CN114717123B

CN114717123B - 无醇酿酒酵母及利用该菌株酿造无醇啤酒的方法

Info

Publication number: CN114717123B
Application number: CN202210342685.2A
Authority: CN
Inventors: 潘冬梅; 张心青; 蔡颖辉; 杨传伦; 晁谨; 王红霞; 田杰伟; 苏士岗; 马春峰; 张萧萧
Original assignee: Chambroad Chemical Industry Research Institute Co Ltd
Current assignee: Chambroad Chemical Industry Research Institute Co Ltd
Priority date: 2022-04-02
Filing date: 2022-04-02
Publication date: 2023-12-15
Anticipated expiration: 2042-04-02
Also published as: CN114717123A

Abstract

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及无醇酿酒酵母及利用该菌株酿造无醇啤酒的方法，所使用的无醇酿酒酵母的菌株，保藏编号为CGMCCNO.24311。将该菌株应用于原麦汁浓度8°P～11°P的无醇啤酒生产中，可获得酒精度＜0.50％、酸度1.0％～2.0％、总醇65mg/L～85mg/L、总醇:总酯＝(3.6～4.3):1的无醇啤酒。泡沫洁白细腻丰富，有鲜明麦芽和啤酒特有香气，口感接近传统啤酒其余理化指标及品评无明显差别，可实现减少酒精的摄入、有益于身体健康，还能满足人们口感上的享受，该菌株将成为无醇啤酒大规模生产的关键，具有良好的工业化应用前景。

Description

无醇酿酒酵母及利用该菌株酿造无醇啤酒的方法

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及无醇酿酒酵母及利用该菌株酿造无醇啤酒的方法。

背景技术

随着人们对酒精危害认识的加深，以及消费者越来越多的关注健康，无醇啤酒、无醇葡萄酒等无醇饮料渐渐走进人们的生活，其中无醇啤酒更是受到消费者的青睐。我国国家标准对于无醇啤酒的规定除了要求酒精体积分数小于等于0.5％外，还要求啤酒的原麦汁浓度大于等于3.0°P。按照此定义在不考虑口感的情况下，若将原麦汁浓度调整为3.0°P，采用普通酿酒酵母正常发酵，发酵度为65％，则会产生约体积分数1.2％的酒精，若无其它手段配合，不能得到无醇啤酒。

工业上主要通过两种方法生产无醇啤酒，一种是工业上最常用的物理脱醇法，即在正常生产啤酒的基础上，通过反渗透、透析或蒸发等方法脱醇。科学家们提出了一种采用反渗透法制备无醇啤酒的方法，酒精度可降低85％以上，一些研究者将普通啤酒中的酒精用真空精馏法去除，使啤酒中的酒精含量小于0.5％制备无醇啤酒，但这些方法都需要增加脱醇设备，增加成本，且啤酒在去掉酒精后，通常带有麦汁味，口感较淡，酸感突出。另一种是通过控制发酵方法来降低啤酒发酵过程中乙醇的生产量，一些学者提出了不能利用麦芽糖和麦芽三糖的特殊酵母发酵以减少乙醇产生，由于醪液中含有大量的未发酵麦芽糖而具有很浓的甜味，缺少传统啤酒的醇酯风味，因此筛选一种乙醇产量低，而发酵啤酒风味、口感与传统啤酒接近的无醇啤酒菌种，将成为无醇啤酒大规模生产的关键。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供无醇酿酒酵母及利用该菌株酿造无醇啤酒的方法。

本发明提供了保藏编号为CGMCC NO.24311的酿酒酵母。

所述酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，菌株命名为YJY22-01，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.24311，形态特征为：细胞成卵圆型或球型，繁殖方式为出芽繁殖；该菌株在麦芽汁琼脂上形成奶酪色，表面为球形突起，光滑，不透明。

