CN114752655A - 一种适用于分子标记辅助育种的dna提取方法 - Google Patents

一种适用于分子标记辅助育种的dna提取方法 Download PDF

Info

Publication number
CN114752655A
CN114752655A CN202210536136.9A CN202210536136A CN114752655A CN 114752655 A CN114752655 A CN 114752655A CN 202210536136 A CN202210536136 A CN 202210536136A CN 114752655 A CN114752655 A CN 114752655A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dna
extraction method
dna extraction
molecular marker
centrifuging
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210536136.9A
Other languages
English (en)
Inventor
金锐
于新艳
朱全贵
苏法
李丹
邹志清
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Anhui Win All Hi Tech Seed Co ltd
Original Assignee
Anhui Win All Hi Tech Seed Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Anhui Win All Hi Tech Seed Co ltd filed Critical Anhui Win All Hi Tech Seed Co ltd
Priority to CN202210536136.9A priority Critical patent/CN114752655A/zh
Publication of CN114752655A publication Critical patent/CN114752655A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种适用于分子标记辅助育种的DNA提取方法，具体为：取植物样本置于容器内，再加入不锈钢钢珠和经预热处理的SDS提取液，研磨后离心，加入乙酸铵进行抽提，离心后取上清液；再在上清液中加入无水乙醇，混匀后离心，待沉淀干燥后再加入ddH2O重悬。该方法操作简单、成本低、安全无毒，适合大批量的DNA提取，而且能够满足分子标记辅助育种对DNA质量的要求。

