CN109468404B

CN109468404B - 一种鉴定水稻香味表型的方法及其所用引物对

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Publication number: CN109468404B
Application number: CN201811554512.7A
Authority: CN
Inventors: 胡文彬; 周政; 赵正洪; 周斌; 张世辉; 李咏谊
Original assignee: HUNAN RICE RESEARCH INSTITUTE
Current assignee: HUNAN RICE RESEARCH INSTITUTE
Priority date: 2018-12-19
Filing date: 2018-12-19
Publication date: 2022-04-26
Anticipated expiration: 2038-12-19
Also published as: CN109468404A

Abstract

本发明公开了一种鉴定水稻香味表型的方法及其所用引物对。本发明所提供的鉴定或辅助鉴定香型水稻的方法，包括如下步骤：以待鉴定水稻的基因组DNA为模板，以SEQ ID No.1所示的单链DNA分子和SEQ ID No.2分子所示的单链DNA为正向引物，以SEQ ID No.3所示的单链DNA分子为反向引物，进行扩增，检测扩增产物的大小，根据扩增产物的大小按照下述方法确定所述待鉴定水稻是否为香型水稻：如果所述待鉴定水稻的扩增产物中仅为大小是167bp的DNA片段，则所述待鉴定水稻为香型水稻或候选香型水稻；如果所述待鉴定水稻的扩增产物中含有大小为206bp的DNA片段，则所述待鉴定水稻为非香型水稻或候选非香型水稻。

Description

一种鉴定水稻香味表型的方法及其所用引物对

技术领域

本发明涉及生物技术领域中一种鉴定水稻香味表型的方法及其所用引物对。

背景技术

水稻是我国乃至世界的重要粮食作物。随着经济的发展和生活水平的提高，人们对大米的需求已不再是量的满足，而是对品质提出了更高的要求。香味是高品质水稻中一个重要性状，具有香味的水稻品种，其大米气味芬香，深受消费者喜爱，因而价格高、市场需求旺盛。目前香米在国际大米市场十分畅销，主要品种是印度的Basmati系列、泰国的KDML105和美国的Della等。我国香稻资源也十分丰富，如曲阜香稻、江永香米、永顺香米等；但这些资源普遍存在农艺性状差、抗逆性不强、适应能力不佳，产量低，不适合大面积种植，因而无法满足国内市场需求。

为了进一步拓展香稻种植范围，提高产量，研究人员对水稻香味的成分、形成原因和遗传机制进行了深入的研究。水稻品种中香味的表型鉴定主要是热水法、KOH法和咀嚼法。随着香味基因的确定，各种突变类型的分子标记相继被开发出来，被并广泛应用于香稻品种选育中。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何快速、准确地鉴定水稻的香味表型。

为了解决上述技术问题，本发明根据水稻中Badh2基因第7外显子8碱基缺失、3碱基突变开发了快速鉴定水稻香味表型的特异引物组。

本发明所提供的鉴定或辅助鉴定水稻香味表型的引物组，由正向引物和反向引物组成；上述正向引物为如下a1)和a2)：

a1)SEQ ID No.1所示的单链DNA分子；

a2)SEQ ID No.2所示的单链DNA分子；

上述反向引物为SEQ ID No.3所示的单链DNA分子。

为了解决上述技术问题，本发明还提供一种鉴定或辅助鉴定香型水稻的方法。

本发明所提供的鉴定或辅助鉴定香型水稻的方法包括如下步骤：以待鉴定水稻的基因组DNA为模板，以SEQ ID No.1所示的单链DNA分子和SEQ ID No.2所示的单链DNA分子为正向引物，以SEQ ID No.3所示的单链DNA分子为反向引物，进行扩增，检测扩增产物的大小，根据扩增产物的大小按照下述方法确定所述待鉴定水稻是否为香型水稻：如果所述待鉴定水稻的扩增产物为大小是167bp的DNA片段，则所述待鉴定水稻为香型水稻或候选香型水稻；如果所述待鉴定水稻的扩增产物中含有大小为206bp的DNA片段，则所述待鉴定水稻为非香型水稻或候选非香型水稻；所述香型水稻为水稻植株和籽粒均具有香味的水稻，所述非香型水稻为水稻植株不具有香味的水稻。

上述方法中，所述扩增产物中含有大小为206bp的DNA片段可为所述扩增产物为206bp的DNA片段或所述扩增产物为两条DNA片段，所述两条DNA片段中一条DNA片段大小为206bp，另一条DNA片段大小为167bp。

