CN109490426B - 测定中草药中烯啶虫胺杀虫剂残留量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种测定中草药中烯啶虫胺杀虫剂残留量的方法，包括以下步骤：采用液相色谱‑串联质谱联用仪测定待测液中烯啶虫胺浓度，并计算待测中药中烯啶虫胺残留量，液相色谱‑串联质谱联用仪的测定条件为：液相色谱柱采用Eclipse plus C18色谱柱，规格为柱长150mm，柱内径2.1mm，颗粒内径3.5μm；液相流动相采用2mM醋酸铵水溶液和甲醇；串联质谱仪采集选择多反应监测正模式扫描模式，扫描离子对为271.1>225.2，271.1>126.0，271.1>56.1，其中，离子对271.1>225.2用于定量。本发明具有有效剔除中药中的重金属、非水溶性药用成分对中草药中烯啶虫胺含量检测影响的有益效果。

Description

测定中草药中烯啶虫胺杀虫剂残留量的方法

技术领域

本发明涉及烯啶虫胺检测领域。更具体地说，本发明涉及一种测定中草药中烯啶虫胺 杀虫剂残留量的方法。

背景技术

烯啶虫胺杀虫剂为新烟碱类杀虫剂，具有高效、低毒、内吸和无交互抗性四大优点， 被广泛的用于中草药病虫害的防治，进一步环境污染、及加工储存运输过程中引起的再次 污染，共同造成中草药烯啶虫胺残留，烯啶虫胺主要作用于昆虫神经，对昆虫的轴状突触 受体具有神经阻断作用，其对人体健康特别是神经发育和功能也会存在严重的危害，2014 年8月开始实施的GB 2763-2014《食品中农药最大残留限量》(简称GB 2763-2014)对油 料和油脂及水果等食品明确规定了烯啶虫胺最大残留限量要求，进一步说明烯啶虫胺残留 对人体危害，烯啶虫胺化学结构式如下：

纯品为浅黄色结晶体，熔点83-84℃，密度1.40(26℃)。 蒸气压1.1×10-9Pa(25℃)。溶解度(g/L、20℃)：水(pH＝7)840、氯仿700、丙酮290、二甲 苯4.5。

对于烯啶虫胺残留量的检测，已经有一些相关的报道。如用带碱热离子检测器或高灵 敏度氮磷检测器(CPMA及CPMF)的气相色谱仪、高效液相色谱法、高效液相色谱-质 谱(或串联质谱)法、及气相色谱-质谱法测试其残留量等，但是目前这些方法针对的样 品基质仅涉及蔬菜(如甘蓝)、水果(如苹果、桔子等)或土壤，并没有针对中草药中烯 啶虫胺残留量检测的相关文献报道。然而，由于中药基质复杂，中药中的重金属、药用成 分均对检测产生很大的干扰，申请号为2015106131877，名称为一种测定中草药中烯啶虫 胺杀虫剂残留量的方法的发明专利公开了使用液相色谱-串联质谱联用仪进行检测，但是 其并未有效从源头解决中药基质因含有重金属、及药用成分而导致的检测不准确的问题， 如何在较少(可忽略)影响烯啶虫胺提取检测的情况下，有效剔除中药中的重金属、药用 成分对后期检测的影响是目前急需解决的问题。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种测定中草药中烯啶虫胺杀虫剂残留量的方法，有效剔 除中药中的重金属、非水溶性药用成分对中草药中烯啶虫胺含量检测影响。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种测定中草药中烯啶虫胺杀虫 剂残留量的方法，包括：

S1、按照质量比为1:2取黄豆、及甜菜分别置于干燥箱中干燥后混合，研磨得混合粗 粉，向混合粗粉中加入混合粗粉总质量8倍量的甲醇，控制温度为58-62℃提取40-50min， 过滤得第一滤液和第一滤渣，向第一滤渣中加入混合粗粉总质量8倍量的水，水煮30min 后过滤得第二滤液和第二滤渣，向第二滤渣中加入混合粗粉总质量8倍量的甲醇/水混合 液，控制温度为58-62℃提取40-50min，过滤得第三滤液，混合第二滤液和第三滤液后浓 缩干燥得浓缩物，将浓缩物溶于第一滤液中，高压汞灯照射第一滤液1-1.2h，得照射液，照射液中加入混合粗粉质量5％的氧化石墨烯，搅拌后静置3-4h，过滤浓缩干燥得黄豆甜菜提取物；

