CN114984111A - 牡荆提取物在制备坏死性肠炎预防或治疗药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了牡荆提取物在制备坏死性肠炎预防或治疗药物中的应用，在本发明中，发明人通过试验发现牡荆提取物能够显著抑制产气荚膜梭菌，最小抑菌浓度可以达到7.81μg/mL，并可通过口服饲喂的方式提高动物生长性能、增强免疫力、降低产气荚膜梭菌定植能力、增加各肠段肠绒毛长度、并通过免疫因子表达和IgA和IgG调节来降低坏死性肠炎的发生或治疗坏死性肠炎。

Description

牡荆提取物在制备坏死性肠炎预防或治疗药物中的应用
技术领域
本发明属于兽用药物及饲料添加剂领域，具体涉及牡荆提取物在制备坏死性肠炎预防或治疗药物中的应用。
背景技术
牡荆(Vitex negundo var.cannabifolia.)是牡荆属马鞭草科灌木或小乔木。叶对生，掌状复叶，小叶片披针形或椭圆状披针形，顶端渐尖，基部楔形，边缘有粗锯齿，表面绿色，背面淡绿色，通常被柔毛。圆锥花序顶生，花冠淡紫色。果实近球形，黑色。6～7月开花，8～11月结果。广泛分布于中国华东各省及河北、湖南、湖北、广东、广西、四川、贵州、云南。
牡荆属(Vitex)植物众多，是一种传统医药植物，牡荆中主要有木脂素类、黄酮类、二萜、三萜、环烯醚萜类等化合物，有抗炎镇痛、抗氧化、抗肿瘤、镇咳平喘、抗菌等作用。虽然牡荆分布广泛，一直有作为药用植物的历史，但目前对牡荆属植物的研究多集中于蔓荆(V.trifolia)、黄荆(V.negundo)、穗花牡荆(V.agnus-casyus)，而对牡荆的研究较少，已有的研究主要集中在化学成分的研究与在医学上的应用研究，未见适用于养殖业的研究。
发明内容
本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出牡荆提取物在制备坏死性肠炎预防或治疗药物中的应用，发明人发现，通过向动物饲喂一定量的牡荆提取物能够显著起到预防和治疗坏死性肠炎的效果，而且并未发现该物质对于动物安全性和生长情况的影响，可以有效作为饲料添加剂或相关治疗或预防药物用于动物的饲喂。
本发明的第一个方面，提供一种组合物，所述组合物中含有牡荆提取物。
根据本发明的第一个方面，在本发明的一些实施方式中，所述牡荆提取物为牡荆全株的醇提物。
牡荆所具有的广泛药理作用，在当前养殖业减抗替抗的发展方向下，是一种可作为抗生素的有效替代品，尤其是作为植物饲料添加剂，将在养殖业中产生极大的应用前景。牡荆属植物具有多种药理活性，尤其总黄酮含量丰富，能够基于其开发新型饲料添加剂或新型兽药。发明人为了进一步展示其在养殖业上应用的可行性及安全性，通过对牡荆进行提取加工获得牡荆提取物，并通过体外抑菌实验确定牡荆提取物的抑菌能力；通过建立坏死性肠炎模型，研究牡荆醇提液抗腹泻能力及其促生长能力，为牡荆做为饲料添加剂或新型兽药提供基础理论支持。
在本发明的一些实施方式中，所述醇包括甲醇、乙醇。
在本发明的一些实施方式中，所述醇为乙醇。
在本发明的一些实施方式中，所述醇的质量浓度为55～65％。
在本发明的一些实施方式中，所述醇的质量浓度为60％
在本发明的一些实施方式中，发明人发现牡荆提取物中富含多种有效活性成分(66种化合物)，具体组成如表2所示。其中，通过文献可鉴定的化合物为22中，其中黄酮类化合物有11种，酚酸类化合物有8种，环烯醚萜类3种。
本发明的第二个方面，提供一种牡荆提取物的制备方法，包括如下步骤：使用醇采用加热提取牡荆全株。
在本发明的一些实施方式中，所采用的加热提取方法具体为加热回流法，当然，本领域技术人员也可以根据实际使用需求，采用其他的加热醇提法进行提取，以获得相同的提取物组成。
根据本发明的第二个方面，在本发明的一些实施方式中，牡荆全株与醇的料液比为1g:30～40mL。
在本发明的一些实施方式中，牡荆全株与醇的料液比为1g：35mL。
在本发明的一些实施方式中，提取温度为45～55℃。
在本发明的一些实施方式中，提取温度为50℃。
在本发明的一些实施方式中，醇的质量浓度为55～65％。
在本发明的一些实施方式中，醇的质量浓度为60％。
在本发明的一些实施方式中，所述制备方法具体为：采用加热回流法，使用60％质量浓度的乙醇提取经破碎后的牡荆全株，牡荆与乙醇的料液比为1g：35mL，提取时间2.5h，提取温度50℃。
在本发明的一些实施方式中，发明人发现上述制备方法获得的牡荆提取物中富含多种有效活性成分(66种化合物)，具体组成如表2所示。其中，通过文献可鉴定的化合物为22中，其中黄酮类化合物有11种，酚酸类化合物有8种，环烯醚萜类3种。
本发明的第三个方面，提供本发明第一个方面所述的组合物在制备消杀灭菌产品中的应用。
在本发明的一些实施方式中，所述消杀灭菌产品用于抑制产气荚膜梭菌。
在本发明中，发明人采用本领域常规的抑菌圈法测定上述牡荆提取物对于产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的抑菌效果，发现牡荆提取物对产气荚膜梭菌有较好抑制效果，最小抑菌浓度为7.81μg/mL。
本发明的第四个方面，提供本发明第一个方面所述的组合物在制备预防坏死性肠炎的药物中的应用。
在本发明的一些实施方式中，所述组合物中的牡荆提取物的浓度为0.5～1.5g/mL。
在本发明的一些实施方式中，所述组合物中的牡荆提取物的浓度为1g/mL。
在本发明的一些实施方式中，以鸡的体重(kg)计，所述牡荆提取物的给药量为3～15g。
在本发明的一些实施方式中，以鸡的体重(kg)计，所述牡荆提取物的给药量为4～12g。
当然，本领域技术人员也可以根据实际使用对象，按照不同动物之间的给药量换算比例，调整给药量进行给药，可选择的适用对象包括但不限于鸡。
在本发明的一些实施方式中，所述使用对象为家禽类。
以植物提取物进行减抗替抗是一种有效的方法。通过在饲料中少量混入特定的植物提取物或其干粉，可以提高饲料适口性、动物机体免疫功能、生产性能，从而做到防病抗病、提高生产性能、改善肉类品质。在本发明中，发明人采用牡荆提取物对试验鸡坏死性肠炎模型进行预防研究，通过计算试验鸡的生长性能，ELISA实验检测试验鸡免疫水平的表达，qPCR法检测肠道内细胞因子TNF-α、IL-8、IL-17A、IL-1β的表达量，以及通过制作病理组织切片，镜下观察试验鸡各肠段形态结果变化，发现牡荆提取物对产气荚膜梭菌感染引发的坏死性肠炎的预防效果，证明了牡荆提取物无安全性问题，且能有效预防坏死性肠炎，为后续的临床应用提供理论基础。
在本发明实施例中，使用牡荆提取物在预防产气荚膜梭菌感染导致的坏死性肠炎时，发明人发现牡荆提取物在面对产气荚膜梭菌感染时，能够显著提高动物生长性能；在感染前期提高免疫器官的重量，增强免疫力；同时，还会在感染前期增加杯状细胞的数量，保护肠道不被产气荚膜梭菌定植，以降低产气荚膜梭菌定植造成的肠炎损伤，而且，使用牡荆提取物能被显著增加各肠段肠绒毛长度，且在不影响免疫因子表达的基础上，显著提高机体IgA和IgG的浓度，加强机体的免疫能力。从而对于预防产气荚膜梭菌感染的坏死性肠炎上起到了积极的作用。