Description

一种适用于分子标记辅助育种的DNA提取方法
技术领域
本发明属于核酸提取技术领域，具体涉及一种适用于分子标记辅助育种的 DNA提取方法。
背景技术
玉米是世界上重要的粮饲作物之一，更是我国第一大粮食作物，玉米产量的提高在于选育优良品种。玉米育种的过程就是对控制重要性状的优良功能基因进行重组、聚合，选择优良基因型个体的过程，也即是选育优良种质的过程。
近年来，随着现代生物技术与分子生物学的快速发展，分子标记辅助育种在玉米育种中应用愈加广泛。分子标记辅助育种是一种利用与目的基因紧密连锁的分子标记对群体内不同个体的基因型进行选择，这种手段打破了传统的育种方式，能够精确、快速地改良目标性状进而选育出优良品种。构建合适的分离群体，并获得该分离群体的标记基因型和表现型是开展分子标记辅助育种的前提。故玉米基因组DNA的提取是分子标记辅助育种的基础和关键，尤其是适用于样本量大的分离群体的快速提取。
植物基因组DNA的提取可以分为裂解和纯化两大步骤，裂解是破坏样品细胞结构从而使样品中的DNA游离在裂解体系中的过程，纯化则是使DNA与裂解体系中的其他成分如蛋白质、盐及其他杂质彻底分离的过程。目前用于分子标记辅助育种的DNA提取方法通常存在以下问题：①裂解时需对待测样本进行液氮冷冻、研磨，耗费人力物力；②纯化过程中使用氯仿、异戊醇、苯酚、β-巯基乙醇等有机溶剂，此类有机溶剂有较大的毒性，不仅对人体有害而且对环境有严重污染；③提取过程中需要多次水浴，且多次开盖操作会引起交叉污染；④采用的裂解液和抽提液(即纯化试剂)中均包含多种试剂，提取成本高。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种操作简单、成本低、安全无毒且适用于分子标记辅助育种的DNA提取方法。
为了实现上述目的，本发明的技术方案具体如下：
一种适用于分子标记辅助育种的DNA提取方法，包括以下步骤：
S1、取植物样本置于容器内，再加入不锈钢钢珠和经预热处理的SDS提取液，研磨后离心；
S2、加入乙酸铵进行抽提，然后离心后取上清液；
S3、在步骤S2所得上清液中加入无水乙醇，混匀后离心，弃液体，待沉淀干燥后再加入ddH2O重悬。
进一步地，在上述技术方案中，SDS提取液的组成为：200mmol/L Tris-HCl， 1％SDS，250mmol/L NaCl，25mmol/L EDTA；且SDS提取液的pH为8.0。
进一步地，在上述技术方案中，步骤S2中乙酸铵浓度为7.5M，乙酸铵与SDS 提取液的体积比为1∶2。
进一步地，在上述技术方案中，植物样本具体为植物苗期叶片；更进一步地，叶片在经SDS提取液研磨处理前，先被初步破碎成较小的片状，具体可采用刀片或剪刀等剪碎，且最好采取不同方向破裂；在本发明的一些具体实施例中，植物为玉米。
进一步地，在上述技术方案中，步骤S1中的预热处理具体为：将SDS提取液预先用65℃水浴处理。经水浴处理后的SDS提取液与植物样本组织接触研磨更充分，DNA产量更高。
进一步地，在上述技术方案中，步骤S2和步骤S3中的离心条件均为： 4000rpm下离心10min。
进一步地，在上述技术方案中，步骤S3中干燥的温度为20～70℃，具体可采取自然晾干或烘箱干燥。
进一步地，在上述技术方案中，步骤S3中无水乙醇与上清液的体积比为2∶ 1，而且可在使用前对无水乙醇进行冷冻处理。
相对于现有技术，本发明的有益效果为：
1)省略了传统植物DNA提取方法中的液氮研磨、多次水浴提取等操作，并避免了复杂的提取试剂以及有毒抽提试剂(如氯仿、异戊醇)的使用，不仅降低了提取成本，且安全性高；
2)仅采用特定组分的SDS提取液提取植物中的基因组DNA，乙酸铵为DNA 提取过程提供缓冲环境，经乙醇一次沉淀即可得到质量能够满足分子标记辅助育种需求的DNA；故本发明的方法操作简单，提取效率高，适用于大规模DNA提取实验；
3)经本发明方法得到的DNA具有很好的稳定性，长时间放置后仍能满足分子标记辅助育种的DNA质量需求。
附图说明
图1为实施例1提取的玉米DNA用于分子标记umc1429y7纯度鉴定所得的电泳胶图；
图2为实施例1提取的玉米DNA用于分子标记umc1936k4纯度鉴定所得的电泳胶图；
图3为实施例1提取的玉米DNA用于分子标记SSR58抗病性鉴定所得的电泳胶图；
图4为实施例1提取的玉米DNA用于分子标记bnlg1006、nc130和phi024 检测8个标准测验种所得的电泳胶图
图5为实施例1提取的玉米DNA用于分子标记umc1239遗传多样性分析所得低电泳胶图；
图6为实施例1提取的玉米DNA用于分子标记Phi109275遗传多样性分析所得低电泳胶图；
图7为实施例2中的玉米DNA和对比例1提取的玉米DNA分别用于分子标记bnlg1716检测时的比较图。
具体实施方式
下面将结合本发明中的实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
实施例1
将全玉1233(自育杂交品种)的种子和8个标准测验种(齐319、丹340、掖478、黄早四、Mo17、B73、PH4CV和PH6WC)的种子于实验室内的培养箱中发芽，待玉米种子长出真叶时即采集叶片用于DNA提取。
DNA提取过程具体为：每个叶片均取1cm2大小，剪碎后置于96孔的深孔板中，每孔中各加入一颗不锈钢钢珠和400μL预先65℃水浴好的SDS提取液(含有200mmol/L Tris-HCl，1％SDS，250mmol/L NaCl，25mmol/L EDTA；pH为 8.0)，然后置于SPEX GENO 2010仪器内研磨1min，离心2min；再利用排枪在每孔中各加入200μL 7.5M乙酸铵充分混匀进行抽提，于4000rpm下离心2min；利用排枪吸取200μL上清液转移至另一96孔的深孔板中，每孔各加入400μL无水乙醇(提前-20℃预冷)沉淀DNA，于4000rpm下离心2min；打开封板摸，倾倒96深孔板内全部液体，并在吸水纸上吸湿3次，然后倾斜放置在超净台上，直至DNA干燥，最后加入200μL的ddH2O，4℃备用。
实施例2
将提取的DNA样品在-20℃冰箱中长时间存放后再进行检测。具体的，本实施例中DNA提取的时间为2021年7月，DNA存放后用于检测的时间为2022年 3月。
对比例1
玉米幼苗叶片的获取同实施例1，但本对比例采取CTAB提取法获取DNA，其过程具体为：
取约1cm2的叶片置于2ml离心管中，每个离心管中加入2颗不锈钢钢珠，再加入2％的CTAB 200μL，在高通量组织研磨仪研磨至匀浆；打开离心管，再利用连续加样器加入500μL2％的CTAB后盖上盖子；将放有匀浆的离心管置于 65℃水浴锅中水浴60min，每10min轻轻晃动(摇匀)1次；水浴完成后，加入等体积(700μL)的氯仿∶异戊醇(24∶1)充分混匀，在摇床上摇15min后，再于室温下12000r/min离心10min；吸取上清液400μL至新的1.5mL的离心管中，加 40μL的醋酸钾(PH＝5.2)；加2倍体积的无水乙醇800μL(提前-20℃预冷)，上下晃动混匀后置于-20℃冰箱20～30min至析出白色絮状DNA；室温下 12000r/min离心5min，倒掉上清液，沉淀即为DNA；用75％的乙醇洗涤沉淀，上下摇动几下除去杂质，室温12000r/min离心5min；倒掉乙醇，37℃保温箱中烘干，最后加100μL ddH2O重悬DNA。
对上述所得的玉米DNA质量进行检测，具体包括以下：
(1)使用两个SSR分子标记的引物分别对500株全玉幼苗的DNA(实施例 1制备)进行纯度鉴定，其中引物序列具体为：
umc1429y7-F：CTTCTCCTCGGCATCATCCAAAC(SEQ ID NO.1)，
umc1429y7-R：GGTGGCCCTGTTAATCCTCATCTG(SEQ ID NO.2)；
umc1936k4-F：GCTTGAGGCGGTTGAGGTATGAG(SEQ ID NO.3)，