为了解决上述技术问题，本发明又提供另一种鉴定或辅助鉴定水稻香味表型的方法。

本发明所提供的鉴定或辅助鉴定水稻香味表型的方法包括如下步骤：以待鉴定水稻的基因组DNA为模板，以SEQ ID No.1所示的单链DNA分子和SEQ ID No.2所示的单链DNA分子为正向引物，以SEQ ID No.3所示的单链DNA分子为反向引物，进行扩增，检测扩增产物的大小，根据扩增产物的大小按照下述方法确定所述待鉴定水稻的香味表型：如果所述待鉴定水稻的扩增产物仅为167bp的DNA片段，则所述待鉴定水稻的植株和籽粒均具有香味；如果所述待鉴定水稻的扩增产物仅为206bp的DNA片段，则所述待鉴定水稻的植株和籽粒均不具有香味；如果所述待鉴定水稻的扩增产物为167bp和206bp的DNA片段，则所述待鉴定水稻的植株不具有香气味。

为了解决上述技术问题，本发明再提供了一种培育水稻的方法。

本发明所提供的培育水稻的方法包括如下步骤：1)按照如下方法选出纯合香味水稻或杂合香味水稻：以待鉴定水稻的基因组DNA为模板，以SEQ ID No.1所示的单链DNA分子和SEQ ID No.2所示的单链DNA分子为正向引物，以SEQ ID No.3所示的单链DNA分子为反向引物，进行扩增，检测扩增产物的大小，如果所述待鉴定水稻的扩增产物为167bp的DNA片段，则所述待鉴定水稻为纯合香味水稻；如果所述待鉴定水稻的扩增产物为167bp和206bp的DNA片段，则所述待鉴定水稻为杂合香味水稻；

2)以步骤1)选出的纯合香味水稻或杂合香味水稻作为亲本进行水稻育种。

上述方法中，所述扩增可为PCR扩增。

上述方法中，所述扩增采用的PCR反应程序可为：95℃预变性5min；95℃变性20s，55℃退火20s，72℃延伸30s，34个循环；72℃延伸5min。

上述方法中，所述扩增采用的PCR体系中，SEQ ID No.1所示的单链DNA分子、SEQID No.2所示的单链DNA分子和SEQ ID No.3所示的单链DNA分子的摩尔比可为2∶2∶5。

上述方法中，所述检测扩增产物的大小可通过凝胶电泳实现；所述凝胶电泳可为2-3％的琼脂糖凝胶电泳，具体可为2％、2.5％或3％的琼脂糖凝胶电泳。

为了解决上述技术问题，本发明还提供了上述方法的用途，所述用途为下述1)-3)中任意一种：

1)在鉴定或辅助鉴定水稻香味表型中的应用；

2)在选育水稻香味品种中的应用；

3)在预测水稻香味表型中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明还开发了一种鉴定或辅助鉴定水稻香味表型的试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒含有上述鉴定或辅助鉴定水稻香味表型的引物组。

为了解决上述技术问题，本发明还提供了上述引物组或上述试剂或试剂盒的用途，所述用途为下述A-E中的任意一种：

A、在鉴定或辅助鉴定水稻香味表型中的应用；

B、在选育水稻香味品种中的应用；

C、预测水稻香味表型中的应用；

D、在制备鉴定或辅助鉴定水稻香味表型产品中的应用；

E、在制备预测水稻香味表型产品中的应用。

本发明中涉及的水稻植株不包含水稻籽粒。

本发明所涉及的待鉴定水稻可为湘晚籼13号×谷梅4号杂交后代中的F3及其以后世代的家系，本发明所涉及的待鉴定水稻还可为谷梅4号×湘晚籼13号杂交后代中的F3及其以后世代的家系。

为避免了非目的DNA片段的扩增，又达到扩大产物差异的目的，发明人在引物5’端中添加非水稻DNA序列。并通过实验证明，利用本发明所提供的特异引物组对水稻香味表型进行鉴定，在纯合香味水稻材料仅能扩增出167bp的特征DNA片段，在纯合非香味水稻材料中仅能扩增出206bp的特征DNA片段，而在杂合型水稻材料中能同时扩增出167bp和206bp两条特征DNA片段。通过无毒琼脂糖凝胶就能快速检测出水稻植株中香味基因的纯、杂和无三种情况，避免了聚丙烯酰胺凝胶电泳的高毒性、长耗时，在无多余DNA片段的情况下实现水稻香味基因三种状态的早期、准确检测，且不需要破获水稻籽粒，有助于香型水稻新品种的选育。