本发明的第五个方面，提供本发明第一个方面所述的组合物在制备治疗坏死性肠炎的药物中的应用。
在本发明的一些实施方式中，所述组合物中的牡荆提取物的浓度为0.5～1.5g/mL。
在本发明的一些实施方式中，所述组合物中的牡荆提取物的浓度为1g/mL。
在本发明的一些实施方式中，以鸡的体重(kg)计，所述牡荆提取物的给药量为3～15g。
在本发明的一些实施方式中，以鸡的体重(kg)计，所述牡荆提取物的给药量为4～12g。
当然，本领域技术人员也可以根据实际使用对象，按照不同动物之间的给药量换算比例，调整给药量进行给药，可选择的适用对象包括但不限于鸡。
在本发明的一些实施方式中，所述使用对象为家禽类。
在本发明中，发明人采用牡荆提取物对试验鸡坏死性肠炎模型进行了治疗方面的研究，通过计算试验鸡的生长性能，ELISA实验检测试验鸡免疫水平的表达，qPCR法检测肠道内细胞因子TNF-α、IL-8、IL-17A、IL-1β的表达量，以及通过制作病理组织切片，镜下观察试验鸡各肠段形态结果变化，发现牡荆提取物对产气荚膜梭菌感染引发的坏死性肠炎具有较好的治疗作用，同时证明了治疗浓度下的牡荆提取物无安全性问题，为后续的临床应用提供理论基础。
在本发明实施例中，使用牡荆提取物在治疗产气荚膜梭菌感染导致的坏死性肠炎时，发明人发现牡荆提取物在治疗坏死性肠炎时，能够在患病早期提高免疫器官的重量，增强免疫力。而且还发现，牡荆提取物虽然和相关阳性药物一样，对十二指肠的损伤治疗效果不明显，但在对空肠和回肠的损伤有良好的治疗能力。而且，其对各肠段肠绒毛长度的增加效果显著。早治疗前期，可以促进炎症反应的发生，减短炎症进程，同时还能有效提高IgG的浓度，加强机体的免疫能力。可见牡荆提取物在治疗产气荚膜梭菌感染导致的坏死性肠炎上有积极的作用。
本发明的有益效果是：
1.本发明提供了牡荆提取物在抑制产气荚膜梭菌中的应用，发明人通过试验发现牡荆提取物对产气荚膜梭菌有较好抑制效果，最小抑菌浓度为7.81μg/mL。
2.本发明还提供了牡荆提取物在治疗和预防坏死性肠炎中的应用，发明人通过饲喂特定量的牡荆提取物能够通过提高动物生长性能、增强免疫力、降低产气荚膜梭菌定植能力、增加各肠段肠绒毛长度、并通过免疫因子表达和IgA和IgG调节来降低坏死性肠炎的发生或治疗坏死性肠炎。
附图说明
图1为UPLC-MS分析实施例中制备得到的牡荆提取物的化学成分的正离子流图。
图2为UPLC-MS分析实施例中制备得到的牡荆提取物的化学成分的负离子流图。
图3为不同组对坏死性肠炎预防试验中对第14日龄试验鸡肠道病理变化的影响对比图。
图4为不同组对坏死性肠炎预防试验中对第21日龄试验鸡肠道病理变化的影响对比图。
图5为不同组对坏死性肠炎治疗试验中对第21日龄试验鸡肠道病理变化的影响对比图。
图6为不同组对坏死性肠炎治疗试验中对第28日龄试验鸡肠道病理变化的影响对比图。
具体实施方式
为了使本发明的发明目的、技术方案及其技术效果更加清晰，以下结合具体实施方式，对本发明进行进一步详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的具体实施方式仅仅是为了解释本发明，并非为了限定本发明。
所使用的实验材料和试剂，若无特别说明，均为常规可从商业途径所获得的耗材和试剂。
牡荆提取物的获得
在下述实施例中，所用牡荆提取物的制备方法为：
采用加热回流法，使用60％质量浓度的乙醇提取经破碎后的牡荆全株(采自广东省河源市，经华南农业大学郭世宁教授鉴定为马鞭草科牡荆属植物牡荆)，牡荆与乙醇的料液比为1g：35mL，提取时间2.5h，提取温度50℃。
为验证提取工艺的稳定性，试验重复三次。
结果如表1所示。
表1牡荆提取物产率
Figure BDA0003676062550000041
结果发现，通过上述提取工艺，能被稳定获得45mg/g以上的牡荆提取物，且制备工艺简单，具有较好的重复性。
牡荆提取物的成分鉴定
使用UPLC-MS分析上述实施例中制备得到的牡荆提取物的化学成分，采用正负离子扫描模式，其正、负离子流图分别如图1和图2所示。
通过对一级质谱数据进行分析，在牡荆提取物中共检测出66种化合物的信息，主要包括酚酸类、黄酮类以及环烯醚萜类等化合物。结合二级质谱数据、Mass Bank数据库以及参考文献等共确定了其中22种化合物的结构信息(如表2所示)，其中黄酮类化合物有11种，酚酸类化合物有8种，环烯醚萜类3种。
表2牡荆提取物中的化合物离子结构信息
Figure BDA0003676062550000042
Figure BDA0003676062550000051
Figure BDA0003676062550000061
Figure BDA0003676062550000071
可以发现，通过液质联用技术鉴定牡荆提取物中的化学成分，结果发现牡荆中主要含有的活性物质有黄酮类、酚酸类、环烯醚萜类等化合物。
牡荆提取物的抑菌效果
取上述实施例中制备得到的牡荆提取物，检测其对于产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)的抑菌效果。
其中，抑菌效果采用微量二倍稀释法测定MIC，所用产气荚膜梭菌的菌株编号为CVCC52，具体试验方法为：
取产气荚膜梭菌在市售FT培养基中培养活化，活化后制成活菌数为1×106cfu/mL的菌悬液。取96孔板，加入牡荆提取液100μL，按2倍稀释原则逐级稀释至250、125、62.5、31.25、15.63、7.81和3.91μg/mL。然后每孔加入100μL上述菌悬液。同时设置阴性对照组和空白对照组。37℃厌氧孵育24h，观察菌落生长。
结果如表3所示。
表3牡荆提取物对产气荚膜梭菌的最小抑菌浓度(MIC)
药物浓度(μg/mL) 250 125 62.5 31.25 15.63 7.81 3.91
产气荚膜梭菌生长情况 － － － － － － +
其中，“+”表示有菌落生长，“－”表示无菌生长。
可以发现，牡荆提取物对产气荚膜梭菌有较好抑制效果，最小抑菌浓度为7.81μg/mL。
牡荆提取物对坏死性肠炎预防效果
在本实施例中，取上述实施例中制备得到的牡荆提取物测试其对坏死性肠炎预防效果，具体试验步骤如下：
取1日龄试验鸡150只，正常饲喂配合饲料至7日龄，在经检查无异常后逐一称重，并随机分为5组(空白对照组、阴性对照组、牡荆提取物低剂量组、牡荆提取物中剂量组、牡荆提取物高剂量组)，每组三个重复，每个重复10只。除空白对照组外，其他各组改为饲喂高蛋白饲料，各组均自由采食至试验结束。坏死性肠炎的造模采用上述产气荚膜梭菌菌液，攻毒剂量5×109cfu/次/d。其中，所用牡荆提取物的浓度浓缩至生药浓度为1g/mL备用。
具体分组情况如表4所示。
表4试验鸡分组情况及处理方法
Figure BDA0003676062550000081
试验期间每日观察试验鸡的精神状态、临床症状、排便、采食等情况。
