CN116033923A - Variovorax病菌作为球虫病替代治疗的用途 - Google Patents

Variovorax病菌作为球虫病替代治疗的用途 Download PDF

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Abstract

能够选择性调节TLR信号通路的化合物为动物和人类的多种疾病提供了一种改进的治疗方法。治疗和/或预防球虫病和其他与肠道炎症相关的疾病的作用机制是通过直接影响先天性和适应性免疫通路。下游结果是与肠道健康相关的性能参数得到改善(包括改变肠道微生物、转化率和增重等。当给动物施用时，本发明所公开的化合物的生物活性通过增强免疫反应而不是对寄生虫(如艾美耳球虫寄生虫)的直接影响来减轻球虫病的影响。本发明所公开的化合物和方法的作用机制是通过启动免疫系统而不是对病原体的直接影响，因此不存在产生治疗抗药性的风险。

Description

Variovorax病菌作为球虫病替代治疗的用途
相关申请的交叉引用
本申请是2020年8月12日提交的名称为“Variovorax病菌作为抗球虫药的用途”的美国临时专利申请63/064706的美国非临时专利申请，出于所有目的，其全文通过引用并入本文。
技术领域
本发明涉及基于细菌的化合物在预防和治疗疾病中的用途。更具体地，本发明涉及一种化合物(例如来源于革兰氏阴性菌的脂多糖(LPS))以及化合物的用途，该化合物在预防和治疗动物和人类疾病中选择性地调节Toll样受体(TLR)通路。
背景技术
脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)，也称为内毒素，是革兰氏阴性菌外膜的主要成分。LPS的脂质A部分对革兰氏阴性菌的大部分毒性负责。已知一些LPS化合物与Toll样受体4(TLR4)相互作用并激活它们。TLR4的激活导致炎性细胞因子的产生和先天免疫系统的激活。通过识别病原生物激活TLR是先天免疫反应的关键步骤。然而，这种防御机制的异常激活会导致非特异性炎症反应，并使自身免疫反应永久化。
TLR4，发现于全身免疫系统细胞以及其他细胞类型，如心脏、肝脏和脂肪细胞，最近成为连接饮食、肠道微生物群和代谢健康的共同因素。
无论是通过感染还是炎症激活，TLR4都与人类和动物的多种急性和慢性疾病有关。TLR4是家禽生产中非抗生素治疗的有吸引力的靶点，在家禽生产中，寄生虫引起的炎症(如艾美耳球虫(Eimeria)寄生虫引起的炎症)会损害肠道完整性，导致营养利用率降低和生长受损。此外，TLR4活性较低的遗传差异与鸡对沙门氏菌感染的抵抗力增加有关。TLR4与慢性背痛和椎间盘退变有关，并在骨关节炎的病理生理学中发挥作用，骨关节炎是全球人类残疾的第八大原因，也影响超过60％的7岁以上犬科动物。因此，TLR4作为一系列疾病的高价值治疗靶点的研究正在进行中。
已知与TLR4相关的炎性和自身免疫性疾病的几个例子。这些例子包括但不限于败血症、狼疮、多发性硬化症、炎症性肠病、类风湿性关节炎、牛皮癣、哮喘、过敏、神经变性和与神经炎症相关的中枢神经系统(CNS)疾病、癌症、病毒感染、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、神经病理性疼痛、糖尿病相关并发症(如糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变和糖尿病神经病变)、慢性阻塞性肺病(COPD)、许多心血管疾病(包括动脉粥样硬化、高血压和中风)的发病机制、肥胖相关代谢炎症、药物滥用、重度抑郁症和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。