umc1936k4-R：TGCACAGAATAAACATAGGTAGGTCAGGTC(SEQ ID NO.4)。
具体的PCR扩增体系为：2×T5 Super PCRMix(PAGE)3.2ul(南京擎科生物科技有限公司)，左右引物各0.5μL，DNA 1μL、ddH2O 4.8μL，总反应体系10ul。 PCR扩增程序为：98℃预变性3分钟；94℃变性10秒，60℃退火10秒，72℃延伸10秒，35个循环；72℃延伸5分钟。
扩增产物用40％PAGE制胶剂进行聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测，部分检测结果如图1和图2所示。其中，图1为玉米核心标记umc1429y7群体中纯度鉴定的电泳图，玉米核心标记umc1936k4群体中纯度鉴定的电泳图。
(2)使用与抗茎腐病基因qrfg1紧密连锁的分子标记SSR58鉴定全玉1233 植株是否含有抗病基因，对照品种为抗病亲本1145，所用引物序列具体为：
SSR58-F：GACGCTGCACAATAGGTTCT(SEQ ID NO.5)；
SSR58-R：TCATATACACCGACGACCTG(SEQ ID NO.6)。
使用(1)中的扩增体系和扩增程序(DNA模板为实施例1提取)，部分电泳检测结果如图3所示。分子标记SSR58为共显性标记，有三种带型：一种与抗病对照1145标记基因型相同的表示抗病(R)，一种与抗病对照标记基因型不一样的表示感病(S)，杂合带型表示含有与1145相同基因型，表示抗病(R)。
(3)8个标准测验种分别代表不同类群，用以下3对核心SSR引物进行优势群验证(每个品种各取20株幼苗的叶片，实施例1提取)：
bnlg1006-F：GACCAGCGTGTTGATCCC(SEQ ID NO.7)，
bnlg1006-R：GGAGACCCCGACTCTCTCTC(SEQ ID NO.8)；
nc130-F：GCACATGAAGATCCTGCTGA(SEQ ID NO.9)，
nc130-R：TGTGGATGACGGTGATGC(SEQ ID NO.10)；
phi024-F：ACTGTCCACCAAACCAAGCCGAGA(SEQ ID NO.11)，
phi024-R：AGTAGGGGTTGGGGATCTCCTCC(SEQ ID NO.12)。
检测结果如图4所示(从左到右依次为齐319、丹340、掖478、黄早四、 Mo17、B73、PH4CV和PH6WC)：均有多个等位基因位点，且有现有研究结果一致。
(4)分别使用分子标记umc1239和Phi109275对实施例2冷冻保存后的部分玉米材料的DNA进行遗传背景分析其中所用引物序列为：
umc1239-F：ATCAACACACCTTTCGATTTCTGG(SEQ ID NO.13)，
umc1239-R：CGGTGATTAGTCGATGAAGAGTGA(SEQ ID NO.14)；
Phi109275-F：CGGTTCATGCTAGCTCTGC(SEQ ID NO.15)，
Phi109275-R：GTTGTGGCTGTGGTGGTG(SEQ ID NO.16)。
检测结果分别如图5个图6所示，可见本发明提取的DNA具有很好的稳定性，即使冷冻存放8个月后仍未降解，仍能满足DNA检测质量要求。
(5)使用分子标记bnlg1716对实施例1和对比例1提取的DNA质量进行比较，该分子标记对应的引物序列为：
bnlg1716-F：AAATAACCAGAACATGCCGC(SEQ ID NO.17)，
bnlg1716-R：CGCAACTTTCATCGAGTTGA(SEQ ID NO.18)。
检测结果如图7所示(a为对比例1，b为实施例1)，可知实施例1提取的 DNA与CTAB提取法获取的DNA的质量基本无差异。然而，本发明的提取方法每人每天可以提取至少1000个样品，且不会污染，其提取效率远大于CTAB提取法。
综上所述，本发明提供DNA提取方法能够满足分子标记辅助育种对DNA 质量的需求。
以上所述是本发明的优选实施方式而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 安徽荃银高科种业股份有限公司
<120> 一种适用于分子标记辅助育种的DNA提取方法
<160> 18
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
cttctcctcg gcatcatcca aac 23
<210> 2
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ggtggccctg ttaatcctca tctg 24
<210> 3
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
gcttgaggcg gttgaggtat gag 23
<210> 4
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
tgcacagaat aaacataggt aggtcaggtc 30
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
gacgctgcac aataggttct 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
tcatatacac cgacgacctg 20
<210> 7
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
gaccagcgtg ttgatccc 18
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
ggagaccccg actctctctc 20
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
gcacatgaag atcctgctga 20
<210> 10
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
tgtggatgac ggtgatgc 18
<210> 11
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
actgtccacc aaaccaagcc gaga 24
<210> 12
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
agtaggggtt ggggatctcc tcc 23
<210> 13
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
atcaacacac ctttcgattt ctgg 24
<210> 14
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
cggtgattag tcgatgaaga gtga 24
<210> 15
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
cggttcatgc tagctctgc 19
<210> 16
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
gttgtggctg tggtggtg 18
<210> 17
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
aaataaccag aacatgccgc 20
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
cgcaactttc atcgagttga 20