所述菌株YJY22-01的来源：发明人采集滨州地区自制葡萄酒样品分离纯化单菌落，经过TTC平板初筛、WLN平板、酵母产气、产香能力和凝聚性能复筛，并对其生理生化特性、遗传稳定性深入研究后，最终筛选出一株无醇酿酒酵母、利用该菌株酿造无醇啤酒、易培养且具有遗传稳定性的菌株。发明人对该菌株在中国微生物菌种保藏管理委员普通微生物中心进行了生物保藏，保藏编号为CGMCC NO.24311，经检测其为存活状态。

发明人同时对菌株YJY22-01进行了16SrDNA测序，其序列如SEQ ID No：1所示，该序列为菌株的16SrDNA的全序列。

所以本发明还提供了所述的无醇酿酒酵母菌株16S rDNA的核苷酸，其序列如SeqID No:1所示。

将所测得的16SrDNA序列进行BLAST比对，比对结果显示，菌株YJY22-01的16SrDNA的核苷酸序列与酵母菌属(Saccharomyces sp.)不同菌株的核苷酸序列有大于99％的同源性，与其中明确标记为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的菌株有100％的同源性；鉴定其为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。

本发明还提供了保藏编号为CGMCC NO.24311的酿酒酵母在酿造无醇啤酒中的应用。

本发明提供了酿造无醇啤酒的发酵剂，其包括保藏编号为CGMCC NO.24311的酿酒酵母。

本发明还提供了酿造无醇啤酒的发酵剂的制备方法，培养保藏编号为CGMCCNO.24311的酿酒酵母，收集菌体。

本发明所述的制备方法，所述收集菌体后，还包括重悬菌体制备菌悬液的步骤；或者还包括将菌体与冻干保护剂混合，经冻干制得冻干粉的步骤。

本发明提供了一种无醇啤酒，其原料包括：保藏编号为CGMCC NO.24311的酿酒酵母、麦芽、啤酒花和水。

所述麦芽包括：精品麦芽100重量份、浅色焦香5～10重量份、红麦芽20～30重量份、小麦芽5～10重量份；所述啤酒花包括青岛大花0.05～0.08重量份、卡斯卡特香花0.06～0.09重量份和西姆科酒花0.1～0.3重量份。

本发明所述的无醇啤酒，所述无醇啤酒的酒精度＜0.50％、酸度1.0％～2.0％、二氧化碳含量0.50％mass～0.60％mass、总醇65mg/L～85mg/L、总醇:总酯＝(3.6～4.3):1。

本发明还提供了所述的无醇啤酒的酿造方法，以保藏编号为CGMCC NO.24311的酿酒酵母为菌种进行发酵。

本发明所述的酿造无醇啤酒的生产方法：具体步骤包括：

(1)制备液体种子：包括菌种活化、种子制备、液体深层发酵；

(2)制备无醇啤酒：原料准备、麦汁糖化、麦汁煮沸、无醇啤酒发酵、无醇啤酒后熟。

本发明所述的酿造无醇啤酒的方法：

其中，步骤(1)中所述的菌种活化方法具体为：将4℃条件下保存在麦汁琼脂培养基上的试管斜面菌种移至室温条件下活化4h～8h；

所述种子制备具体过程为：在无菌操作台上，从活化的试管斜面挑取一环酵母菌种接入pH4.0～pH5.0、浓度8°P～11°P的10mL麦芽汁试管中，将试管放入14℃～19℃的恒温培养箱中培养24h～36h，再将麦汁与酵母泥全部转移至100mL麦汁三角烧瓶中，在14℃～19℃的恒温培养箱中培养24h～36h，得到种子液；

所述的液体深层发酵具体过程为：取制备好的种子液，按照5％～10％(v/w)的接种量接种于pH4.0～pH5.0、浓度8°P～11°P的麦芽汁摇瓶中，培养温度14℃～19℃，摇床转速130r/min～180r/min，培养时间为20h～28h，检测OD₆₆₀＝1.5～2.0时停止培养。

