CN114468124A - 一种防治坏死性肠炎的发酵中草药饲料添加剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种防治坏死性肠炎的发酵中草药饲料添加剂，属于生物饲料技术领域。该添加剂防治坏死性肠炎的药物成分为3‑羟基丁酮。该添加剂是由复方中草药粉经过复合益生菌发酵制得。其中复方中草药粉原料是由川芎、马齿苋和葎草制备而成，复合益生菌是由植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌、粪肠球菌和酿酒酵母组成。本发明所制备的发酵中草药饲料添加剂能有效预防畜禽产气荚膜梭菌导致的坏死性肠炎。
Description
技术领域
本发明属于生物饲料添加剂领域，具体涉及一种预防坏死性肠炎的发酵中药饲料添加剂。
背景技术
畜禽肠道共生菌群中有少量的条件致病菌，主要包括产气荚膜梭菌、沙门氏菌、大肠杆菌和弯曲杆菌，其中一种或多种菌群在肠道增殖失衡是导致肠道疾病的主要原因。近年来，由产气荚膜梭菌失衡导致的肠道坏死性肠炎是单胃肉用动物死亡和经济损失的主要因素。生产中，预防肠道细菌性疾病最有效的药物是抗生素，但是抗生素的副作用大，世界各地相继出台抗生素禁用令。我国农业农村部第194号公告宣布自2020年7月1日起，饲料生产企业停止生产含有促生长类药物饲料添加剂(中药类除外)的商品饲料。禁抗后，随之而来的是肠道细菌性疾病的频发。生物饲料是应对无抗养殖最重要的技术措施，针对肠道条件致病菌，研发功能性生物饲料是解决肠道细菌性疾病的关键。饲料添加剂益生菌是最重要的功能性生物饲料，其不仅能够改善肠道微生态，还可以分解一些酶类，有助于饲料成分的消化。同时，一些中草药富含抑菌成分。但是，现有文献显示，通过发酵工程生产的能够抑制畜禽肠道产气荚膜梭菌的益生菌菌株和中草药混合制剂尚属空白。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种防治坏死性肠炎的发酵中草药饲料添加剂及其制备方法。
本发明所提供的防治坏死性肠炎的发酵中草药饲料添加剂的制备方法，包括下述步骤：1)将川芎、马齿苋和葎草分别粉碎至60-80目，按照比例混合得到复方中草药粉；所述复方中草药粉中各药材的质量百分含量如下：川芎10％-20％、马齿苋50％-70％、葎草20％-30％；
2)将所述复方中草药粉、玉米浆、豆粕与水混合，灭菌，得到复方中草药；所述复方中草药液体中各物质的质量百分含量如下：复方中草药粉0.5％-1％、玉米浆2.5％-4％、豆粕1％-2.5％、余量为水；
3)将复合益生菌与所述复方中草药液体混合均匀，进行发酵培养，得到发酵中草药饲料添加剂。
上述方法步骤1)中，具体的，所述复方中草药粉中各药材的质量百分含量如下：川芎20％、马齿苋50％、葎草30％；或川芎10％、马齿苋70％、葎草20％；或川芎20％、马齿苋60％、葎草20％。
上述方法步骤2)中，所述灭菌的条件具体可为121℃灭菌30min。
上述方法步骤3)中，所述发酵培养的条件可为：30-37℃下发酵3-10d。
上述方法步骤3)中，所述复合物益生菌包括植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。
进一步地，所述复合益生菌中，所述植物乳杆菌、粪肠球菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母的活菌数(CFU)配比为(3-5):(1-4):(1-2):(1-2)；
具体的，所述复合益生菌中，所述植物乳杆菌、粪肠球菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母的活菌数(CFU)配比可为3:4:2:1或4:3:1:2或5:1:2:2。
在本发明的具体实施方式中，所述复合益生菌中的植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)BFC1602；所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)BFC1602在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.13132；
所述复合益生菌中的粪肠球菌为粪肠球菌(Enterococcus faecalis)BFEC180201；所述粪肠球菌(Enterococcus faecalis)BFEC180201在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.16062；
