CN114755331A

CN114755331A - Uplc-q-tof法鉴别舒筋活血丸中6种组分的方法

Info

Publication number: CN114755331A
Application number: CN202210358023.4A
Authority: CN
Inventors: 苏晶; 汪杨丽; 李青; 白小琼; 陈晓虎; 王慧; 唐华; 葛渊源; 张毅; 蒋万浪
Original assignee: Chongqing Institute for Food and Drug Control
Current assignee: Chongqing Institute for Food and Drug Control
Priority date: 2022-04-06
Filing date: 2022-04-06
Publication date: 2022-07-15
Anticipated expiration: 2042-04-06
Also published as: CN114755331B

Abstract

本发明属于化学分析技术领域，具体涉及的是UPLC‑Q‑TOF法鉴别舒筋活血丸中6种组分的方法，所述组分为：川续断皂苷Ⅵ、β‑蜕皮甾酮、柚皮苷、苦杏仁苷、儿茶素以及±原苏木素B。该方法采用Waters超高速液相色谱仪以及小粒径的超高速液相仪专用色谱柱进行梯度洗脱，流动相A为甲酸铵和甲酸的混合溶液，其中甲酸铵浓度为0.02mmol/L，甲酸体积浓度为0.1％，流动相B为甲酸和乙腈的混合溶液，其中甲酸体积浓度为0.1％；检测仪器为四级杆飞行时间串联质谱，扫描模式为电喷雾电离负离子模式。本发明建立的方法，能够准确鉴别出舒筋活血丸中6种组分，并判断该药是否含有续断、牛膝、骨碎补、桃仁、儿茶、苏木几味药材，对综合评价舒筋活血丸质量具有重要的意义。

Description

UPLC-Q-TOF法鉴别舒筋活血丸中6种组分的方法

技术领域

本发明属于化学分析领域，具体涉及的是UPLC-Q-TOF法鉴别舒筋活血丸中6种组分的方法。

背景技术

舒筋活血丸是由续断、牛膝、骨碎补、桃仁、儿茶、苏木、土鳖虫、红花、熟地黄、白芷、栀子、赤芍、桂枝、三七、乳香(制)、自然铜(醋煅)、大黄、制马钱子、当归以及冰片组成的深褐色大蜜丸。该药味苦、涩，具有舒筋通络和活血止痛的功效，可用于跌打损伤，闪腰岔气，筋断骨折，瘀血作痛。

舒筋活血丸包括川续断皂苷Ⅵ、β-蜕皮甾酮、柚皮苷、苦杏仁苷、儿茶素以及(±)原苏木素B等组分，然而其收载标准仅记载采用薄层色谱法定性鉴别该制剂中的桂枝、三七、白芷以及赤芍，该提取过程复杂、分析时间较长，并且未涉及续断、牛膝、骨碎补、桃仁、儿茶、苏木的定性鉴别。

有鉴于此，本发明利用UPLC-Q-TOF技术对多种组分进行研究，建立了UPLC-Q-TOF快速检测舒筋活血丸中6种组分的定性方法，该方法简便、快速、准确，能全面而快速地对舒筋活血丸中多种组分进行准确鉴定，为舒筋活血丸的质量标准完善提供新的参考。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种从舒筋活血丸中分离6种组分的UPLC-Q-TOF方法，该方法可同时分离舒筋活血丸中的6种组分。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

从舒筋活血丸中分离6种组分的UPLC-Q-TOF方法，所述UPLC-Q-TOF方法采用甲酸与甲酸铵的混合溶液作流动相A，以及含有甲酸与乙腈的混合溶液作流动相B，进行梯度洗脱；所述UPLC-Q-TOF方法质谱条件为四级杆飞行时间串联质谱，采用电喷雾电离负离子模式；所述UPLC-Q-TOF方法分离的组分包括川续断皂苷Ⅵ、β-蜕皮甾酮、柚皮苷、苦杏仁苷、儿茶素和/或±原苏木素B，川续断皂苷Ⅵ的结构式如式Ⅰ，β-蜕皮甾酮的结构式如式Ⅱ，柚皮苷的结构式如式Ⅲ，苦杏仁苷的结构式如式Ⅳ，儿茶素的结构式如式Ⅴ，±原苏木素B的结构式如式Ⅵ：