在试验鸡第7、14、21、28、42日龄上午7:00～9:00对试验鸡进行空腹称重并记录。记录各阶段采食量。结束给药后的第1d、7d进行采样。心脏非抗凝采血5mL，2000rpm/min离心10min得到血清。采血结束后，处死解剖，称取免疫器官的重量。各剪取十二指肠、空肠和回肠3cm放入装有4％多聚甲醛的EP管内固定保存，用于组织学检查。刮取小肠粘膜2mL。
1.牡荆提取物对生长性能的影响：
通过记录鸡只在第7、14、21、28、42日龄的空腹称重量，以及阶段的给料量及剩料量，计算平均日采食量、平均日增重和料重比，计算公式如下：
Figure BDA0003676062550000082
Figure BDA0003676062550000083
Figure BDA0003676062550000084
结果如表5所示。
表5牡荆提取物对生长性能的影响
Figure BDA0003676062550000085
Figure BDA0003676062550000091
同行相比，不标字母或字母相同表示差异不显著(P>0.05)，字母不相同表示差异显著(P<0.05)。大写字母表示差异极显著(P＜0.01)。
可以发现，给药结束后第1d(第14日龄)，与空白对照组相比，阴性对照组的生长性能降低，平均日采食量极显著降低(P＜0.01)。与阴性对照组相比，低中高剂量组平均日增重分别提高了19.14％、16.10％、19.04％，但差异不显著，低中高剂量组平均日采食量分别提高了16.90％(P＜0.01)、6.94％、19.45％(P＜0.01)，三个剂量组料重比分别有所降低，但差异不显著。
给药结束后第7d(第21日龄)，与空白对照组相比，阴性对照组的生长性能降低，平均日增重显著降低(P＜0.05)，料重比显著增加(P＜0.05)。与阴性对照组相比，低剂量组平均日增重和平均日采食量均有所降低，中高剂量组平均日增重分别提高了27.60％、18.37％，中高剂量组平均日采食量分别提高了1.49％、7.64％，但差异均不显著，低中高剂量组料重比分别降低了0.84％、21.85％、10.08％。
2.牡荆提取物对免疫器官指数的影响：
解剖后分离脾脏、法氏囊和胸腺等免疫器官，用滤纸将表面水分吸干，剥离多余的组织，利用分析天平称重，根据免疫器官重量与体重之比计算免疫器官指数，计算公式如下：
Figure BDA0003676062550000092
结果如表6所示。
表6牡荆提取物对免疫器官指数的影响
Figure BDA0003676062550000093
同行相比，不标字母或字母相同表示差异不显著(P>0.05)，字母不相同表示差异显著(P<0.05)。大写字母表示差异极显著(P＜0.01)。
可以发现，结束给药后第1d(第14日龄)，与空白对照组相比，阴性对照组的免疫器官指数均降低。与阴性对照组相比，高剂量组脾指数提高9.10％，中高剂量组胸腺指数分别提高7.70％、12.31％，高剂量组法氏囊指数提高3.39％；在发病前期牡荆提取物可提高免疫器官指数，增强免疫力。
结束给药后第7d(第21日龄)，与空白对照组相比，阴性对照组的免疫器官指数均降低，胸腺指数差异显著(P＜0.05)。与阴性对照组相比，低中高剂量组脾指数分别提高20％、50％(P＜0.01)、50％(P＜0.01)，低中高剂量组胸腺指数分别提高10.77％、6.15％、13.85％。在疾病进程中，牡荆提取物可提高脾、胸腺指数，增强免疫力。
3.肠道病理组织学检查：
取4％多聚甲醛固定的十二指肠、空肠和回肠组织，制作病理切片。对病理切片进行病理描述，测量肠绒毛长度(VH)和隐窝深度(CD)，并计算肠绒毛长度/隐窝深度比值(VH/CD)。
牡荆提取物对试验鸡肠道病理变化的影响结果如图3～4所示。
如图3，给药结束后第1d(第14日龄)结果显示，空白对照组的十二指肠、空肠、回肠均黏膜层绒毛丰富，肠腺丰富，绒毛上皮完整，上皮细胞形态正常，肠腺排列紧密，肌层肌纤维着色均匀，排列紧密，形态正常，未见明显异常。阴性对照组的十二指肠黏膜层上皮不完整，少量上皮细胞脱落入肠腔，伴绒毛上皮与固有层轻度分离；空肠黏膜层上皮不完整，广泛见绒毛顶端自溶伴上皮细胞脱落，局部固有层少量淋巴组织浸润，伴肠腺轻度减少；回肠局部固有层淋巴组织灶性浸润，伴底部肠腺减少，排列疏松，伴绒毛底部相互融合、增宽。牡荆提取物低剂量组的十二指肠黏膜层绒毛上皮不完整，少量上皮细胞脱落，较多绒毛上皮与固有层轻度分离，肌层肌纤维着色均匀，排列紧密，形态正常；空肠与回肠黏膜层绒毛及肠腺丰富，上皮完整，上皮细胞排列紧密，绒毛广泛增粗，杯状细胞增多，肌层肌纤维着色均匀，排列紧密，形态正常；牡荆提取物中剂量组的十二指肠黏膜层绒毛丰富，少量绒毛上皮不完整，上皮细胞脱落，肌层肌纤维着色均匀，排列紧密，形态正常；空肠和回肠均黏膜层绒毛及肠腺丰富，上皮完整，上皮细胞排列紧密，肌层肌纤维着色均匀，排列紧密，形态正常。牡荆提取物高剂量组的十二指肠黏膜层绒毛丰富，排列紧密，绒毛上皮不完整，少量上皮细胞脱落，底部肠腺丰富，肌层肌纤维排列紧密，着色均匀，形态正常；空肠黏膜层绒毛丰富，广泛见绒毛顶端自溶，伴少量上皮细胞脱落，底部肠腺丰富，排列紧密，肌层肌纤维排列紧密，着色均匀，形态正常。回肠黏膜层绒毛绒毛及肠腺丰富，上皮完整，上皮细胞排列紧密，形态正常，黏膜层底部见少量淋巴组织小灶性浸润，伴肠腺排列疏松，肌层肌纤维着色均匀，排列紧密，形态正常。
如图4，给药结束后第7d(第21日龄)结果显示，空白对照组的十二指肠、空肠、回肠均黏膜层绒毛丰富，肠腺丰富，绒毛上皮完整，上皮细胞形态正常，肠腺排列紧密，肌层肌纤维着色均匀，排列紧密，形态正常，未见明显异常。阴性对照组的十二指肠黏膜层少量绒毛上皮细胞脱落，伴较多绒毛上皮与固有层分离，绒毛固有层还见少量毛细血管瘀血，黏膜层底部偶见淋巴组织小灶性浸润；空肠黏膜层少量绒毛顶端自溶，伴少量上皮细胞脱落，固有层偶见淋巴组织小灶性浸润；回肠少量绒毛顶端上皮与固有层轻度分离，固有层偶见淋巴组织小灶性浸润。牡荆提取物低剂量组的十二指肠黏膜层少量绒毛上皮细胞脱落，伴绒毛上皮与固有层轻度分离，固有层少量毛细血管轻度瘀血；空肠和回肠均黏膜层绒毛丰富，肠腺丰富，绒毛上皮完整，上皮细胞形态正常，肠腺排列紧密，肌层肌纤维着色均匀，排列紧密，形态正常，未见明显异常。牡荆提取物中剂量组的十二指肠黏膜层少量绒毛上皮细胞脱落，伴绒毛上皮与固有层轻度分离，固有层少量毛细血管轻度瘀血；空肠和回肠均黏膜层绒毛丰富，上皮完整，肠腺丰富，排列紧密，固有层偶见淋巴组织小灶性浸润，肌层肌纤维着色均匀，形态正常，未见其他明显异常。牡荆提取物高剂量组的十二指肠黏膜层较多绒毛顶部自溶，伴少量上皮细胞脱落，伴较多绒毛上皮与固有层轻度分离，固有层偶见淋巴组织小灶性浸润，未见其他明显异常；空肠黏膜层较多绒毛顶部自溶，伴少量上皮细胞脱落，伴较多绒毛上皮与固有层轻度分离，肌层肌纤维着色均匀，形态正常，未见其他明显异常；回肠黏膜层绒毛丰富，上皮完整，肠腺丰富，排列紧密，固有层偶见淋巴组织小灶性浸润，肌层肌纤维着色均匀，形态正常，未见其他明显异常。
