CN111110733B - 一种用于治疗老年性痛风性关节炎的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种用于治疗老年性痛风性关节炎的中药组合物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开一种用于治疗老年性痛风性关节炎的中药组合物及其制备方法和应用。所述的中药组合物包括以下重量份的各原料药：菟丝子5‑15重量份、狗头七10‑15重量份、粗叶悬钩子20‑30重量份、岗梅根40‑50重量份、佩兰2‑10重量份、旋复花5‑15重量份、芡实10‑15重量份以及降香10‑15重量份。该中药组合物具有益肾活血、祛瘀清毒、化湿消痰、健脾止痛的功效，实验证明，可以改善老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠足趾部关节肿胀程度、关节炎症指数、免疫器官脏器指数、抗氧化能力及炎症介质含量，还可以改善小鼠足趾部NOD样受体蛋白3及核转录因子‑κBp65蛋白和基因表达水平，而对小鼠重要器官脏器指数和体重无影响，说明该中药组合物对治疗老年性痛风性关节炎有效且无副作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和应用。特别涉及一种用于治疗老年性痛风性关节炎的中药组合物及其制备方法和应用。本发明属于医药技术领域。
背景技术
老年性痛风性关节炎是一种临床上常见的老年疾病之一(Mei J，Zhou F， QiaoH，et al.Nerve modulation therapy in gouty arthritis：targeting increased sFRP2expression in dorsal root ganglion regulates macrophage polarization andalleviates endothelial damage[J].Theranostics，2019，9(13)：3707-3722.；Schlee S，Bollheimer LC，Bertsch T，et al.Crystal arthritides gout and calciumpyrophosphate arthritis Part3 Treatment[J].Z Gerontol Geriatr，2018，51(6)：703-710.)，其主要是由于在老年人生理机能减退基础上，结合环境因素、遗传因素、精神因素、心理因素、社会因素等综合因素作用下，引起老年人体内核酸碱基腺嘌呤及鸟嘌呤等嘌呤衍生物合成及分解异常(Hidalgo AI，Carretta MD，Alarcon P，et al.Pro-inflammatorymediators and neutrophils are increased in synovial fluid from heifers withacute ruminal acidosis[J].BMC Vet Res，2019，15(1)：225.)，尿酸盐沉积于机体关节而致病。
资料显示，人类缺少尿酸酶，机体核酸碱基腺嘌呤及鸟嘌呤等嘌呤产生尿酸后，不能代谢为尿囊酸，即人类核酸碱基腺嘌呤及鸟嘌呤等嘌呤的代谢产物主要是尿酸，而不是尿囊酸(Li ZX，Jiao GL，Zhou SM，et al.Evaluation of the chemical composition ofnephrolithiasis using dual-energy CT in Southern Chinese gout patients[J].BMCNephrol，2019，20(1)：273.)。
一般而言，人类机体核酸碱基腺嘌呤及鸟嘌呤等嘌呤衍生物最终主要代谢为尿酸，这与人类体内酶缺失现象有关(Colliard S，Jourde-Chiche N，Clavarino G， etal.Autoantibodies Targeting Ficolin-2in Systemic Lupus Erythematosus PatientsWith Active Nephritis[J].Arthritis Care Res，2018，70(8)：1263-1268.)。一旦机体嘌呤代谢发生紊乱后，无法进行代谢的尿酸就会大量堆积，多以细小针尖状的尿酸盐形式存在，细小针尖状的尿酸盐沉积于血液供应不良的关节部位会引起痛风性关节炎，可伴有关节畸形，还可伴有关节部位红、肿、热、痛(Calich AL， Borba EF，Ugolini-Lopes MR，etal.Serum uric acid levels are associated with lupus nephritis in patientswith normal renal function[J].Clin Rheumatol，2018，37(5)： 1223-1228.)；同时细小针尖状的尿酸盐也可以沉积于肾脏内，造成肾脏组织结构及功能破坏，会引起痛风性肾病、肾结石，甚至引起肾功能衰竭及尿毒症，将严重危害机体健康。
随着人类生活水平逐渐提高及老年人寿命不断延长，老年性痛风性关节炎的发病率、患病率逐年升高，这与老年人饮食结构改变如进食较多脂类、运动减少及长期饮酒有关(Reber LL，Starkl P，Balbino B，et al.The tyrosine kinase inhibitor imatinibmesylate suppresses uric acid crystal-induced acute gouty arthritis in mice[J].PLoS One，2017，12(10)：e0185704.)。
资料显示，机体进食较多脂类、运动减少及长期饮酒，会引起体内脂肪酸含量增加，与脂肪酸代谢有关的酶类激活，线粒体功能活跃，促使机体产生大量氧自由基(Roos J，Peters M，Maucher IV，et al.Drug-Mediated Intracellular Donation of NitricOxide Potently Inhibits 5-Lipoxygenase A Possible Key to FutureAntileukotriene Therapy[J].Antioxid Redox Signal，2018，28(14)：1265-1285.)，而此时机体抗氧化酶类如超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD) (Superoxidedismutase)(Han J，Xie Y，Sui F，et al.Zisheng Shenqi decoction amelioratesmonosodium urate crystal-induced gouty arthritis in rats through anti-inflammatory and anti-oxidative effects[J].Mol Med Rep，2016，14(3)： 2589-2597.)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase，GSH-PX)等并没有增加，造成自由产生增加而降解减少，体内自由基平衡失调，自由基代谢产物丙二醛(Malondialdehyde，MDA)产生增加，这将会活化许多与自由基代谢有关的通路如NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路活化(Lu X，Zeng R，Lin J，et al.Pharmacological basis for use ofmadecassoside in gouty arthritis anti-inflammatory anti-hyperuricemic andNLRP3 inhibition[J].Immunopharmacol Immunotoxicol， 2019，41(2)：277-284.)，会对机体健康产生危害。
一般认为，老年人体内自由基大量产生后，NLRP3信号通路活化(Mouasni S，Gonzalez V，Schmitt A，et al.The classical NLRP3 inflammasome controls FADDunconventional secretion through microvesicle shedding[J].Cell Death Dis，2019，10 (3)：190.)，引起巨噬细胞活化而导致核转录因子-κB(Nuclear TranscriptionFactor-κB，NF-κB)含量增加，促进白介素-1β(Interleukin-1β，IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)释放，促进中性粒细胞聚集、活化、趋化、吞噬，中性粒细胞吞噬细小针尖状的尿酸盐后，诱使机体出现无菌性炎症反应，对关节周围组织造成不同程度损伤，最终促使机体关节部位出现老年性痛风性关节炎。
中医理论认为，老年性痛风性关节炎的基本病机是老年人肾气不足为本，脏腑功能失调所致瘀、毒、湿、痰留滞为标，该病积极强调在老年人肾气不足基础上瘀、毒、湿、痰积聚致机体发病，人体关节血脉不畅而诱发疼痛(陈亚洲，徐延庆.中医药治疗痛风性肾病概况[J].湖南中医杂志，2019，35(4)：175-177.)。
文献报道，《素问·逆调论》提及肾者水脏，主泄液。肾主水主要依靠肾气之阳来气化水液，进而实现水液调控，这就是肾脏主持和调节水液代谢的基本作用。肾可将具有濡养滋润的水谷精微输布全身而完成供应机体物质代谢的基本功能，还可将机体脏腑组织利用水谷精微后代谢产生的瘀、毒、湿、痰排出体外，减少瘀、毒、湿、积聚体内诱发机体产生疾病(王思思，庞学丰，黄政治，等.中医药治疗急性痛风性关节炎研究现状[J].中医临床研究，2019，11(5)：146-148.)。一旦肾气功能失调，气化失职，开阖失度，肾脏主持和调节水液代谢不能正常发挥功能，气化失常，关门不利，瘀、毒、湿、痰积聚体内，最终瘀、毒、湿、痰滞留血脉，血脉不畅，诱发机体出现病变，可见，老年性痛风性关节炎需要补肾活血。因此，有效治疗老年性痛风性关节炎需要选择具有补肾活血的中药。