舒筋活血丸的质量检测大多采用薄层色谱法对方中各位药进行研究，涉及药材多为当归、熟地、大黄、栀子、马钱子、赤芍以及白芷。与薄层色谱法相比，UPLC-Q-TOF法能够准确鉴别出舒筋活血丸中6种组分，并判断该药是否含有续断、牛膝、骨碎补、桃仁、儿茶和/或苏木几味药材，更加简便、快速、可靠。

进一步，所述流动相A为甲酸和甲酸铵的混合溶液，其中甲酸铵浓度为0.02mmol/L，甲酸体积浓度为0.1％；所述流动相B为甲酸和乙腈的混合溶液，甲酸体积浓度为0.1％。

进一步，色谱条件为：梯度洗脱0～4min，流动相A 90％-50％，流动相B10％-50％；柱温为30℃；体积流量为0.3mL/min，进样体积为1μL。

进一步，扫描方式采用MS全扫瞄，质量扫描范围为100～1000m/z。

进一步，离子源参数为：毛细管电压3000V，源温度110℃，脱溶剂气温度350℃，N₂体积流量：8.3L/min。

本发明的目的之二在于提供一种定性鉴别舒筋活血丸组分的UPLC-Q-TOF方法，该方法可快速鉴别舒筋活血丸的组分。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

1)样品前处理：以甲醇为稀释液，配置供试品溶液、对照品溶液以及阴性对照品溶液；

2)采用UPLC-Q-TOF方法分离舒筋活血丸中的6种组分，并得到供试品溶液、对照品溶液和阴性对照品溶液的总离子流图和一级质谱图；

3)根据对照品溶液的质谱图建立模型；

4)将样品的一级质谱图与模型对比，判断样品中是否含有该6种组分。

进一步，所述步骤1)供试品的制备过程中，提取溶剂为无水乙醇，提取方法为超声提取法。

进一步，所述步骤2)中的对照品±原苏木素B的出峰时间为0.67min，供试品±原苏木素B的出峰时间为0.66min；对照品儿茶素的出峰时间为0.62min，供试品儿茶素的出峰时间为0.61min；对照品苦杏仁苷的出峰时间为0.63min，供试品苦杏仁苷的出峰时间为0.64min；对照品柚皮苷的出峰时间为1.28min，供试品柚皮苷的出峰时间为1.28min；对照品β-蜕皮甾酮的出峰时间为0.92min，供试品β-蜕皮甾酮的出峰时间为0.93min；对照品川续断皂苷Ⅵ出峰时间为3.55min，供试品川续断皂苷Ⅵ的出峰时间为3.56min。

进一步，所述步骤2)中的对照品±原苏木素B的质荷比为303.1，供试品±原苏木素B的质荷比为303.1；对照品儿茶素的质荷比为289.1，供试品儿茶素的质荷比为289.1；对照品苦杏仁苷的质荷比为456.2，供试品苦杏仁苷的质荷比为456.2；对照品柚皮苷的质荷比为579.2，供试品柚皮苷的质荷比为579.2；对照品β-蜕皮甾酮的质荷比为479.3，供试品β-蜕皮甾酮的质荷比为479.3；对照品川续断皂苷Ⅵ质荷比为927.5，供试品川续断皂苷Ⅵ的质荷比为927.5。

进一步，所述步骤4)当样品中各组分的出峰时间和质荷比与对照品中的各组分的出峰时间和质荷比一致，则判断样品中含有对应的组分。

进一步，样品中川续断皂苷Ⅵ、β-蜕皮甾酮、柚皮苷、苦杏仁苷、儿茶素、±原苏木素B的检测限分别为1.1×10-6μg/g、1.6×10-6μg/g、2.1×10-6μg/g、3.0×10-6μg/g、1.2×10-6μg/g。