S2、取待测中药置于干燥箱中干燥后研磨得中药粗粉，向中药粗粉中加入其总质量8 倍量的水，煎煮提取三次，每次煎煮40min，混合三次煎煮提取的煎煮液，浓缩至煎煮液总体积的1/3，得浓缩液，向浓缩液中加入待测中药总质量6％的氧化石墨烯，搅拌后静置3-4h，过滤得吸附氧化石墨烯，向吸附氧化石墨烯中加入待测中药总质量4倍量的乙腈溶液，震荡浸泡1h后，控制温度为50-60℃超声提取1h，过滤得第一洗脱液和洗脱氧化石 墨烯，向洗脱氧化石墨烯中加入待测中药总质量4倍量的乙腈/甲醇混合液，震荡浸泡1h 后，控制温度为50-60℃超声提取1h，过滤得第二洗脱液，第二洗脱液浓缩干燥后加入第 一洗脱液中搅拌溶解并浓缩得预处理待测液；

S3、将黄豆干菜提取物加入预处理待测液中，以120-200r/min搅拌30min后静置30min，加入待测中药总质量4％的阳离子交换树脂，以120-200r/min搅拌30min后静置30min，过滤后得待测液，其中，每1重量份的待测中药提取的预处理待测液中加入每1 重量份的混合粗粉提取的黄豆甜菜提取物；

S4、采用液相色谱-串联质谱联用仪测定待测液中烯啶虫胺浓度，并计算待测中药中 烯啶虫胺残留量。

优选的是，所述的测定中草药中烯啶虫胺杀虫剂残留量的方法，还包括：标准溶液配 置：称取0.0200g烯啶虫胺与50mL的容量瓶中用乙腈定容至刻度，得质量浓度为0.4mg/mL 标准母液，再用乙腈逐级稀释成质量浓度为0.02μg/mL、0.04μg/mL、0.06μg/mL、0.08μg/mL、 0.10μg/mL、0.30μg/mL、0.50μg/mL、0.70μg/mL、0.90μg/mL、1.20μg/mL的标准溶液；

采用液相色谱-串联质谱联用仪测定标准溶液中烯啶虫胺浓度，以标准溶液的质量浓 度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。

优选的是，步骤S1中甲醇/水混合液中甲醇和水的体积比为1:1。

优选的是，步骤S2中乙腈/甲醇混合液中乙腈和甲醇的体积比为1:1。

优选的是，待测液使用前过0.20μm的聚四氟乙烯滤膜。

优选的是，液相色谱-串联质谱联用仪的测定条件为：液相色谱柱采用Eclipseplus C18 色谱柱，规格为柱长150mm，柱内径2.1mm，颗粒内径3.5μm；

液相流动相采用2mM醋酸铵水溶液和甲醇；

串联质谱仪采集选择多反应监测正模式扫描模式，扫描离子对为271.1>225.2，271.1>126.0，271.1>56.1，其中，离子对271.1>225.2用于定量。

本发明至少包括以下有益效果：

第一、在较少(可忽略)影响烯啶虫胺提取检测的情况下，有效剔除中药中的重金属、 非水溶性药用成分对后期检测的影响，有效从源头解决中药基质因含有重金属、及药用成 分而导致的检测不准确的问题。

第二、将待测中药研磨成粉经三次煎煮提取，有效提取待测中药中烯啶虫胺的同时， 避免非水溶性药物成分对于烯啶虫胺检测的影响，进一步加入氧化石墨烯，氧化石墨烯吸 附浓缩液中的烯啶虫胺、部分重金属离子、及其他可能附属杂质，依次采用乙腈、乙腈/ 甲醇，并配合超声洗脱氧化石墨烯吸附成分，其中主要为烯啶虫胺、部分重金属离子等， 在减少烯啶虫胺损失的同时，减少中草药中的影响成分含量，得预处理待测液；