而从肠绒毛长度(VH)、隐窝深度(CD)以及肠绒毛长度/隐窝深度比值(VH/CD)方面评估，如表7所示。
表7牡荆提取物对各肠组织形态结构的影响
Figure BDA0003676062550000111
Figure BDA0003676062550000121
同行相比，不标字母或字母相同表示差异不显著(P>0.05)，字母不相同表示差异显著(P<0.05)。大写字母表示差异极显著(P＜0.01)。
对于试验鸡的十二指肠形态结构，给药结束后第1d(第14日龄)，与空白对照组相比，阴性对照组的VH显著降低(P＜0.05)、CD增大、VH/CD比值降低，肠道形态结构存在受损。与阴性对照组相比，中高剂量组VH极显著增加(P＜0.01)，低中高剂量组CD均显著降低(P＜0.05)，低高剂量组VH/CD显著增加(P＜0.05)、中剂量组极显著增加(P＜0.01)。在发病前期，牡荆提取物可提高VH，降低CD，提高VH/CD比值，维持肠道内形态结构，对十二指肠的形态结构有显著影响。给药结束后第7d(第21日龄)结果显示，与空白对照组相比，阴性对照组的VH极显著降低(P＜0.01)、VH/CD比值降低，肠道形态结构存在受损。与阴性对照组的VH相比，低中高剂量组极显著增加(P＜0.01)；牡荆提取物三组的CD、VH/CD比值与阴性对照组差异均不显著(P＞0.05)。牡荆提取物预防给药在发病后期可提高十二指肠VH，效果显著。
对于试验鸡的空肠形态结构，给药结束后第1d(第14日龄)，与空白对照组相比，阴性对照组的VH极显著降低(P＜0.01)、VH/CD比值降低，肠道形态结构存在受损。与阴性对照组相比，低中高剂量组的VH极显著增加(P＜0.01)，低高剂量组的VH/CD比值显著增加(P＜0.05)。在发病前期，牡荆提取物可提高VH和VH/CD比值，维持肠道内形态结构，对空肠的形态结构有显著影响。给药结束后第7d(第21日龄)，与空白对照组相比，阴性对照组的VH降低、CD增大、VH/CD比值降低，肠道形态结构存在受损。与阴性对照组相比，低中高剂量组的VH极显著增加(P＜0.01)。在疾病后期，牡荆提取物可提高空肠VH，效果显著。
对于试验鸡的回肠形态结构，给药结束后第1d(第14日龄)，与空白对照组相比，阴性对照组的VH极显著降低(P＜0.01)、CD显著降低(P＜0.05)，肠道形态结构存在受损。与阴性对照组相比，低剂量组的VH显著增加(P＜0.05)、中高剂量组极显著增加(P＜0.01)；低中高剂量组的CD均降低(P＞0.05)；低高剂量组的VH/CD比值极显著增加(P＜0.01)。在发病前期，牡荆提取物可提高VH，降低CD，提高VH/CD比值，维持肠道内形态结构，对回肠的形态结构有显著影响。给药结束后第7d(第21日龄)，与空白对照组相比，阴性对照组的VH降低、VH/CD比值降低，肠道形态结构存在受损。与阴性对照组相比，低中剂量组的VH极显著增加(P＜0.01)、高剂量组显著增加(P＜0.05)；低中剂量组的VH/CD比值均增加(P＞0.05)。在疾病进程中，牡荆提取物可提高回肠VH，效果显著。
4.牡荆提取物对肠道炎性因子含量的影响：
取刮取的小肠粘膜，使用市售RNA提取试剂盒提取提取RNA后进行反转录(Evo M-MLV反转录预混型试剂盒)，利用实时荧光定量PCR(SYBR Green Pro Taq HS预混型qPCR试剂盒)分析TNF-α、IL--8、IL-17A、IL-1β等细胞因子的表达量，试验结果计算方法为2-△△Ct法。
牡荆提取物对试验鸡肠道炎性因子的影响结果如表8所示。
表8牡荆提取物对相关基因表达量的影响
Figure BDA0003676062550000131
同行相比，不标字母或字母相同表示差异不显著(P>0.05)，字母不相同表示差异显著(P<0.05)。
可以发现，给药结束后第1d(第14日龄)，各组间的IL-8、TNF-α、IL-17A的基因相对表达量均无显著差异(P＞0.05)。牡荆提取物三组的IL-1β基因相对表达量均显著小于空白对照组与阴性对照组(P＜0.05)。给药结束后第7d(第21日龄)，各组间的IL-8、TNF-α、IL-17A的基因相对表达量均无显著差异(P＞0.05)。与阴性对照组相比，牡荆提取物低剂量组的的IL-1β相对表达量显著下调(P＜0.05)。牡荆提取物仅对促炎因子IL-1β有显著下调作用。
5.血清中免疫指标检测：
使用市售试剂盒(鸡免疫球蛋白A(IgA)酶联免疫检测试剂盒、鸡免疫球蛋白G(IgG)酶联免疫检测试剂盒，购自南京建成)检测上述实施例中心脏采血后制得的血清中的IgA、IgG含量。
结果如表9所示。
表9牡荆提取物对血清中IgA和IgG的影响
Figure BDA0003676062550000132
同行相比，不标字母或字母相同表示差异不显著(P>0.05)，字母不相同表示差异显著(P<0.05)。大写字母表示差异极显著(P＜0.01)。
给药结束后第1d(第14日龄)，与空白对照组相比，阴性对照组的IgA浓度显著升高(P＜0.05)。与阴性对照组相比，中剂量组IgA浓度提高1.64％(P＞0.05)。与空白对照组相比，阴性对照组的IgG浓度升高(P＞0.05)。与阴性对照组相比，高剂量组IgG浓度极显著升高(P＜0.01)。在发病前期，牡荆提取物可提高血液中IgA、IgG浓度，对IgG的影响更显著。给药结束后第7d(第21日龄)，各组之间的IgA浓度无显著差异(P＞0.05)。与空白对照组相比，阴性对照组的IgG浓度极显著升高(P＜0.01)。中剂量组的IgG浓度极显著低于阴性对照组(P＜0.01)。在疾病后期，牡荆提取物主要影响血清中IgG浓度。
综上所述，可以发现，在第一阶段(7-14日龄)，各组的平均日增重差异不显著。牡荆提取物低、高剂量组采食量极显著高于阴性对照组。空白对照的料重比最低，与空白对照组相比阴性对照组、低、高剂量组均显著提高，中剂量组与空白对照组差异不显著。在第二阶段(15-21日龄)，空白组的平均日增重最高，阴性对照组、牡荆提取物低、高剂量组显著低于空白对照组，中剂量组与空白对照组差异不显著；中、高剂量的平均日采食量高于空白对照组；在第二阶段结果料重比与第一阶段相同。综上所述，牡荆提取物在预防鸡坏死性肠炎时，与阴性对照组相比，可提高试验鸡的日增重、日采食量和降低料重比，中剂量组在各阶段的各项目均能和空白对照组保持相近的的水平，说明牡荆提取物在预防坏死性肠炎时具有提高试验鸡生长性能的能力。
脾脏、法氏囊和胸腺作为禽类重要的免疫器官，它们的发育状态影响着禽类的免疫水平。通过免疫器官指数能够很好的反映出免疫器官的发育状态，在上述实施例中，可以发现第一阶段，各组脾指数均差异不显著；中、高剂量组的胸腺指数与空白对照组组差异不显著；低、高剂量组的法氏囊指数与空白对照组差异不显著。第二阶段，牡荆提取物中、高剂量组脾指数显著高于空白组极显著高于阴性对照组；低、高剂量组的胸腺指数与空白对照组差异不显著；低中高剂量组的法氏囊指数均小于空白对照组；综上所述，试验组在预防坏死性肠炎时，能保持与空白组相近的水平，证明牡荆提取物在预防产气荚膜梭菌感染的情况下，能提高免疫器官的重量，提高抗病能力。