本发明的有益效果在于：

1)本发明所采用的方法为定性鉴别，采用超声处理提取进行样品前处理和无水乙醇作为提取溶剂，促进了待检测组分的有效提取，并且减少了炼蜜中糖类杂质的影响。

2)本发明采用甲酸与甲酸铵的混合溶液作流动相A，甲酸与乙腈的混合溶液作流动相B，进行梯度洗脱，获得了优质的色谱峰形、分离度和质谱信号响应。

3)本发明提供了一种同时鉴别舒筋活血丸中6种组分的UPLC-Q-TOF方法，该方法简便、快速、可靠，能够同时准确鉴别出舒筋活血丸中的6种组分，判断该药是否含有续断、牛膝、骨碎补、桃仁、儿茶、苏木几味药材，为综合评价舒筋活血丸质量、生产厂家是否按规定投料提供参考。

附图说明

图1为舒筋活血丸中6个组分的总离子流图(对照品)；

图2为舒筋活血丸中6个组分的总离子流图(供试品)；

图3为±原苏木素B对照品的质谱图；

图4为±原苏木素B样品的质谱图；

图5为儿茶素对照品的质谱图；

图6儿茶素样品的质谱图；

图7苦杏仁苷对照品的质谱图；

图8为苦杏仁苷样品的质谱图；

图9为柚皮苷对照品的质谱图；

图10为柚皮苷样品的质谱图；

图11为β-蜕皮甾酮对照品的质谱图；

图12为β-蜕皮甾酮样品的质谱图；

图13为川续断皂苷Ⅵ对照品的质谱图；

图14为川续断皂苷Ⅵ样品的质谱图。

具体实施方式

所举实施例是为了更好地对本发明进行说明，但并不是本发明的内容仅局限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整所获得的技术方案，仍属于本发明的保护范围。

实施例1样品前处理

1)配置供试品溶液：舒筋活血丸1丸，剪碎后加入硅藻土5g，混匀并研细，再加入无水乙醇50mL，超声处理20min后过滤，取滤液0.2mL，加入甲醇溶液稀释至10mL，摇匀后使用微孔滤膜(0.22μm)过滤，所得续滤液即供试品溶液。

2)配置对照品溶液：分别取川续断皂苷Ⅵ、β-蜕皮甾酮、柚皮苷、苦杏仁苷、儿茶素、±原苏木素B对照品适量，精密称定，加入甲醇溶液分别制成含量为2μg/mL的溶液，然后采用微孔滤膜(0.22μm)过滤，所得续滤液即对照品溶液。

3)配置阴性对照品溶液：分别按处方比例及制备工艺制备续断(川续断皂苷Ⅵ)、牛膝(β-蜕皮甾酮)、骨碎补(柚皮苷)、桃仁(苦杏仁苷)、儿茶(儿茶素)、苏木(原苏木素B)的阴性对照样品，再按1)项制备方法分别制备阴性对照品溶液。

配置供试品溶液时，由于样品为大蜜丸，其中含有大量的炼蜜，加入硅藻土研磨能够除去部分杂质，从而减少对检测仪器及色谱柱的污染和损害。

实施例2流动相的筛选

考察乙腈与不同种类的挥发性缓冲液(0.1％甲酸、0.02mmol/L甲酸铵溶液、含0.1％甲酸的0.02mmol/L甲酸铵溶液)组成的流动相对6种化合物的色谱行为和离子化程度的影响，具体如下：

1.色谱条件

色谱柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18(50×2.1mm，1.7μm)色谱柱；柱温为30℃，进样体积为1μL，体积流量0.3mL/min。

①流动相A含0.1％甲酸的0.02mmol/L甲酸铵溶液；流动相B含0.1％甲酸的乙腈。

②梯度洗脱0～4min，流动相A90％-50％，流动相B10％-50％。

2.质谱条件

采用电喷雾电离负离子模式；质量扫描范围：100～1000m/z；采用Q-TOF全扫描(MS)；离子源参数：毛细管电压3000V，源温度110℃，脱溶剂气温度350℃，N₂体积流量：8.3L/min。