所以本发明所述的无醇啤酒的酿造方法，所述发酵至发酵液的OD₆₆₀为1.5～2.0。

所述步骤(2)中无醇啤酒制备过程如下：

其中，原料的准备具体过程为：选取精品麦芽100重量份、浅色焦香5～10重量份、红麦芽20～30重量份、小麦芽5～10重量份、青岛大花0.05～0.08重量份、卡斯卡特香花0.06～0.09重量份和西姆科酒花0.1～0.3重量份；

所述的麦汁糖化具体过程为：将麦芽100重量份、浅色焦香5～10重量份、红麦芽20～30重量份、小麦芽5～10重量份粉碎，倒入糖化锅内，加入400～600重量份山泉水，加热至50℃～55℃，保持30min，然后升温至60℃～65℃，保持30min，然后升温至72℃，每5min取清液用0.5％碘液检测，至碘液反应无色糖化结束，升温至80℃灭酶，麦汁经过过滤槽过滤，控制麦汁糖度7°P～10°P添加洗糟山泉水，得到糖化麦汁。

所述的麦汁煮沸具体过程为：煮沸麦汁后计时60min，初沸后10min加入青岛大花0.04～0.07重量份，初沸后30min加入青岛大花0.01重量份，初沸后60min加入卡斯卡特香花0.06～0.09重量份，控制麦汁糖度8°P～11°P，分离热凝固物，充氧泵入发酵罐澄清麦汁。

所述的无醇啤酒发酵具体过程为：按照1％～2％(V/V)接种制备好的液体无醇酵母种子，控制温度14℃～19℃，当糖度降到5°P时，添加西姆科酒花0.1～0.3重量份，封罐；

所述的无醇啤酒后熟具体过程为：待酒液双乙酰降至0.05mg/L以下时，开始降温至4℃，排除底层酵母，继续降温至0℃冷贮7天，即得到酒精度＜0.50％、酸度1.0％～2.0％、二氧化碳含量0.50％mass～0.60％mass、总醇≥50mg/L、总酯≥8mg/L，泡沫洁白细腻丰富，有鲜明麦芽和啤酒特有香气，口感纯正的无醇啤酒。

所以本发明所述的方法，所述发酵后无醇啤酒后熟至酒液双乙酰为0.05mg/L。

利用上述无醇酿酒酵母，酿造无醇啤酒有以下优点：

1、TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)是一种显色剂,它能对酵母的代谢产物发生呈色反应,通过它可以判断酵母中呼吸酶活力的大小,即酵母产酒精能力的高低。将在一定的培养基上培养的酵母菌落上覆盖一层TTC显色剂,TTC会显不同的颜色,产酒精能力强的酵母会显现深红色,次之显粉红色,微红色的产酒精能力弱酵母，不显色的无醇酵母，本发明挑选TTC不显色的酵母菌株(如图1所示)；

2、WLN平板筛选中，溴甲酚绿用作酸碱指示剂，pH＝3.8时呈黄色、pH＝5.4时呈蓝绿色、pH＝4.5时开始有颜色的明显变化，啤酒中的双乙酰主要是由啤酒酵母细胞通过缬氨酸代谢途径产生的α-乙酰乳酸(α-Acetolactate)分泌至细胞外，再经过非酶促的氧化脱羧反应合成的，细胞外α-乙酰乳酸的量决定了双乙酰的生成量，本发明挑选WLN平板颜色较浅，呈乳白色的菌株(如图2所示)，双乙酰峰值较低；

3、酵母菌株产气能力筛选为：每支试管先放置一个干净的布氏小管，然后分别装入灭菌的液体麦汁培养基10mL，灭菌冷却后接入不同种类酵母菌悬液，然后置于培养箱中14℃～19℃条件下静止发酵120h，测定酵母菌的产气量大小，本发明挑选产气大的酵母菌株；

4、酵母菌株产香能力筛选为：取液体麦汁培养基150mL装入300mL三角瓶中，灭菌冷却后接入酵母菌株悬液，然后置于培养箱中14℃～19℃条件下静止发酵120h，气相色谱测定总醇、总酯含量，本发明筛选总醇≥50mg/L、总酯≥8mg/L的酵母菌株；