产气荚膜梭菌混合感染是可引起鸡肠道炎症反应和肠道形态和功能上的改变，是导致鸡肠坏死的主要原因之一。如通过VH、CD以及VH/CD则可以有效反映绒毛萎缩以及小肠健康状况。小肠绒毛长度越长、隐窝约浅、成熟的肠壁上皮细胞比例越高，代表肠道消化吸收能力越强。而小肠绒毛高度与隐窝深度的比值过低，则表示肠粘膜可能受到损伤，从而会引起肠道吸收率下降，导致动物生产性能降低。基于上述实施例，可以发现第一阶段，低剂量组的十二指肠病变与阴性对照组相似；空肠回肠均结构正常，未见病变。中剂量组的十二指肠仅见少量绒毛上皮不完整与上皮细胞脱落；空肠回肠均结构正常，未见病变。高级剂量组的十二指肠上皮不完整，绒毛和肠腺数量丰富；空肠绒顶端自融，肠腺丰富未见减少，未见淋巴细胞浸润；回肠的肠粘膜完整，底层少量淋巴组织浸润，肠腺排列疏松。第二阶段，低剂量组的十二指肠病变与阴性对照组相似；空肠与回肠均结构正常，未见病变；中剂量组的十二指肠病变与阴性对照组相似；空肠回肠偶见固有层淋巴组织小灶性浸润，未见其他明显异常；高剂量组的十二指肠病变与阴性对照组相似；空肠黏膜绒毛顶部自溶，未见淋巴组织浸润；回肠上皮完整肠腺丰富，仅偶见固有层淋巴组织小灶性浸润。综上所述，牡荆提取物低剂量在一二阶段均未见对十二指肠的保护能力，可保护空肠回肠粘膜完整，增加肠腺数量，未见淋巴细胞浸润，增加杯状细胞数量，增加黏蛋白的分泌形成黏膜，保护肠粘膜不受产气荚膜梭菌的侵害，肠道健康无病变，均有对空肠回肠良好的保护力；牡荆提取物中剂量在感染前期可保护十二指肠、空肠、回肠三个肠段的肠道健康，在感染后期未见对十二指肠的保护力，对空肠回肠的预防保护能力尚可，可保持肠道内形态结果基本正常，仅偶见淋巴细胞浸润；牡荆提取物高剂量在感染前期后期均对肠道预防保护能力不佳。
而进一步基于肠道结构形态结果，发现：对十二指肠形态结构而言，第一阶段，牡荆提取物中、高剂量组VH显著高于阴性对照组，其中中剂量组VH最长，与空白对照组差异不显著；低、中、高剂量组的CD均浅于阴性对照组，其中中剂量组CD最浅与空白对照组差异不显著；中剂量组的VH/CD显著大于阴性对照组和空白对照组。第二阶段中，阴性对照组的VH均极显著小于其他组；CD和VH/CD俩数据，各组之间差异均不显著。
对空肠形态结构而言，第一阶段高剂量组在试验组中VH最长，与空白组差异不显著，显著高于阴性对照组；高剂量组的CD最浅，显著浅与空白对照组；高剂量组的VH/CD最高，显著高于阴性对照组。第二阶段中，中剂量组VH最高，极显著高于阴性对照组和空白对照组；低、高剂量组的CD与阴性对照组差异不显著；各组间VH/CD差异不显著。
对回肠形态结构而言，第一阶段，中高剂量组VD显著高于阴性对照组；低中高三组OD均显著浅与空白组；低中高三组VH/CD均显著高于空白组。在第二阶段，中剂量组VH显著最长极显著长于阴性对照组；CD和VH/CD俩数据，各组之间差异均不显著。
综上所述，可以发现，牡荆提取物能使各肠段均能保持良好的肠道形态，且健康状态高于空白对照组，说明牡荆提取物能够在早期阶段预防产气荚膜梭菌感染所造成的鸡肠道损伤，其中牡荆提取物中剂量组的预防效果最佳。
细胞因子在炎症反应和免疫调节反应中发挥重要作用。TNF-α是一种促炎因子，可以诱导炎症反应。产气荚膜梭菌感染后会产生NetB毒素，从而诱发或促进鸡肠道淋巴细胞TNF-α基因mRNA过量表达。IL-8在炎症反应中会出现分泌增加，并趋化免疫细胞至患处活化参与免疫反应，实现免疫细胞的抵抗功能。IL-17通过增加组织中趋化因子的产量使单核细胞和中性粒细胞到炎症部位，延缓炎症的发生。IL-1β是一种促炎细胞因子，能激促进了肌球蛋白轻链的合成，启动炎症反应，促进病原体清除。在上述实施例中，可以发现在两个不同日龄阶段，IL-8、TNF-α、IL-17A在各组间均无显著差异，IL-1β相对表达量均显著下调，从而说明牡荆提取物实际上并非通过调控炎症因子表达等常规方式实现预防作用，也不会引发炎症因子的异常表达。IgG是动物受到抗原刺激后体内产生的能与抗原特异性作用的免疫球蛋白，是血清中浓度最大的一类免疫球蛋白。IgA主要是由胃肠淋巴样组织所产生的一种免疫球蛋白。上述实施例中，在第一阶段，中剂量组的IgA浓度最高显著高于空白对照组；高剂量组的IgG浓度最高显著高于空白对照组。在第二阶段，各组之间的IgA浓度无显著差异；中剂量组的IgG浓度显著低于阴性对照组。综上所述，牡荆提取物在早期预防阶段，能有效的提高鸡的IgA和IgG的浓度，让机体保持主动免疫能力并维持机体内环境稳定，具有提高试验鸡免疫功能的能力，与上述免疫器官指数的结论相符。
综合上述结果，可以发现，牡荆提取物在前期后期均可提升试验鸡的生长性能与免疫器官指数，其中高剂量组对免疫器官指数的影响更显著；对肠道方面的影响，牡荆提取物在前期可保护肠粘膜相对健康，并显著增加VH、降低CD和增加VH/CD比值，后期仅VH比阴性对照组有显著提高，其他检测指标均差异不显著，分析应为阴性对照组在攻毒结束后，逐渐自愈，证明牡荆提取物可保护肠粘膜达到预防作用；在前期与后期，牡荆提取物对IL-1β有下调作用，减少炎症反应，起到预防作用；在试验前期，牡荆提取物可提高机体内的免疫蛋白水平，后期均有所降低，推断牡荆提取物在前期促进免疫蛋白的合成，提高免疫能力，而阴性对照组在攻毒后期依靠自身免疫系统产生大量免疫蛋白，证明牡荆提取物达到预防效果。
牡荆提取物对坏死性肠炎的治疗效果
在本实施例中，取上述实施例中制备得到的牡荆提取物测试其对坏死性肠炎治疗效果，具体试验步骤如下：
取1日龄试验鸡150只，正常饲喂配合饲料至7日龄，在经检查无异常后逐一称重，并随机分为6组(空白对照组、阴性对照组、恩拉霉素组(阳性对照)、牡荆提取物低剂量组、牡荆提取物中剂量组、牡荆提取物高剂量组)，每组三个重复，每个重复10只。除空白对照组外，其他各组改为饲喂高蛋白饲料，各组均自由采食至试验结束。坏死性肠炎的造模采用上述产气荚膜梭菌菌液，攻毒剂量5×109cfu/次/d。其中，所用牡荆提取物的浓度固定为1g/mL备用。
具体分组情况如表10所示。
表10试验鸡分组情况及处理方法
Figure BDA0003676062550000161
试验期间每日观察试验鸡的精神状态、临床症状、排便、采食等情况。
取样操作同上述实施例。
1.牡荆提取物对生长性能的影响：
测试方法同上述实施例。
结果如表11所示。
表11牡荆提取物对生长性能的影响
Figure BDA0003676062550000162
Figure BDA0003676062550000171
同行相比，不标字母或字母相同表示差异不显著(P>0.05)，字母不相同表示差异显著(P<0.05)。大写字母表示差异极显著(P＜0.01)。