所述复合益生菌中的枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601；所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.13131；
所述复合益生菌中的酿酒酵母具体为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFEC180301；所述酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFEC180301在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.16063。
进一步的，所述步骤3)中，所述复合益生菌以益生菌种子液的形式与所述复方中草药液体混合；得到的混合液中，益生菌种子液的质量百分含量为10％-20％、复方中草药液的质量百分含量为80％-90％。
所述复合益生菌种子液中，各菌以活菌数计，其浓度(CFU/mL)如下：植物乳杆菌3×108-5×108、粪肠球菌1×108-4×108、枯草芽孢杆菌1×108-2×108、酿酒酵母1×108-2×108。
具体的，所述益生菌种子液的制备方法如下：将植物乳杆菌(BFC1602-13132)、粪肠球菌(BFEC180201-16062)、枯草芽孢杆菌(BFC1601-13131)和酿酒酵母(BFEC180301-16063)分别进行菌种活化、一级液体扩大培养、二级液体扩大培养，二级扩大培养液按照活菌数比例植物乳杆菌3×108-5×108、粪肠球菌1×108-4×108、枯草芽孢杆菌1×108-2×108、酿酒酵母1×108-2×108比例混合均匀，制得益生菌种子液。
上述方法制备得到的发酵中草药饲料添加剂也属于本发明的保护范围。所述发酵中草药饲料添加剂中防治坏死性肠炎的药物成分是3-羟基丁酮。
3-羟基丁酮在制备防治坏死性肠炎的药物和/或饲料和/或饲料添加剂中的应用也属于本发明的保护范围。
防治坏死性肠炎的药物和/或饲料和/或饲料添加剂适用于畜禽。
本发明的另一个目的是提供一种防治坏死性肠炎的饲料。
本发明所提供的防治坏死性肠炎的饲料，包括畜禽基础饲料和上述的发酵中草药饲料添加剂。优选的，所述饲料中，发酵中草药饲料添加剂的含量为所述畜禽基础饲料质量的4％-10％。
所述防治坏死性肠炎的饲料适用于畜禽。
本发明的再一个目的是提供前文所述的复合益生菌。
本发明的再一个目的是提供前文所述的复方中草药。
本发明还保护如下任一所述的应用：
(I)所述发酵中草药饲料添加剂或所述饲料在防治畜禽坏死性肠炎中的应用；
(II)所述发酵中草药饲料添加剂或所述饲料在抑制畜禽产气荚膜梭菌感染中的应用；
(III)所述复合益生菌在制备所述发酵中草药饲料添加剂或所述饲料中的应用；
(IIII)所述复方中草药在制备所述发酵中草药饲料添加剂或所述饲料中的应用。
本发明中所述坏死性肠炎可由产气荚膜梭菌感染引起。
本发明中所述的畜禽包括鸡、獭兔等。
本发明的有益效果：
(1)复合益生菌植物乳杆菌、粪肠球菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母活菌及其发酵过程中代谢产物是调节肠道菌群平衡，改善肠道健康的主要物质。植物乳杆菌和粪肠球菌利用与小肠更高的亲和性与有害菌竞争小肠上的结合位点，其代谢产物乳酸能降低小肠pH，且可以合成细菌素和过氧化氢等抑菌物质来抑制有害菌生长，使肠道微生物区系更加健康稳定。枯草芽孢杆菌可分解肠道中碳水化合物并产生短链脂肪酸，促进肠道发育，其产生的抗菌肽还有抗菌作用。酿酒酵母中超氧化物歧化酶可催化超氧阴离子的歧化反应，消除超氧阴离子的毒性，对机体具有保护作用。这些益生菌菌株代谢产物还具有杀死产气荚膜梭菌α-毒素的特异功能，以及含有海藻糖、维生素、矿物质、三磷酸腺苷、谷胱甘肽、核酸等家禽需要的营养与功能成分。本发明复合益生菌的这些特异性和普通性功能对畜禽坏死性肠炎具有良好的预防效果。
(2)经过复合益生菌发酵后，中草药物理结构发生改变，化学成分被释放出来，3-羟基丁酮成分含量提高8-10倍，极大地增强了抑菌和防治腹泻的效果。中草药川芎富含3-羟基丁酮，具有抑制产气荚膜梭菌作用。马齿苋和葎草的主要功能为防治腹泻，腹泻是产气荚膜梭菌致病的早期临床症状。马齿苋含有多种化学成分，主要为多糖、有机酸、黄酮、萜类等，具有抗菌作用，其作用机理为下调肠道相关炎症因子的表达减轻肠道炎症反应，调节血液Cl-、Ca2+含量恢复其电解质平衡。葎草含有木犀草素、胆碱、丁香烯、β-葎草烯、大波斯菊苷、木犀草素-7-葡萄糖苷、牡荆素等成分，具有预防腹泻、清热解毒、抗菌消炎等作用。中草药联合益生菌发酵对畜禽坏死性肠炎预防效果显著。