第三、按照质量比为1:2混合研磨黄豆及甜菜，后先后经过甲醇、水、及甲醇/水混合 物提取获得富含不同种天然活性成分三萜类皂苷的提取液，后采取高压汞灯照射，一定程 度上去除黄豆和甜菜中可能含有的烯啶虫胺，获得黄豆甜菜提取物，将黄豆甜菜提取物置 于预处理待测液中，搅拌静置后加入阳离子交换树脂，能够进一步的在不影响烯啶虫胺含 量的同时去除重金属离子，为后期烯啶虫胺检测做准备，提高检测准确性。

本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明 的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字 能够据以实施。

<实施例1>

测定金银花中烯啶虫胺杀虫剂残留量的方法，包括以下步骤：

S1、取1g黄豆、及2g甜菜分别置于干燥箱中干燥后混合，研磨得混合粗粉，向混合粗粉中加入混合粗粉总质量8倍量的甲醇，控制温度为58-62℃范围内提取40min，过滤 得第一滤液和第一滤渣，向第一滤渣中加入混合粗粉总质量8倍量的水，水煮30min后过 滤得第二滤液和第二滤渣，向第二滤渣中加入混合粗粉总质量8倍量的甲醇/水混合液， 控制温度为58-62℃范围内提50min，过滤得第三滤液，混合第二滤液和第三滤液后浓缩 干燥至无液体残留得浓缩物，将浓缩物溶于第一滤液中，高压汞灯照射容有浓缩液的第一 滤液1h，得照射液，照射液中加入混合粗粉质量5％的氧化石墨烯，搅拌后静置4h，过滤 浓缩干燥得黄豆甜菜提取物，其中，甲醇/水混合液中甲醇和水的体积比为1:1；

S2、取金银花3g置于干燥箱中干燥后研磨得中药粗粉，向中药粗粉中加入其总质量 8倍量的水，煎煮提取三次(即每次煎煮后得煎煮液和煎煮渣，煎煮渣进行下一次煎煮提取)，每次煎煮40min，混合三次煎煮提取的煎煮液，浓缩至煎煮液总体积的1/3，得浓缩 液，向浓缩液中加入180mg氧化石墨烯，搅拌后静置3h，过滤得吸附氧化石墨烯，向吸 附氧化石墨烯中加入12g的乙腈溶液，震荡浸泡1h后，控制温度为50-60℃范围内超声提 取1h，过滤得第一洗脱液和洗脱氧化石墨烯，向洗脱氧化石墨烯中加入12g的乙腈/甲醇 混合液，震荡浸泡1h后，控制温度为50-60℃范围内超声提取1h，过滤得第二洗脱液， 第二洗脱液浓缩干燥后加入第一洗脱液中搅拌溶解并浓缩得预处理待测液，其中，乙腈/ 甲醇混合液中乙腈和甲醇的体积比为1:1；

S3、将黄豆干菜提取物加入预处理待测液中，以120-200r/min搅拌30min后静置30min，加入120mg的阳离子交换树脂，以200r/min搅拌30min后静置30min，常规滤纸 过滤后过0.20μm的聚四氟乙烯滤膜得待测液；

S4、采用液相色谱-串联质谱联用仪分析。

<实施例2>

测定土茯苓中烯啶虫胺杀虫剂残留量的方法，包括以下步骤：

S1、取1g黄豆、及2g甜菜分别置于干燥箱中干燥后混合，研磨得混合粗粉，向混合粗粉中加入混合粗粉总质量8倍量的甲醇，控制温度为58-62℃范围内提取50min，过滤 得第一滤液和第一滤渣，向第一滤渣中加入混合粗粉总质量8倍量的水，水煮30min后过 滤得第二滤液和第二滤渣，向第二滤渣中加入混合粗粉总质量8倍量的甲醇/水混合液， 控制温度为58-62℃范围内提取40min，过滤得第三滤液，混合第二滤液和第三滤液后浓 缩干燥至无液体残留得浓缩物，将浓缩物溶于第一滤液中，高压汞灯照射容有浓缩液的第 一滤液1.2h，得照射液，照射液中加入混合粗粉质量5％的氧化石墨烯，搅拌后静置3h， 过滤浓缩干燥得黄豆甜菜提取物，其中，甲醇/水混合液中甲醇和水的体积比为1:1；