可以发现，给药结束后第1d(第21日龄)，与空白对照组相比，阴性对照组平均日增重显著降低(P＜0.05)、平均日采食量提高、料重比极显著增加(P＜0.01)，阴性对照组的生长性能降低。与阴性对照组相比，低中高剂量组的平均日增重分别提高39.75％、40.62％、50.34％(P＞0.05)；中高剂量组的平均日采食量分别提高26.53％、23.60％(P＜0.01)；低中高剂量组的料重比分别降低31.93％、26.64％、18.49％(P＞0.05)。与恩拉霉素组相比，中高剂量组的平均日采食量极显著提高(P＜0.01)，牡荆提取物三组其他生长性能差异不显著(P＞0.05)。在治疗第一阶段，牡荆提取物可提高试验鸡生长性能，其效果水平与恩拉霉素相近。给药结束后第7d(第28日龄)，与空白对照组相比，平均日增重极显著降低(P＜0.01)、平均日采食量极显著降低(P＜0.01)，阴性对照组的生长性能降低。与阴性对照组相比，低中高剂量组的平均日增重分别提高5.86％、22.71％、18.21％(P＞0.05)；低中剂量组的平均日采食量极显著提高(P＜0.01)，高剂量显著提高(P＜0.05)；与恩拉霉素组相比，低中剂量组的平均日采食量极显著提高(P＜0.01)，牡荆提取物三组其他生长性能差异不显著(P＞0.05)。在治疗过程中，牡荆提取物在生长性能方面效果水平与恩拉霉素相近。
2.牡荆提取物对免疫器官指数的影响：
测试方法同上述实施例。
结果如表12所示。
表12牡荆提取物对免疫器官指数的影响
Figure BDA0003676062550000172
Figure BDA0003676062550000181
同行相比，不标字母或字母相同表示差异不显著(P>0.05)，字母不相同表示差异显著(P<0.05)。大写字母表示差异极显著(P＜0.01)。
可以发现，给药结束后第1d(第21日龄)，与空白对照组相比，阴性对照组的免疫器官指数均降低(P＞0.05)。与阴性对照组相比，中高剂量组脾指数极显著提高(P＜0.01)；中高剂量组胸腺指数显著提高(P＜0.05)；与恩拉霉素组相比，低中剂量组的脾指数显著提高(P＜0.05)，牡荆提取物三组其他免疫器官指数差异不显著(P＞0.05)。在治疗第一阶段，牡荆提取物可提高试验鸡脾指数与胸腺指数，提高免疫器官指数效果与恩拉霉素相近。给药结束后第7d(第28日龄)，除低中剂量组脾指数显著高于阴性对照组外，牡荆提取物三组与空白对照组、阴性对照组、恩拉霉素组在免疫器官指数方面均无显著差异(P＞0.05)。在治疗过程末，各组的免疫器官质指数趋于相同。
3.肠道病理组织学检查：
测试方法同上述实施例。
结果如图5～6所示。
如图5，给药结束后第1d(第21日龄)结果显示，空白对照组的十二指肠、空肠、回肠均黏膜层绒毛丰富，肠腺丰富，绒毛上皮完整，上皮细胞形态正常，肠腺排列紧密，肌层肌纤维着色均匀，排列紧密，形态正常，无明显异常。阴性对照组的十二指肠黏膜上皮不完整，少量绒毛上皮细胞脱落，伴较多绒毛上皮与固有层分离，绒毛固有层还见少量毛细血管瘀血，黏膜层底部偶见淋巴组织小灶性浸润；空肠黏膜层少量绒毛顶端自溶，伴少量上皮细胞脱落，固有层偶见淋巴组织小灶性浸润，未见其他明显异常；回肠少量绒毛顶端上皮与固有层轻度分离，固有层偶见淋巴组织小灶性浸润。恩拉霉素组十二指肠黏膜层少量绒毛上皮细胞脱落，伴少量绒毛上皮与固有层分离，肌层肌纤维着色均匀，形态正常，无其他明显异常；空肠与回肠黏膜层绒毛丰富，肠腺丰富，绒毛上皮完整，上皮细胞形态正常，肠腺排列紧密，固有层偶见淋巴组织小灶性浸润，无其他明显异常；牡荆提取物低剂量组的十二指肠黏膜层较多绒毛顶部自溶，伴少量上皮细胞脱落，伴较多绒毛上皮与固有层轻度分离，固有层少量淋巴组织小灶性浸润，无其他明显异常；空肠与回肠均黏膜层绒毛丰富，上皮完整，肠腺丰富，排列紧密，固有层偶见淋巴组织小灶性浸润，肌层肌纤维着色均匀，形态正常，无其他明显异常。牡荆提取物中剂量组的十二指肠黏膜层较多绒毛顶部自溶，伴少量上皮细胞脱落，伴较多绒毛上皮与固有层轻度分离，固有层局偶见淋巴组织小灶性浸润，无其他明显异常；空肠与回肠均黏膜层绒毛丰富，上皮完整，肠腺丰富，排列紧密，固有层偶见淋巴组织小灶性浸润，肌层肌纤维着色均匀，形态正常，无其他明显异常。牡荆提取物高剂量组的十二指肠黏膜层少量绒毛上皮细胞脱落，较多绒毛上皮与固有层轻度分离，固有层偶见淋巴组织小灶性浸润，肌层肌纤维着色均匀，形态正常，无其他明显异常；空肠与回肠均黏膜层绒毛丰富，上皮完整，肠腺丰富，排列紧密，固有层偶见淋巴组织小灶性浸润，肌层肌纤维着色均匀，形态正常，无其他明显异常。
如图6，给药结束后第7d(第28日龄)结果显示，空白对照组的的十二指肠、空肠、回肠均黏膜层绒毛丰富，肠腺丰富，绒毛上皮完整，上皮细胞形态正常，肠腺排列紧密，肌层肌纤维着色均匀，排列紧密，形态正常，无明显异常。阴性对照组的十二指肠黏膜层绒毛上皮不完整，少量绒毛上皮细胞脱落，较多绒毛上皮与固有层轻度分离，间隙增大，偶见绒毛固有层内少量异嗜性粒细胞浸润；空肠黏膜层绒毛上皮不完整，少量绒毛上皮细胞脱落，少量见绒毛上皮与固有层轻度分离，间隙增大，固有层偶见淋巴组织小灶性浸润；回肠黏膜层绒毛丰富，少量绒毛上皮细胞脱落，固有层偶见淋巴组织小灶性浸润。恩拉霉素组的十二指肠黏膜层绒毛上皮不完整，少量绒毛上皮细胞脱落，较多绒毛上皮与固有层分离，间隙增大，肌层肌纤维排列紧密，着色均匀，形态正常，无其他明显异常；空肠与回肠均黏膜层绒毛丰富，上皮完整，底部肠腺丰富，排列紧密，肌层肌纤维着色均匀，形态正常，无明显异常；牡荆提取物低剂量组的十二指肠黏膜层绒毛上皮不完整，较多绒毛上皮细胞脱落，广泛见绒毛上皮与固有层分离，间隙增大，肌层肌纤维排列紧密，着色均匀，形态正常，无其他明显异常；空肠与回肠均黏膜层绒毛丰富，上皮完整，底部肠腺丰富，排列紧密，肌层肌纤维着色均匀，形态正常，无明显异常。牡荆提取物中剂量组的十二指肠黏膜层绒毛上皮不完整，少量绒毛上皮细胞脱落，较多见绒毛上皮与固有层分离，间隙增大，肌层肌纤维排列紧密，着色均匀，形态正常，无其他明显异常；回肠与空肠均黏膜层绒毛丰富，上皮完整，底部肠腺丰富，排列紧密，肌层肌纤维着色均匀，形态正常，无明显异常；牡荆提取物高剂量组的十二指肠黏膜层绒毛上皮不完整，少量绒毛上皮细胞脱落，较多见绒毛上皮与固有层轻度分离，间隙增大，固有层局部较多淋巴组织灶性浸润，无其他明显异常。空肠与回肠黏膜层绒毛丰富，上皮完整，局部可见较多淋巴组织灶性浸润，并见淋巴小结形成，肌层肌纤维着色均匀，形态正常，无其他明显异常。
而从肠绒毛长度(VH)、隐窝深度(CD)以及肠绒毛长度/隐窝深度比值(VH/CD)方面评估，如表13所示。
表13牡荆提取物对各肠组织形态结构的影响
Figure BDA0003676062550000191
Figure BDA0003676062550000201
同行相比，不标字母或字母相同表示差异不显著(P>0.05)，字母不相同表示差异显著(P<0.05)。大写字母表示差异极显著(P＜0.01)。
对于试验鸡的十二指肠形态结构，给药结束后第1d(第21日龄)，与空白对照组相比，阴性对照组的VH极显著降低(P＜0.01)，肠道形态结构存在受损。与阴性对照组相比，低中剂量组的VH极显著提高(P＜0.01)，高剂量组显著提高(P＜0.05)；与恩拉霉素组相比，牡荆提取物三组肠道形态无显著差异(P＞0.05)。给药结束后第7d(第28日龄)，与空白对照组相比，阴性对照组的VH极显著降低(P＜0.01)，肠道形态结构存在受损。与阴性对照组相比，低中高剂量组的VH均极显著提高(P＜0.01)；与恩拉霉素组相比，除中剂量组的VH、CD极显著提高(P＜0.01)，其他形态无显著差异(P＞0.05)。
对于试验鸡的空肠形态结构，给药结束后第1d(第21日龄)，与空白对照组相比，阴性对照组的VH显著降低(P＜0.05)，VH/CD比值降低(P＞0.05)，肠道形态结构存在受损。与阴性对照组相比，中高剂量组的VH显著提高(P＜0.05)，低剂量组显著提高(P＜0.01)。与恩拉霉素组相比，牡荆提取物三组肠道形态无显著差异(P＞0.05)。给药结束后第7d(第28日龄)，与空白对照组相比，阴性对照组的VH极显著降低(P＜0.01)，CD增加(P＞0.05)，VH/CD比值降低(P＞0.05)，肠道形态结构存在受损。与阴性对照组相比，低中高剂量组的VH极显著提高(P＜0.01)。与恩拉霉素组相比，牡荆提取物三组肠道形态无显著差异(P＞0.05)。
对于试验鸡的回肠形态结构，给药结束后第1d(第21日龄)，与空白对照组相比，阴性对照组的VH显著降低(P＜0.05)，VH/CD比值降低(P＞0.05)，肠道形态结构存在受损。与阴性对照组相比，低中剂量组的VH极显著提高(P＜0.01)，高剂量组显著提高(P＜0.05)；中剂量组的VH/CD比值显著提高(P＜0.05)。与恩拉霉素组相比，牡荆提取物三组肠道形态无显著差异(P＞0.05)。给药结束后第7d(第28日龄)结果显示，与空白对照组相比，阴性对照组的VH极显著降低(P＜0.01)，VH/CD比值降低(P＞0.05)，肠道形态结构存在受损。与阴性对照组相比，低中高剂量组的VH极显著提高(P＜0.01)。与恩拉霉素组相比，牡荆提取物三组肠道形态无显著差异(P＞0.05)。
综上所述，可以发现在郑工治疗过程中，牡荆提取物能提高各肠段各阶段的VH，效果水平与恩拉霉素相似。
4.牡荆提取物对肠道炎性因子含量的影响：
测试方法同上述实施例。
牡荆提取物对试验鸡肠道内炎性因子的影响如表14所示。
表14牡荆提取物对相关基因表达量的影响
Figure BDA0003676062550000211
同行相比，不标字母或字母相同表示差异不显著(P>0.05)，字母不相同表示差异显著(P<0.05)。大写字母表示差异极显著(P＜0.01)。
可以发现，给药结束后第1d(第21日龄)，与空白对照组相比，阴性对照组的各炎性因子相对表达量并无显著差异(P＞0.05)。与阴性对照组相比，高剂量组可显著上调IL-8基因相对表达量(P＜0.05)；低中剂量组可显著下调IL-17A基因相对表达量(P＜0.05)；其他组的各相对表达量差异不显著(P＞0.05)。与恩拉霉素组相比，低中剂量组可显著上调IL-8基因相对表达量(P＜0.05)；低中高剂量组TNF-α基因相对表达量差异不显著(P＞0.05)；低中高剂量组可显著下调IL-17A、IL-1β基因相对表达量(P＜0.05)。给药结束后第7d(第28日龄)，与空白对照组相比，阴性对照组的IL-8基因相对表达量极显著上调(P＜0.01)，TNF-α、IL-17A基因相对表达量显著上调(P＜0.05)。与阴性对照组相比，低中高剂量组可极显著上调IL-8基因相对表达量(P＜0.01)；低中高剂量组TNF-α、IL-1β基因相对表达量差异不显著(P＞0.05)；低中剂量组可显著下调IL-17A基因相对表达量(P＜0.05)。
5.血清中免疫指标检测：
测试方法同上述实施例。
结果如表15所示。
表15牡荆提取物对血清中IgA和IgG的影响
Figure BDA0003676062550000221
同行相比，不标字母或字母相同表示差异不显著(P>0.05)，字母不相同表示差异显著(P<0.05)。大写字母表示差异极显著(P＜0.01)。
可以发现，试验结束给药的第1d(第21日龄)，与空白对照组相比，阴性对照组的IgA浓度显著升高(P＜0.05)，IgG浓度差异不显著(P＞0.05)。与阴性对照组相比，低剂量组IgA浓度显著降低(P＜0.05)，中高剂量组极显著下降(P＜0.01)；高剂量组的IgG浓度最高极显著升高(P＜0.01)。与恩拉霉素组相比，高剂量组的IgG浓度最高极显著升高(P＜0.01)，其他组的IgA、IgG浓度差异不显著(P＞0.05)。试验结束给药的第7d(第28日龄)结果显示，与空白对照组相比，阴性对照组的IgA浓度显著升高(P＜0.05)，IgG浓度差异不显著(P＞0.05)。与阴性对照组相比，低中高剂量组IgA、IgG浓度差异不显著(P＞0.05)。与恩拉霉素组相比，低中高剂量组IgA浓度差异不显著(P＞0.05)；低剂量组的IgG浓度差异不显著(P＞0.05)，中剂量组的显著降低(P＜0.05)，高剂量组极显著降低(P＜0.05)
综上所述，可以发现，第一阶段(14-21日龄)，空白对照组与恩拉霉素组的平均日增长显著高于阴性对照组，牡荆提取物三个剂量组与空白对照和恩拉霉素组差异不显著；牡荆提取物的中、高剂量组的平均日采食量极显著高于其他组，中剂量组最高；与阴性对照组相比，低剂量组的料重比极显著下降，并与空白对照组和恩拉霉素组差异不显著。第二阶段(22-28日龄)，空白对照组的平均日增重最高，与空白对照组相比，牡荆提取物三个剂量组均有显著降低，但均高于阴性对照组和恩拉霉素组；与阴性对照组相比，低、中剂量组平均日采食量极显著提高；空白对照组的料重比最大，与其他各组差异显著。因此，可以看出牡荆提取物在早期阶段对于鸡的生长性能有显著的提高效果，尤其是在14-21日龄阶段。
在上述实施例中，第一阶段(14-21日龄)，牡荆提取物中高剂量的脾指数显著高于空白对照组，极显著高于阴性对照组；高剂量组的胸腺指数显著高于空白对照组；中、高剂量组的法氏囊指数与空白对照组差异不显著。第二阶段(22-28日龄)，低、中剂量组脾指数与空白对照组差异不显著；各组间胸腺指数差异不显著；各组间法氏囊指数差异不显著。综上所述，试验组在治疗的第一阶段能保持高于阴性对照组，并与空白组相近的水平。在第二阶段阴性对照组开始自愈，免疫器官指数均保持同一水平。综上所述，其结果可以证明牡荆提取物在产气荚膜梭菌感染初期有明显治疗作用，且可提高免疫器官重量。