通常而言，老年人脏腑功能减退，常伴有糖尿病、高血压、冠心病、高脂血症、慢性肺部疾病、慢性肾部疾病等，津液不归正化而形成病理产物，造成瘀、毒积聚，阻滞经络，雍遏邪气，干扰机体血脉功能，直接或间接作用于机体，引起新病症，如痛风性肾病，可见，老年性痛风性关节炎需要祛瘀清毒。因此，治疗老年性痛风性关节炎需要选择具有祛瘀清毒的中药。
一般认为，湿痰之邪多主生于内，而非受之于外，湿痰之邪痹阻经络，气血运行不畅，必然导致血瘀，滞留血脉，血脉不畅，诱发机体出现病变(刘东武，于静，姜兆荣，等.从伏痰论治痛风[J].吉林中医药，2019，39(1)：1-3.)，可见，湿痰积聚是老年性痛风性关节炎的主要病因之一。因此，治疗老年性痛风性关节炎需要选择具有化湿消痰的中药。
已经证实，老年人伴有先天禀赋不足或素体脾虚，加之饮食不节，喜好醇酒，恣食膏粱厚味，将会导致脾失健运，升清降浊失调，于是水谷失化，滞留血中，经脉不通，使经络骨节痹阻，机体骨节则痛，可见，脾失健运是老年性痛风性关节炎的主要病机之一，且机体疼痛是老年性痛风性关节炎的主要症状之一(汪学良，刘念，秦天楠，等.痛风研究现状及展望[J].风湿病与关节炎，2018，7(6)： 68-70.；杜永怡，庞学丰，王思超，等.中医治疗痛风性关节炎急性发作研究近况 [J].亚太传统医药，2018，14(2)：124-126.)。因此，治疗老年性痛风性关节炎需要选择具有健脾止痛的中药。
综上，临床上治疗老年性痛风性关节炎需要积极益肾活血、祛瘀清毒、化湿消痰、健脾止痛。针对中医治疗老年性痛风性关节炎的基本治疗原则益肾活血、祛瘀清毒、化湿消痰、健脾止痛，可以选择发挥益肾活血、祛瘀清毒、化湿消痰、健脾止痛的中药组合物开展防治老年性痛风性关节炎的实验研究。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可以用于治疗老年性痛风性关节炎的中药组合物及其制备方法和应用。
为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：
本发明的一种用于治疗老年性痛风性关节炎的中药组合物，包括以下重量份的各原料药：菟丝子5-15重量份、狗头七10-15重量份、粗叶悬钩子20-30重量份、岗梅根40-50重量份、佩兰2-10重量份、旋复花5-15重量份、芡实10-15 重量份以及降香10-15重量份。
其中，优选的，所述的中药组合物包括以下重量份的各原料药：菟丝子9重量份、狗头七12.5重量份、粗叶悬钩子22.5重量份、岗梅根45重量份、佩兰6 重量份、旋复花11重量份、芡实12重量份以及降香12重量份。
其中，菟丝子，又名无娘藤，性温，味甘，归肾经、脾经、肝经，具有益肾固精、补肝缩尿、止泻明目的功效；狗头七，又名矮人陀，性寒，味苦，归肝经、脾经，具有活血舒筋、凉血消肿、解毒止血的功效；粗叶悬钩子，又名大叶蛇泡竻，性平，味甘，归肝经、胃经，具有祛瘀清热、活血止血的功效；岗梅根，又名盆包银，性寒，味甘，归肝经、肺经、大肠经，具有清毒生津、清热止渴、润肺祛瘀的功效；佩兰，又名圆梗泽兰，性平，味辛，归脾经、胃经、肺经，具有化湿开胃、解暑健脾的功效；旋复花，又名飞天蕊，性温，味甘，归肝经、胃经、肺经、大肠经，具有消痰行水、软坚下气的功效；芡实，又名鸡头米，性平，味甘，归肾经、脾经，具有健脾祛湿、益肾止泻、固精止带的功效；降香，性温，味辛，归脾经、肝经，具有止痛行气、活血止血的功效。综合分析，在本发明治疗老年性痛风性关节炎的中药组合物中，君药菟丝子、狗头七主要具有益肾活血的功效；臣药粗叶悬钩子、岗梅根主要具有祛瘀清毒的功效；佐药佩兰、旋复花主要具有化湿消痰的功效；使药芡实、降香主要具有健脾止痛的功效。因此，本发明治疗老年性痛风性关节炎中药组合物的主要功效为益肾活血、祛瘀清毒、化湿消痰、健脾止痛，可以对老年性痛风性关节炎具有显著的治疗效果且无副作用。
进一步的，本发明还提出了一种制备所述的中药组合物的方法，其包括以下步骤：
(1)按照本发明所述的重量份称取各原料药，将各原料药混合均匀后放入高颈圆底烧瓶中，加入药物重量10-15倍的蒸馏水，浸泡2-3h后，煎煮2-3h，冷却；
(2)将步骤(1)冷却后的药液用纱布过滤，得到第一次滤液；
(3)步骤(2)剩余的药物残渣放入高颈圆底烧瓶中，加入药物重量10-15 倍的蒸馏水，浸泡2-3h后，煎煮2-3h，冷却；用纱布过滤，得到第二次滤液；
(4)合并二次滤液，并且均匀搅拌，让第一次滤液及其第二次滤液充分混合；
(5)将合并后的二次滤液置于电热恒温鼓风干燥箱中，在温度为60-70℃下干燥5-7d，得到所述中药组合物的干膏。
其中，优选的，将得到的干膏放在粉碎机内粉碎，研磨，分子筛处理，得到所述中药组合物的干粉。
其中，优选的，将得到的干膏放在粉碎机内粉碎后，分别依次经过10目、 50目、100目以及200目的筛网进行过滤，得到所述中药组合物的干粉。
其中，优选的，步骤(2)中所述的纱布过滤是指分别依次经过2层纱布、4 层纱布、6层纱布以及8层纱布进行过滤，步骤(3)中所述的纱布过滤是指分别依次经过4层纱布、6层纱布以及8层纱布进行过滤。
更进一步的，本发明还提出了所述的中药组合物在制备治疗老年性痛风性关节炎的药物中的应用。
更进一步的，本发明还提出了一种用于治疗老年性痛风性关节炎的中药制剂，其由所述的中药组合物加入制剂成型所需的辅料，按照制备药物制剂的常规方法制成。
其中，优选的，所述的制剂为水煎剂、粉剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、片剂或口服液。
为了明确本发明的中药组合物具有益肾活血、祛瘀清毒、化湿消痰、健脾止痛的功效，于是开展了中药组合物(含有菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子 22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g)对老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠模型的初步研究。
本实验通过检测老年性痛风性关节炎模型关节肿胀度和关节炎症指数来评价关节炎症反应，评价中药组合物作用效果。结果显示，与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠关节肿胀度和关节炎症指数改变不明显，说明常规注射的手术动作对实验无干扰。与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组清洁级昆明小鼠关节肿胀度和关节炎症指数明显增加(P＜0.05)，差异具有统计学意义，说明模型组关节部位炎症反应明显，关节部位出现红、肿、热、痛等表现，老年性痛风性关节炎模型建立成功，老年性痛风性关节炎模型稳定，可以开展后续的实验研究。经过中药组合物治疗后，中药组合物高中剂量可以明显降低老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠的关节肿胀度和关节炎症指数(P＜0.05)，差异具有统计学意义，而中药组合物低剂量并不能降低老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠的关节肿胀度和关节炎症指数(P＞0.05)，说明中药组合物高中剂量(含有菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花 11g、芡实12g、降香12g)可以改善关节部位炎症反应，减轻关节部位出现红、肿、热、痛等表现，起到治疗老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠的积极作用。
本实验通过检测老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠足趾部SOD、GSH-PX、 T-AOC、MDA含量来评价中药组合物(含有菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g)对足趾部抗氧化能力。结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组清洁级昆明小鼠足趾部SOD、GSH-PX、T-AOC含量明显降低(P＜0.05)，差异具有统计学意义，伴有模型组清洁级昆明小鼠足趾部MDA明显增加(P＜0.05)，差异具有统计学意义，说明模型组清洁级昆明小鼠足趾部抗氧化能力降低，造成大量氧化产物堆积，对机体健康产生威胁，这与清洁级昆明小鼠足趾部抗氧化酶含量降低并无法有效清除自由基有关。而经过中药组合物治疗后，中药组合物高中剂量可以明显增加老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠足趾部SOD、GSH-PX、T-AOC含量(P ＜0.05)，差异具有统计学意义，伴有明显减少老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠足趾部MDA含量(P＜0.05)，差异具有统计学意义，说明中药组合物高中剂量可以通过增加清洁级昆明小鼠足趾部SOD、GSH-PX、T-AOC含量来加快清除自由基，以此来改善老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠足趾部的抗氧化能力。
