<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 4
agctggatgc tctcatcagg 20
Claims (10)
1.一种中药组合物,其特征在于,所述中药组合物按重量份计包含以下组分:龙胆花2.5-10份、泽泻5-20份、黄芪5-20份、山楂5-20份和陈皮2.5-10份。
2.如权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,所述中药组合物中龙胆花、泽泻、黄芪、山楂和陈皮的重量比为1:2:2:2:1。
3.如权利要求1或2所述的中药组合物在制备治疗肝脏炎症的药物中的应用。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于,所述肝脏炎症为非酒精性脂肪肝引起的肝脏炎症。
5.如权利要求1或2所述的中药组合物在制备治疗非酒精性脂肪肝的药物中的应用。
6.一种治疗肝脏炎症和/或非酒精性脂肪肝的药物,其特征在于,所述药物包含权利要求1或2所述的中药组合物及药物学上可接受的辅料。
7.如权利要求6所述的药物,其特征在于,所述药物的剂型为汤剂、胶囊剂、颗粒剂、溶液剂、丸剂。
8.如权利要求7所述的药物,其特征在于,所述药物的剂型为汤剂。
9.如权利要求8所述的药物,其特征在于,所述药物的制备方法包括以下步骤:按配方将药材混合,加入药材总重量6-10倍量的水浸泡,煎煮,过滤后;于药材残渣中再次加入6-10倍量的水煎煮,过滤;将两次滤液合并,即得所述中药组合物。
10.如权利要求9所述的药物,其特征在于,所述浸泡时间为0.5~1h;和/或,所述煎煮时间为0.5~1h。
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