附图说明

图1显示了Badh2基因第7外显子突变类型及位置。

图2显示了badh2-7NF、badh2-7XF和badh2-7R引物在香型水稻和非香型水稻的Badh2基因上的位置。

图3为30个水稻品种的PCR扩增产物电泳图；

图中，M为DNA MarkerⅠ，从上至下的DNA片段分别为600bp、500bp、400bp、300bp、200bp和100bp；1-30依次为日本晴、9311、谷梅4号、蜀恢527、粤晶丝苗2号、粤王丝苗、粤奇丝苗、特青、IR64、R900、华占、金穗128、黄华占、稻花香2号、象牙香占、岳优9113、农香18、大粒香、天优华占、吉粳88、东稻2号、湘晚籼13号、湘晚籼17号、农香24、农香32、桃优香占、湘晚籼12号、玉针香、Y两优1号和R1128。

图4为湘晚籼13、谷梅四号及F3群体单株PCR扩增产物电泳图；

图中，M为DNA MarkerⅠ，从上至下的DNA片段分别为600bp、500bp、400bp、300bp、200bp和100bp；+为香型亲本湘晚籼13号；-为非香型亲本谷梅4号；1-94是以湘晚籼13号为母本，谷梅4号为父本的F₃群体。

图5为利用引物组A-C分别扩增24个水稻DNA样品的PCR扩增产物电泳图；

图中，M为DNA MarkerⅠ，从上至下的DNA片段分别为600bp、500bp、400bp、300bp、200bp和100bp；1-24依次为日本晴、玉针香、混合样品1(日本晴与玉针香1:1)、9311、农香18、农香24、农香32、华占、黄华占、天优华占、湘晚籼13、湘晚籼17、谷梅4号、稻花香2号、象牙香占、大粒香、粤王丝苗、粤奇丝苗、粤晶丝苗2号、Y两优1号、桃优香占、吉粳88、东稻2号和混合样品2(大粒香与9311 1:1)。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下列实施例中水稻品种日本晴、9311、谷梅4号、蜀恢527、粤晶丝苗2号、粤王丝苗、粤奇丝苗、特青、IR64、R900、华占、金穗128、黄华占、稻花香2号、象牙香占、岳优9113、农香18、大粒香、天优华占、吉粳88、东稻2号、湘晚籼13号、湘晚籼17号、农香24、农香32、桃优香占、湘晚籼12号、玉针香、Y两优1号和R1128均由湖南省农科院水稻研究所提供，其种质资源可从国家水稻数据中心查询(http://www.ricedata.cn/index.htm)。公众可从申请人处获得这些水稻材料，这些水稻材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。

实施例1、鉴定水稻香味表型的引物开发

根据水稻中Badh2基因第7外显子8碱基缺失、3碱基突变分别设计了快速检测香味基因的引物组A。

其中，引物组A由引物名称为badh2-7NF、badh2-7XF和badh2-7R的三条引物组成。

badh2-7NF、badh2-7XF和badh2-7R的序列分别如下：

badh2-7NF：5’-ACAGGATTCAATCTTAAGAAACTTTATTGCCCTGGTAAAAAGATTATGGCTTCAG-3’(序列表中SEQ ID No.1)；

badh2-7XF：5’-CTGGTATATATTTCAGCTGC-3’(序列表中SEQ ID No.2)；

badh2-7R：5’-GAATGATGCTCAAAGTGTC-3’(序列表中SEQ ID No.3)。

实施例2、水稻品种香味表型鉴定

本实施例中采用PCR技术和现有方法对水稻品种的香味表型进行鉴定。

1、利用PCR技术鉴定水稻品种香型(本发明的方法)

1.1 DNA提取

利用CTAB法分别从日本晴、9311、谷梅4号、蜀恢527、粤晶丝苗2号、粤王丝苗、粤奇丝苗、特青、IR64、R900、华占、金穗128、黄华占、稻花香2号、象牙香占、岳优9113、农香18、大粒香、天优华占、吉粳88号、东稻2号、湘晚籼13号、湘晚籼17号、农香24、农香32、桃优香占、湘晚籼12号、玉针香、Y两优1号和R1128等30个水稻品种的叶片中提取基因组DNA。

