CN114533665B - 一种含挥发油型兽用双黄连口服液及其制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药物制剂技术领域,具体涉及一种含挥发油型兽用双黄连口服液及其制备工艺。本发明提供的含有挥发油型兽用双黄连口服液,包括如下重量的原料:金银花300~400g、黄芩300~400g、连翘700~800g。本发明提供的含挥发油型兽用双黄连口服液本为纯中药制剂,提取出的有效成分多,含有绿原酸、咖啡酸、连翘酯苷A、木犀草苷、野黄芩酯、芦丁、连翘苷、黄芩苷、黄芩素、挥发油类等20多种有效成分,提取的挥发油成分,具有抗菌抑病毒作用。并且采用低温逆流提取工艺,确保物料受热均匀,药液质量得到提高,能最大限度提取更多有效成分和减少高温条件对有效成分质量的影响。
Description
技术领域
本发明属于药物制剂技术领域,具体涉及一种含挥发油型兽用双黄连口服液及其制备工艺。
背景技术
近年来,随着养殖业的发展和规模扩大,畜禽疾病日益多样化、复杂化,大量的化学药物、抗生素在畜禽生产中使用,药物的滥用使病原微生物耐受性增加,不仅加大了治疗疾病的难度,还严重威胁着人类的健康。因此,用传统中药代替抗生素更具有可持续发展的意义。
双黄连口服液是兽医临床使用较广的一种纯中药复方制剂,由黄芩、金银花、连翘3味中药组成,具有辛凉解表、清热解毒的功效,可用于犬、猫、鸡感冒发热的疾病治疗。现代医学研究表明,双黄连口服液能抗多种病原微生物,具有广谱的杀菌作用,并能降低毛细血管的通透性,减少渗出,具有抗炎,抗过敏作用,还可增强机体产生干扰素能力。可显著地増强细胞免疫和体液免疫作用,对病毒也均有较强的抑制左右,并能中和细菌产生的内毒素,同时具抗感染和免疫调节双重作用。双黄连口服液以其良好的疗效被广泛应用至今,在防治流感、抑制细菌方面具有显著的疗效。
虽然双黄连口服液在临床上应用也较为普遍,但是在防治鸡、犬和猫等动物的感冒发热疫病时的效果不能达到人们理想的要求。目前,兽用双黄连口服液的生产工艺执行《中华人民共和国兽药典》2020年版二部收载工艺,工艺操作复杂,成本较高。同时,目前市售企业采用药材提取生产的双黄连口服液产品,普遍性状不符合澄清的质量要求;采用超滤处理,虽然可以提升溶液的澄清度,但也会造成大分子量中药有效成分的损失且澄清体系稳定性差,难以维持较长时间,还会增加生产成本。
中国专利申请CN103356739A公开了一种兽用双黄连口服液,由活性成分与辅料组成,其中,活性成分为黄芩20%-25%重量、金银花20%-25%重量、连翘50%-60%重量。该发明的制备工艺虽然通过低温提取处理,实现了简化提取工艺,提高生产效率,减少了因对原料多次煎煮浸提过滤而造成的有效成分的损失,但是仍然没有对具有重要药效的挥发油进行单独提取的步骤,而现行质量标准的含量测定也只是采用色谱方法分别测定成方中药材的三种成分,成分指标较单一,不能全面评价制剂的质量。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题,本发明的目的在于提供一种含挥发油型兽用双黄连口服液及其制备工艺。本发明提供的含挥发油型兽用双黄连口服液本发明为纯中药制剂,提取的挥发油成分,具有抗菌抑病毒作用,在双黄连口服液中发挥重要药用功效,采用低温逆流提取工艺,使整个提取过程保持恒定温度,确保物料受热均匀,药液质量得到提高,能最大限度提取更多有效成分和减少高温条件对有效成分质量的影响。
本发明的技术方案是:
一种含挥发油型兽用双黄连口服液,包括如下重量的原料:
金银花300~400g、黄芩300~400g、连翘700~800g。
进一步地,所述的含挥发油型兽用双黄连口服液,由如下重量的原料组成:金银花375g、黄芩375g、连翘750g。
本发明还提供了一种所述的含挥发油型兽用双黄连口服液的制备工艺,包括如下步骤:
S1、将黄芩切片,用逆流提取设备在80~90℃下提取3次,每次加水1000ml,并提取2小时,合并提取液,滤过,滤液浓缩并调节pH后,保温1h,静置12h,滤过,沉淀中加入其重量6~8倍的水,用40%氢氧化钠溶液调pH至7,再加等量95%的乙醇,搅拌使溶解,滤过,滤液用2mol/L盐酸溶液调pH至2,60~70℃保温30min,静置12h,滤过,沉淀加乙醇洗至pH为7,挥尽乙醇备用,得黄芩提取物;
S2、金银花和连翘加水浸泡半小时后,冷凝回流5小时,分别收集回流液和挥发油后,再向金银花和连翘中加入其重量3倍的水继续煎煮1h,合并回流液和煎液,滤过,滤液浓缩,然后降温至40℃时缓慢加入乙醇,使含醇量达75%,充分搅拌,静置12h,滤取上清液,残渣加75%乙醇至1000mL,搅匀,静置12h,滤过,合并乙醇液,并回收乙醇至无醇味,得金银花与连翘提取;
S3、向步骤S2所得的金银花与连翘提取液中加入步骤S1所得的黄芩提取物,并加水至850mL,以40%氢氧化钠调节pH至7,搅匀,冷藏72h,滤过,滤液调节pH至7,加水至900mL,搅匀,静置12h,滤过,得混合液Ⅰ;
S4、将步骤S2中收集的挥发油,溶于乳化剂中,搅拌均匀,再加入挥发油体积4倍的95%乙醇,搅拌均匀,得混合液Ⅱ;
S5、将步骤S3所得的混合液Ⅰ,缓慢加入步骤S4所得的混合液Ⅱ中,并在60℃下加热,乳化充分后冷却,定容至1000mL,搅匀静置12小时,滤过,灌装,灭菌,即得。
进一步地,所述步骤S1中逆流提取所得的提取液,滤过,滤液浓缩并在80℃时加入2mol/L盐酸溶液调节pH至1~2。
进一步地,所述步骤S2中金银花和连翘浸泡时的温度为40~50℃。
进一步地,所述步骤S2中合并回流液和煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.2~1.25,于70~80℃下测量。
进一步地,所述步骤S3中的冷藏温度为4~8℃。
进一步地,所述步骤S4中的乳化剂为司盘20、吐温80、烷基糖苷按0.8~1.3:2~6:0.8~1.2的重量比组成,添加量为所述挥发油体积的3~5倍。
更进一步地,所述步骤S4中的乳化剂为司盘20、吐温80、烷基糖苷化合物按1:4:1的重量比组成。
本发明提供含挥发油型兽用双黄连口服液为纯中药制剂,而现有技术中,对于中药组分的提取,普遍为水醇法,制备过程中受高温煎煮等工艺的影响,造成主要有效成分绿原酸、连翘苷、黄岑苷等成分损失,有效生物活性物质成分降解失效,提取率降低。而本发明的制备工艺中采用的了低温逆流提取工艺,整个提取过程保持80~90℃的恒定温度,可以保证物料受热均匀,能最大限度提取更多有效成分和减少高温条件对有效成分质量的影响,药液质量得到提高。
同时为了提供本发明制得的双黄连口服液,还将提取的挥发油的有效成分,还采用先进混悬技术,弥散于溶液中,其中以特定比例的司盘20、吐温80、烷基糖苷作为乳化剂,在确保挥发油以微小的油滴均匀混悬的同时,还能够提高溶液的澄清度,不会产生分层的现象,有效提高了双黄连口服液中挥发油类物质的吸收效果。
通过对本发明提供的含挥发油型兽用双黄连口服液进行临床药学试验,结果显示本发明的含挥发油型兽用双黄连口服液对鸡感冒发热具有较好的疗效,用药14天后,有效率、治愈率分别为96.5%和94.5%,同时能够能使发病鸡的体温下降,并能提供鸡血液中溶菌酶水平,提高鸡非特异性免疫力,达到治疗鸡感冒发热的效果。
而本发明实施例2组、药物对照组的相对增重率分别为108.87%和104.89%。依据双黄连口服液治疗效果和鸡体温、血清溶酶菌等免疫及生化指标变化情况,表明本发明药物在治疗效果方面高于普通市售双黄连口服液。本试验通过对血液中溶酶菌的测定,解释了双黄连口服液治疗发热感冒的可能性机制,为实践生产应用提供了数据支持。
与现有技术相比,本发明提供的含挥发油型兽用双黄连口服液及其制备工艺具有以下优势:
(1)本发明提供含挥发油型兽用双黄连口服液提取出的有效成分多,含有绿原酸、咖啡酸、连翘酯苷A、木犀草苷、野黄芩酯、芦丁、连翘苷、黄芩苷、黄芩素、挥发油类等20多种有效成分,能够有效满足饮水给药方便快捷的特点,在绿色健康养殖之路上将有广阔的应用和发展前景。