S2、取金银花3g置于干燥箱中干燥后研磨得中药粗粉，向中药粗粉中加入其总质量 8倍量的水，煎煮提取三次(即每次煎煮后得煎煮液和煎煮渣，煎煮渣进行下一次煎煮提取)，每次煎煮40min，混合三次煎煮提取的煎煮液，浓缩至煎煮液总体积的1/3，得浓缩 液，向浓缩液中加入180mg氧化石墨烯，搅拌后静置4h，过滤得吸附氧化石墨烯，向吸 附氧化石墨烯中加入12g的乙腈溶液，震荡浸泡1h后，控制温度为50-60℃范围内超声提 取1h，过滤得第一洗脱液和洗脱氧化石墨烯，向洗脱氧化石墨烯中加入12g的乙腈/甲醇 混合液，震荡浸泡1h后，控制温度为50-60℃范围内超声提取1h，过滤得第二洗脱液， 第二洗脱液浓缩干燥后加入第一洗脱液中搅拌溶解并浓缩得预处理待测液，其中，乙腈/ 甲醇混合液中乙腈和甲醇的体积比为1:1；

S3、将黄豆干菜提取物加入预处理待测液中，以120-200r/min搅拌30min后静置30min，加入120mg的阳离子交换树脂，以120r/min搅拌30min后静置30min，常规滤纸 过滤后过0.20μm的聚四氟乙烯滤膜得待测液；

S4、采用液相色谱-串联质谱联用仪分析。

<对比例1>

称取与实施例1同批次金银花3g置于干燥箱中干燥后研磨得中药粗粉，向中药粗粉 中加入其总质量8倍量的水，煎煮提取三次(即每次煎煮后得煎煮液和煎煮渣，煎煮渣进行下一次煎煮提取)，每次煎煮40min，混合三次煎煮提取的煎煮液，浓缩至煎煮液总体 积的1/3，得浓缩液，取其中二分之一体积的浓缩液过0.20μm的聚四氟乙烯滤膜，得待测 液。

<对比例2>

取对比例1二分之一体积的浓缩液，向浓缩液中加入90mg氧化石墨烯，搅拌后静置3h，过滤得吸附氧化石墨烯，向吸附氧化石墨烯中加入6g的乙腈溶液，震荡浸泡1h后， 控制温度为50-60℃范围内超声提取1h，过滤得第一洗脱液和洗脱氧化石墨烯，向洗脱氧 化石墨烯中加入6g的乙腈/甲醇混合液，震荡浸泡1h后，控制温度为50-60℃范围内超声 提取1h，过滤得第二洗脱液，第二洗脱液浓缩干燥后加入第一洗脱液中搅拌溶解并浓缩 得预处理待测液，取预处理待测液过0.20μm的聚四氟乙烯滤膜得待测液，其中，乙腈/甲 醇混合液中乙腈和甲醇的体积比为1:1。

1：液相色谱-串联质谱联用仪的参数设定：

液相色谱柱采用Eclipse plus C18色谱柱，规格为柱长150mm，柱内径2.1mm，颗粒内径3.5μm；

柱温箱温度为40℃；载气流速为0.4mL/min；进样体积为2μL；液相流动相采用2mM醋酸铵水溶液和甲醇进行梯度洗脱；串联质谱仪采集选择多反应监测正模式扫描模式，其条件为：离子源：电喷雾离子源(ESI)；采集方式：多反应监测模式，正模式；干燥气温 度：350℃；鞘气温度：375℃；干燥气流速：6mL/min；喷雾针压力：40psi；鞘气流速： 10mL/min；毛细管电压：3000V(正模式)；倍增管电压：300V；

