CN105181870A - 一种测定蔬菜水果中噁霉灵残留物的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于分析化学技术领域，具体地说是一种测定蔬菜水果中噁霉灵残留物的方法，其测定步骤为：1)样品的处理：取样品的可食性部分，用食品粉碎机打碎，混合均匀装入玻璃容器中备用；2)提取：用甲醇涡旋提取；3)采用液相色谱-串联质谱仪测定步骤2所得的甲醇洗脱液；4)根据步骤3所得的样品提取溶液中噁霉灵的浓度，计算样品中噁霉灵的含量；本发明是一种样品经有机溶剂直接提取后用液相色谱-串联质谱仪测定的方法，不仅操作快速、简单，而且能够实现蔬菜和水果中噁霉灵残留物含量的准确测定；该测定方法的检出限为0.1mg/kg，低于GB2763-2014标准中对于蔬菜水果中噁霉灵的临时限量0.5mg/kg。

Description

一种测定蔬菜水果中噁霉灵残留物的方法

[技术领域]

本发明属于分析化学技术领域，具体地说是一种测定蔬菜水果中噁霉灵残留物的方法。

[背景技术]

食品安全与人类的生存及生活息息相关，而自从人类大量使用化学农药以来，各种农副产品的农药残留问题也越来越突出，对人体健康带来了直接或间接的影响。近几年来，食品安全事件层出不穷，食品中农药超标情况屡见不鲜。因此，世界各国对农药残留问题高度重视，对各种农副产品中农药残留的限量要求也越来越严格。许多国家以农药残留限量作为技术壁垒，限制农产品的进口，这直接影响了我国农副产品的国际贸易。自1981年起我国就开始参考国外发达国家的农药残留限量，逐步推出我国农药残留限量标准。2014年8月1日开始实施的新版《食品中农药最大残留限量》(即GB2763-2014)，较之前的GB2763-2012，明确限量要求的农药新增了65个，其中也包括了一些新型农药。

噁霉灵(3-羟基-5-甲基异恶唑)是一种新型广谱内吸性杀菌剂，对各种植物真菌病害，如镰刀菌、苗腐菌、腐霉菌等所引起的立枯、根腐、枯萎等土传病害均有显著的防治效果，并能促进作物生长与根系发达，防止根系老化。而我国现在普遍使用的中、高毒性杀菌剂，导致了农产品农药残毒增高。根据哈尔滨医科大学公共卫生学院毒理检测结果和中华人民共和国国家标准(GB15670-1995)《农药登记毒理试验方法》中的急性毒理分极标准，噁霉灵急性毒性为低毒。因此，在世界呼吁绿色农药的今天，噁霉灵作为一种新型的杀菌剂脱颖而出，广泛应用于蔬菜、水稻、苗木、果树、谷类、瓜类、草坪、花卉等作物，展现出优异的应用效果。噁霉灵由于是一种新开发的产品，物料安全数据还不完全，也被列入GB2763-2014《食品中农药最大残留限量标准》中。

目前，国内外只有报道测定谷物中噁霉灵残留量的气相色谱方法，尚没有用于蔬菜和水果中噁霉灵残留物的检测方法。而噁霉灵在常见有机溶剂和水中都有良好的溶解性，因此蔬菜和水果样品中的水分将影响噁霉灵的提取效率，谷物样品检测方法中所用的提取方法显然不适用。然而，GB2763-2014已明确了噁霉灵在蔬菜和水果中的限量要求，因此建立一个蔬菜和水果中噁霉灵残留物的检测方法迫在眉睫。

[发明内容]

本发明的目的就是要解决上述的不足而提供一种测定蔬菜水果中噁霉灵残留物的方法，该测定方法不仅快速、简单，而且能够实现蔬菜和水果中噁霉灵残留量的准确测定，其检出限为0.1mg/kg，低于GB2763-2014标准中对于蔬菜水果中噁霉灵的最大残留限量要求。