(2)本发明提供含挥发油型兽用双黄连口服液中提取的挥发油成分,具有抗菌抑病毒作用,在双黄连口服液中发挥重要药用功效。
(3)本发明提供含挥发油型兽用双黄连口服液采用的了低温逆流提取工艺,整个提取过程保持80~90℃的恒定温度,使物料受热均匀,药液质量得到提高,能最大限度提取更多有效成分和减少高温条件对有效成分质量的影响;同时还采用先进混悬技术,确保挥发油以微小的油滴均匀混悬、弥散于溶液,有效提高挥发油类的吸收。
(4)本发明提供含挥发油型兽用双黄连口服液为纯中药制剂,对食品安全危害较小,同时在防治流感、抑制细菌方面疗效独特,可以达到中药汤剂的最宽的适应症,最好的药效显效性,是目前最便利性的汤剂。
附图说明
图1为本发明实施例2制备的含挥发油型兽用双黄连口服液的指纹图谱;
图2为普通兽用双黄连口服液的指纹图谱。
具体实施方式
以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明,但这并非是对本发明的限制,本领域技术人员根据本发明的基本思想,可以做出各种修改或改进,但是只要不脱离本发明的基本思想,均在本发明的保护范围之内。
烷基糖苷购自上海麦克林生化科技有限公司,货号为A864768。
另外,本发明所用的其他试剂均为常用试剂,均可在常规试剂生产销售公司购买。
实施例1一种含挥发油型兽用双黄连口服液及其制备方法
所述的含挥发油型兽用双黄连口服液由如下重量的原料组成:
金银花300g、黄芩300g、连翘700g。
所述的含挥发油型兽用双黄连口服液的制备方法包括如下步骤:
S1、将黄芩切片,用逆流提取设备在80~90℃提取3次,每次加水1000ml,并提取2小时,合并提取液,滤过,滤液浓缩并在80℃时加入2mol/L盐酸溶液适量调节pH至1~2,保温1h,静置12h,滤过,沉淀中加入其重量6倍的水,用40%氢氧化钠溶液调pH至7,再加等量95%的乙醇,搅拌使溶解,滤过,滤液用2mol/L盐酸溶液调pH至2,60℃保温30min,静置12h,滤过,沉淀加乙醇洗至pH为7,挥尽乙醇备用,得黄芩提取物;
S2、金银花和连翘加水在40℃下浸泡半小时后,冷凝回流5小时,分别收集回流液和挥发后,再向金银花和连翘中加入其重量3倍的水继续煎煮1h,合并回流液和煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.2~1.25(于70~80℃测量),然后在降温至40℃时缓慢加入乙醇,使含醇量达75%,充分搅拌,静置12h,滤取上清液,残渣加75%乙醇至1000mL,搅匀,静置12h,滤过,合并乙醇液,并回收乙醇至无醇味,得金银花与连翘提取液;
S3、向步骤S2所得的金银花与连翘提取液中加入步骤S1所得的黄芩提取物,并加水至850mL,以40%氢氧化钠调节pH至7,搅匀,于4℃下冷藏72h,滤过,滤液调节pH至7,加水至900mL,搅匀,静置12h,滤过,得混合液Ⅰ;
S4、将步骤S2中收集的挥发油,溶于挥发油体积3倍的乳化剂中,搅拌均匀,再加入挥发油体积4倍的95%乙醇,搅拌均匀,得混合液Ⅱ;
S5、将步骤S3所得的混合液Ⅰ,缓慢加入步骤S4所得的混合液Ⅱ中,并60℃加热,乳化充分后冷却,并定容至1000mL,搅匀静置12小时,滤过,灌装,灭菌,即得。
所述步骤S4中的乳化剂为司盘20、吐温80、烷基糖苷按0.8:2:1.2的重量比组成。
实施例2一种含挥发油型兽用双黄连口服液及其制备方法
所述的含挥发油型兽用双黄连口服液由如下重量的原料组成:
金银花375g、黄芩375g、连翘750g。
所述的含挥发油型兽用双黄连口服液的制备方法包括如下步骤:
S1、将黄芩切片,用逆流提取设备在85℃提取3次,每次加水1000ml,并提取2小时,合并提取液,滤过,滤液浓缩并在80℃时加入2mol/L盐酸溶液适量调节pH至1~2,保温1h,静置12h,滤过,沉淀中加入其重量7倍的水,用40%氢氧化钠溶液调pH至7,再加等量95%的乙醇,搅拌使溶解,滤过,滤液用2mol/L盐酸溶液调pH至2,65℃保温30min,静置12h,滤过,沉淀加乙醇洗至pH为7,挥尽乙醇备用,得黄芩提取物;
S2、金银花和连翘加水在45℃下浸泡半小时后,冷凝回流5小时,分别收集回流液和挥发油后,再向金银花和连翘中加入其重量3倍的水继续煎煮1h,合并回流液和煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.2~1.25(于70~80℃测量),然后在降温至40℃时缓慢加入乙醇,使含醇量达75%,充分搅拌,静置12h,滤取上清液,残渣加75%乙醇至1000mL,搅匀,静置12h,滤过,合并乙醇液,并回收乙醇至无醇味,得金银花与连翘提取液;
S3、向步骤S2所得的金银花与连翘提取液中加入步骤S1所得的黄芩提取物,并加水至850mL,以40%氢氧化钠调节pH至7,搅匀,于6℃下冷藏72h,滤过,滤液调节pH至7,加水至900mL,搅匀,静置12h,滤过,得混合液Ⅰ;
S4、将步骤S2中收集的挥发油,溶于挥发油体积4倍的乳化剂中,搅拌均匀,再加入挥发油体积4倍的95%乙醇,搅拌均匀,得混合液Ⅱ;
S5、将步骤S3所得的混合液Ⅰ,缓慢加入步骤S4所得的混合液Ⅱ中,并60℃加热,乳化充分后冷却,并定容至1000mL,搅匀静置12小时,滤过,灌装,灭菌,即得。
所述步骤S4中的乳化剂为司盘20、吐温80、烷基糖苷按1:4:1的重量比组成。
实施例3一种含挥发油型兽用双黄连口服液及其制备方法
所述的含挥发油型兽用双黄连口服液由如下重量的原料组成:
金银花400g、黄芩400g、连翘800g。
所述的含挥发油型兽用双黄连口服液的制备方法包括如下步骤:
S1、将黄芩切片,用逆流提取设备在90℃提取3次,每次加水1000ml,并提取2小时,合并提取液,滤过,滤液浓缩并在80℃时加入2mol/L盐酸溶液适量调节pH至1~2,保温1h,静置12h,滤过,沉淀中加入其重量8倍的水,用40%氢氧化钠溶液调pH至7,再加等量95%的乙醇,搅拌使溶解,滤过,滤液用2mol/L盐酸溶液调pH至2,70℃保温30min,静置12h,滤过,沉淀加乙醇洗至pH为7,挥尽乙醇备用,得黄芩提取物;
S2、金银花和连翘加水在50℃下浸泡半小时后,冷凝回流5小时,分别收集回流液和挥发油后,再向金银花和连翘中加入其重量3倍的水继续煎煮1h,合并回流液和煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.2~1.25(于70~80℃测量),然后在降温至40℃时缓慢加入乙醇,使含醇量达75%,充分搅拌,静置12h,滤取上清液,残渣加75%乙醇至1000mL,搅匀,静置12h,滤过,合并乙醇液,并回收乙醇至无醇味,得金银花与连翘提取液;
S3、向步骤S2所得的金银花与连翘提取液中加入步骤S1所得的黄芩提取物,并加水至850mL,以40%氢氧化钠调节pH至7,搅匀,于8℃下冷藏72h,滤过,滤液调节pH至7,加水至900mL,搅匀,静置12h,滤过,得混合液Ⅰ;
S4、将步骤S2中收集的挥发油,溶于挥发油体积5倍的乳化剂中,搅拌均匀,再加入挥发油体积4倍的95%乙醇,搅拌均匀,得混合液Ⅱ;
S5、将步骤S3所得的混合液Ⅰ,缓慢加入步骤S4所得的混合液Ⅱ中,并60℃加热,乳化充分后冷却,并定容至1000mL,搅匀静置12小时,滤过,灌装,灭菌,即得。
所述步骤S4中的乳化剂为司盘20、吐温80、烷基糖苷按1.3:6:0.8的重量比组成。
对比例1一种含挥发油型兽用双黄连口服液及其制备方法
与实施例2的相比,对比例1的区别在于,所述步骤S4中的乳化剂为吐温80,其他参数和操作与实施例2相同。
对比例2一种含挥发油型兽用双黄连口服液及其制备方法
与实施例2的相比,对比例2的区别在于,所述步骤S4中的乳化剂为司盘20和吐温80按重量比1:1组成,其他参数和操作与实施例2相同。