生物材料保藏说明
生物材料的分类命名：植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)
生物材料的菌株编号：BFC1602
生物材料的保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
生物材料的保藏单位简称：CGMCC
生物材料的保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101
生物材料的保藏日期：2016年10月21日
生物材料的保藏中心登记入册编号：CGMCC No.13132
生物材料保藏说明
生物材料的分类命名：粪肠球菌(Enterococcus faecalis)
生物材料的菌株编号：BFEC180201
生物材料的保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
生物材料的保藏单位简称：CGMCC
生物材料的保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101
生物材料的保藏日期：2018年7月5日
生物材料的保藏中心登记入册编号：CGMCC No.16062
生物材料保藏说明
生物材料的分类命名：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)
生物材料的菌株编号：BFC1601
生物材料的保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
生物材料的保藏单位简称：CGMCC
生物材料的保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101
生物材料的保藏日期：2016年10月21日
生物材料的保藏中心登记入册编号：CGMCC No.13131
生物材料保藏说明
生物材料的分类命名：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)
生物材料的菌株编号：BFEC180301
生物材料的保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
生物材料的保藏单位简称：CGMCC
生物材料的保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101
生物材料的保藏日期：2018年7月5日
生物材料的保藏中心登记入册编号：CGMCC No.16063
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明并不限于以下实施例。所述方法如无特别说明均为常规方法。所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径获得。
本发明中使用的复合益生菌是由植物乳杆菌(BFC1602-13132)、粪肠球菌(BFEC180201-16062)、枯草芽孢杆菌(BFC1601-13131)和酿酒酵母(BFEC180301-16063)按比例混合，得到的复合益生菌。
枯草芽孢杆菌(BFC1601-13131)：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.13131。
植物乳杆酸菌(BFC1602-13132)：植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)BFC1602保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.13132。
粪肠球菌(BFEC180201-16062)：粪肠球菌(Enterococcus faecalis)BFEC180201保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.16062。
酿酒酵母(BFEC180301-16063)：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFEC180301保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.16063。
下述实施例中3-羟基丁酮的测定方法参考文献：王诗卉,罗秋玲,刘佳,等.高产3-羟基丁酮解淀粉芽孢杆菌的选育及发酵优化.生物工程学报,2018,34(5):803-811)
实施例1
1.复合益生菌种子液的制备
1)各菌种分别摇瓶培养，植物乳杆菌和粪肠球菌使用MRS培养液进行培养，pH6.5，121℃高压灭菌30min，37℃培养3d。枯草芽孢杆菌使用LB培养基培养，pH7.5，121℃高压灭菌30min，37℃培养15h。酿酒酵母使用YPD培养基，121℃高压灭菌30min，pH5.0，30℃培养24h。
2)植物乳杆菌、粪肠球菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母分别逐步进行一级(50L罐)、二级(500L罐)液体扩大培养，接种量为15％；
3)将各菌种二级扩大培养液按照比例混合，得到复合益生菌种子液，其中，所述复合益生菌种子液中，各菌以活菌数计，其浓度(CFU/mL)如下：植物乳杆菌3×108、粪肠球菌4×108、枯草芽孢杆菌2×108和酿酒酵母1×108。
2.复方中草药的制备
1)将中草药川芎、马齿苋、葎草粉碎至60目；
2)按中草药粉按照下述质量百分比混匀，即川芎20％、马齿苋50％、葎草30％，三维混合得复方中草药粉；
3.中草药发酵液得的制备
1)按照以下质量百分比将复方中草药粉0.5％、玉米浆2.5％、豆粕1％、水补足100％混合，121℃灭菌30min，制得复方中草药液体；
2)以益生菌种子液10％和复方中草药液体90％的质量百分比混匀，在30℃下发酵10d；
3)罐装，即制得发酵中草药饲料添加剂。
4)本实施例制得的发酵中草药饲料添加剂中3-羟基丁酮含量为1354mg/kg。
实施例2
1.复合益生菌种子液的制备
1)各菌种分别摇瓶培养，植物乳杆菌和粪肠球菌使用MRS培养液进行培养，pH6.5，121℃高压灭菌30min，37℃培养3d。枯草芽孢杆菌使用LB培养基培养，pH7.5，121℃高压灭菌30min，37℃培养15h。酿酒酵母使用YPD培养基，121℃高压灭菌30min，pH5.0，30℃培养24h。
2)植物乳杆菌、粪肠球菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母分别逐步进行一级(50L罐)、二级(500L罐)液体扩大培养，接种量为15％；
3)将各菌种二级扩大培养液按照比例混合，得到复合益生菌种子液，其中，所述复合益生菌种子液中，各菌以活菌数计，其浓度(CFU/mL)如下：植物乳杆菌4×108、粪肠球菌3×108、枯草芽孢杆菌1×108和酿酒酵母2×108。
2.复方中草药的制备
1)将中草药川芎、马齿苋、葎草粉碎至70目；
2)中草药粉按照质量百分比混匀，即川芎10％、马齿苋70％、葎草20％，三维混合得中复方草药粉；
3.中草药发酵液得的制备
1)按照以下质量百分比将复方中草药粉1％、玉米浆4％、豆粕2.5％、水100％混合，121℃灭菌30min，制得复方中草药液体；
2)以益生菌种子液15％和复方中草药液体85％的质量百分比混匀，在35℃下发酵5d；
3)罐装，即制得发酵中草药饲料添加剂。
4)制得的发酵中草药饲料添加剂3-羟基丁酮含量为1571mg/kg。
实施例3
1.复合益生菌种子液的制备
1)各菌种分别摇瓶培养，植物乳杆菌和粪肠球菌使用MRS培养液进行培养，pH6.5，120℃高压灭菌30min，37℃培养3d。枯草芽孢杆菌使用LB培养基培养，pH7.5，121℃高压灭菌30min，37℃培养15h。酿酒酵母使用YPD培养基，121℃高压灭菌30min，pH5.0，30℃培养24h。
2)植物乳杆菌、粪肠球菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母分别逐步进行一级(50L罐)、二级(500L罐)液体扩大培养，接种量为15％；
3)将各菌种二级扩大培养液按照比例混合，得到复合益生菌种子液，其中，所述复合益生菌种子液中，各菌以活菌数计，其浓度(CFU/mL)如下：植物乳杆菌5×108、粪肠球菌1×108、枯草芽孢杆菌2×108和酿酒酵母2×108。
2.复方中草药的制备
1)将中草药川芎、马齿苋、葎草粉碎至80目；
2)将中草药粉按照质量百分比混匀，即川芎20％、马齿苋60％、葎草20％，三维混合得复方中草药粉；
3.中草药发酵液的制备
1)按照以下质量百分比将复方中草药粉1％、玉米浆3％、豆粕2％、水100％混合，121℃灭菌30min，制得复方中草药液体；