为实现上述目的，本发明设计了一种测定蔬菜水果中噁霉灵残留物的方法，包括以下步骤：

1)样品预处理：取可食性样品，用食品粉碎机将样品打碎，混合均匀装入玻璃容器中备用；

2)样品的提取：称取样品，用甲醇溶液涡旋提取；

3)采用液相色谱-串联质谱法测定样品提取溶液中噁霉灵的浓度；

4)根据步骤3)所得的噁霉灵的浓度，计算样品中噁霉灵的含量。

步骤1)中，样品为蔬菜水果的可食性部分，样品打碎混合均匀后装入洁净干燥的玻璃容器中，并于4℃下密封保存。

步骤2)中，称取样品前再次用搅拌棒混匀样品，然后称取样品于离心管中，加入甲醇溶液，涡旋提取样品2分钟，以8000r/min转速离心5分钟，上层清液通过定性滤纸或布氏漏斗抽滤入容量瓶中，残渣再用甲醇溶液涡旋提取2分钟，提取溶液经过滤并入前述容量瓶中，最后用甲醇定容到刻度，混匀备用。

步骤2)中，用甲醇定容到刻度并混匀后，再经0.22μmPTFE有机相滤膜滤于进样小瓶中，供液相色谱-串联质谱仪分析。

步骤3)中，此液相色谱-串联质谱仪的测定条件为：

1)液相色谱柱采用HALOC18柱，柱长为10cm，柱内径为4.6mm，粒径为2.7μm；

2)液相色谱柱温度设定为25℃；

3)进样量为5μL；

4)流速为0.3mL/min；

5)流动相梯度见下表，依此条件，噁霉灵的保留时间为7.3分钟：

6)质谱参数见下表：

步骤4)中，由提取溶液中噁霉灵的浓度换算到样品中噁霉灵的残留量，根据基质校准曲线，采用外标法定量，最低定量浓度为0.1mg/kg。

本发明具有如下有益效果：本发明针对GB2763-2014中新增了噁霉灵在蔬菜和水果中的最高残留限量要求，却没有推荐相应的检测方法这一问题，提供了一种经有机溶剂提取后直接用液相色谱-串联质谱测定蔬菜水果中噁霉灵残留物的方法，该测定方法不仅快速、简单，而且能够实现蔬菜和水果中噁霉灵残留量的准确测定；该测定方法的检出限为0.1mg/kg，低于GB2763-2014标准中对于蔬菜水果中噁霉灵的最大残留限量要求(0.5mg/kg)，解决了GB2763-2014中只有限量标准没有相应检测方法的问题，完全满足对蔬菜和水果中噁霉灵残留监测的要求。

[附图说明]

图1是本发明的实施例2中采用液相色谱-串联质谱所得白菜样品中噁霉灵的TIC总离子流图；

图2是本发明的实施例2中采用液相色谱-串联质谱所得白菜样品中噁霉灵的MRM多反应监测图。

[具体实施方式]

本发明属于分析化学领域，具体地说是对蔬菜和水果中噁霉灵残留物的测定，其原理为：将样品中的噁霉灵用甲醇溶液提取，再由液相色谱-串联质谱仪测定样品中噁霉灵的量。

液相色谱-串联质谱仪的测定条件为：

1)液相色谱柱采用HALOC18柱，规格为柱长10cm，柱内径4.6mm，粒径2.7μm；

2)液相色谱柱温度设定为25℃；

3)进样量：5μL；

4)流速：0.3mL/min；

5)流动相梯度见下表：

依此条件，噁霉灵的保留时间在7.3分钟；

6)质谱参数见下表：

实施例1：柑橘中噁霉灵残留量的测定

1.样品溶液的制备：

将柑橘剥皮，并去籽，果肉用食品粉碎机粉碎，混匀，装入洁净干燥的玻璃容器中，加盖密封备用。称取5g混匀的样品于50mL离心管中，加入10mL甲醇溶液，涡旋提取样品2分钟，以8000r/min转速离心5分钟。上层清液通过布氏漏斗抽滤入25mL容量瓶中；残渣再用10mL甲醇涡旋提取2分钟，提取溶液经过滤并入容量瓶中，最后用甲醇定容到刻度，混匀。提取溶液经0.22μmPTFE有机相滤膜过滤于进样小瓶中，供液相色谱-串联质谱分析。

2.设定仪器参数：

1)液相色谱柱采用HALOC18柱，规格为柱长10cm，柱内径4.6mm，粒径2.7μm；

2)液相色谱柱温度设定为25℃；

3)进样量：5μL；

4)流速：0.3mL/min；

5)流动相梯度见下表：

依此条件，噁霉灵的保留时间在7.3分钟。

6)质谱参数见下表：

3.定性和定量

1)定性

经样品峰和标准品峰的保留时间相比较，样品峰质谱图和标准物质质谱图相比较，确定样品中是否检出待测物。

2)定量

采用基质校准曲线外标法定量

4.计算

根据样品提取溶液中噁霉灵的浓度，计算样品中噁霉灵的含量。

测试结果：此柑橘样品中噁霉灵残留量小于方法检出限0.1mg/kg。

实施例2：白菜中噁霉灵的测定

1.样品的制备：

白菜去根，用食品粉碎机粉碎，混匀，装入洁净干燥的玻璃容器中，加盖密封备用。称取5g混匀的样品于50mL离心管中，加入10mL甲醇溶液，涡旋提取样品2分钟，以8000r/min转速离心5分钟。上层清液通过定性滤纸抽滤入25mL容量瓶中；残渣再用10mL甲醇涡旋提取2分钟，提取溶液经过滤并入容量瓶中，最后用甲醇定容到刻度，混匀。提取溶液经0.22μmPTFE有机相滤膜过滤于进样小瓶中，供液相色谱-串联质谱分析。

2.设定仪器参数：

1)液相色谱柱采用HALOC18柱，规格为柱长10cm，柱内径4.6mm，粒径2.7μm；

2)液相色谱柱温度设定为25℃；

3)进样量：5μL；

4)流速：0.3mL/min；

5)流动相梯度见下表：

依此条件，噁霉灵的保留时间在7.3分钟。

6)质谱参数见下表：

3.定性和定量

1)定性

经样品峰和标准品峰的保留时间相比较，样品峰质谱图和标准物质质谱图相比较，确定样品中是否检出待测物。

2)定量

采用基质校准曲线外标法定量

4.计算

根据样品提取溶液中噁霉灵的浓度，计算样品中噁霉灵的含量。

测试结果：经检测，该白菜样品中，噁霉灵的含量为0.11mg/kg。

如附图所示，为使用液相色谱-串联质谱仪检测白菜样品中噁霉灵残留量的总离子流图(TIC)和多反应监测图(MRM)，其中，7.3min的色谱峰为白菜提取溶液中噁霉灵的色谱峰。

本发明并不受上述实施方式的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种测定蔬菜水果中噁霉灵残留物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)样品预处理：取可食性样品，用食品粉碎机将样品打碎，混合均匀装入玻璃容器中备用；

2)样品的提取：称取样品，用甲醇溶液涡旋提取；

3)采用液相色谱-串联质谱法测定样品提取溶液中噁霉灵的浓度；

4)根据步骤3)所得的噁霉灵的浓度，计算样品中噁霉灵的含量。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)中，样品为蔬菜水果的可食性部分，样品打碎混合均匀后装入洁净干燥的玻璃容器中，并于4℃下密封保存。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2)中，称取样品前再次用搅拌棒混匀样品，然后称取样品于离心管中，加入甲醇溶液，涡旋提取样品2分钟，以8000r/min转速离心5分钟，上层清液通过定性滤纸或布氏漏斗抽滤入容量瓶中，残渣再用甲醇溶液涡旋提取2分钟，提取溶液经过滤并入前述容量瓶中，最后用甲醇定容到刻度，混匀备用。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤2)中，用甲醇定容到刻度并混匀后，再经0.22μmPTFE有机相滤膜滤于进样小瓶中，供液相色谱-串联质谱仪分析。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中，此液相色谱-串联质谱仪的测定条件为：

1)液相色谱柱采用HALOC18柱，柱长为10cm，柱内径为4.6mm，粒径为2.7μm；

2)液相色谱柱温度设定为25℃；

3)进样量为5μL；

4)流速为0.3mL/min；

5)流动相梯度见下表，依此条件，噁霉灵的保留时间为7.3分钟：

6)质谱参数见下表：

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤4)中，由提取溶液中噁霉灵的浓度换算到样品中噁霉灵的残留量，根据基质校准曲线，采用外标法定量，最低定量浓度为0.1mg/kg。