许多TLR4调节剂已在人类临床试验中进行了评估。例如，TLR4抑制剂间氯苯基哌嗪盐酸盐(Eritoran)和瑞沙托维(Resatorvid)是治疗严重脓毒症的潜在候选药物，在早期人类临床试验中显示出良好的前景，严重脓毒症的致命性超过乳腺癌、结肠癌和肺癌的总和。然而，在3期临床试验中，这些化合物未能降低死亡率。同样，潜在的TLR4抑制剂用于治疗类风湿性关节炎，早期显示出前景，但在2期临床试验中未能显示出疗效，据估计，美国每10万人中就有860人患有类风湿性关节炎。2018年终止了旨在减少2型糖尿病胰岛素抵抗肥胖患者炎症和改善糖代谢的2期Eritoran试验。最近完成的2期多发性硬化症试验表明，与安慰剂相比，TLR4拮抗剂异丁司特(Ibudilast)与脑萎缩进展较慢有关，但胃肠道副作用、头痛和抑郁症的发生率较高。有几种候选药物，包括用于自身免疫性肝炎的JKB-122和用于ALS的Ibudilast，目前正在进行积极的临床试验。此外，对于在一种疾病中表现出次优治疗的候选药物，仍可评估其在与TLR4信号传导过度相关的其他疾病中的应用。
发明内容
所公开的发明构思提供了一种用于动物和人类的多种疾病的改进的治疗方法。治疗和/或预防球虫病、坏死性肠炎和其他与肠道炎症相关的疾病的作用机制是通过对先天性和适应性免疫通路的直接影响。可参考申请人于2021年6月25日提交的名称为“通过服用天然免疫调节剂进行免疫启动以加速/增强免疫反应(Immune Priming to Accelerate/Enhance Immune Response Through Administration of Natural Immune Modulator)”、美国序列号为17/358878的共同申请和未决申请，出于所有目的，本文通过引用将其全部并入。
球虫病和坏死性肠炎的爆发通常同时发生。众所周知，球虫病感染使动物易患坏死性肠炎，因为球虫病感染造成的损害为球虫寄生虫的繁殖创造了理想的环境。下游结果是与肠道健康(包括改变肠道微生物)、饲料转化率和增重等相关的性能参数得到了改善。当在家禽饲料或饮用水中施用时，本发明所公开的化合物的生物活性通过增强免疫反应而不是对寄生虫(如艾美耳球虫寄生虫)的直接影响来减轻球虫病的影响。
本发明所公开的化合物和方法的作用机制是通过免疫系统启动而不是直接影响病原体，因此不存在产生治疗耐药性的风险。由于广谱免疫调节，动物的生长和发育得到了系统性增强。
具体实施方式
在以下描述中，针对不同构造的实施例描述了各种操作参数和组件。这些特定参数和组件作为示例包括在内，并不意味着是限制性的。除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语应具有本领域普通技术人员所理解的常用含义。
用于治疗的化合物
所公开的治疗方法优选但不限于使用通常来源于革兰氏阴性菌的脂多糖(LPS)的化合物。通过在肉鸡生命早期施用该化合物，通过免疫调节实现疾病预防和治疗。如本文所用，术语“抑制剂”是指减少或减弱由另一分子、受体、细胞结构或器官诱导的活性的分子。例如，可以阻断宿主免疫细胞表面存在的TLR4的LPS依赖性激活的化合物将被视为该特定通路的抑制剂。
如本文所用，“调节剂”指激活剂、抑制剂或两者。调节可以是至少一种Toll样受体(TLR)(如TLR4或可能的TLR2)的活性的结果。如本文所用，术语“抑制剂”是指降低或减弱另一分子诱导的活性的分子。例如，可能阻断人类和动物免疫细胞表面TLR的LPS依赖性激活的化合物将被视为这一特定通路的抑制剂。
如本文所用，术语“藻类培养物”定义为在液体培养基中一起生长的藻类生物和细菌(一种或多种类型)。除非另有明确说明，否则术语“藻类生物”是指藻类细胞和细菌细胞(不含液体培养基)。“藻类生物”可以是湿物质或干物质。
除非另有明确规定，否则术语“藻类上清液”定义为藻类生物质生长的培养基，其中含有藻类生物质排出的化合物。藻类上清液通过在培养基中生长藻类生物质适当的时间，然后通过过滤和/或离心去除藻类和细菌细胞而获得。
众所周知，贪噬菌(Variovorax)属和红细菌(Rhodobacter)属的细菌在代谢上具有多样性。Variovorax是一种革兰氏阴性需氧菌，可以在各种条件下生长。它是变形杆菌(Proteobacteria)亚纲的一部分，能够代谢利用植物或藻类产生的几种天然化合物。Rhodobacter可以在多种条件下生长，包括光合作用和化学合成。生长也可以在厌氧和需氧条件下实现。球形红杆菌(Rhodobacter sphaeroides)是一种革兰氏阴性兼性细菌，是Proteobacteriaα-3亚类的一员。