2)以益生菌种子液20％和复方中草药液体80％的质量百分比混匀，在37℃下发酵3d；
3)罐装，即制得发酵中草药饲料添加剂。
4)制得的发酵中草药饲料添加剂3-羟基丁酮含量为1496mg/kg。
对照例1
分别重复实施例中1-3步骤，但是，发酵时间均设置为0，制得未发酵中草药饲料添加剂1-3，药物成分3-羟基丁酮含量分别为136、147和182mg/kg。
对照例2
分别重复实施例中1-3步骤，但是，发酵用菌种选用本发明菌株以外的其他菌株，包括枯草芽孢杆菌(CGMCC No.18912)、植物乳杆酸菌(CCTCC M2016136)、粪肠球菌(CGMCCNo.18916)、酿酒酵母(CGMCC No.13133)。
制得发酵中草药饲料添加剂，药物成分3-羟基丁酮含量分别为311、373和324mg/kg。
对照例3
设置本对照例3，以对比本发明有效药物成分3-羟基丁酮对防治坏死性肠炎的防治效果。将180只10日龄肉仔鸡随机等分为对照组、感染组和药物组，基础饲料为市售任一品牌肉仔鸡饲料，3-羟基丁酮，纯度≥98％。对照组饲喂基础饲料，感染组饲喂基础饲料并实施产气荚膜梭菌感染(106CFU/只)，药物组实施产气荚膜梭菌感染(106CFU/只)并饲喂基础饲料和3-羟基丁酮，3-羟基丁酮添加量为每公斤饲料30mg。试验第9-10天，计算鸡成活率和粪中产气荚膜梭菌数量，计算两天平均值。试验结果见表1。
表1.3-羟基丁酮防治坏死性肠炎效果对比试验
从表1可知，药物组较感染组显著提高鸡成活率，降低粪中产气荚膜梭菌数，表明3-羟基丁酮防治鸡坏死性肠炎效果显著。
试验例1
将420只14日龄健康肉用仔鸡随机等分为7组，即对照组、感染组、益生菌组(添加本发明复合益生菌，添加量3×108CFU/kg，植物乳杆菌、粪肠球菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母的比例(CFU)为3:4:2:1)、中草药组(添加本发明未发酵复方中草药粉(对照例1制备的产品，复方中草药粉组成同实施例1)，添加量4％)和试验组1-3分别添加本发明实施例1-3制备的发酵中草药饲料添加剂，添加量分别为4％、5％、6％。于试验第一天实施产气荚膜梭菌感染(106CFU/只)。试验期为14d，即28日龄试验结束。试验期间，自由采食，基础饲料来自市售全价肉鸡前期饲料。以上各组试验结果见表2。
表2.实施例1-3对防治肉鸡坏死性肠炎效果比较
从表2可知，在产气荚膜梭菌感染情况下，使用本发明添加剂的试验组1-3与感染组相比，肉鸡体重提高30.0％-32.3％；与益生菌或中草药组相比，使用本发明添加剂的试验组1-3肉鸡体重提高13.4％-15.4％。同时，与感染组相比，试验组1-3成活率提高32.4％-43.1％；每克粪中产气荚膜梭菌数量减少4.74-4.89Log10CFU。结果表明，本发明发酵中草药饲料添加剂能有效抑制产气荚膜梭菌感染，显著提高肉鸡体重和成活率。
试验例2
选择420只体重一致、健康断奶獭兔随机等分为7组，即对照组、感染组、益生菌组(添加本发明复合益生菌，添加量3×108CFU/kg，植物乳杆菌、粪肠球菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母的比例(CFU)为3:4:2:1.)、中草药组(添加本发明未发酵复方中草药粉(对照例1制备的产品，复方中草药粉组成同实施例1)，添加量6％)和试验组1-3分别添加本发明实施例1-3制备的发酵中草药饲料添加剂，添加量分别为6％、8％、10％。于试验第一天实施产气荚膜梭菌感染(108CFU/只)，试验期为7d。试验期间，自由采食，基础饲料来自市售全价肉兔饲料。以上各组试验结果见表3。
表3.实施例1-3对防治獭兔坏死性肠炎效果比较
从表3可知，在产气荚膜梭菌感染情况下，使用本发明添加剂的试验组1-3与感染组相比，獭兔体重提高27.4％-30.3％；与益生菌或中草药组相比，使用本发明添加剂的试验组1-3獭兔体重提高9.5％-12.1％。同时，与感染组相比，试验组1-3成活率提高25.1％-29.6％；每克粪中产气荚膜梭菌数量减少6.04-6.18Log10CFU。结果表明，本发明发酵中草药饲料添加剂能有效抑制产气荚膜梭菌感染，显著提高獭兔体重和成活率。
Claims (10)
1.一种发酵中草药饲料添加剂的制备方法，是由复方中草药经过复合益生菌发酵制得；
其中，所述复方中草药由下述质量百分含量的组分组成：川芎10％-20％、马齿苋50％-70％、葎草20％-30％；