资料显示，痛风性关节炎与病损部位炎症介质大量释放有关，结合老年人生理机能减退，如血液运行阻力增加、血管黏度增加、血管脆性增加等，易引起老年人痛风性关节炎逐渐加重，这与老年性痛风性关节炎病损部位IL-12、IL-6、 IL-1β、TNF-α含量增加有关(Scanu A，Giraudo C，Galuppini F，et al.Periodontal Injection ofLipopolysaccharide Promotes Arthritis Development in Mice[J].Inflammation，2019，42(3)：1117-1128.；Estevez-Garcia IO，Gallegos-Nava S，Vera-Perez E，etal.Levels of Cytokines and MicroRNAs in Individuals With AsymptomaticHyperuricemia and Ultrasonographic Findings of Gout:A Bench-to-BedsideApproach[J].Arthritis Care Res，2018，70(12)：1814-1821.)。本实验结果显示，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠足趾部IL-12、IL-6、IL-1β、TNF-α含量明显增加(P＜0.05)，差异具有统计学意义，说明老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠足趾部IL-12、IL-6、 IL-1β、TNF-α含量增加，无菌性炎症反应明显。经过中药组合物高中剂量治疗后，中药组合物高中剂量(含有菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根 45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g)可以明显降低老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠足趾部IL-12、IL-6、IL-1β、TNF-α含量(P＜0.05)，差异具有统计学意义，进而减少老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠足趾部IL-12、 IL-6、IL-1β、TNF-α水平，减弱老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠足趾部无菌性炎症反应，说明中药组合物高中剂量(含有菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g)可以明显降低老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠足趾部炎症反应，也说明IL-12、IL-6、 IL-1β、TNF-α是老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠极为重要的评价因子。
本实验通过测定脾指数和胸腺指数来评价中药组合物对老年性痛风性关节炎免疫反应的初步干预效果。本实验结果显示，对照组清洁级昆明小鼠脾指数、胸腺指数较低，说明对照组免疫反应不明显；与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组清洁级昆明小鼠脾指数、胸腺指数较高，说明模型组免疫反应强烈。经过中药组合物高中剂量(含有菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根 45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g)治疗后，中药组合物高中剂量 (含有菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g)可以降低脾指数、胸腺指数，且还可以降低老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠的关节肿胀度和关节炎症指数，说明中药组合物高中剂量(含有菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g)可以改善机体免疫反应和炎症反应。
研究证实，老年性痛风性关节清洁级昆明小鼠模型常伴有NLRP3和 NF-κBp65基因和蛋白表达异常，如NLRP3和NF-κBp65基因和蛋白表达上调，常预示老年性痛风性关节清洁级昆明小鼠模型炎症反应明显(Ruiz-Miyazawa KW，Staurengo-Ferrari L，Pinho-RibeiroFA，et al.15d-PGJ-loaded nanocapsules ameliorate experimental gout arthritisby reducing pain and inflammation in a PPAR-gamma-sensitive manner in mice[J].Sci Rep，2018，8(1)：13979.；McWherter C，Choi YJ，Serrano RL，etal.Arhalofenate acid inhibits monosodium urate crystal-induced inflammatoryresponses through activation of AMP-activated protein kinase(AMPK)signaling[J].Arthritis Res Ther，2018，20(1)：204.)。本实验通过检测NLRP3和NF-κBp65基因和蛋白来评估各组清洁级昆明小鼠炎症反应情况。实验结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部NLRP3和NF-κBp65蛋白平均光密度值和基因相对表达量明显增加(P＜0.05)，说明模型组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部炎症反应明显；经过中药组合物(含有菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子 22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g)治疗后，与模型组清洁级昆明小鼠比较，中药组合物高剂量组、中剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部NLRP3和NF-κBp65蛋白平均光密度值和基因相对表达量明显降低(P＜0.05)，说明中药组合物高剂量组、中剂量(含有菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g)可以改善老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部炎症反应。
为了评价中药组合物的副作用，本实验检测各组清洁级昆明小鼠重要器官脏器指数和体重变化。结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠心指数、肺指数、脑指数、肾指数、肝指数改变不明显(P＞0.05)，模型组0d、7d、14d清洁级昆明小鼠体重改变不明显(P＞0.05)。经过中药组合物(菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g)治疗后，与模型组清洁级昆明小鼠比较，治疗组、高剂量组、中剂量组、低剂量组清洁级昆明小鼠心指数、肺指数、脑指数、肾指数、肝指数改变不明显(P＞0.05)，治疗组、高剂量组、中剂量组、低剂量组0d、7d、14d清洁级昆明小鼠体重改变不明显(P＞0.05)，说明中药组合物(菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g)对老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠心指数、肺指数、脑指数、肾指数、肝指数及其体重均没有影响，提示中药组合物(菟丝子 9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实 12g、降香12g)无副作用，预示可以放心使用中药组合物(菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香 12g)治疗老年性痛风性关节炎。
以上实验表明，中药组合物高、中剂量(33.80g/kg、16.90g/kg)(菟丝子 9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实 12g、降香12g)可以改善老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠足趾部的关节肿胀程度、关节炎症指数、抗氧化能力、炎症介质含量及免疫器官脏器指数，还可以改善老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠足趾部NLRP3和NF-κBp65蛋白和基因水平，同时该中药组合物(菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根 45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g)对老年性痛风性关节炎清洁级昆明小鼠重要脏器的脏器指数和清洁级昆明小鼠体重无影响，说明该中药组合物治疗老年性痛风性关节炎有效，并且该中药组合物无副作用。