本文所述的用于治疗疾病的化合物的实施例包括一种或多种由革兰氏阴性菌菌株产生的LPS/脂质A化合物，用作TLR4信号通路的选择性调节剂。所公开的发明构思涉及三个基本步骤的任何组合：(1)革兰氏阴性菌产生LPS/脂质A化合物；(2)LPS/脂质化合物通过激活或抑制调节TLR4活性；以及(3)下游效应导致由于球虫病、坏死性肠炎和其他与肠道炎症相关的疾病引起的对健康和生长的负面影响减少。
在一个实施例中，用作TLR4信号通路的选择性调节剂的LPS/脂质A化合物由Variovorax paradoxus菌株产生。Variovorax paradoxus菌株可以是在藻类生物质中发现的天然菌株。(如上文第[0015]段所述，在藻类上清液中可发现生物活性副产物[包括排泄物或结构成分]。)藻类生物质可以包括藻类物种软克里藻(Klebsormidium flaccidum)。更具体地，藻类生物质培养物可以包括藻类菌株Klebsormidium flaccidum，var.ZIVO。
在另一个实施例中，用作TLR4信号通路的选择性调节剂的LPS/脂质A化合物由Rhodobacter sphaeroides菌株产生。已经对Rhodobacter sphaeroides的结构和功能进行了广泛的研究。更为集中的研究考察了Rhodobacter sphaeroides的光合特性。虽然已知在人细胞中，来自Rhodobacter sphaeroides的脂多糖是有效的TLR4拮抗剂，通过阻断LPS/TLR4信号传导来防止TLR4介导的炎症，发明人采用测试方法来解决家禽中的多种生命生长性能参数，从而得出来源于Rhodobacter sphaeroides的LPS化合物被证明是有效的球虫病替代治疗方法的结论。研究进一步表明，将在人体体外试验中起TLR4抑制剂作用的化合物与TLR2活化剂(如来自革兰氏阴性菌的LPS)结合可提供抗球虫病作用。
因此，根据本发明用于治疗疾病的化合物的实施例涉及一种或多种LPS/脂质A化合物，其由Variovorax组或Rhodobacter组的革兰氏阴性菌菌株产生，用作TLR信号通路的选择性调节剂。所公开的发明构思的一个具体实施例涉及由Variovorax paradoxus菌株和Rhodobacter sphaeroides菌株产生的LPS/脂质A化合物用作TLR4信号通路的选择性调节剂的用途。
本文使用的LPS/脂质A化合物可以通过任何合适的方法从Variovorax paradoxus菌株和/或Rhodobacter sphaeroides菌株获得，但在特定实施例中，它们是使用标准的多步骤LPS提取协议提取的，例如：(1)用苯酚/硫氰酸胍溶液提取冻干细菌并收集水层用于冻干；(2)使冻干部分在水中再溶解；(3)超滤溶解部分以去除低分子量物质和盐；(4)使用多粘菌素B树脂柱(如Aff-prep多粘菌蛋白基质材料(Bio-Rad))亲和纯化高分子量级分，活性级分用1％脱氧胆酸盐和其他方式洗脱；(5)使用尺寸排阻色谱法进行额外的纯化。
在一些实施例中，采用多种类型的LPS提取方案从细菌中获得LPS化合物，并且提取过程可以进行不止一次。一旦从细菌中提取出LPS化合物并纯化，可通过酸水解或其他合适的技术来制备脂质A级分。
在一些示例中，使用本领域的常规方法(包括使用质谱法、气相色谱法或两者)对LPS化合物的结构进行分析。作为非限制性示例，在一个实施例中，从Varivarax paradoxus菌株分离的LPS的液相色谱分析结果显示在脂质A级分上存在羟基癸酸和羟基辛酸脂肪酸。作为另一个非限制性示例，在另一个实施例中，从Variovorax paradous菌株分离的LPS的气相色谱-质谱(GC-MS)分析结果表明，主要的饱和脂肪酸是月桂酸，每个脂质A结构具有一个或两个分子。
一种或多种来源于革兰氏阴性菌菌株(如Variovorax paradoxus或Rhodobactersphaeroides)的LPS/脂质A化合物可以选择性调节TLR4信号通路，以改变炎症反应，并在多种用途和应用中改善免疫健康。在一个实施例中，可将来源于Variovorax paradoxus或Rhodobacter sphaeroides的LPS/脂质A化合物并入基于藻类的饲料成分中，以改善家禽的肠道健康。