所述复合益生菌包括植物乳杆菌、粪肠球菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
所述步骤3)中，所述复合益生菌中，所述植物乳杆菌、粪肠球菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母的活菌数(CFU)配比为(3-5):(1-4):(1-2):(1-2)；
进一步的，所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)BFC1602；所述植物乳杆菌(Lactobacillus)BFC1602在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.13132；
所述粪肠球菌为粪肠球菌(Enterococcus faecalis)BFEC180201；所述粪肠球菌(Enterococcus faecalis)BFEC180201在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.16062；
所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601；所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BFC1601在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.13131；
所述酿酒酵母具体为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFEC180301；所述酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BFEC180301在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.16063。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述方法包括下述步骤：
1)将川芎、马齿苋和葎草分别粉碎至60-80目，按照比例混合得到复方中草药粉；
2)将所述复方中草药粉、玉米浆、豆粕与水混合，灭菌，得到复方中草药液体；所述复方中草药液体中各物质的质量百分含量如下：复方中草药粉0.5％-1％、玉米浆2.5％-4％、豆粕1％-2.5％、余量为水；
3)将复合益生菌与所述复方中草药液体混合均匀，进行发酵培养，得到发酵中草药饲料添加剂。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述灭菌的条件为121℃灭菌30min；
所述步骤3)中，所述发酵培养的条件为：30-37℃下发酵3-10d。
5.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述复合益生菌以复合益生菌种子液的形式与所述复方中草药液体混合；得到的混合液中，复合益生菌种子液的质量百分含量为10％-20％、复方中草药液的质量百分含量为80％-90％；
所述益生菌种子液中，各菌以活菌数计，其浓度(CFU/mL)如下：植物乳杆菌3×108-5×108、粪肠球菌1×108-4×108、枯草芽孢杆菌1×108-2×108、酿酒酵母1×108-2×108。
6.权利要求1-5中任一项所述方法制备得到的发酵中草药饲料添加剂。
7.一种防治坏死性肠炎的饲料，包括基础饲料和权利要求6所述的发酵中草药饲料添加剂；优选的，所述饲料中，所述发酵中草药饲料添加剂的质量为所述基础饲料质量的4％-10％；
优选的，所述防治坏死性肠炎的饲料适用于畜禽。
8.权利要求1或2中所述的复方中草药，或权利要求1或2中所述的复合益生菌。
9.如下任一所述的应用：
(I)权利要求6所述的发酵中草药饲料添加剂或权利要求7所述的饲料在防治畜禽坏死性肠炎中的应用；
(II)权利要求6所述的发酵中草药饲料添加剂或权利要求7所述的饲料在抑制畜禽产气荚膜梭菌感染中的应用；
(III)权利要求8所述的复方中草药在制备权利要求6所述的发酵中草药饲料添加剂或权利要求7所述的饲料中的应用。
(IIII)权利要求8所述的复合益生菌在制备权利要求6所述的发酵中草药饲料添加剂或权利要求7所述的饲料中的应用。
10.3-羟基丁酮在制备防治畜禽坏死性肠炎的药物和/或饲料和/或饲料添加剂中的应用。
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