综上所述，本发明由8味药材——菟丝子、狗头七、粗叶悬钩子、岗梅根、佩兰、旋复花、芡实、降香组成的中药组合物对治疗老年性痛风性关节炎有效且无副作用，具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为中药组合物对模型小鼠足趾部关节肿胀度的影响；
注：横坐标是组别，纵坐标是关节肿胀度(mL)；
图2为中药组合物对模型小鼠足趾部关节炎症指数的影响；
注：横坐标是组别，纵坐标是关节炎症指数(值)；
图3为中药组合物对模型小鼠足趾部T-AOC的影响；
注：横坐标是组别，纵坐标是T-AOC(nU/mg)含量具体值；
图4为中药组合物对模型小鼠足趾部SOD和GSH-PX的影响；
注：横坐标是组别，每个组别内左侧是SOD(U/mg)，右侧是GSH-PX； (nmol/g)；纵坐标是SOD(U/mg)和GSH-PX(nmol/g)含量具体值；
图5为中药组合物对模型小鼠足趾部MDA的影响；
注：横坐标是组别；纵坐标是MDA(μmol/g)含量具体值；
图6为中药组合物对模型小鼠足趾部IL-12的影响；
注：横坐标是组别；纵坐标是IL-12(pg/mL)含量具体值；
图7为中药组合物对模型小鼠足趾部IL-6的影响；
注：横坐标是组别；纵坐标是IL-6(ng/mL)含量具体值；
图8为中药组合物对模型小鼠足趾部IL-1β的影响；
注：横坐标是组别，每组别内左侧是IL-1β(pg/mL)，右侧是TNF-α(pg/mL)；纵坐标是IL-1β(pg/mL)和TNF-α(pg/mL)含量具体值；
图9为中药组合物对模型小鼠足趾部NLRP3和NF-κBp65蛋白的影响；
注：横坐标是组别，每组别内左侧是NLRP3(平均光密度值)，右侧是 NF-κBp65(平均光密度值)；纵坐标是NLRP3和NF-κBp65(平均光密度值)具体值；
图10为中药组合物对模型小鼠足趾部NLRP3和NF-κBp65基因的影响；
注：横坐标是组别，每组别内左侧是NLRP3(相对表达量)，右侧是NF-κBp65 (相对表达量)；纵坐标是NLRP3和NF-κBp65(相对表达量)具体值；
图11为中药组合物对模型小鼠脾指数和胸腺指数的影响；
注：横坐标是组别，每组别内左侧是脾指数(mg/g)，右侧是胸腺指数(mg/g)；纵坐标是脾指数(mg/g)和胸腺指数(mg/g)具体值；
图12为中药组合物对模型小鼠心指数、肺指数、脑指数的影响；
注：横坐标是组别，每组别内从左至右依次是心指数(mg/g)、肺指数(mg/g)、脑指数(mg/g)；纵坐标是心指数(mg/g)、肺指数(mg/g)、脑指数(mg/g)具体值；
图13为中药组合物对模型小鼠肾指数、肝指数的影响；
注：横坐标是组别，每组别内从左至右依次是肾指数(mg/g)、肝指数(mg/g)；纵坐标是肾指数(mg/g)、肝指数(mg/g)具体值；
图14为中药组合物对模型小鼠体重的影响；
注：横坐标是组别，每组别内从左至右依次是0d体重(g)、7d体重(g)、 14d体重(g)；纵坐标是0d体重(g)、7d体重(g)、14d体重(g)具体值。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1用于治疗老年性痛风性关节炎的中药组合物的制备
所述的中药组合物包括以下重量的各原料药：菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g以及降香12g。
实施例2用于治疗老年性痛风性关节炎的中药组合物的制备
所述的中药组合物包括以下重量的各原料药：菟丝子10g、狗头七15g、粗叶悬钩子20g、岗梅根40g、佩兰10g、旋复花6g、芡实10g以及降香15g。
实施例3用于治疗老年性痛风性关节炎的中药组合物的制备
所述的中药组合物包括以下重量的各原料药：菟丝子5g、狗头七10g、粗叶悬钩子30g、岗梅根50g、佩兰2g、旋复花14g、芡实15g以及降香10g。
实施例4用于治疗老年性痛风性关节炎的中药组合物(干粉)的制备
(1)配制中药组合物5份
需要分别取菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰 6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g各5份，配制5份中药组合物，获取由菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g组成的中药组合物，5份中药组合物共计650g。
(2)获取中药组合物第一次滤液
选取650g中药组合物菟丝子、狗头七、粗叶悬钩子、岗梅根、佩兰、旋复花、芡实、降香放入20000mL大容量圆底烧瓶中，加入蒸馏水8000mL，需要蒸馏水浸泡650g中药组合物2.5h，100℃下煎煮2.5h，煎煮后，药液分别依次通过 2层纱布、4层纱布、6层纱布、8层纱布过滤后，获取650g中药组合物的第一次滤液。
(3)获取中药组合物第二次滤液
将650g中药组合物的其他残渣放到20000mL大容量圆底烧瓶中，加入蒸馏水8000mL，蒸馏水浸泡2.5h，100℃下煎煮2.5h，煎煮后，药液分别依次通过4 层纱布、6层纱布、8层纱布过滤后，获取650g中药组合物的第二次滤液。
(4)合并中药组合物滤液
将第一次滤液及第二次滤液合并，并且均匀搅拌，让第一次滤液及其第二次滤液充分混合。
(5)获取中药组合物干膏
将合并后的二次滤液置于电热恒温鼓风干燥箱中，在温度为65℃下干燥6d，获取含有菟丝子、狗头七、粗叶悬钩子、岗梅根、佩兰、旋复花、芡实、降香的中药组合物干膏。
(6)称量中药组合物干膏
使用PLZOZ-S型电子天平称重含有菟丝子、狗头七、粗叶悬钩子、岗梅根、佩兰、旋复花、芡实、降香有效成分的中药组合物干膏168.3g，并记录下来。
(7)计算中药组合物出膏率
按照公式计算中药组合物出膏率。计算公式：中药组合物出膏率＝[干膏(g) /中药组合物(g)]×100％。计算由菟丝子、狗头七、粗叶悬钩子、岗梅根、佩兰、旋复花、芡实、降香组成的中药组合物出膏率为[干膏(g)/中药组合物(g)]×100％，即(168.3g/650g)×100％＝25.89％，即1g中药组合物干膏相当于中药组合物原药材3.86g。
(8)获取中药组合物干粉
使用粉碎机将中药组合物干膏多次粉碎，细心研磨，分别依次通过10目筛网、50目筛网、100目筛网以及200目筛网过滤，得到所述的中药组合物的干粉。
(9)称量中药组合物干粉
使用PLZOZ-S型电子天平称重含有菟丝子、狗头七、粗叶悬钩子、岗梅根、佩兰、旋复花、芡实、降香有效成分的中药组合物干粉152.3g，并记录下来。
(10)计算中药组合物出粉率
按照公式计算中药组合物出粉率。计算公式：中药组合物出粉率＝[干粉(g) /中药组合物(g)]×100％。计算由菟丝子、狗头七、粗叶悬钩子、岗梅根、佩兰、旋复花、芡实、降香组成的中药组合物出粉率为[干粉(g)/中药组合物(g)]×100％，即(152.3g/650g)×100％＝23.43％，即1g中药组合物干粉相当于中药组合物原药材4.27g。
(11)分装中药组合物干粉
本实验将由菟丝子、狗头七、粗叶悬钩子、岗梅根、佩兰、旋复花、芡实、降香组成的中药组合物干粉分装成袋，10g/袋，最后一袋2.3g，共16袋。
(12)保存中药组合物干粉
本实验将由菟丝子、狗头七、粗叶悬钩子、岗梅根、佩兰、旋复花、芡实、降香组成的中药组合物干粉，分装成袋成16袋后，保存于-80℃冰箱备用。
实验例1中药组合物在治疗老年性痛风性关节炎中的应用
1实验材料
1.1实验动物
清洁级昆明小鼠，12月龄，雄性，98只，(30±2)g，购买于黑龙江中医药大学实验动物中心(合格证号：SCXK(黑)2013-004)。清洁级昆明小鼠饲养于黑龙江中医药大学实验动物中心，饲养环境为常温、常湿，给予清洁级昆明小鼠无菌饲料及无菌饮用水，清洁级昆明小鼠自由获取食物，维持1只/笼，清洁级昆明小鼠由黑龙江中医药大学实验动物中心李宝龙教授完成饲养工作。
1.2实验药物
每份中药组合物包括菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根 45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g，需要购买5份中药组合物。中药组合物(菟丝子、狗头七、粗叶悬钩子、岗梅根、佩兰、旋复花、芡实、降香) 购买地为黑龙江中医药大学附属第一医院，中药组合物购买人员为黑龙江中医药大学周忠光教授，中药组合物鉴定标准为1989年江苏地方标准，中药组合物鉴定人员为黑龙江中医药大学田明教授，中药组合物需要制备成水煎剂、干膏、干粉，并低温冰箱保存备用。别嘌呤醇，中国重庆青阳药业有限公司。
1.3实验试剂
尿酸钠，美国Sigma公司。IL-12、IL-1β、TNF-α、IL-6酶联免疫试剂盒，南京建成生物工程研究所，20170501。T-AOC、SOD、GSH-PX、MDA酶联免疫试剂盒，南京建成生物工程研究所，20170501。NF-κBp65、NLRP3、β-action引物，美国Santa Cruz Biotechnology公司。Prime
RT reagent KIT，日本 TaKaRa公司。其他试剂均为国产分析纯，由齐齐哈尔医学院张英博副教授及黑龙江中医药大学周忠光教授提供。
1.4实验仪器
-20℃冰箱，中国青岛海尔电器有限公司。6100型酶标仪，美国RT公司。 AppliedBiosystems型定量PCR仪，美国应用生物系统公司。-80℃冰箱，中国青岛海尔电器有限公司。TT30-FW-100型高速万能粉碎机，温岭市林大机械有限公司。TGL-16G型台式离心机，上海安亭科学仪器厂。PLZOZ-S型电子天平，赛多利斯公司。Rsearch UV型超纯水系统，上海和泰仪器有限公司。
2实验方法
2.1动物分组