Claims (10)

1.一种适用于分子标记辅助育种的DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、取植物样本置于容器内，再加入不锈钢钢珠和经预热处理的SDS提取液，研磨后离心；
S2、加入乙酸铵进行抽提，然后离心取上清液；
S3、在上清液中加入无水乙醇，混匀后离心，弃液体，待沉淀干燥后再加入ddH2O重悬。
2.根据权利要求1所述的DNA提取方法，其特征在于，所述SDS提取液包含：200mmol/LTris-HCl，1％SDS，250mmol/L NaCl，25mmol/L EDTA；所述SDS提取液的pH为8.0。
3.根据权利要求2所述的DNA提取方法，其特征在于，步骤S2所述乙酸铵的浓度为7.5M，所述乙酸铵与SDS提取液的体积比为1∶2。
4.根据权利要求1所述的DNA提取方法，其特征在于，所述植物样本为植物苗期叶片。
5.根据权利要求4所述的DNA提取方法，其特征在于，所述植物苗期叶片在研磨前经初步破碎处理。
6.根据权利要求4所述的DNA提取方法，其特征在于，所述植物为玉米。
7.根据权利要求1所述的DNA提取方法，其特征在于，步骤S1所述的预热处理具体为：将SDS提取液预先用65℃水浴处理。
8.根据权利要求1所述的DNA提取方法，其特征在于，步骤S2和步骤S3所述离心的条件均为：4000rpm下离心10min。
9.根据权利要求1所述的DNA提取方法，其特征在于，步骤S3所述干燥的温度为20～70℃。
10.根据权利要求1所述的DNA提取方法，其特征在于，步骤S3所述无水乙醇与上清液的体积比为2∶1，所述无水乙醇为经预冷处理的无水乙醇。
CN202210536136.9A 2022-05-17 2022-05-17 一种适用于分子标记辅助育种的dna提取方法 Pending CN114752655A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210536136.9A CN114752655A (zh) 2022-05-17 2022-05-17 一种适用于分子标记辅助育种的dna提取方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210536136.9A CN114752655A (zh) 2022-05-17 2022-05-17 一种适用于分子标记辅助育种的dna提取方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114752655A true CN114752655A (zh) 2022-07-15