基于上述实施例，可以发现14-21日龄阶段，恩拉霉素组的十二指肠少量绒毛上皮细胞脱落，少量绒毛上皮与固有层分离，未见其他明显异常；空肠回肠偶见固有层淋巴组织小灶性浸润，未见其他明显异常。低剂量的十二指肠病变与阴性对照组相似，但未见毛细血管淤血；空肠回肠偶见固有层淋巴组织小灶性浸润，未见其他明显异常。中剂量组的十二指肠病变与阴性对照组相似，但未见毛细血管淤血；空肠回肠偶见固有层淋巴组织小灶性浸润，未见其他明显异常。高剂量组的十二指肠病变与阴性对照组相似，但未见毛细血管淤血；空肠回肠偶见固有层淋巴组织小灶性浸润，未见其他明显异常。第二阶段，恩拉霉素组的十二指肠病变与阴性对照组相似，但未见少量异嗜性粒细胞浸润；空肠回肠均结构正常，未见病变。低剂量的的十二指肠病变与阴性对照组相似，但未见少量异嗜性粒细胞浸润；空肠回肠均结构正常，未见病变。中剂量组的十二指肠与阴性对照组相似，但未见少量异嗜性粒细胞浸润；空肠回肠均结构正常，未见病变高剂量组的十二指肠与阴性对照组相似，但未见少量异嗜性粒细胞浸润；空肠回肠均结构正常，未见病变。因此，可以说明牡荆提取物不同剂量给药组对因产气荚膜梭菌造所成的肠道损伤具有较好的治疗效果，与常规的阳性药物恩拉霉素能力相当。但恩拉霉素和牡荆提取物均对十二指肠的治疗能力不显著，但对空肠与回肠有显著的治疗能力，在感染前期可保持空肠回肠的肠道结构完整，仅偶见固有层少量淋巴组织浸润，在感染后期，可使空肠与回肠的肠道结构保持完整，恢复肠道健康。
而进一步基于肠道结构形态结果，发现：对十二指肠形态结构而言，在14-21日龄阶段，低、中剂量组VH极显著长于阴性对照组；各组间CD无显著差异；低、中剂量组VH/CD与空白对照组差异不显著。在第二阶段，中剂量组VH最高，极显著高于阴性对照组；低、高剂量组CD与空白对照组和恩拉霉素组差异不显著；各组间的VH/CD比值均差异不显著。
对空肠形态结构而言，在14-21日龄阶段，低中高三个牡荆提取物给药组VH均极显著高于阴性对照组，与空白对照组和恩拉霉素组差异不显著；低剂量组CD与空白对照和恩拉霉素组差异不显著各组间VH/CD比值无显著差异；在第二阶段，低中高三组VH均极显著高于阴性对照组，与空白对照组和恩拉霉素组差异不显著；各组间CD无显著差异(P＞0.05)；中剂量组的VH/CD最高，显著高于阴性对照组，空白对照组，与恩拉霉素组差异不显著。
对回肠形态结构而言，14-21日龄阶段和22-28日龄阶段的治疗效果相同，三个牡荆提取物不同剂量给药组VH均极显著高于阴性对照组，与空白对照组和恩拉霉素组差异不显著；各组之间CD无显著差异；各组间VH/CD比值无显著差异。
综上所述，可以发现，牡荆提取物在第一阶段与第二阶段均有较好的提高肠绒毛长度的能力，对隐窝深度和比值的影响能力不显著，可以说明牡荆提取物能够有效抑制鸡产气荚膜梭菌感染，并维持肠绒毛长度结构完整，提高其肠道消化能力。其也与牡荆提取物对生长性能影响结果相呼应。
在上述实施例中，可以发现，在14-21日龄阶段，牡荆提取物低、中剂量组IL-8的基因表达量与空白对照组差异不显著，恩拉霉素组和牡荆提取物高剂量组的相对表达量显著上调；与阴性对照组相比，其他各组的TNF-α基因相对表达量均显著下调；牡荆提取物低、高剂量组的IL-17A基因相对表达量比阴性对照组显著下调；恩拉霉素组的IL-1β基因相对表达量最高，显著高于其他组。在第二阶段，各组间的IL-8基因相对表达量无显著差异；各组的TNF-α基因相对表达量与空白对照组相比均显著上调；恩拉霉素组和牡荆提取物中剂量组IL-17A基因相对表达量均显著上调差异不显著；各组间的IL-1β基因相对表达量无显著差异。因此，可以发现，高剂量牡荆提取物能在发病早期促进机体产生IL-8因子，加快炎症反应，促进炎症进程的结束，可达到恩拉霉素相同的治疗效果。三种不同的牡荆提取物剂量均能下调TNF-α的相对表达量，从而抑制产气荚膜梭菌NetB毒力的增加。而且，牡荆提取物还可抑制IL-17A表达，从而可以确定牡荆提取物在炎症前期可以促进肠炎加速进行，加快炎性进程，达到治疗效果。
上述实施例中，在14-21日龄阶段，三种不同的牡荆提取物剂量组IgA浓度均显著小于阴性对照组；高剂量组的IgG浓度最高，极显著高于其他组。第二阶段，各组之间IgA浓度差异不显著；低剂量组的IgG浓度最高，显著高于空白对照组。因此，可以发现，牡荆提取物在治疗坏死性肠炎时，不会提高IgA浓度，但可以显著提高IgG浓度，使机体免疫功能加强。
综合上述结果，牡荆提取物可在发病前期提升试验鸡的生长性能和免疫器官指数，其效果与恩拉霉素组相似，但后期与阴性对照组差异不显著。对肠道方面的影响说明牡荆提取物与恩拉霉素组，对十二指肠均无治疗能力，但全程对空肠回肠肠道完整性均有保护治疗能力。在整个试验周期，牡荆提取物对IL-8有上调作用，促进炎症反应，加快疾病的发生，缩短发病时间。在发病前期，牡荆提取物可提高机体内IgG水平，提升效果与恩拉霉素组相似，但后期均有所降低，与阴性对照组差异不显著。同时，发现牡荆提取物对试验鸡的治疗效果主要发生在疾病前期，而后期阴性对照组在结束攻毒后逐渐自愈，上述结果说明牡荆提取物可缩短疾病进程。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种组合物，其特征在于，所述组合物中含有牡荆提取物。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述牡荆提取物为牡荆全株的醇提物，所述醇包括甲醇、乙醇。
3.一种牡荆提取物的制备方法，包括如下步骤：使用醇加热提取牡荆全株。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，牡荆全株与醇的料液比为1g:30～40mL。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，提取温度为45～55℃。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，醇的质量浓度为55～65％。
7.权利要求1～2任一项所述的组合物在制备消杀灭菌产品中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述消杀灭菌产品用于抑制产气荚膜梭菌。
9.权利要求1～2任一项所述的组合物在制备预防坏死性肠炎的药物中的应用。
10.权利要求1～2任一项所述的组合物在制备治疗坏死性肠炎的药物中的应用。
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114468124A (zh) * 2022-03-25 2022-05-13 天津博菲德科技有限公司 一种防治坏死性肠炎的发酵中草药饲料添加剂

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114468124A (zh) * 2022-03-25 2022-05-13 天津博菲德科技有限公司 一种防治坏死性肠炎的发酵中草药饲料添加剂

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
孙阿宁 等: "牡荆素减轻小鼠溃疡性结肠炎的药效作用及机制研究" *
李亚晖 等: "牡荆总黄酮提取工艺优化及其对产气荚膜梭菌抑菌活性研究" *

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