5、酵母凝聚性能筛选为：分别将不同酵母菌株接入装有10mL灭菌液体麦汁培养基试管中，在14℃～19℃下静置培养48h，再取相同装有10mL灭菌液体麦汁培养基试管，接入1mL酵母菌培养液，14℃～19℃下震荡培养120h，将沉淀酵母菌细胞摇匀，测定酵母菌细胞数T。将试管在14℃～19℃下静置30min，测出悬浮酵母菌细胞数S，凝聚性F＝(T-S)/S，F值越大，表示酵母菌凝聚性越强，本发明筛选F值较大的酵母菌株；

6、利用菌株YJY22-01酿造原麦汁浓度8°P～11°P的无醇啤酒，酒精度＜0.50％、酸度1.0％～2.0％、二氧化碳含量0.50％mass～0.60％mass、总醇≥50mg/L、总酯≥8mg/L，泡沫洁白细腻丰富，有鲜明麦芽和啤酒特有香气，口感纯正的无醇啤酒。

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及无醇酿酒酵母及利用该菌株酿造无醇啤酒的方法，所涉及的无醇酿酒酵母的菌株，经鉴定为酿酒酵母，菌株代码为YJY22-01，保藏编号为CGMCC NO.24311。将该菌株应用于原麦汁浓度8°P～11°P的无醇啤酒生产中，可获得酒精度＜0.50％、酸度1.0％～2.0％、二氧化碳含量0.50％mass～0.60％mass、总醇65mg/L～85mg/L、总醇:总酯＝(3.6～4.3):1，泡沫洁白细腻丰富，有鲜明麦芽和啤酒特有香气，其余理化指标及品评无明显差别，可以实现减少酒精的摄入，有益于身体健康，还可以满足人们对啤酒口感上的享受，是口感接近传统啤酒的无醇啤酒，该菌株将成为无醇啤酒大规模生产的关键，具有良好的工业化应用前景。

生物保藏说明

生物材料：YJY22-01，分类命名：酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae，于2022年01月17日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC NO.24311。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图：

图1示筛选菌株YJY22-01TTC平板不显色；

图2示筛选菌株YJY22-01在WLN平板呈乳白色。

具体实施方式

本发明提供了无醇酿酒酵母及利用该菌株酿造无醇啤酒的方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明中，所述精品麦芽购自永顺泰麦芽有限公司。

浅色焦香购自永顺泰麦芽有限公司。

红麦芽购自永顺泰麦芽有限公司。

小麦芽购自永顺泰麦芽有限公司。

青岛大花购自美国雅基玛酒花公司。

卡斯卡特购自美国雅基玛酒花公司。

西姆科酒花购自美国雅基玛酒花公司。

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例1

一种无醇啤酒的生产方法，具体步骤包括：

其中步骤(1)中所述的菌种活化具体为：将4℃条件下保存在麦汁琼脂培养基上的试管斜面菌种YJY22-01移至室温条件下活化4h～8h；

所述的种子制备具体过程为：在无菌操作台上，从活化的试管斜面挑取一环酵母菌种接入pH4.0、浓度9.5°P的10mL麦芽汁试管中，将试管放入14℃的恒温培养箱中培养36h，再将麦汁与酵母泥全部转移至100mL麦汁三角烧瓶中，在18℃的恒温培养箱中培养24h，得到种子液；

所述的液体深层发酵具体过程为：取制备好的种子液，按照5％(v/w)的接种量100mL接种于pH 5.0、浓度8°P的2L麦芽汁摇瓶中，培养温度19℃，摇床转速130r/min，培养时间为28h，检测OD₆₆₀＝1.5时停止培养；

所述步骤(2)中无醇啤酒制备过程如下：

所述的原料准备具体过程为：选取精品麦芽100重量份10Kg、浅色焦香10重量份1Kg、红麦芽29重量份2.9Kg、小麦芽5重量份0.5Kg、青岛大花0.07重量份7g、卡斯卡特香花0.06重量份6g和西姆科酒花0.2重量份20g；

所述的麦汁糖化具体过程为：将精品麦芽10Kg、浅色焦香1Kg、红麦芽2.9Kg、小麦芽0.5Kg粉碎，倒入糖化锅内，加入480重量份48Kg山泉水，加热至55℃，保持30min，然后升温至60℃，保持30min，然后升温至72℃，每5min取清液用0.5％碘液检测，至碘液反应无色糖化结束，升温至80℃灭酶，麦汁经过过滤槽过滤，控制麦汁糖度9°P添加洗糟山泉水63Kg，得到糖化麦汁。

所述的麦汁煮沸具体过程为：煮沸麦汁后计时60min，初沸后10min加入青岛大花0.06重量份6g，初沸后30min加入青岛大花0.01重量份1g，初沸后60min加入卡斯卡特香花0.06重量份6g，控制麦汁糖度10°P，分离热凝固物，充氧泵入发酵罐澄清麦汁。

所述的无醇啤酒发酵具体过程为：按照2％(V/V)接种制备好的2L液体无醇酵母种子，控制温度16℃，当糖度降到5°P时，添加西姆科酒花0.2重量份20g，封罐；

所述的无醇啤酒后熟具体过程为：待酒液双乙酰降至0.05mg/L以下时，开始降温至4℃，排除底层酵母，继续降温至0℃冷贮7天，即得到酒精度0.41％、酸度2.0％、二氧化碳含量0.50％mass、总醇78mg/L、总醇:总酯＝3.6:1，风味、口感接近传统啤酒。

实施例2

一种无醇啤酒的生产方法，具体步骤包括：

所述的种子制备具体过程为：在无菌操作台上，从活化的试管斜面挑取一环酵母菌种接入pH 5.0、浓度8°P的10mL麦芽汁试管中，将试管放入19℃的恒温培养箱中培养30h，再将麦汁与酵母泥全部转移至100mL麦汁三角烧瓶中，在14℃的恒温培养箱中培养36h，得到种子液；

所述的液体深层发酵具体过程为：取制备好的种子液，按照6％(v/w)的接种量40mL接种于pH 4.6、浓度11°P的800mL麦芽汁摇瓶中，培养温度16℃，摇床转速180r/min，培养时间为20h，检测OD₆₆₀＝1.7时停止培养；

所述步骤(2)中无醇啤酒制备过程如下：

所述的原料准备具体过程为：选取精品麦芽100重量份5Kg、浅色焦香8重量份0.4Kg、红麦芽20重量份1Kg、小麦芽10重量份0.5Kg、青岛大花0.08重量份4g、卡斯卡特香花0.09重量份4.5g和西姆科酒花0.1重量份5g；

所述的麦汁糖化具体过程为：将精品麦芽5Kg、浅色焦香0.4Kg、红麦芽1Kg、小麦芽0.5Kg粉碎，倒入糖化锅内，加入600重量份30Kg山泉水，加热至50℃，保持30min，然后升温至63℃，保持30min，然后升温至72℃，每5min取清液用0.5％碘液检测，至碘液反应无色糖化结束，升温至80℃灭酶，麦汁经过过滤槽过滤，控制麦汁糖度7°P添加洗糟山泉水35Kg，得到糖化麦汁。

所述的麦汁煮沸具体过程为：煮沸麦汁后计时60min，初沸后10min加入青岛大花0.07重量份3.5g，初沸后30min加入青岛大花0.01重量份0.5g，初沸后60min加入卡斯卡特香花0.09重量份4.5g，控制麦汁糖度8°P，分离热凝固物，充氧泵入发酵罐澄清麦汁。

所述的无醇啤酒发酵具体过程为：按照1.6％(V/V)接种制备好的800mL液体无醇酵母种子，控制温度14℃，当糖度降到5°P时，添加西姆科酒花0.1重量份5g，封罐；