表1化合物的保留时间及定性定量离子对

注：带*的为定量离子对

2：分析结果定性分析

2.1标准曲线的绘制：

标准溶液配置：称取0.0200g烯啶虫胺与50mL的容量瓶中用乙腈定容至刻度，得质量浓度为0.4mg/mL标准母液，再用乙腈逐级稀释成质量浓度为0.02μg/mL、0.04μg/mL、0.06μg/mL、0.08μg/mL、0.10μg/mL、0.30μg/mL、0.50μg/mL、0.70μg/mL、0.90μg/mL、 1.20μg/mL的标准溶液；

采用液相色谱-串联质谱联用仪分析，确定保留时间约为6.522min色谱峰为烯啶虫胺， 以标准溶液的质量浓度为横坐标，对应峰面积为纵坐标绘制标准曲线，同时可知其在 0.02μg/mL-1.20μg/mL范围内呈现良好的线性关系，相关系数为0.9958；

确定实施例1和实施例2中的分析结果中保留时间在6.358-6.685min间的色谱峰为烯 啶虫胺对应的色谱峰，其中，实施例1烯啶虫胺的色谱峰的保留时间为6.512；实施例2烯啶虫胺的色谱峰的保留时间为6.525。

3：分析结果定量分析

根据峰面积、及标准曲线确定实施例1金银花中烯啶虫胺杀虫剂残留量为0.12mg/kg；

根据峰面积、及标准曲线确定实施例2土茯苓中烯啶虫胺杀虫剂残留量为0.17mg/kg；

4：加标回收实验

通过向阴性金银花(没有被烯啶虫胺污染的产品)中添加烯啶虫胺，使金银花中烯啶 虫胺的添加浓度为0.06mg/kg、0.30mg/kg、及0.90mg/kg，分别采用实施例1的方法进行提纯获得金银花加标待测液，采用液相色谱-串联质谱联用仪分析，每个处理重复3次， 具体数据如表2所示：

表2金银花中烯啶虫胺的添加回收率

通过向阴性土茯苓(没有被烯啶虫胺污染的产品)中添加烯啶虫胺，使土茯苓中烯啶 虫胺的添加浓度为0.06mg/kg、0.30mg/kg、及0.90mg/kg，分别采用实施例1的方法进行提纯获得土茯苓加标待测液，采用液相色谱-串联质谱联用仪分析，每个处理重复3次；

表3土茯苓中烯啶虫胺的添加回收率

由表2和表3数据可知，金银花中烯啶虫胺的加标平均回收率为86.31％-92.51％，土 茯苓中烯啶虫胺的加标平均回收率为95.35％-106.30％。

5：重金属离子含量测定

取对比例1待测液、对比例2待测液、实施例1待测液，按照《中国药典》附录铅、 镉、砷、汞、铜测定法中的原子吸收分光光度法进行重金属离子浓度测定，具体如表4所 示：

表4重金属含量检测结果

	铅(mg/Kg)	镉(mg/Kg)	砷(mg/Kg)	汞(mg/Kg)	铜(mg/Kg)
						对比例1待测液	5.12	0.16	2.38	未检出	14.26
对比例2待测液	4.28	0.11	1.23	未检出	10.47
						实施例1待测液	0.004	未检出	0.032	未检出	0.005

由表4可知氧化石墨烯的吸附洗脱能够在减少烯啶虫胺损失的同时，能够部分去除中 草药中金属离子，按照质量比为1:2混合研磨黄豆及甜菜，后先后经过甲醇、水、及甲醇 /水混合物提取获得富含不同种天然活性成分三萜类皂苷的提取液，后采取高压汞灯照射， 一定程度上去除黄豆和甜菜中可能含有的烯啶虫胺，获得黄豆甜菜提取物，将黄豆甜菜提 取物置于预处理待测液中，搅拌静置后加入阳离子交换树脂，能够进一步的在不影响烯啶 虫胺含量的同时去除重金属离子，为后期烯啶虫胺检测做准备，提高检测准确性。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运 用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地 实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限 于特定的细节和这里示出与描述的实施例。

Claims (6)