本实验将98只12月龄雄性清洁级昆明小鼠按照随机数字表排列方式进行分组，使用苦味酸溶液进行标记头部及腹部，共分7组，包括对照组14只，假手术组14只，模型组14只，治疗组14只，中药组合物高剂量组(简称高剂量组) 14只，中药组合物中剂量组(简称中剂量组)14只，中药组合物低剂量组(简称低剂量组)14只，每组清洁级昆明小鼠适应饲养1周，并随时观察每组清洁级昆明小鼠一般状态。
2.2动物造模
资料显示，尿酸盐注射12月龄雄性清洁级昆明小鼠体内可诱导老年性痛风性关节炎(Jeong JH，Jung JH，Lee JS，et al.Prominent Inflammatory Features ofMonocytes/Macrophages in Acute Calcium Pyrophosphate Crystal Arthritis aComparison with Acute Gouty Arthritis[J].Immune Netw，2019，19(3)：e21.)，但需要多次针对同一清洁级昆明小鼠同一部位使用尿酸盐诱导年性痛风性关节炎模型(Zhang B，Duan M，Long B，et al.Urate transport capacity of glucose transporter 9 andurate transporter 1in cartilage chondrocytes[J].Mol Med Rep，2019，20(2)： 1645-1654.；Elmagboul N，Coburn BW，Foster J，et al.Comparison of an interactive voiceresponse system and smartphone application in the identification of goutflares[J].Arthritis Res Ther，2019，21(1)：160.)。本实验参考文献制备老年性痛风性关节炎模型(Ma TH，Sheng T，Tian CM，et al.Effect of ethanolic extract ofPolygonum cuspidatum on acute gouty arthritis in mice through NLRP3/ASC/caspase-1[J].Zhongguo Zhong Yao Za Zhi，2019，44(3)：546-552.； Zhang Y，Zhang N，Song H，et al.Design characterization and comparison of transdermal deliveryof colchicine via borneol-chemically-modified and borneol-physically-modifiedethosome[J].Drug Deliv，2019，26(1)：70-77.)。本实验将选择模型组14只、治疗组14只、高剂量组14只、中剂量组14只、低剂量组14只制备老年性痛风性关节炎模型。具体过程：消毒超净工作台，配制2.5％尿酸钠溶液，戴好手套，抓取清洁级昆明小鼠，无菌消毒清洁级昆明小鼠右侧下肢，在清洁级昆明小鼠右侧足底部注射0.05mL2.5％的尿酸钠溶液，同时在清洁级昆明小鼠右侧足背部注射0.05mL2.5％的尿酸钠溶液，观察清洁级昆明小鼠右侧足部隆起。假手术组14只清洁级昆明小鼠右侧足底部注射0.05mL生理盐水，同时假手术组14只清洁级昆明小鼠右侧足背部注射0.05mL生理盐水。对照组 14只清洁级昆明小鼠右侧足底部及其足背部不注射尿酸钠溶液和生理盐水。本次实验需要经过2次造模可确定建立老年性痛风性关节炎模型。第二次造模过程同第一次造模过程，且两次造模间隔时间为8d，造模持续时间一共为16d。
2.3模型评价
本实验第一次老年性痛风性关节炎造模结束4h后，模型组14只、治疗组14 只、高剂量组14只、中剂量组14只、低剂量组14只，在清洁级昆明小鼠右侧足底部注射0.05mL2.5％的尿酸钠溶液，同时在清洁级昆明小鼠右侧足背部注射 0.05mL2.5％的尿酸钠溶液，均未见清洁级昆明小鼠死亡，清洁级昆明小鼠足趾部明显肿胀；假手术组14只清洁级昆明小鼠右侧足底部注射0.05mL生理盐水，同时假手术组14只清洁级昆明小鼠右侧足背部注射0.05mL生理盐水，未见清洁级昆明小鼠死亡，清洁级昆明小鼠足趾部肿胀不明显；对照组14只清洁级昆明小鼠右侧足底部及其足背部不注射尿酸钠溶液和生理盐水，未见清洁级昆明小鼠死亡，足趾部正常。
本实验清洁级昆明小鼠经过第一次老年性痛风性关节炎模型造模后，悉心饲养8d后，开始第二次老年性痛风性关节炎模型造模过程。
本实验第二次老年性痛风性关节炎造模结束4h后，模型组14只、治疗组14 只、高剂量组14只、中剂量组14只、低剂量组14只，在清洁级昆明小鼠右侧足底部注射0.05mL2.5％的尿酸钠溶液，同时在清洁级昆明小鼠右侧足背部注射 0.05mL2.5％的尿酸钠溶液，可见，模型组13只、治疗组13只、高剂量组12只、中剂量组11只、低剂量组11只存活，清洁级昆明小鼠足趾部明显肿胀模型建立成功；假手术组14只清洁级昆明小鼠右侧足底部注射0.05mL生理盐水，同时假手术组14只清洁级昆明小鼠右侧足背部注射0.05mL生理盐水，清洁级昆明小鼠死亡1只，清洁级昆明小鼠足趾部肿胀不明显；对照组14只清洁级昆明小鼠右侧足底部及其足背部不注射尿酸钠溶液和生理盐水，清洁级昆明小鼠死亡2只，足趾部正常。
最终，本实验老年性痛风性关节炎模型建立成功，且各组清洁级昆明小鼠数量分别为对照组12只、假手术组13只、模型组13只、治疗组13只、高剂量组 12只、中剂量组11只、低剂量组11只，将可以进行后续实验研究。
2.4中药组合物提取
(1)购买中药组合物
本实验由黑龙江中医药大学周忠光教授购买中药组合物，每份由菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g组成的中药组合物，一共购买5份。
(2)鉴定中药组合物
本实验由黑龙江中医药大学田明教授对由菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g组成的中药组合物进行鉴定。该菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g均为原药材，可以进行后续实验研究。
(3)分析中药组合物配伍规律
本实验由黑龙江中医药大学栗明副教授对由菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g组成的中药组合物进行方解分析，经过观察菟丝子、狗头七、粗叶悬钩子、岗梅根、佩兰、旋复花、芡实、降香的性味归经及药效，综合分析由菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g组成的中药组合物具有益肾活血、祛瘀清毒、化湿消痰、健脾止痛的功效。
(4)计算中药组合物剂量
每份中药组合物包括菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根 45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g，共计130g。经过黑龙江中医药大学栗明副教授评定后，该每份130g中药组合物剂量是正常机体的常规安全剂量。
(5)中药提取物的制备
方法同实施例4。
(6)使用中药组合物干粉
本实验使用由菟丝子、狗头七、粗叶悬钩子、岗梅根、佩兰、旋复花、芡实、降香组成的中药组合物干粉，需要将含有菟丝子、狗头七、粗叶悬钩子、岗梅根、佩兰、旋复花、芡实、降香中药组合物室温内融化，搅拌含有菟丝子、狗头七、粗叶悬钩子、岗梅根、佩兰、旋复花、芡实、降香中药组合物后，并按照清洁级昆明小鼠的体表面积及其体重数值精细换算含有菟丝子、狗头七、粗叶悬钩子、岗梅根、佩兰、旋复花、芡实、降香中药组合物给药量。
2.5设定药物剂量
中药组合物每份安全剂量包括菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g，一共130g，将依据清洁级昆明小鼠和人体表面积比值0.0026：1进行换算，计算求得含有菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g的中药组合物常规剂量为[(130g×0.0026)/20g清洁级昆明小鼠]×50，即16.90g/kg。此为含有菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g的中药组合物中剂量。最终设定由菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g组成的中药组合物高剂量、中药组合物中剂量、中药组合物低剂量分别是33.80g/kg、16.90g/kg、8.45g/kg。临床上别嘌呤醇治疗老年性痛风性关节炎的常规可用剂量是(200～400)mg按照换算关系计算清洁级昆明小鼠给药剂量(26～52)mg/kg或(0.026～0.052)g/kg，本实验选择0.03g/kg别嘌呤醇开展实验研究。
2.6动物给药
本实验第二次造模结束4h后，可以对各组清洁级昆明小鼠进行给药。其中，对照组清洁级昆明小鼠给予0.3mL生理盐水灌胃14d；假手术组清洁级昆明小鼠给予0.3mL生理盐水灌胃14d；模型组清洁级昆明小鼠给予0.3mL生理盐水灌胃 14d；治疗组给予0.03g/kg别嘌呤醇灌胃14d；高剂量组给予33.80g/kg中药组合物(相当于中药组合物原药材菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g，一共130g)灌胃14d；中剂量组给予16.90g/kg中药组合物(相当于中药组合物原药材菟丝子9g、狗头七 12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香 12g，一共130g)灌胃14d；低剂量组给予8.45g/kg中药组合物(相当于中药组合物原药材菟丝子9g、狗头七12.5g、粗叶悬钩子22.5g、岗梅根45g、佩兰6g、旋复花11g、芡实12g、降香12g，一共130g)灌胃14d。本实验灌胃给药结束后，各组清洁级昆明小鼠存活数目包括，对照组10只清洁级昆明小鼠存活；假手术组11只清洁级昆明小鼠存活；模型组9只清洁级昆明小鼠存活；治疗组11只清洁级昆明小鼠存活；高剂量组11只清洁级昆明小鼠存活；中剂量组10只清洁级昆明小鼠存活；低剂量组10只清洁级昆明小鼠存活。