琼脂糖电泳和Nanodrop2100分别检测所提取DNA的质量，发现提取的基因组DNA均达到了相关的质量要求，即琼脂糖电泳显示DNA片段单一，没有明显弥散；Nanodrop2100检测A260/280介于1.8-2.0之间(DNA样品没有蛋白污染)；A260/230介于1.8-2.0之间(DNA样品盐离子浓度低)；270nm没有明显的光吸收(DNA样品没有酚污染)。稀释DNA浓度成为10ng/μl备用，得到待测DNA。

1.2 PCR扩增

以步骤1中分离提取的水稻基因组DNA分别作为模板，利用实施例1中的引物组A进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。

其中，PCR扩增反应体系为20μL，由2.0μL的10×PCR Buffer，2.0μL的10mM dNTPs，0.4μL的10μM引物badh2-7XF，0.4μL的10μM引物badh2-7R，1μL的10μM引物badh2-7NF，0.2μL的5U/μL Taq DNA聚合酶和14μL ddH₂O组成。PCR扩增条件为：95℃预变性5min；95℃变性20s，55℃退火20s，72℃延伸30s，循环34次；72℃延伸5min。

1.3琼脂糖凝胶电泳

配制质量分数为2-3％琼脂糖凝胶，按体积比1:10000(Gelred：琼脂糖凝胶)的比例加入无毒染料Gelred。将PCR扩增产物和DNA marker加入到冷却的凝胶中，然后7V/cm电泳30min；电泳完成后，将凝胶放置到紫外凝胶成像仪中拍照、保存。

2、现有方法鉴定水稻香味表型

KOH法鉴定叶片香味：取每个材料叶片2g，放入培养皿内，加1.7％KOH溶液10mL，盖上培养皿。在室温下放置20～30min，然后打开培养皿，立即闻其气味，判定是否有香味。

咀嚼法鉴定籽粒香味：收获每个水稻品种的种子10粒，去壳，然后对每一粒进行咀嚼，判断香味情况。

3、30个水稻品种的香味表型检测结果

本发明按照如下方法确定待鉴定水稻是香型水稻还是非香型水稻：若待测水稻品种中只有167bp的特征DNA片段，则待测水稻为纯合香味水稻，其植株和籽粒均有香味；若待测水稻品种中含有167bp和206bp两条DNA片段，则待测水稻为杂合香型水稻，其植株不香，但部分籽粒具有香味；若待测水稻品种中只有206bp的特征DNA片段，则待测水稻为纯合非香味水稻，其植株和籽粒均无香味。其中，纯合香味水稻属于香型水稻，而杂合香味水稻和纯合非香味水稻属于非香型水稻。

引物组A检测30个水稻品种的结果如图3所示。其中，稻花香2号、象牙香占、农香18、大粒香等9个水稻品种均只扩增到167bp一条特征DNA片段，表明这9个水稻品种是纯合香味水稻，属于香型水稻品种，在表1中的检测结果以“+”表示；日本晴、9311、谷梅4号等20个水稻品种中均只扩增到206bp一条特征DNA片段，表明这20个水稻品种为纯合非香味水稻，属于非香型水稻品种，在表1中的检测结果以“-”表示；桃优香占为杂交稻，PCR产物为167bp和206bp两种DNA片段，表明该水稻品种为杂合香味水稻，属于非香型水稻品种，在表1中的检测结果以“-/+”表示。

由表1所示的结果可知，现有方法对30个水稻品种的表型鉴定结果与PCR检测结果一致。

注：检测结果中，“-”为纯合非香味水稻，叶片和籽粒均无香味；“+”为纯合香味水稻，叶片和籽粒均有香味；“-/+”为杂合香味水稻，叶片不具有香味，但部分籽粒具有香味。

实施例3、引物组A在鉴定香型水稻和非香型水稻材料中的应用

94份水稻材料为亲本湘晚籼13号与谷梅4号的杂交后F₃代家系，具体方法如下：以谷梅4号为父本与湘晚籼13号为母本进行人工杂交，获得F₁代；种植F₁，收获种子，即获得F₂；然后种植F₂代，分单株收获种子，获得F₃代群体。

利用CTAB法对94份水稻材料提取DNA。利用实施例1中的引物组对94份水稻材料进行PCR扩增。扩增体系与扩增条件与实施例2中引物组A扩增30个水稻品种的条件相同。采用实施例2中相同的方法检测PCR扩增产物。

采用实施例2中的KOH法和咀嚼法鉴定叶片和籽粒的香味。

结果表明(如图4所示)：94个水稻材料中有36株为纯合香味水稻，33株为合水非香味纯稻，还有25株为杂合香味水稻；该检测结果与水稻种子咀嚼法鉴定的结果一致(表2)。

可见，本发明的鉴定或辅助鉴定水稻香味表型的方法灵敏度高，且准确性达到了100％。

表2本发明检测94个水稻材料香味基因的结果

注：表型鉴定中，“香”表示植株和籽粒均有香味；“不香”表示植株和籽粒均无香味；“部分香”表示植株不具有香味，部分籽粒具有香味。“-”为纯合非香味水稻，植株和籽粒均无香味；“+”为纯合香味水稻，植株和籽粒均有香味；“-/+”为杂合香味水稻。

对比例、鉴定香味基因的不同引物组比较

针对水稻中Badh2基因第7外显子8碱基缺失、3碱基突变，选出另外两个常用引物组-引物组B和引物组C与本发明的引物组A进行比较。

其中，引物组B由fgrF、fgrIn和fgrR的三条引物组成。

fgrF、fgrIn和fgrR的序列分别如下：

fgrF：5’-TTGTTTGGAGCTTGCTGATG-3’；

fgrIn：5’-AACCATAGGAGCAGGTGAAAT-3’；

fgrR：5’-ACAAAGTCCCGCACTTCAGA-3’。

引物组C由YY5、YY6、YY7和YY8四条引物组成。

YY5、YY6、YY7和YY8的序列分别如下：

YY5：5’-CCGGTGCTCCTTTGTCATC-3’；

YY6：5’-TGAAACTGGTAAAAAGATTATGGC-3’；

YY6：5’-GAGCAGCTGAAATATATACC-3’；

YY8：5’-TTGCATCCTGCTCGTCTGG-3’。

以日本晴、玉针香、9311、农香18、农香24、农香32、华占、黄华占、天优华占、湘晚籼13号、湘晚籼17号、谷梅4号、稻花香2号、大粒香、象牙香占、粤晶丝苗2号、粤王丝苗、粤奇丝苗、Y两优1号、桃优香占、吉粳88、东稻2号等22个水稻品种的基因组DNA，以及日本晴与玉针香的基因组DNA 1:1的混合样品1和大粒香与9311基因组DNA 1:1混合样品2为模板，利用引物组A-C分别进行PCR扩增，得到扩增产物。

其中，当扩增引物为引物组A时，扩增体系与扩增条件与实施例2中引物组A扩增30个水稻品种的条件相同。

当扩增引物为引物组B时，PCR扩增反应体系为20μL，由2.0μL的10×PCR Buffer，2.0μL的10mM dNTPs，0.5μL的10μM引物fgrF，0.5μL的10μM引物fgrIn，0.5μL的10μM引物fgrR，0.2μL的5U/μL Taq DNA聚合酶和14.3μL ddH₂O组成。PCR扩增条件为：95℃预变性5min；95℃变性20s，58℃退火30s，72℃延伸30s，循环34次；72℃延伸5min。

当扩增引物为引物组C时，PCR扩增反应体系为20μL，由2.0μL的10×PCR Buffer，2.0μL的10mM dNTPs，0.5μL的10μM引物YY5，0.5μL的10μM引物YY6，0.5μL的10μM引物YY7，0.5μL的10μM引物YY8，0.2μL的5U/μL Taq DNA聚合酶和13.8μL ddH₂O组成。PCR扩增条件为：95℃预变性5min；95℃变性20s，56℃退火30s，72℃延伸30s，循环34次；72℃延伸5min。

利用2-3％琼脂糖凝胶对引物组A-C的扩增产物分别进行检测。

其中，利用引物组B对待测水稻样品进行扩增，若扩增产物为569bp和260bp两个DNA片段，则表明该待测水稻样品种不含有香味基因；若扩增产物为569bp的DNA条带，则表明该该待测水稻样品中含有香味基因。利用引物组C对待测水稻样品进行扩增，若扩增产物为591bp和449bp两个DNA片段，则表明该待测水稻样品中不含有香味基因；若扩增产物为583bp和169bp两个DNA片段，则表明该待测水稻样品中含有香味基因；若扩增产物为591bp、583bp、449bp和169bp四个DNA片段，则表明该待测水稻样品为杂合体。