1.测定中草药中烯啶虫胺杀虫剂残留量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、按照质量比为1:2取黄豆、及甜菜分别置于干燥箱中干燥后混合，研磨得混合粗粉，向混合粗粉中加入混合粗粉总质量8倍量的甲醇，控制温度为58-62℃提取40-50min，过滤得第一滤液和第一滤渣，向第一滤渣中加入混合粗粉总质量8倍量的水，水煮30min后过滤得第二滤液和第二滤渣，向第二滤渣中加入混合粗粉总质量8倍量的甲醇/水混合液，控制温度为58-62℃提取40-50min，过滤得第三滤液，混合第二滤液和第三滤液后浓缩干燥得浓缩物，将浓缩物溶于第一滤液中，高压汞灯照射第一滤液1-1.2h，得照射液，照射液中加入混合粗粉质量5％的氧化石墨烯，搅拌后静置3-4h，过滤浓缩干燥得黄豆甜菜提取物，其中，甲醇/水混合液中甲醇和水的体积比为1:1；

S2、取待测中药置于干燥箱中干燥后研磨得中药粗粉，向中药粗粉中加入其总质量8倍量的水，煎煮提取三次，每次煎煮40min，混合三次煎煮提取的煎煮液，浓缩至煎煮液总体积的1/3，得浓缩液，向浓缩液中加入待测中药总质量6％的氧化石墨烯，搅拌后静置3-4h，过滤得吸附氧化石墨烯，向吸附氧化石墨烯中加入待测中药总质量4倍量的乙腈溶液，震荡浸泡1h后，控制温度为50-60℃超声提取1h，过滤得第一洗脱液和洗脱氧化石墨烯，向洗脱氧化石墨烯中加入待测中药总质量4倍量的乙腈/甲醇混合液，震荡浸泡1h后，控制温度为50-60℃超声提取1h，过滤得第二洗脱液，第二洗脱液浓缩干燥后加入第一洗脱液中搅拌溶解并浓缩得预处理待测液，其中，乙腈/甲醇混合液中乙腈和甲醇的体积比为1:1；

S3、将黄豆干菜提取物加入预处理待测液中，以120-200r/min搅拌30min后静置30min，加入待测中药总质量4％的阳离子交换树脂，以120-200r/min搅拌30min后静置30min，过滤后得待测液，其中，每1重量份的待测中药提取的预处理待测液中加入每1重量份的混合粗粉提取的黄豆甜菜提取物；

S4、采用液相色谱-串联质谱联用仪测定待测液中烯啶虫胺浓度，并计算待测中药中烯啶虫胺残留量。

2.如权利要求1所述的测定中草药中烯啶虫胺杀虫剂残留量的方法，其特征在于，还包括：标准溶液配置：称取0.0200g烯啶虫胺与50mL的容量瓶中用乙腈定容至刻度，得质量浓度为0.4mg/mL标准母液，再用乙腈逐级稀释成质量浓度为0.02μg/mL、0.04μg/mL、0.06μg/mL、0.08μg/mL、0.10μg/mL、0.30μg/mL、0.50μg/mL、0.70μg/mL、0.90μg/mL、1.20μg/mL的标准溶液；

采用液相色谱-串联质谱联用仪测定标准溶液中烯啶虫胺浓度，以标准溶液的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。

3.如权利要求1所述的测定中草药中烯啶虫胺杀虫剂残留量的方法，其特征在于，步骤S1中甲醇/水混合液中甲醇和水的体积比为1:1。

4.如权利要求1所述的测定中草药中烯啶虫胺杀虫剂残留量的方法，其特征在于，步骤S2中乙腈/甲醇混合液中乙腈和甲醇的体积比为1:1。

5.如权利要求1所述的测定中草药中烯啶虫胺杀虫剂残留量的方法，其特征在于，待测液使用前过0.20μm的聚四氟乙烯滤膜。

6.如权利要求1所述的测定中草药中烯啶虫胺杀虫剂残留量的方法，其特征在于，液相色谱-串联质谱联用仪的测定条件为：液相色谱柱采用Eclipse plus C18色谱柱，规格为柱长150mm，柱内径2.1mm，颗粒内径3.5μm；

液相流动相采用2mM醋酸铵水溶液和甲醇；

串联质谱仪采集选择多反应监测正模式扫描模式，扫描离子对为271.1>225.2，271.1>126.0，271.1>56.1，其中，离子对271.1>225.2用于定量。