所公开的来源于Variovorax paradoxus或Rhodobacter sphaeroides的LPS/脂质A化合物可用于通过多种机制改善家禽的健康。例如，LPS/脂质A化合物可以通过在典型的炎症级联中下调TLR4表达和下游抑制NF-κB激活来负性调节炎症介质，从而保护家禽免受内部炎症。在另一个实施例中，LPS/脂质A化合物可通过干扰半胱氨酸残基介导的受体二聚化来抑制家禽中TLR4的激活。在又一示例中，LPS/脂质A化合物可抑制非传染性和传染性刺激物与TLR4相互作用并触发促炎反应的能力，从而改善家禽肠道完整性。在另一个实施例中，LPS/脂质A化合物可以通过配体依赖性或配体非依赖性激活来调节TLR4。作为另一个例子，LPS/脂质A化合物可与其他TLR兴奋剂协同作用，以提供增强的免疫反应，同时降低宿主的代谢成本。
当在动物饲料中包括作为细菌生物质的所公开的发明构思时，组合批料优选以每吨成品饲料约20.0g组合物至每吨成品饲料约250.0g组合物的量提供，更优选以每吨成品饲料约125.0g组合物至每吨成品饲料约175.0g组合物的量提供，最优选以每吨成品饲料约100.0g组合物至每吨成品饲料约150.0g组合物的量提供。理想的建议比率和非限制性比率为每吨成品饲料约125.0g组合物以获得最大效果。
第一项研究
第一项研究旨在证明本发明构思所公开的的化合物和治疗方法的有效性，被设计用于确定本发明化合物在动物(特别是鸡，更具体地说肉鸡)饲料中施用时的比较抗球虫功效。
第一项研究–处理方法
提出了提高暴露于球虫病攻击的肉鸡生长效率的方法的非限制性示例。应理解的是，以下方法不旨在作为唯一的处理方法，而只是示例性的。该研究比较了四种处理方案：(1)饲料中无添加材料，家禽不受球虫病攻击；(2)饲料中无添加材料，家禽受球虫病攻击；(3)饲料中有盐霉素(Salinomycin)，家禽受球虫病攻击；和(4)饲料中有本发明的化合物，家禽受球虫病攻击。盐霉素是一种从白色链霉菌(Streptomyces albus)中分离出来的聚醚离子载体抗生素，常用作治疗球虫病的抗生素。
研究动物为鸡，特别是雄性肉鸡。获得孵化日雄性肉鸡雏鸡。禽类在孵卵场交配。每组10只雏鸡被随机挑选、分组称重并放入笼子。记录所有未用于分配的禽类的数量和处理情况。在研究过程中，没有更换禽类。每个处理组有80只禽类。
按照层架中的位置将鸡笼子分成区块，区块大小等于处理。孵化日(DOT 0)将这些禽类(特别是肉鸡)放在实验笼中时，这项研究开始。只选择了健康的禽类。放置时，给禽类喂食处理饲料。恒温控制的燃气炉/空调保持笼内温度均匀。
配制了与美国常用饲料混合的非药物商业型鸡发酵剂(starter)。饲粮是全蔬菜饲料，不含抗生素、有机酸、NSP酶或直接饲喂的微生物。该日粮从小鸡到达之日起至研究的第28天任意喂养。饲粮配方包含在源数据中。实验处理饲料是由这种基础发酵剂饲料制备的。记录用于制备处理批次的所有基础饲料和供试品的量。
从每批处理饲粮的开始、中间和结束各采集一份，并混合以形成复合样本。每次处理从复合样本中取一个样本进行分析。
所有禽类均在DOT 0、14、20和28用笼子称重。饲料在DOT 0称重。剩余饲料在DOT14、20和28称重。
进行了球虫卵囊接种程序。在研究的第14天，除T1外，所有禽类都口服了稀释至1.0ml体积(p.o.)的混合E.acervulina(堆型艾美耳球虫)、E.maxima(巨型艾美耳球虫)和E.tenella(柔嫩艾美耳球虫)球虫接种物。接种物水平旨在产生中等攻击。
在DOT 20，从每个笼子中选择一定数量的禽类，处死、称重，并检查球虫病变的程度。Johnson和Reid(1970)的球虫病病变评分方法用于对肠道感染区域进行评分。评分基于0-4分，0分为正常，4分为最严重。同样在第20天，从每个笼子收集混合粪便。通过粪便漂浮检查每个样本中每克粪便中的卵囊数量。
第一项研究–数据
收集的数据如下表所示。
Figure BDA0004113279910000081
Figure BDA0004113279910000091
Figure BDA0004113279910000092
Figure BDA0004113279910000093
Figure BDA0004113279910000094
Figure BDA0004113279910000095