所述的无醇啤酒后熟具体过程为：待酒液双乙酰降至0.05mg/L以下时，开始降温至4℃，排除底层酵母，继续降温至0℃冷贮7天，即得到酒精度0.42％、酸度1.0％、二氧化碳含量0.56％mass、总醇65mg/L、总醇:总酯＝4.3:1，有鲜明麦芽和啤酒特有香气，口感纯正的无醇啤酒。

实施例3

一种无醇啤酒的生产方法，具体步骤包括：

所述的种子制备具体过程为：在无菌操作台上，从活化的试管斜面挑取一环酵母菌种接入pH 4.3、浓度11°P的10mL麦芽汁试管中，将试管放入15.6℃的恒温培养箱中培养24h，再将麦汁与酵母泥全部转移至100mL麦汁三角烧瓶中，在19℃的恒温培养箱中培养28h，得到种子液；

所述的液体深层发酵具体过程为：取制备好的种子液，按照10％(v/w)的接种量300mL接种于pH 4.0、浓度10°P的3L麦芽汁摇瓶中，培养温度14℃，摇床转速160r/min，培养时间为25h，检测OD₆₆₀＝2.0时停止培养；

所述步骤(2)中无醇啤酒制备过程如下：

所述的原料准备具体过程为：选取精品麦芽100重量份30Kg、浅色焦香5重量份1.5Kg、红麦芽30重量份8Kg、小麦芽8重量份2.4Kg、青岛大花0.05重量份15g、卡斯卡特香花0.08重量份24g和西姆科酒花0.3重量份80g；

所述的麦汁糖化具体过程为：将精品麦芽30Kg、浅色焦香1.5Kg、红麦芽8Kg、小麦芽2.4Kg粉碎，倒入糖化锅内，加入400重量份120Kg山泉水，加热至52℃，保持30min，然后升温至65℃，保持30min，然后升温至72℃，每5min取清液用0.5％碘液检测，至碘液反应无色糖化结束，升温至80℃灭酶，麦汁经过过滤槽过滤，控制麦汁糖度10°P添加洗糟山泉水200L，得到糖化麦汁。

所述的麦汁煮沸具体过程为：煮沸麦汁后计时60min，初沸后10min加入青岛大花0.04重量份12g，初沸后30min加入青岛大花0.01重量份3g，初沸后60min加入卡斯卡特香花0.08重量份24g，控制麦汁糖度11°P，分离热凝固物，充氧泵入发酵罐澄清麦汁。

所述的无醇啤酒发酵具体过程为：按照1％(V/V)接种制备好的液体3L无醇酵母种子，控制温度19℃，当糖度降到5°P时，添加西姆科酒花0.3重量份80g，封罐；

所述的无醇啤酒后熟具体过程为：待酒液双乙酰降至0.05mg/L以下时，开始降温至4℃，排除底层酵母，继续降温至0℃冷贮7天，即得到酒精度0.38％、酸度1.4％、二氧化碳含量0.60％mass、总醇85mg/L、总醇:总酯＝4.1:1，泡沫洁白细腻丰富，口感纯正的无醇啤酒。

实验例4

以实施例1酿制的无醇啤酒与以实施例1方法制备的普通酿酒酵母液体种子接种实施例1制备无醇啤酒方法中的原料准备、麦汁糖化、麦汁煮沸制备的麦芽汁酿制的对比例普通啤酒，进行对比：

表1实施例1与对比例啤酒的理化检测及品评结果

如表1所述，对比实施例1与对比例可以看出，采用本发明无醇酿酒酵母菌株YJY22-01酿造的无醇啤酒实施例1与普通啤酒对比例，只有酒精度＜0.50％，其余理化指标及品评无明显差别，可以实现减少酒精的摄入、有益于身体健康，还可以满足人们对啤酒口感上的享受。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

序列表

<110> 黄河三角洲京博化工研究院有限公司

<120> 无醇酿酒酵母及利用该菌株酿造无醇啤酒的方法

<130> MP21032782

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1326

<212> DNA

<213> 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)

<400> 1

tgcccccatt gctggttagc gcacggccgt cgggtagacc caactcccat ggtgtgacgg 60

gcggtgtgta caaggcccgg gaacgtattc accgcggcat gctgttccgc gattactagc 120

gattccaact tcatggggtc gagttgcaga ccccaatccg aactgagatg gcttttgggg 180

attaacccac tgtcaccacc attgtagcac gtgtgtagcc caacccgtaa gggccatgag 240

gacttgacgt catccacacc ttcctccgac ttatcatcgg cagttcttcc agagtgccca 300

accaaatgat ggcaactgga agtgtgggtt gcgctcgttg ccggacttaa ccgaacatct 360

cacgacacga gctgacgaca gccatgcagc acctgtctcc aggtcaccga agtgaaagac 420

ccgtctccgg gccggtcctg ggatgtcaag ggttggtaag gttctgcgcg ttgcttcgaa 480

ttaaaccaca tgctccaccg cttgtgcggg cccccgtcaa ttcctttgag ttttaatctt 540

gcgaccgtac tccccaggcg gaatgcttaa tccgttaggt gtgtcaccga acagcatgct 600

gcccgacgac tggcattcat cgtttacggc gtggactacc agggtatcta atcctgtttg 660

ctccccacgc tttcgcacct cagcgtcagt atcgagccag tgagccgcct tcgccactgg 720

tgttcctccg aatatctacg aatttcacct ctacactcgg aattccactc acctctctcg 780

aactccagac cgatagtttt gaaggcagtt ccggggttga gccccgggat ttcaccccca 840

actttccggt ccgcctacgt gcgctttacg cccagtaatt ccgaacaacg ctagccccct 900

ccgtattacc gcggctgctg gcacggagtt agccggggct tcttctgctg gtaccgtcat 960

tatcttccca gctgaaagag ctttacaacc ctagggcctt catcactcac gcggcatggc 1020

tagatcaggg ttgcccccat tgtctaagat tccccactgc tgcctcccgt aggagtctgg 1080

gccgtgtctc agtcccagtg tggctgatca tcctctcaaa ccagctatgg atcgtcggct 1140

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Claims

1.保藏编号为CGMCC NO.24311的酿酒酵母。

2.保藏编号为CGMCC NO.24311的酿酒酵母在酿造无醇啤酒中的应用。

3.酿造无醇啤酒的发酵剂，其特征在于，包括保藏编号为CGMCCNO.24311的酿酒酵母。

4.权利要求3所述的发酵剂的制备方法，其特征在于，培养保藏编号为CGMCC NO.24311的酿酒酵母，收集菌体。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述收集菌体后，还包括重悬菌体制备菌悬液的步骤；或者还包括将菌体与冻干保护剂混合，经冻干制得冻干粉的步骤。

6.一种无醇啤酒，其特征在于，其原料包括：保藏编号为CGMCCNO.24311的酿酒酵母、麦芽、啤酒花和水；

所述麦芽包括：精品麦芽100重量份、浅色焦香5～10重量份、红麦芽20～30重量份、小麦芽5～10重量份；所述啤酒花包括青岛大花0.05～0.08重量份、卡斯卡特香花0.06～0.09重量份和西姆科酒花0.1～0.3重量份；

所述无醇啤酒的酒精度＜0.50％、酸度1.0％～2.0％、二氧化碳含量0.50％mass～0.60％mass、总醇65mg/L～85mg/L、总醇:总酯＝(3.6～4.3):1。

7.权利要求6所述的无醇啤酒的酿造方法，其特征在于，以保藏编号为CGMCC NO.24311的酿酒酵母为菌种进行发酵。

8.根据权利要求7所述的酿造方法，其特征在于，还包括后熟的步骤，所述后熟至酒液双乙酰为0.05mg/L。