2.7测定关节肿胀度
本实验参考文献(金晓敏，张晓熙，郭璐，等.基于NLRP3炎性体轴探讨土茯苓总黄酮对痛风性关节炎的作用和机制[J].中国实验方剂学杂志，2018，24(4)： 90-95.；文学平，刘德俊，裴忆雪，等.黄芩苷抗急性痛风性关节炎的实验研究[J]. 中药材，2017，40(8)：1952-1955.)测定各组清洁级昆明小鼠足趾部的关节肿胀度。本实验需要准备记号笔，使用记号笔标记每只清洁级昆明小鼠的膝部关节弯曲处。本实验在各组清洁级昆明小鼠最后一次灌胃给药结束4h后，将清洁级昆明小鼠放于密闭玻璃容器内，向玻璃容器内注入乙醚，开始麻醉清洁级昆明小鼠，同时观察清洁级昆明小鼠的基本状态，避免麻醉过度。清洁级昆明小鼠麻醉好后，将清洁级昆明小鼠足趾部从膝部弯曲标记处剪下，放于装有预冷生理盐水量筒中，精确记录观察清洁级昆明小鼠足趾部的容积刻度。计算公式为：足趾部关节肿胀度(mL)＝实验后足趾部关节容积(mL)-实验前足趾部关节容积(mL)。
2.8测定关节炎症指数
本实验参考文献(何泳龙，青玉凤，周京国.高尿酸血症及痛风性关节炎动物模型及其中药复方治疗概况[J].川北医学院学报，2015，30(4)：574-578.；尤元梅.痛风康对痹证湿热蕴结型的实验研究[D].安徽中医药大学，2015.；谭唱.萆薢除痹汤对于高尿酸血症模型血清尿酸及小鼠肾脏尿酸转运盐蛋白OAT1、URAT1 mRNA表达的实验研究[D].南京中医药大学，2014.)测定老年性痛风性关节炎足趾部关节炎症指数。本实验评价老年性痛风性关节炎足趾部关节炎症指数方法如下：老年性痛风性关节炎足趾部关节炎症指数包括5级，其中0级0分、1级1～ 2分、2级3～4分、3级5～6分、4级7～8分。其中，无肿胀：0级表示清洁级昆明小鼠足趾部没有红、肿、热，足趾部的骨性标志清晰可见；轻度肿胀：1级清洁级昆明小鼠足趾部出现局限性肿胀，关节出现红、热，足趾部的骨性标志看不到；中度肿胀：2级清洁级昆明小鼠足趾部出现整体性肿胀，关节出现红、热、痛，足趾部骨性标志看不到；重度肿胀：3级清洁级昆明小鼠足趾部出现整体性肿胀，关节出现红、热、痛，足趾部骨性标志看不到出现，同时足趾部以外的关节部位，如膝关节出现明显肿胀；极重度肿胀：4级清洁级昆明小鼠足趾部出现整体性肿胀，关节出现红、热、痛，足趾部骨性标志看不到出现，同时足趾部以外的关节部位，如膝关节出现明显肿胀，伴有关节畸形，活动受限。
2.9测定抗氧化能力
本实验参考文献(Liu NY，Huang JM，Ren XM，et al.Superoxide dismutase fromvenom of the ectoparasitoid Scleroderma guani inhibits melanization ofhemolymph[J].Arch Insect Biochem Physiol，2018，99(3)：e21503.；Greifova G， BodyP，Greif G，et al.Human phagocytic cell response to histamine derived frompotential probiotic strains of Lactobacillus reuteri[J].Immunobiology，2018，223(11)： 618-626.)使用酶联免疫吸附实验方法测定各组清洁级昆明小鼠足趾部的抗氧化能力。本实验在最后一次对清洁级昆明小鼠灌胃给药结束4h后，10％水合氯醛麻醉清洁级昆明小鼠，迅速在冰上取材清洁级昆明小鼠足趾部，去除清洁级昆明小鼠皮肤，精细研磨清洁级昆明小鼠足趾部，匀浆，4℃静置匀浆液1h，静置1h，TGL-16G型台式离心机3000rpm/min离心清洁级昆明小鼠足趾部匀浆液20min，取各组清洁级昆明小鼠足趾部上清液，进行分装清洁级昆明小鼠足趾部上清液，按照试剂盒说明书测定各组清洁级昆明小鼠足趾部T-AOC、SOD、GSH-PX、MDA 含量。
2.10测定炎症介质
本实验参考文献(Yuan X，Fan YS，Xu L，et al.Jia-Wei-Si-Miao-Wanalleviates acute gouty arthritis by targeting NLRP3 inflammasome[J].J BiolRegul Homeost Agents，2019，33(1)：63-71.)使用酶联免疫吸附实验方法测定各组清洁级昆明小鼠的炎症介质IL-12、IL-6、IL-1β、TNF-α含量表达水平。本实验在最后一次对各组清洁级昆明小鼠灌胃给药结束4h后，需要抓取清洁级昆明小鼠，麻醉清洁级昆明小鼠，迅速在冰上取材清洁级昆明小鼠足趾部，去除各组清洁级昆明小鼠皮肤，精细研磨清洁级昆明小鼠足趾部，匀浆，4℃静置清洁级昆明小鼠足趾部匀浆液1h，TGL-16G型台式离心机3000rpm/min离心20min，取清洁级昆明小鼠足趾部上清液，分装清洁级昆明小鼠足趾部上清液，检测各组清洁级昆明小鼠足趾部关节组织IL-12、IL-6、IL-1β、TNF-α蛋白含量，余下清洁级昆明小鼠足趾部上清液样品保存于-80℃冰箱备用。按照试剂盒说明书，采用6100型酶标仪测定450nm波长处吸光度值(OD)，根据标准曲线方程及各孔吸光度值(OD) 计算清洁级昆明小鼠足趾部关节组织炎症介质IL-12、IL-6、IL-1β、TNF-α含量。
2.11测定NLRP3和NF-κBp65蛋白表达
本实验参考文献(Chang WC，Chu MT，Hsu CY，et al.Rhein An AnthraquinoneDrug Suppresses the NLRP3 Inflammasome and Macrophage Activation in UrateCrystal-Induced Gouty Inflammation[J].Am J Chin Med，2019，47(1)：135-151.) 采用免疫组织化学法检测NLRP3、NF-κBp65表达。本实验在最后一次对各组清洁级昆明小鼠灌胃给药结束4h后，需要抓取清洁级昆明小鼠，麻醉清洁级昆明小鼠，迅速在冰上取材清洁级昆明小鼠足趾部，去除各组清洁级昆明小鼠皮肤，精细研磨清洁级昆明小鼠足趾部，依次完成清洁级昆明小鼠足趾部的固定、组织包埋、组织切片、组织脱蜡、组织脱水、组织修复、组织滴加封闭液、组织一抗工作液(4℃过夜)，HRP偶联的二抗孵育组织，苏木精复染组织，光学显微镜下观察，存储图像，应用Image-Pro Plus 6.0软件计算清洁级昆明小鼠足趾部NLRP3、 NF-κBp65的平均光密度值(MOD)。
2.12测定NLRP3和NF-κBp65基因表达
本实验参考文献(Yang QB，He YL，Zhong XW，et al.Resveratrol amelioratesgouty inflammation via upregulation of sirtuin 1to promote autophagy in goutpatients[J].Inflammopharmacology，2019，27(1)：47-56.；Hsieh CY，Li LH， Rao YK，etal.Mechanistic insight into the attenuation of gouty inflammation byTaiwanese green propolis via inhibition of the NLRP3 inflammasome[J].J CellPhysiol，2019，234(4)：4081-4094.)，使用Applied Biosystems型定量PCR 仪，采用Real-time-PCR测定各组清洁级昆明小鼠足趾部关节组织NLRP3和 NF-κBp65 mRNA表达。本实验在最后一次灌胃给药结束4h后，需要将新鲜清洁级昆明小鼠足趾部RNA，并反转录成cDNA，设计各组清洁级昆明小鼠足趾部关节组织NLRP3和NF-κBp65 mRNA的特异性引物。其中如NLRP3(Forward： 5’-GAG CTG GAC CTC AGT GAC AAT GC-3’；Reverse：3’-ACC AAT GCGAGA TCC TGA CAA CAC-5’)；NF-κBp65(Forward：5’-ACG CGG ATT CCT GTA CAC CT-3’；Reverse：3’-CAG GAG CTC CAC AGG ACA GA-5’)。实验需要加特殊 SYBR Green I荧光材料，设置参数包括50℃2min，95℃10min，95℃15s，60℃ 1min，40Cycles，采用2-ΔΔCt法计算，分析计算清洁级昆明小鼠足趾部关节组织 NLRP3和NF-κBp65 mRNA表达量。
2.13测定脏器指数
本实验在最后一次灌胃给药结束4h后，断头处死清洁级昆明小鼠，解剖清洁级昆明小鼠，取材清洁级昆明小鼠脾、胸腺、脑、心、肺、肾、肝，称重清洁级昆明小鼠脾、胸腺、脑、心、肺、肾、肝，按照清洁级昆明小鼠脾、胸腺、脑、心、肺、肾、肝脏器指数公式计算各组清洁级昆明小鼠脾、胸腺、脑、心、肺、肾、肝等脏器的脏器指数，将会评价中药组合物对老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠副作用。计算公式：脏器指数(mg/g)＝脏器质量(mg)/清洁级昆明小鼠体重(g)
2.14测定小鼠体重
本实验参考文献使用电子天平测定各组清洁级昆明小鼠体重。本实验在给药过程中0d、7d、14d内，分别测定各组清洁级昆明小鼠体重，统计各组清洁级昆明小鼠在给药过程中0d、7d、14d体重数据变化，将会评价中药组合物对老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠副作用。
2.15统计分析
采用SPSS19.0软件分析各组清洁级昆明小鼠数据，各组清洁级昆明小鼠数据采用
表示，多组间清洁级昆明小鼠数据比较采用单因素方差分析，使用P＜ 0.05表示各组清洁级昆明小鼠数据差异具有统计学意义，使用P＞0.05表示各组清洁级昆明小鼠数据差异不具有统计学意义。
3结果
3.1中药组合物对模型小鼠足趾部关节肿胀度的影响
结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部的关节肿胀度明显增加(P＜0.05)；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠足趾部的关节肿胀度改变不明显(P＞0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，治疗组、高剂量组、中剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部的关节肿胀度明显降低(P＜0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，低剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部的关节肿胀度改变不明显(P＞0.05)。见表1、图1。
表1中药组合物对模型小鼠足趾部关节肿胀度的影响
注：与对照组比较：*P＞0.05，**P＜0.05；与模型组比较：#P＜0.05，##P＞ 0.05
3.2中药组合物对模型小鼠足趾部关节炎症指数的影响
结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部关节炎症指数明显增加(P＜0.05)；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠足趾部关节炎症指数改变不明显(P＞0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，治疗组、高剂量组、中剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部关节炎症指数明显降低(P＜0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，低剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部关节炎症指数改变不明显(P＞0.05)。见表2、图2。
表2中药组合物对模型小鼠足趾部关节炎症指数的影响
注：与对照组比较：*P＞0.05，**P＜0.05；与模型组比较：#P＜0.05，##P＞ 0.05
3.3中药组合物对模型小鼠足趾部T-AOC的影响
结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部T-AOC明显降低(P＜0.05)；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠足趾部T-AOC改变不明显(P＞0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，治疗组、高剂量组、中剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部T-AOC明显增加(P＜0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，低剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部T-AOC改变不明显(P＞0.05)。见表3、图3。
表3中药组合物对模型小鼠足趾部T-AOC的影响
注：与对照组比较：*P＞0.05，**P＜0.05；与模型组比较：#P＜0.05，##P＞ 0.05
3.4中药组合物对模型小鼠足趾部SOD和GSH-PX的影响
结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部SOD和GSH-PX含量明显降低(P＜0.05)；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠足趾部SOD和GSH-PX含量改变不明显(P＞0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，治疗组、高剂量组、中剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部SOD和GSH-PX含量明显增加(P＜0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，低剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部SOD和GSH-PX含量改变不明显(P＞0.05)。见表4、图4。
表4中药组合物对模型小鼠足趾部SOD和GSH-PX的影响
注：与对照组比较：*P＞0.05，**P＜0.05；与模型组比较：#P＜0.05，##P＞ 0.05。
3.5中药组合物对模型小鼠足趾部MDA的影响
结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部MDA明显增加(P＜0.05)；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠足趾部MDA改变不明显(P＞0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，治疗组、高剂量组、中剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部MDA明显降低(P＜0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，低剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部MDA改变不明显(P ＞0.05)。见表5、图5。
表5中药组合物对模型小鼠足趾部MDA的影响
注：与对照组比较：*P＞0.05，**P＜0.05；与模型组比较：#P＜0.05，##P＞ 0.05
3.6中药组合物对模型小鼠足趾部IL-12的影响
结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部IL-12明显增加(P＜0.05)；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠足趾部IL-12改变不明显(P＞0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，治疗组、高剂量组、中剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部IL-12明显降低(P＜0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，低剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部IL-12改变不明显(P ＞0.05)。见表6、图6。
表6中药组合物对模型小鼠足趾部IL-12的影响
注：与对照组比较：*P＞0.05，**P＜0.05；与模型组比较：#P＜0.05，##P＞0.05
3.7中药组合物对模型小鼠足趾部IL-6的影响
结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部IL-6明显增加(P＜0.05)；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠足趾部IL-6改变不明显(P＞0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，治疗组、高剂量组、中剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部IL-6明显降低(P＜0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，低剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部IL-6改变不明显(P＞ 0.05)。见表7、图7。
表7中药组合物对模型小鼠足趾部IL-6的影响
注：与对照组比较：*P＞0.05，**P＜0.05；与模型组比较：#P＜0.05，##P＞ 0.05
3.8中药组合物对模型小鼠足趾部IL-1β和TNF-α的影响
结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部IL-1β和TNF-α明显增加(P＜0.05)；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠足趾部IL-1β和TNF-α改变不明显(P ＞0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，治疗组、高剂量组、中剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部IL-1β和TNF-α明显降低(P＜0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，低剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部IL-1β和TNF-α改变不明显(P＞0.05)。见表8、图8。
表8中药组合物对模型小鼠足趾部IL-1β和TNF-α的影响
注：与对照组比较：*P＞0.05，**P＜0.05；与模型组比较：#P＜0.05，##P＞ 0.05
3.9中药组合物对模型小鼠足趾部NLRP3和NF-κBp65蛋白的影响
结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部NLRP3和NF-κBp65蛋白平均光密度值明显增加(P＜0.05)；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠足趾部NLRP3 和NF-κBp65蛋白平均光密度值改变不明显(P＞0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，治疗组、高剂量组、中剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部NLRP3和NF-κBp65蛋白平均光密度值明显降低(P＜0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，低剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部 NLRP3和NF-κBp65蛋白平均光密度值改变不明显(P＞0.05)。见表9、图9。
表9中药组合物对模型小鼠足趾部NLRP3和NF-κBp65蛋白的影响
注：与对照组比较：*P＞0.05，**P＜0.05；与模型组比较：#P＜0.05，##P＞0.05
3.10中药组合物对模型小鼠足趾部NLRP3和NF-κBp65基因的影响
结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部NLRP3和NF-κBp65基因相对表达量明显增加(P＜0.05)；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠足趾部NLRP3和 NF-κBp65基因相对表达量改变不明显(P＞0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，治疗组、高剂量组、中剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部NLRP3和NF-κBp65基因相对表达量明显降低(P＜0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，低剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠足趾部NLRP3 和NF-κBp65基因相对表达量改变不明显(P＞0.05)。见表10、图10。
表10中药组合物对模型小鼠足趾部NLRP3和NF-κBp65基因的影响
注：与对照组比较：*P＞0.05，**P＜0.05；与模型组比较：#P＜0.05，##P＞ 0.05
3.11中药组合物对模型小鼠脾指数和胸腺指数的影响
结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠免疫器官脏器指数明显增加(P＜0.05)；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠免疫器官脏器指数改变不明显(P＞0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，治疗组、高剂量组、中剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠免疫器官脏器指数明显降低(P＜0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，低剂量组老年性痛风性关节炎模型清洁级昆明小鼠免疫器官脏器指数改变不明显(P＞0.05)。见表11、图11。
表11中药组合物对模型小鼠脾指数和胸腺指数的影响
注：与对照组比较：*P＞0.05，**P＜0.05；与模型组比较：#P＜0.05，##P＞ 0.05
3.12中药组合物对模型小鼠心指数、肺指数、脑指数的影响
结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组模型小鼠心指数、肺指数、脑指数改变不明显(P＞0.05)；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠心指数、肺指数、脑指数改变不明显(P＞0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，治疗组、高剂量组、中剂量组、低剂量组清洁级昆明小鼠心指数、肺指数、脑指数改变不明显(P＞0.05)。见表12、图12。
表12中药组合物对模型小鼠心指数、肺指数、脑指数的影响(
n＝9)
注：与对照组比较：*P＞0.05；与模型组比较：**P＞0.05
3.13中药组合物对模型小鼠肾指数、肝指数的影响
结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组模型小鼠肾指数、肝指数改变不明显(P＞0.05)；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠肾指数、肝指数改变不明显(P＞0.05)；与模型组清洁级昆明小鼠比较，治疗组、高剂量组、中剂量组、低剂量组清洁级昆明小鼠肾指数、肝指数改变不明显 (P＞0.05)。见表13、图13。
表13中药组合物对模型小鼠肾指数、肝指数的影响(
n＝9)
注：与对照组比较：*P＞0.05；与模型组比较：**P＞0.05
3.14中药组合物对模型小鼠体重的影响
结果表明，与对照组0d、7d、14d清洁级昆明小鼠体重比较，模型组0d、7d、 14d清洁级昆明小鼠体重改变不明显(P＞0.05)；与对照组0d、7d、14d清洁级昆明小鼠体重比较，假手术组0d、7d、14d清洁级昆明小鼠体重改变不明显(P ＞0.05)；与模型组0d、7d、14d清洁级昆明小鼠体重比较，治疗组、高剂量组、中剂量组、低剂量组0d、7d、14d清洁级昆明小鼠体重改变不明显(P＞0.05)。见表14、图14。
表14中药组合物对模型小鼠体重的影响(
n＝9)
注：与对照组比较：*P＞0.05；与模型组比较：**P＞0.05。
Claims (9)
1.一种用于治疗老年性痛风性关节炎的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物由以下重量份的各原料药制成：菟丝子5-15重量份、狗头七10-15重量份、粗叶悬钩子20-30重量份、岗梅根40-50重量份、佩兰2-10重量份、旋复花5-15重量份、芡实10-15重量份以及降香10-15重量份。
2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物由以下重量份的各原料药制成：菟丝子9重量份、狗头七12.5重量份、粗叶悬钩子22.5重量份、岗梅根45重量份、佩兰6重量份、旋复花11重量份、芡实12重量份以及降香12重量份。
3.一种制备权利要求1或2所述的中药组合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）按照权利要求1或2所述的重量份称取各原料药，将各原料药混合均匀后放入高颈圆底烧瓶中，加入药物重量10-15倍的蒸馏水，浸泡2-3h后，煎煮2-3h，冷却；
（2）将步骤（1）冷却后的药液用纱布过滤，得到第一次滤液；
（3）步骤（2）剩余的药物残渣放入高颈圆底烧瓶中，加入药物重量10-15倍的蒸馏水，浸泡2-3h后，煎煮2-3h，冷却；用纱布过滤，得到第二次滤液；
（4）合并二次滤液，并且均匀搅拌，让第一次滤液及其第二次滤液充分混合；
（5）将合并后的二次滤液置于电热恒温鼓风干燥箱中，在温度为60-70℃下干燥5-7d，得到所述中药组合物的干膏。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，将得到的干膏放在粉碎机内粉碎，研磨，分子筛处理，得到所述中药组合物的干粉。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，将得到的干膏放在粉碎机内粉碎后，分别依次经过10目、50目、100目以及200目的筛网进行过滤，得到所述中药组合物的干粉。
6.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述的纱布过滤是指分别依次经过2层纱布、4层纱布、6层纱布以及8层纱布进行过滤，步骤（3）中所述的纱布过滤是指分别依次经过4层纱布、6层纱布以及8层纱布进行过滤。
7.权利要求1或2所述的中药组合物在制备治疗老年性痛风性关节炎的药物中的应用。
8.一种用于治疗老年性痛风性关节炎的中药制剂，其特征在于，由权利要求1或2所述的中药组合物加入制剂成型所需的辅料，按照制备药物制剂的常规方法制成。
9.如权利要求8所述的中药制剂，其特征在于，所述的制剂为水煎剂、粉剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、片剂或口服液。
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