3.方法及结果

按上述实施例1的方法及步骤配置样品及对照品溶液，并按照上述色谱条件和质谱条件进样检测，得到一级质谱图。

如图1～图14所示，采用流动相①进行梯度洗脱，供试品中的6个被检测成分的一级质谱图与对照品的一级质谱图一致，相应的阴性对照品，均未检出相对应的分子离子峰，6种化合物及定性离子如表1所示。

表1

Claims

1.从舒筋活血丸中分离6种组分的UPLC-Q-TOF方法，其特征在于，所述UPLC-Q-TOF方法采用甲酸与甲酸铵的混合溶液作流动相A，甲酸与乙腈的混合溶液作流动相B，进行梯度洗脱；所述UPLC-Q-TOF方法质谱条件为四级杆飞行时间串联质谱，采用电喷雾电离负离子模式；所述UPLC-Q-TOF方法分离的组分包括川续断皂苷Ⅵ、β-蜕皮甾酮、柚皮苷、苦杏仁苷、儿茶素和/或±原苏木素B，川续断皂苷Ⅵ的结构式如式Ⅰ，β-蜕皮甾酮的结构式如式Ⅱ，柚皮苷的结构式如式Ⅲ，苦杏仁苷的结构式如式Ⅳ，儿茶素的结构式如式Ⅴ，±原苏木素B的结构式如式Ⅵ：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相A为甲酸和甲酸铵的混合溶液，其中甲酸铵浓度为0.02mmol/L，甲酸体积浓度为0.1％；所述流动相B为甲酸和乙腈的混合溶液，甲酸体积浓度为0.1％。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，色谱条件为：梯度洗脱0～4min，流动相A90％-50％，流动相B10％-50％；柱温为30℃；体积流量为0.3mL/min，进样体积为1μL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，扫描方式采用MS全扫瞄，质量扫描范围为100～1000m/z。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，离子源参数为：毛细管电压3000V，源温度110℃，脱溶剂气温度350℃，N2体积流量：8.3L/min。

6.定性鉴别舒筋活血丸组分的UPLC-Q-TOF方法，其特征在于，所述方法具体步骤如下：

1)样品前处理：以甲酸为稀释液，配置供试品溶液、对照品溶液以及阴性对照品溶液；

2)采用权利要求1～5任一所述UPLC-Q-TOF方法分离舒筋活血丸中的6种组分，并得到供试品溶液、对照品溶液和阴性对照品溶液的总离子流图和一级质谱图；

3)根据对照品溶液的质谱图建立模型；

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤1)供试品的制备过程中，提取溶剂为无水乙醇，提取方法为超声提取法。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的对照品±原苏木素B的出峰时间为0.67min，供试品±原苏木素B的出峰时间为0.66min；对照品儿茶素的出峰时间为0.62min，供试品儿茶素的出峰时间为0.61min；对照品苦杏仁苷的出峰时间为0.63min，供试品苦杏仁苷的出峰时间为0.64min；对照品柚皮苷的出峰时间为1.28min，供试品柚皮苷的出峰时间为1.28min；对照品β-蜕皮甾酮的出峰时间为0.92min，供试品β-蜕皮甾酮的出峰时间为0.93min；对照品川续断皂苷Ⅵ出峰时间为3.55min，供试品川续断皂苷Ⅵ的出峰时间为3.56min。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的对照品±原苏木素B的质荷比为303.1，供试品±原苏木素B的质荷比为303.1；对照品儿茶素的质荷比为289.1，供试品儿茶素的质荷比为289.1；对照品苦杏仁苷的质荷比为456.2，供试品苦杏仁苷的质荷比为456.2；对照品柚皮苷的质荷比为579.2，供试品柚皮苷的质荷比为579.2；对照品β-蜕皮甾酮的质荷比为479.3，供试品β-蜕皮甾酮的质荷比为479.3；对照品川续断皂苷Ⅵ质荷比为927.5，供试品川续断皂苷Ⅵ的质荷比为927.5。

10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤4)当样品中各组分的出峰时间和质荷比与对照品中的各组分的出峰时间和质荷比一致，则判断样品中含有对应的组分。