Figure BDA0004113279910000096
Figure BDA0004113279910000101
每个结果显示的字母表示统计显著性，具有相同字母的那些结果在统计上彼此没有差异。
第一项研究–分析方法计算笼子增重、饲料消耗量、饲料转化率、病变评分、卵囊计数(OPG)和死亡率的平均值。
第一项研究–结果试验结果表明，与受攻击的对照组相比，化合物处理组的整体FCR降低。喂食本发明化合物的动物具有与盐霉素(药物)处理组相似的FCR。
第二项研究
第二项研究旨在证明本发明构思所公开的化合物和治疗方法的有效性，被设计用于确定饲料中施用的本发明化合物对控制动物(特别是鸡，更具体地说，肉鸡)中由产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)引起的坏死性肠炎的比较功效。Clostridiumperfringens是一种产孢厌氧菌。它通常存在于土壤、灰尘、饲料、家禽垃圾、粪便和肠道中。
第二项研究-处理方法
提出了使用本发明化合物的另一种处理方法的示例。应理解的是，以下方法不旨在作为唯一的处理方法，而只是示例性的。该研究比较了五种处理方案：(1)饲料中无添加材料，家禽不受球虫病/Clostridium perfringens攻击，(2)饲料中无添加材料，家禽受球虫病/Clostridium perfringens攻击，(3)饲料中化合物包含率为0.039％，家禽受球虫病/Clostridium perfringens攻击，(4)饲料中化合物包含率为0.077％，家禽受球虫病/Clostridium perfringens攻击，以及(5)饲料中化合物包含率为0.551％，家禽受球虫病/Clostridium perfringens攻击。如下所述，该研究由40个笼子组成，每个笼子最初有9只雏鸡。这些处理在八个区块(每个区块五个笼子)中重复。鸡龄为0至28天。
配制了与美国常用饲料混合的非药物鸡发酵剂。该饲粮是当地商业配方的代表，计算分析结果符合或超过美国国家研究委员会(NRC)的肉鸡发酵剂要求。饲粮配方包含在源数据中。实验处理饲料是由这种基础发酵剂饲料制备的。记录用于制备处理批次的所有基础饲料和供试品的量。混合处理饲料以确保各供试品均匀分布。冲洗混合器以防止交叉污染。饲料分配给相同处理的笼子。在研究期间喂养该日粮(以醪的形式)。从每批处理饲粮的开始、中间和结束处各收集一份，并混合以形成复合样本。
获得孵化日雄性肉鸡雏鸡。记录饲养员的群信息。禽类在孵卵场交配。研究中只使用了外表健康的雏鸡。记录了所有未用于分配的禽类的处理情况。每个处理组有72只家禽。
雏鸡抵达后被饲养在
Figure BDA0004113279910000111
层架式笼子中。放置时，给禽类喂食处理饲料。恒温控制的燃气炉/空调保持均匀的温度。甚至提供了照明。记录了笼图。按照层架中的位置将笼子分成区块。将禽类放置(孵化日)(DOT0)到实验笼中时，这项研究开始。在研究过程中，没有更换禽类。
所有禽类在DOT 0、14、21和28称重。饲料在DOT 0称重，剩余饲料在DOT 14、21和28称重。
在DOT 14，所有禽类都口服接种了约5000个E.maxima卵囊。从DOT19开始，除处理1外，所有禽类均接受了C.perfringens肉汤培养物。在3天内(DOT19、20和21)，每天给这些禽类施用一次新鲜肉汤培养物。
第二项研究–分析方法
在DOT 21，从每个笼子中选择三只禽类，处死、称重，并检查坏死性肠管病变的程度。评分基于0至3分，0分为正常，3分为最严重。在DOT28中，从每个笼子中选择一只禽类，处死，称重，并收集整个胃肠道。在DOT 28，从每个笼子中选择一只禽类，实施安乐死，并切下一小段肠并冷冻。计算笼子增重、饲料消耗量、饲料转化率、NE(necrotic enteritis，坏死性肠炎)病变评分和坏死性肠炎死亡率百分比的平均值。
Figure BDA0004113279910000121
第二项研究–收集的数据列出收集数据的图表如下。
Figure BDA0004113279910000122
Figure BDA0004113279910000123
处理 评分NE(0-3) 死亡率％NE