Family

ID=82335184

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210536136.9A Pending CN114752655A (zh) 2022-05-17 2022-05-17 一种适用于分子标记辅助育种的dna提取方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114752655A (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101413018A (zh) * 2008-12-09 2009-04-22 中南大学 一种基因组dna的提取方法
CN101831422A (zh) * 2010-04-28 2010-09-15 北京市农林科学院 适于pcr反应的快速提取食用菌基因组dna的方法
CN104109663A (zh) * 2014-05-13 2014-10-22 中国农业科学院特产研究所 一种简便高效的动物血液dna提取方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101413018A (zh) * 2008-12-09 2009-04-22 中南大学 一种基因组dna的提取方法
CN101831422A (zh) * 2010-04-28 2010-09-15 北京市农林科学院 适于pcr反应的快速提取食用菌基因组dna的方法
CN104109663A (zh) * 2014-05-13 2014-10-22 中国农业科学院特产研究所 一种简便高效的动物血液dna提取方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
柴建芳;刘旭;贾继增;: "一种适于PCR扩增的小麦基因组DNA快速提取法", 植物遗传资源学报, no. 02, pages 247 - 248 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113528698B (zh) 一种鉴定和/或区分甘蓝类蔬菜的InDel分子标记及其应用
CN107475412B (zh) 一种与鸡产蛋性状相关的分子标记及其在鸡育种中的应用
KR101660951B1 (ko) 수박 품종 판별용 snp 마커 및 이의 용도
CN107400715B (zh) 十倍体长穗偃麦草专化分子标记与探针的开发及其应用
CN113151542B (zh) 一种华山松基因组snp的开发方法和应用
CN108949925B (zh) 一种快速准确鉴定杂草稻与栽培稻的分子检测方法
CN114836450B (zh) 有色大麦籽粒花青素转运相关基因HvGST及其应用
CN114672588A (zh) 一种SNP分子标记Cpa03g017250：8及其扩增引物、检测试剂盒和应用
CN114736979A (zh) 用于检测西瓜全缘叶形的snp位点、紧密连锁分子标记及应用
CN112592996B (zh) 一个与芝麻籽粒芝麻素含量主效基因位点紧密连锁的分子标记zmm1776及其应用
CN113528703A (zh) 水稻稻瘟病抗性基因Pid3-A4的KASP分子标记开发及其应用
CN109468404B (zh) 一种鉴定水稻香味表型的方法及其所用引物对
Hameed et al. A rapid (100 min) method for isolating high yield and quality DNA from leaves, roots and coleoptile of wheat (Triticum aestivum L.) suitable for apoptotic and other molecular studies
CN108396026B (zh) 十倍体长穂偃麦草蓝粒性状专化分子标记和荧光原位杂交探针的开发及应用
CN107354233B (zh) 鉴定蝇蛹金小蜂蜂卵性别的微卫星引物、应用及鉴定蝇蛹金小蜂蜂卵性别的方法
CN110878376A (zh) 用于鉴定霍山石斛的ssr分子标记引物及其应用
CN107354234B (zh) 用于筛选长牡蛎高糖原含量亲贝的方法及其相关引物对
CN114752655A (zh) 一种适用于分子标记辅助育种的dna提取方法
CN113736907B (zh) 用于检测番茄灰叶斑病抗性的snp位点组合及其应用
CN116286851A (zh) 玉米隐性核不育ms13-6060突变体序列及其分子鉴定方法和应用
CN109609681B (zh) 一种基于叶绿体基因组序列的火炬松个体鉴定方法
CN111088387B (zh) 香樟叶绿体全基因组pcr扩增引物及其应用
KR100673071B1 (ko) 파이로시퀀싱법을 이용한 녹용의 종간 유전자 감별 키트
CN112695133A (zh) 利用BSA-seq筛选与梨果实褐皮相关联分子标记方法
CN108220470B (zh) 一种检测青稞籽粒蛋白的试剂盒和方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination