CN114703105B - 一种复合益生菌在降血脂或缓解肥胖中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种复合益生菌在降血脂或缓解肥胖中的应用，属于微生物发酵技术领域。本发明公开了一种复合益生菌，包括发酵乳杆菌和凝结芽孢杆菌，所述发酵乳杆菌的保藏编号为CGMCC No.14493；所述凝结芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO：M2017813。发酵乳杆菌菌粉和凝结芽孢杆菌菌粉按照不同质量比复配后制备得到微生物制剂，所得微生物菌剂可以有效的实现降血脂和缓解肥胖的功能，为预防、缓解或治疗血脂升高相关疾病的产品，以及缓解肥胖的产品的制备提供了新的方向和原料。

Description

一种复合益生菌在降血脂或缓解肥胖中的应用

技术领域

本发明涉及微生物发酵技术领域，特别是涉及一种复合益生菌在降血脂或缓解肥胖中的应用。

背景技术

随着人们生活水平的提高，亚健康的人群越来越多，而高血脂患者以及肥胖的人群数量在不断的上涨。血脂过高常常会引发一系列疾病，比如高脂血症、肝脏脂肪变性、肥胖症、冠心病、心肌梗塞等。肥胖的生成与遗传因素和环境因素都有密不可分的关系，其中肠道微生物是调节人体宿主代谢和机体炎症的关键因素。相关研究报道，人类的饮食习惯极大的影响肠道菌群的构成和功能，并且是导致代谢性疾病发生的主要因素。

血脂高或者肥胖已经危害到人类的健康，但是目前能够有效用于控制血脂和肥胖及其引起的相关疾病的药物多种多样，药物主要有中成药和西药，但是中药材和功能性化学组分成本相对较高，导致相应的药物的成本也不断的提高，并且化学组分长期的使用可能对人体产生副作用，这也是导致近些年人们热衷于寻求天然、无毒副作用且能有效的控制血脂和/或肥胖的产品的重要原因之一。

益生菌是调控人体肠道平衡所需的重要微生物，它能够调节肠道微生物种类的多样性，平衡有益菌和有害菌，并且通过增加肠道的蠕动，在代谢过程中产生短链脂肪酸，改善肥胖引起的脂代谢紊乱，帮助缓解肝脏的脂肪积累、高血脂症和慢性炎症等。不同菌株适宜生长的条件存在差异，尤其是想要定植于肠道并起到良好的效果并非简单的将不同菌株进行复配就能实现的，再者考虑到成本、生成工艺条件的控制等因素，目前，有相关某单一菌株用于缓解肥胖或者降血脂方面的应用，或者将单一菌株与其他功能性成分或者中药进行复配后使用，但是并没有将不同菌株进行复配用于降血脂或者缓解肥胖方面应用的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种复合益生菌在降血脂或缓解肥胖中的应用，以解决上述现有技术存在的问题，通过将发酵乳杆菌和凝结芽孢杆菌复配，经过试验验证发现，其能有效的降低血脂和缓解肥胖，为提供天然、无毒副作用的降血脂和缓解肥胖药物的开发提供可新的方向。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种复合益生菌，包括发酵乳杆菌和凝结芽孢杆菌，所述发酵乳杆菌分类命名为Lactobacillus fermentum，保藏编号为CGMCC No.14493，保藏时间为2017年08月04日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；所述凝结芽孢杆菌为凝结芽孢杆菌BC01，分类命名为Bacillus coagulans BC01，保藏编号为CCTCC NO：M2017813，保藏时间为2017年12月21日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉大学。

本发明提供一种微生物菌剂，包括所述的复合益生菌。

优选的是，所述微生物菌剂是由如下方法制备：将发酵乳杆菌和凝结芽孢杆菌分别发酵后，得到发酵乳杆菌发酵液和凝结芽孢杆菌发酵液；之后离心，分别收集菌体，冷冻干燥，得到发酵乳杆菌菌粉和凝结芽孢杆菌菌粉；

将所述发酵乳杆菌菌粉和凝结芽孢杆菌菌粉无菌条件下混合均匀，得到所述微生物菌剂。

优选的是，所述发酵乳杆菌菌粉和凝结芽孢杆菌菌粉的质量比为(1-5):(1-2)。

本发明还提供一种所述的复合益生菌或其次级代谢产物，或所述的微生物菌剂在制备预防、缓解或治疗血脂升高相关疾病的产品中的应用。

优选的是，所述预防、缓解或治疗血脂升高相关疾病包括高脂血症、肝脏脂肪变性或肥胖症。

本发明还提供一种所述的复合益生菌或其次级代谢产物，或所述的微生物菌剂在制备缓解肥胖的药物中的应用。

优选的是，所述缓解肥胖是通过所述复合益生菌或其次级代谢产物，或者所述微生物制剂减少体重、皮下脂肪和/或内脏脂肪的沉积来缓解肥胖。

本发明公开了以下技术效果：

本发明公开了一种由发酵乳杆菌和凝结芽孢杆菌复配形成的复合益生菌，具体将发酵乳杆菌和凝结芽孢杆菌按照不同的配比复配后，制备的微生物菌剂用于测定其在调节血脂和缓解肥胖方面的实验验证，发现该复合益生菌能够实现比现有的降血脂的药物更好的技术效果，并且相比单一菌剂也能实现更好的降低血脂、体内脂肪含量以及缓解肥胖，说明两种菌株能够相互促进，提高控制降血脂或缓解肥胖的作用，为筛选一种天然、无毒害作用的生物制剂提供新的方向。

本发明复配之后能出现显著的效果，一方面由于两种菌都是属于乳杆菌，在营养需求和发酵条件需求方面比较相似，复配后能够迅速的融为一体，平衡各自营养关系；另一方面，本发明提供的凝结芽孢杆菌本身具有抗炎作用，能够在发酵过程中产生一些不利于炎症因子产生的次级代谢产物，而将两种菌株复配之后被饲喂小鼠后，会促使该类次级代谢产物在小鼠体内的定植，然后有利于抑制致病菌的产生，更大程度的扩大有益菌的优势地位，平衡肠道内的菌群，进而利于机体各种代谢通路的进行，使血清中血脂、脏器内脂肪积累处于正常水平，减少血脂升高、脂肪堆积的几率，进而达到控制降血脂和缓解肥胖的目的。总之，本发明按照特定比例将凝结芽孢杆菌和发酵乳杆菌复配后能够显著的防止血脂、体内脂肪的过多积累，有效的降血脂和缓解肥胖。

附图说明

图1为测定的不同分组中在给药处理后的第1-5周小鼠的重量变化；

图2为测定的不同分组中在给药处理后的第1-5周小鼠的增重变化。

具体实施方式

现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。

应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。

除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。

在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见的。本申请说明书和实施例仅是示例性的。

关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。

本发明以下实施例所用的发酵乳杆菌、凝结芽孢杆菌均保藏于善恩康生物科技(苏州)有限公司。

实施例1一种微生物菌剂的制备

(1)发酵乳杆菌的发酵

先将保存的发酵乳杆菌和凝结芽孢杆菌分别用MRS液体培养基(赛默飞)在37℃条件下活化18h，得到活化菌液。

将发酵乳杆菌活化菌液按照接菌量3.5％接种于MRS液体培养基，37℃厌氧培养24h，得到发酵乳杆菌发酵液；将凝结芽孢杆菌按照接菌量4.0％接种于MRS液体培养基，37℃好氧培养24h，得到凝结芽孢杆菌发酵液。

将上述发酵乳杆菌发酵液与凝结芽孢杆菌发酵液，分别于10000rpm离心20min，收集菌体，冷冻干燥，分别得到发酵乳杆菌菌粉和凝结芽孢杆菌菌粉，然后按照质量比1:1、1:1.5、1:2、2:1、3:1、4:1、5:1、3:2、5:2混合均匀，即得微生物菌剂。测定所得微生物菌剂中的总菌量。结果发现：不同配比制备的微生物菌剂中，发酵乳杆菌的活菌量和凝结芽孢杆菌的活菌量均大于等于2.83×10¹⁰cfu/g，详见下表1。

表1

从上表中可见，发酵乳杆菌菌粉和凝结芽孢杆菌菌粉的质量比3:2时，含量量相比其他比例下较低，因此，为了保证最低含量量仍然存在技术效果的基础上，后续功能验证过程中均以发酵乳杆菌菌粉和凝结芽孢杆菌菌粉的质量比3:2混合制备的复合益生菌进行相关验证。

实施例2复合益生菌对正常小鼠体重和血脂水平的影响

取BALB/c小鼠(体重200±20g)，随机分成正常对照组，高脂模型组、药物低剂量组(100mL/kg)、中剂量组(200mL/kg)、高剂量组(300mL/kg)三个剂量组，洛伐他汀10mg/kg阳性对照组，各组随机选取5只小鼠。除正常对照组小鼠喂食基础饲料，其他各组均喂高脂饲料(60％能量来源于脂肪，购自北京科澳协力饲料有限公司)，上述不同组小鼠每天定时投料灌胃，正常对照组和高脂模型组每天用清水灌胃一次，低剂量组、中剂量组和高剂量组每天按照要求剂量复合益生菌的发酵液灌胃一次，连续给药30天，称各组体重；禁食不禁水8h后，内眦静脉丛取血，离心取血清，测定血清中甘油三酯(TG)、胆固醇(TCH)含量；再解剖内脏，摘取肝脏、腹脂称重(上述药物包括实施例1制备的复合益生菌菌粉，还包括分别根据上述实施例1方法制备的发酵乳杆菌菌粉和凝结芽孢杆菌菌粉)。

表2

肝系数(％)＝小鼠肝脏重量/体重×100％；脂肪系数(％)＝小鼠腹脂/体重×100％。

从图1、图2和表2中可以看出，本发明复合益生菌给药后，低剂量组、中剂量组和高剂量组的体重增量和正常对照组相近，但是明显低于高脂模型组，也低于阳性对照组，说明未明显肥胖；而发酵乳杆菌和凝结芽孢杆菌单一的菌粉给药，体重增长率要高于正常对照组，但低于高脂模型组，并且和阳性对照组相近，说明单一菌粉虽然对控制体重有一定效果，但是明显没有复合益生菌发酵液的控制效果好。

本发明复合益生菌发酵液给药后，不同剂量组与阳性对照的肝系数和脂肪系数接近，并且肝系数明显高于高脂模型组，脂肪系数也明显低于高脂模型组，而单一菌种的菌粉不同剂量组的肝系数稍高于高脂模型组，脂肪系数稍低于高脂肪模型组，效果不明显，说明两种菌株复配后能更好的降血脂、降低脂肪含量以及缓解肥胖。

表3

从表3中可以看出，不论是复合益生菌还是单一菌种制备的菌粉，还是正常对照组和阳性对照组，给药后，小鼠体内的TG和TCH含量均低于高脂模型组；同时可以看出，单一菌种的菌粉使用后使用剂量由低到高呈现降低TG和TCH含量的趋势，但是和阳性对照相比并不明显，但是两种菌种复配后却能明显降低TG和TCH含量，说明本发明复合益生菌中两种菌株具有协同促进作用，具有替代现有化学药物成为筛选天然、无毒害作用的生物制剂的潜力。

以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (5)

1.一种微生物菌剂，其特征在于，包括一种复合益生菌，所述复合益生菌为发酵乳杆菌和凝结芽孢杆菌，所述发酵乳杆菌为Lactobacillus fermentum，保藏编号为CGMCCNo.14493，于2017年8月4日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；所述凝结芽孢杆菌为Bacillus coagulans BC01，保藏编号为CCTCC NO：M2017813，于2017年12月21日保藏在中国典型培养物保藏中心；所述发酵乳杆菌和凝结芽孢杆菌的质量比为(1-5):(1-2)。

2.如权利要求1所述的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂是由如下方法制备：将发酵乳杆菌和凝结芽孢杆菌分别发酵后，得到发酵乳杆菌发酵液和凝结芽孢杆菌发酵液；之后离心，分别收集菌体，冷冻干燥，得到发酵乳杆菌菌粉和凝结芽孢杆菌菌粉；

将所述发酵乳杆菌菌粉和凝结芽孢杆菌菌粉无菌条件下混合均匀，得到所述微生物菌剂。

3.一种如权利要求1或2所述的微生物菌剂在制备预防、缓解或治疗血脂升高相关疾病的产品中的应用，其特征在于，所述预防、缓解或治疗血脂升高相关疾病选自高脂血症、肝脏脂肪变性或肥胖症。

4.一种如权利要求1或2所述的微生物菌剂在制备缓解肥胖的药物中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述缓解肥胖是通过所述复合益生菌或者所述微生物制剂减少体重、皮下脂肪和/或内脏脂肪的沉积来缓解肥胖。

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