CN105241989A - 一种测定中草药中烯啶虫胺杀虫剂残留量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于分析化学技术领域，具体地说是一种测定中草药中烯啶虫胺杀虫剂残留量的方法，其测定步骤为，1)样品预处理：取样品，加适量乙腈作为提取液，用涡旋仪混匀，经浸泡振荡后在一定恒温下超声提取，将乙腈提取溶液离心过滤；2)采用液相色谱串联质谱联用仪测定所得的样品的乙腈提取液中烯啶虫胺的浓度；3)根据所得的样品提取液中烯啶虫胺的浓度，计算样品中烯啶虫胺的残留量；本发明不仅测定方法快速、简单，而且能够实现中草药中烯啶虫胺残留量的准确测定，其最低检测浓度很低，可达0.01mg/kg，解决了目前没有对中草药中的烯啶虫胺残留量进行准确痕量定量的问题。

Description

一种测定中草药中烯啶虫胺杀虫剂残留量的方法

[技术领域]

本发明属于分析化学技术领域，具体地说是一种测定中草药中烯啶虫胺杀虫剂残留量的方法。

[背景技术]

中药主要由植物药(根、茎、叶、果)、动物药(内脏、皮、骨、器官等)和矿物药组成。因植物药占中药的大多数，所以中药也称中草药。中国各地使用的中药已达5000种左右，把各种药材相配伍而形成的方剂，更是数不胜数。

然而，随着中药生产、销售和使用越来越广泛，中药中农药残留的问题也渐渐显现，并引起各国相关部门的重视。中药的农药残留主要来源自三个方面，即种植过程中滥用农药而造成的直接污染，环境污染引起的间接污染和采收、加工、贮存及运输过程产生的污染。中草药病虫害种类繁多，用于中草药的杀虫剂种类也多不胜数，且不断有新的杀虫剂品种被研制并投入使用。

烯啶虫胺杀虫剂，是1995年日本武田药品工业株式会社合成，继吡虫啉、啶虫咪之后开发的又一种新型产品，为新烟碱类杀虫剂，具有独特的化学与生物性质。主要作用于昆虫神经，对昆虫的轴状突触受体具有神经阻断作用，与其它的新烟碱类化合物相似，用于水稻、蔬菜、草药等作物，对各种蚜虫、粉虱、水稻叶蝉和蓟马显示了卓越活性，具有高效、低毒、内吸和无交互抗性四大优点，而且杀虫谱较广，残留期较长(以100mg/kg施用，可持续15d)，对稻飞虱，在0.5～0.8mg/kg时，致死率仍可达100％，使用安全，害虫不易产生抗体。目前,在国内已有8家农药企业取得了烯啶虫胺原药登记,含量为95％。烯啶虫胺的合成路线有4条,目前烯啶虫胺的生产工艺主要由2-氯-5-氯甲基吡啶与乙胺胺化,得到N-(6-氯-3-氯甲基吡啶)-N-乙胺,再与1,1-二氯-2-硝基乙烯、甲胺在碱性条件下缩合,合成烯啶虫胺原药。

作为低毒型杀虫剂，烯啶虫胺仍然对眼睛、皮肤等有刺激性。2014年8月开始实施的GB2763-2014《食品中农药最大残留限量》(简称GB2763-2014)中虽没有对中草药中烯啶虫胺的最大残留量做明确要求，但对油料和油脂及水果等食品明确规定了最大残留限量要求。

对于烯啶虫胺残留量的检测，已经有一些相关的报道。如用带碱热离子检测器或高灵敏度氮磷检测器(CPMA及CPMF)的气相色谱仪检测其残留量；采用高效液相色谱法，高效液相色谱-质谱(或串联质谱)法测定其残留量；还有采用气相色谱-质谱法测试其残留量等。但是这些方法针对的样品基质仅涉及蔬菜(如甘蓝)、水果(如苹果、桔子等)或土壤，并没有针对中草药中烯啶虫胺残留量检测的相关文献报道。然而，因基质复杂，中药中的重金属、药用成分均对检测产生很大的干扰，一般的检测方法难以应用于中草药基质的检测。因而建立一个方法，对中草药中烯啶虫胺的残留量进行准确检测是非常必要的。

[发明内容]

本发明的目的就是要解决上述的不足而提供一种有机溶剂提取、液相色谱-串联质谱联用仪测定中草药中烯啶虫胺杀虫剂残留量的方法，不仅测定方法快速、简单，而且能够实现中草药中烯啶虫胺杀虫剂残留量的准确测定，最低定量浓度可达0.01mg/kg。

为实现上述目的设计一种测定中草药中烯啶虫胺杀虫剂残留量的方法，包括以下步骤：

1)样品预处理：称取适量样品，将样品粉碎并混合均匀，加入乙腈作为提取液，用涡旋仪混匀，经振荡浸泡后，在恒温下超声提取，将样品提取溶液离心过滤；

2)采用液相色谱-串联质谱联用仪测定所得的样品提取溶液中烯啶虫胺的浓度；

3)根据所得的样品提取溶液中烯啶虫胺的浓度，计算样品中烯啶虫胺的残留量。

步骤1)中，样品为中草药固体样品，称取3g样品于50mL旋盖离心管中，加入30mL乙腈，用涡旋仪混匀2min，振荡浸泡30min后，再于40℃超声萃取30min，涡旋2min后，以6000r/min转速离心10min，上清液过0.20μm的聚四氟乙烯滤膜。

步骤2)中，液相色谱-串联质谱联用仪的测定条件为：

1)液相色谱仪采用EclipseplusC18色谱柱，柱长为150mm，柱内径为2.1mm，颗粒内径为3.5μm；

2)液相流动相采用2mM醋酸铵水溶液和甲醇；

3)串联质谱仪采集选择多反应监测正模式扫描模式，扫描离子对为271.1>225.2，271.1>126.0，271.1>56.1，其中离子对271.1>225.2用于定量。

液相色谱仪中，柱温箱温度为40℃，载气流速为0.4mL/min，进样体积为2μL。串联质谱仪中，离子源为ESI电喷雾离子源，采集方式为多反应监测模式，干燥气温度为350℃，鞘气温度为375℃，干燥气流速为6mL/min，喷雾针压力为40psi，鞘气流速为10mL/min，毛细管电压为正模式3000V，倍增管电压为300V。

步骤2)中，根据化合物在色谱柱上的保留时间及各化合物特有的质谱图和离子对峰度比，进行定性分析，对于经定性分析确认为阳性的农药，采用外标法定量，最终结果经过基质样品加标回收率进行校正。

步骤3)中，根据经标准曲线得到的样品提取溶液中烯啶虫胺的浓度，计算得到中草药样品中烯啶虫胺的残留量，其最低定量浓度为0.01mg/kg。

本发明同现有技术相比，具有如下有益效果：本发明是一项针对中草药样品经有机溶剂提取，采用液相色谱-串联质谱联用仪测定其中烯啶虫胺残留量的方法，不仅测定方法快速、简单，而且能够实现中草药中烯啶虫胺残留量的准确测定，并可达到很低的检出限；本发明解决了目前对于中草药样品类型，没有方法准确测定其中烯啶虫胺残留量的问题，值得推广应用。

[附图说明]

图1是本发明的实施例1中使用液相色谱-串联质谱联用仪检测银杏叶中烯啶虫胺残留量所得的MRM色谱图。

[具体实施方式]

本发明属于分析化学领域中对中草药中烯啶虫胺残留量的测定，其原理为：将中草药样品中的烯啶虫胺经有机溶剂提取，再由液相色谱-串联质谱联用仪测定烯啶虫胺的残留量。

其中，液相色谱-串联质谱联用仪的测定条件为：

1)液相色谱柱采用EclipseplusC18色谱柱，规格为柱长150mm，柱内径2.1mm，颗粒内径3.5μm；

2)液相色谱使用的流动相采用2mM醋酸铵水溶液和甲醇；

3)串联质谱仪采集选择多反应监测正模式扫描模式，扫描离子对为271.1>225.2，271.1>126.0，271.1>56.1，其中离子对271.1>225.2用于定量。

实施例1：银杏叶中烯啶虫胺的测定

1.样品的制备：

将银杏叶样品用食品料理器粉碎，混合均匀后于洁净干燥样品袋中密封保存。准确称取3g混合均匀的银杏叶试样(精确至0.01g)于50mL旋盖离心管中，加入30mL乙腈，用涡旋仪混匀2min。将离心管置于摇床上振摇30min，充分浸泡试样，再于40℃超声萃取30min，涡旋2min后以6000转速离心10min。上层清液经0.20μm的聚四氟乙烯滤膜过滤，用液相色谱-串联质谱联用仪分析。

2.设定仪器参数：

1)液相色谱仪检测条件

色谱柱：EclipseplusC18，2.1mm×150mm，3.5μm

柱温箱温度：40℃

载气流速：0.4mL/min

进样体积：2μL

流动相条件：2mM醋酸铵水溶液和甲醇

并依据下表比例设置梯度洗脱程序：

时间	2mM醋酸铵水溶液(％)	甲醇(％)
			0.00	95	5
1.00	95	5
			3.50	60	40
3.70	0	100
			9.00	0	100
9.20	95	5
			15.00	95	5

2)串联质谱仪检测条件

离子源：电喷雾离子源(ESI)

采集方式：多反应监测模式，正模式

干燥气温度：350℃

鞘气温度：375℃

干燥气流速：6mL/min

喷雾针压力：40psi

鞘气流速：10mL/min

毛细管电压：3000V(正模式)

倍增管电压：300V

化合物的保留时间及定性定量离子对：如下表参数，带*的为定量离子对。

3.定性和定量

1)定性

根据各种化合物在色谱柱上的保留时间及各化合物的特有的质谱

图和离子对峰度比，进行定性分析。

2)定量

对于经定性分析确认为阳性的农药，采用外标法定量，最终结果

需经过基质样品加标回收率进行校正。

4.计算

由按照曲线所得样品提取溶液中烯啶虫胺的浓度计算得样品基质中烯啶虫胺的残留量。经检测，该银杏叶样品未检出烯啶虫胺残留量为0.2mg/kg。如附图1所示，为使用液相色谱-串联质谱仪检测银杏叶样品中烯啶虫胺残留量所得的MRM色谱图，其中，6.523min的色谱峰为银杏叶提取溶液中烯啶虫胺的色谱峰。

实施例2：苦参中烯啶虫胺的测定

1.样品的制备：

将切成小块儿的苦参样品用食品料理器粉碎，混匀后于洁净干燥样品袋中密封保存。准确称取3g混合均匀的苦参试样(精确至0.01g)于50mL旋盖离心管中，加入30mL乙腈，用涡旋仪混匀2min。将离心管置于摇床上振摇30min，充分浸泡试样，再于40℃超声萃取30min，涡旋2min后以6000转速离心10min。上层清液经0.20μm的聚四氟乙烯滤膜过滤，用液相色谱-串联质谱联用仪分析。

2.设定仪器参数：

1)液相色谱仪检测条件

色谱柱：EclipseplusC18，2.1mm×150mm，3.5μm

柱温箱温度：40℃

载气流速：0.4mL/min

进样体积：2μL

流动相条件：2mM醋酸铵水溶液和甲醇

并依据下表比例设置梯度洗脱程序：

时间	2mM醋酸铵水溶液(％)	甲醇(％)
			0.00	95	5
1.00	95	5
			3.50	60	40
3.70	0	100
			9.00	0	100
9.20	95	5
			15.00	95	5

2)串联质谱仪检测条件

离子源：电喷雾离子源(ESI)

采集方式：多反应监测模式，正模式

干燥气温度：350℃

鞘气温度：375℃

干燥气流速：6mL/min

喷雾针压力：40psi

鞘气流速：10mL/min

毛细管电压：3000V(正模式)

倍增管电压：300V

化合物的保留时间及定性定量离子对：如下表参数

其中，带*的为定量离子对。

3.定性和定量

1)定性

根据各种化合物在色谱柱上的保留时间及各化合物的特有的质谱图和离子对峰度比，进行定性分析。

2)定量

对于经定性分析确认为阳性的农药，采用外标法定量，最终结果需经过基质样品加标回收率进行校正。

4.计算

由按照曲线所得样品提取溶液中烯啶虫胺的浓度计算得样品基质中烯啶虫胺的残留量。经检测，该苦参样品中未检出烯啶虫胺。

本发明并不受上述实施方式的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种测定中草药中烯啶虫胺杀虫剂残留量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)样品预处理：称取适量样品，将样品粉碎并混合均匀，加入乙腈作为提取液，用涡旋仪混匀，经振荡浸泡后，在恒温下超声提取，将样品提取溶液离心过滤；

2)采用液相色谱-串联质谱联用仪测定所得的样品提取溶液中烯啶虫胺的浓度；

3)根据所得的样品提取溶液中烯啶虫胺的浓度，计算样品中烯啶虫胺的残留量。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)中，样品为中草药固体样品，称取3g样品于50mL旋盖离心管中，加入30mL乙腈，用涡旋仪混匀2min，振荡浸泡30min后，再于40℃超声萃取30min，涡旋2min后，以6000r/min转速离心10min，上清液过0.20μm的聚四氟乙烯滤膜。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中，液相色谱-串联质谱联用仪的测定条件为：

1)液相色谱仪采用EclipseplusC18色谱柱，柱长为150mm，柱内径为2.1mm，颗粒内径为3.5μm；

2)液相流动相采用2mM醋酸铵水溶液和甲醇；

3)串联质谱仪采集选择多反应监测正模式扫描模式，扫描离子对为271.1>225.2，271.1>126.0，271.1>56.1，其中离子对271.1>225.2用于定量。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：液相色谱仪中，柱温箱温度为40℃，载气流速为0.4mL/min，进样体积为2μL。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于：串联质谱仪中，离子源为ESI电喷雾离子源，采集方式为多反应监测模式，干燥气温度为350℃，鞘气温度为375℃，干燥气流速为6mL/min，喷雾针压力为40psi，鞘气流速为10mL/min，毛细管电压为正模式3000V，倍增管电压为300V。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2)中，根据化合物在色谱柱上的保留时间及各化合物特有的质谱图和离子对峰度比，进行定性分析，对于经定性分析确认为阳性的农药，采用外标法定量，最终结果经过基质样品加标回收率进行校正。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤3)中，根据经标准曲线得到的样品提取溶液中烯啶虫胺的浓度，计算得到中草药样品中烯啶虫胺的残留量，其最低定量浓度为0.01mg/kg。