检测结果(如图5和表3所示)表明：三组引物都能检测到水稻中是否含有香味基因。但是引物组B在桃优香占、混合样品1和2中呈现出与香味纯合对照玉针香一样的条带，即引物组B不能有效分辨香味基因的纯合与杂合情况。而在实际应用中，香味基因杂合植株也不具备香味，因此引物组B对杂合植株的PCR检测结果与植株的表型不一致，无法满足香稻品种选育需求。而引物组C虽然能满足试验香稻品种选育需求，但是条带繁多，不利于观察。本发明设计开发的引物组A，条带简单，结果准确，更适用于香稻的选育。

表3引物组A-C检测24个水稻样品的PCR检测结果

注：检测结果中，“+”为纯合香味基因；“-”为纯合非香味基因；“-/+”为杂合香味基因。

<110> 湖南省水稻研究所

<120> 一种鉴定水稻香味表型的方法及其所用引物对

<130> GNCRJ181891

<160> 3

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 55

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

acaggattca atcttaagaa actttattgc cctggtaaaa agattatggc ttcag 55

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

ctggtatata tttcagctgc 20

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gaatgatgct caaagtgtc 19

Claims

1.一种鉴定或辅助鉴定香型水稻的方法，包括如下步骤：以待鉴定水稻的基因组DNA为模板，以SEQ ID No. 1所示的单链DNA分子和SEQ ID No. 2所示的单链DNA分子为正向引物，以SEQ ID No. 3所示的单链DNA分子为反向引物，进行扩增，检测扩增产物的大小，根据扩增产物的大小按照下述方法确定所述待鉴定水稻是否为香型水稻：

如果所述待鉴定水稻的扩增产物为大小是167bp的DNA片段，则所述待鉴定水稻为香型水稻或候选香型水稻；如果所述待鉴定水稻的扩增产物中含有大小为206bp的DNA片段，则所述待鉴定水稻为非香型水稻或候选非香型水稻；

所述香型水稻为水稻植株和籽粒均具有香味的水稻；

所述非香型水稻为水稻植株不具有香味的水稻；

所述扩增产物的大小的检测是通过凝胶电泳实现的；所述凝胶电泳为琼脂糖凝胶电泳。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述扩增产物中含有大小为206bp的DNA片段是指所述扩增产物仅为206bp的DNA片段或所述扩增产物为206bp的DNA片段和167bp的DNA片段。

3.一种鉴定或辅助鉴定水稻香味表型的方法，包括如下步骤：以待鉴定水稻的基因组DNA为模板，以SEQ ID No. 1所示的单链DNA分子和SEQ ID No. 2所示的单链DNA分子为正向引物，以SEQ ID No. 3所示的单链DNA分子为反向引物，进行扩增，检测扩增产物的大小，根据扩增产物的大小按照下述方法确定所述待鉴定水稻的香味表型：

如果所述待鉴定水稻的扩增产物为167bp的DNA片段，则所述待鉴定水稻的植株和籽粒均具有香味；如果所述待鉴定水稻的扩增产物为206bp的DNA片段，则所述待鉴定水稻的植株和籽粒均不具有香味；如果所述待鉴定水稻的扩增产物为167bp和206bp的DNA片段，则所述待鉴定水稻的植株不具有香味；

4.一种培育水稻的方法，包括如下步骤：1）按照如下方法选出纯合香味水稻或杂合香味水稻：以待鉴定水稻的基因组DNA为模板，以SEQ ID No. 1所示的单链DNA分子和SEQ IDNo. 2所示的单链DNA分子为正向引物，以SEQ ID No. 3所示的单链DNA分子为反向引物，进行扩增，检测扩增产物的大小，如果所述待鉴定水稻的扩增产物为167bp的DNA片段，则所述待鉴定水稻为纯合香味水稻；如果所述待鉴定水稻的扩增产物为167bp和206bp的DNA片段，则所述待鉴定水稻为杂合香味水稻；

2）以步骤1）选出的纯合香味水稻或杂合香味水稻作为亲本进行水稻育种；

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述待鉴定水稻为湘晚籼13号×谷梅4号杂交后代中的F3及其以后世代的家系或为谷梅4号×湘晚籼13号杂交后代中的F3及其以后世代的家系。

6.权利要求1-5中任一所述方法的用途，所述用途为下述1）-3）中任意一种：

1）在鉴定或辅助鉴定水稻香味表型中的应用；

2）在选育香型水稻品种中的应用；

3）在预测水稻香味表型中的应用。