1.NM，无CP 0.0b 0d
2.NM，CP 1.1a 25a
3.本发明的化合物0.039％，CP 0.8a 13b
4.本发明的化合物0.077％，CP 0.9a 9bc
5.本发明的化合物0.551％，CP 0.9a 5cd
每个结果显示的字母表示统计显著性，具有相同字母的那些结果在统计上彼此没有差异。
第二项研究-结果试验结果表明，与受攻击的对照组相比，化合物处理组的整体FCR降低。喂食本发明化合物的动物具有与未受攻击的对照组相似的FCR。喂食本发明化合物的禽类的坏死性肠炎死亡率百分比显著降低。
第三项研究
第三项研究旨在证明本发明构思所公开的化合物和治疗方法的有效性，被设计用于确定本发明化合物对肉鸡性能和消化健康的比较功效，该化合物以正常配方的玉米/SBM饲粮施用给地板围栏饲养的肉鸡，不含抗球虫药或其他ABF产品，并在疾病攻击环境(球菌挑战+堆积垃圾)下饲养。
第3项研究-处理方法
提出了使用本发明化合物的另一种处理方法的非限制性示例。应理解的是，以下方法不旨在作为唯一的处理方法，而只是示例性的。该研究比较了五种处理方案：(1)饲料中无添加材料，家禽不受球虫病攻击，(2)饲料中无添加材料，家禽受球虫病攻击，(3)Coban(9克/吨饲料)，家禽受球虫病攻击，和(4)饲料中本发明化合物的包含率为125克/吨饲料，家禽受球虫病攻击。
Figure BDA0004113279910000131
(莫能菌素，Monensin，USP)常用作治疗球虫病的抗生素。
研究动物是在商业孵化场从粪便污染的鸡群孵化后12小时内获得的混合性商业肉鸡雏鸡。在孵化场或研究期间的任何时间都没有接种球虫病疫苗。雏鸡在控制温度的条件下被运送到研究围栏，以确保禽类舒适。雏鸡抵达后立即被随机分配到每个实验围栏。
将来自至少3个以前的鸡群中的肉鸡放在含有堆积的地板垫的围栏中。围栏的尺寸为4.5'x10'，为每只禽类提供约0.87平方英尺。最初(第0-10天)，这些禽类被放置在部分室内育雏系统中(每只禽类约0.45平方英尺)。每个处理组有240只禽类。
用具有正常营养配方的标准玉米-SBM饲粮喂养禽类。饲料在每个配方期开始时称重，分两个阶段喂养：发酵期饲粮(0-14日龄)和生长期饲粮(15-28日龄)。
在试验第7天，受试组的所有禽类都接受了含有三种艾美耳球虫混合物的卵囊接种饲料。精确称重足够的饲料，并以平均100％填充容量的速度提供给禽类，这是通过测量前一天每只围栏24小时内消耗的饲料量来确定的。使用50#混合器将卵囊与饲料混合10分钟，以提供每只禽类100000个E.acervuline卵囊、每只禽类50000个E.maxima卵囊和每只禽类75000个E.tenella卵囊。在攻击之前，所有接种了球菌的禽类都被饥饿8小时。将接种的饲料同时放置在每个区块(或代表)上，并保持2小时。在2小时程序之后，移除所有剩余的接种饲料并称重，以确保每个围栏和每只禽类的消耗量相等。
第3项研究–分析方法
对每个处理组的生长活产性能进行测量终点，包括死亡率、饲料摄入量、每个时期的增重以及0-14天、0-21天和0-28天的饲料：增重(即饲料转化率)。
在第14天，对每个围栏2只雄性和2只雌性以及每个围栏4只雄性和4只雌性的28天龄进行了肠道十二指肠病变评分和球虫病/盲肠艾美耳球虫病病变评分。
第三项研究–数据
收集的数据如下表所示。
Figure BDA0004113279910000151
Figure BDA0004113279910000152
Figure BDA0004113279910000153
第14天平均病变评分 十二指肠 盲肠
1.无添加剂，无感染 0.125a 0.146a
2.无添加剂，感染 1.583d 1.729c
3.Coban 90g/ton 0.375b 0.292a
4.本发明的化合物125g/ton 0.646c 0.667b
第28天平均病变评分 十二指肠 盲肠
1.无添加剂，无感染 0.167a 0.188a
2.无添加剂，感染 1.563c 1.667c
3.Coban 90g/ton 0.208a 0.229a
4.本发明的化合物125g/ton 0.625b 0.563b
Figure BDA0004113279910000154
Figure BDA0004113279910000155
Figure BDA0004113279910000161
Figure BDA0004113279910000162
每个结果显示的字母表示统计显著性，具有相同字母的那些结果在统计上彼此没有差异。
第三项研究–结果
试验结果表明，从第15天开始，与受攻击的对照组相比，化合物处理组的整体FCR降低。从第15天到研究结束(第28天)，喂食本发明化合物的动物在所有组中具有最低的FCR值。在整个研究过程中，喂食本发明化合物的动物的平均体重与无感染的对照组没有统计学差异。死亡率也显著降低，与无感染对照组或Coban-处理组无统计学差异。

Claims (20)

1.一种减轻动物球虫感染的方法，所述方法包括通过向所述动物喂食有效量的来源于包含来源于革兰氏阴性菌的脂多糖的生物质的组合物来调节Toll样受体通路，其中球虫病的影响通过由于广谱免疫调节而增强的免疫反应而减轻。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物在喂食给所述动物之前与饲料日粮部分混合。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述革兰氏阴性菌来自Rhodobacter属或Variovorax属。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述革兰氏阴性菌是Variovorax组的一员。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述Variovorax组的一员是Variovoraxparadous。
6.根据权利要求2所述的方法，其中将来源于由革兰氏阴性菌组成的生物质的所述组合物以提供每吨成品饲料约20.0g组合物至每吨成品饲料约250.0g组合物的量喂食给所述动物。
7.根据权利要求2所述的方法，其中将来源于由革兰氏阴性菌组成的生物质的所述组合物以提供每吨成品饲料约125.0g组合物至每吨成品饲料约175.0g组合物的量喂食给所述动物。
8.根据权利要求2所述的方法，其中将来源于由革兰氏阴性菌组成的生物质的所述组合物以提供每吨成品饲料约100.0g组合物至每吨成品饲料约150.0g组合物的量喂食给所述动物。
9.根据权利要求1所述的方法，其中包含来源于革兰氏阴性菌组分的脂多糖的所述组合物适用于家禽。
10.根据权利要求1所述的方法，其中包含来源于革兰氏阴性菌组分的脂多糖的所述组合物用于减轻家禽中的球虫病。
11.一种减轻动物球虫病的方法，所述方法包括通过向所述动物喂食有效量的来源于包含来源于革兰氏阴性菌的脂多糖的生物质的组合物来调节Toll样受体通路的步骤，将所述组合物以每吨成品饲料约20.0g组合物至每吨成品饲料约250.0g组合物的量喂食给所述动物。
12.根据权利要求11所述的方法，其中将来源于由革兰氏阴性菌组成的生物质的所述组合物以提供每吨成品饲料约125.0g组合物至每吨成品饲料约175.0g组合物的量喂食给所述动物。
13.根据权利要求11所述的方法，其中将来源于由革兰氏阴性菌组成的生物质的所述组合物以提供每吨成品饲料约100.0g组合物至每吨成品饲料约150.0g组合物的量喂食给所述动物。
14.根据权利要求11所述的方法，其中所述革兰氏阴性菌来自Rhodobacter属或Variovorax属。
15.根据权利要求11所述的方法，其中所述革兰氏阴性菌是Variovorax组中的一员。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述Variovorax组中的一员是Variovoraxparadous。
17.根据权利要求11所述的方法，其中包含来源于革兰氏阴性菌组分的脂多糖的所述组合物适用于家禽。
18.根据权利要求11所述的方法，其中包含来源于革兰氏阴性菌组分的脂多糖的所述组合物用于减轻家禽中的球虫病。
19.一种用于预防或最小化引起动物肠道炎症的疾病的方法，所述方法包括通过向所述动物喂食有效量的包含来源于革兰氏阴性菌的脂多糖的组合物来对先天性和适应性免疫通路产生直接影响，其中所述肠道炎症疾病的影响通过增强免疫反应而减轻。
20.根据权利要求19所述的方法，其中将由革兰氏阴性菌组成的所述组合物以提供每吨成品饲料约20.0g组合物至每吨成品饲料约250.0g组合物的量喂食给所述动物。
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3177327A1 (en) * 2020-05-14 2021-11-18 Andrew A. Dahl Use of tlr4 modulator in the treatment of coccidiosis
WO2023220272A1 (en) * 2022-05-12 2023-11-16 Can Technologies, Inc. Compositions and methods for the treatment and prevention of clostridium associated disease
WO2023220275A1 (en) * 2022-05-12 2023-11-16 Can Technologies, Inc. Compositions and methods for the treatment and prevention of coccidiosis infection
WO2023220281A1 (en) * 2022-05-12 2023-11-16 Can Technologies, Inc. Compositions and methods for the treatment and prevention of coinfection with eimeria and clostridium
JP7479620B1 (ja) 2023-09-19 2024-05-09 有限会社バイオメディカルリサーチグループ リポ多糖、リポ多糖製造方法及びリポ多糖配合物

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001025254A2 (en) * 1999-10-04 2001-04-12 University Of Maryland Biotechnology Institute Novel adjuvant comprising a lipopolysaccharide antagonist
FI112088B (fi) * 2001-10-17 2003-10-31 Clewer Ltd Oy Eettereitä hajottavia bakteereita ja niiden käyttö
US20060257411A1 (en) * 2005-05-06 2006-11-16 Bruce Beutler Compositions and methods for modulating cells via CD14 and toll-like receptor 4 signaling pathway
US8088396B2 (en) * 2006-03-01 2012-01-03 University Of Iowa Research Foundation Isolated complexes of endotoxin and modified MD-2
US8603518B2 (en) * 2006-05-01 2013-12-10 Universiteit Gent Hydroxybutyrate and poly-hydroxybutyrate as components of animal feed or feed additives
BR112019015140A2 (pt) * 2017-01-23 2020-04-14 Univ Florida indução de imunidade protetora contra antígenos
EP3876750A4 (en) * 2018-11-08 2022-05-25 DSM IP Assets B.V. METHODS TO SUPPORT GASTROINTESTINAL HOMEOSTASIS

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