对比例3一种含挥发油型兽用双黄连口服液及其制备方法
与实施例2的相比,对比例3的区别在于,将所述步骤S4中乳化剂中的烷基糖苷替换为蔗糖脂肪酸酯,其他参数和操作与实施例2相同。
对比例4一种含挥发油型兽用双黄连口服液及其制备方法
所述的含挥发油型兽用双黄连口服液由如下重量的原料组成:
金银花375g、黄芩375g、连翘750g。
所述的含挥发油型兽用双黄连口服液的制备方法包括如下步骤:
S1、将黄芩切片,加水煎煮3次,每次加水1000ml,第一次2小时,第二、第三次各1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩并在80℃时加入2mol/L盐酸溶液适量调节pH至1~2,保温1h,静置12h,滤过,沉淀中加入其重量7倍的水,用40%氢氧化钠溶液调pH至7,再加等量95%的乙醇,搅拌使溶解,滤过,滤液用2mol/L盐酸溶液调pH至2,65℃保温30min,静置12h,滤过,沉淀加乙醇洗至pH为7,挥尽乙醇备用,得黄芩提取物;
S2、金银花和连翘加水在45℃下浸泡半小时后,冷凝回流5小时,分别收集回流液和挥发油后,再向金银花和连翘中加入其重量3倍的水继续煎煮1h,合并回流液和煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.2~1.25(于70~80℃测量),然后在降温至40℃时缓慢加入乙醇,使含醇量达75%,充分搅拌,静置12h,滤取上清液,残渣加75%乙醇至1000mL,搅匀,静置12h,滤过,合并乙醇液,并回收乙醇至无醇味,得金银花与连翘提取液;
S3、向步骤S2所得的金银花与连翘提取液中加入步骤S1所得的黄芩提取物,并加水至850mL,以40%氢氧化钠调节pH至7,搅匀,于6℃下冷藏72h,滤过,滤液调节pH至7,加水至900mL,搅匀,静置12h,滤过,得混合液Ⅰ;
S4、将步骤S2中收集的挥发油,溶于挥发油体积4倍的乳化剂中,搅拌均匀,再加入挥发油体积4倍的95%乙醇,搅拌均匀,得混合液Ⅱ;
S5、将步骤S3所得的混合液Ⅰ,缓慢加入步骤S4所得的混合液Ⅱ中,并60℃加热,乳化充分后冷却,并定容至1000mL,搅匀静置12小时,滤过,灌装,灭菌,即得。
所述步骤S4中的乳化剂为司盘20、吐温80、烷基糖苷按1:4:1的重量比组成。
与实施例2的相比,对比例4的区别在于,所述步骤S1中黄芩提取物的提取过程采用普通的煎煮提取,而未采用逆流提取的方法,其他参数和操作与实施例2相同。
试验例一、本发明含挥发油型兽用双黄连口服液对鸡的风热感冒疾病的治疗效果
1.试验材料:
(1)动物:云城公司三黄鸡,1800只。
(2)药物:普通兽用双黄连口服液、本发明实施例1~3制得的含挥发油型双黄连口服液,对比例1~4制备的含挥发油型兽用双黄连口服液。
2.试验方法:
(1)分组:将发病鸡随机分成9组,分别为空白对照组、药物对照组(普通兽用双黄连口服液对照组)、本发明制备的含挥发油型双黄连口服液实施例1~3,对比例1~4制备的含挥发油型双黄连口服液组,每组200只。
(2)临床治疗对比试验:
根据天气情况和饲养管理使鸡自然发病,出现风热感冒症状,表现为精神沉郁,食欲下降,体温升高,饮水量增加,有脱水、鸡冠变红、咳嗽等感冒发热症状。
在相同条件下,分栏后按推荐治疗剂量分别进行治疗,药物对照组、本发明实施例1~3组,对比例1~4组,每只鸡0.5ml,连用7天,空白对照组自由饮水,观察治疗效果,观察时间持续至停药后第7天,并做好如下记录:
①每群试验过程为14天,每天观察并记录鸡的临床表现,每天做好死亡记录。用药前、用药后第5天,每组试验鸡随机抽取60只测量体温,计算各组平均体温,比较用药前后鸡的体温变化。
②用药前、用药后第12天,每组试验鸡随机抽取60只测量体重,计算各组平均增重,增长率及相对增长率。
③用药后第12天,每组试验鸡随机抽取60只检测鸡血清中溶酶菌含量、总SOD活力、酸性磷酸酶含量、GSH含量、总抗氧化能力、总蛋白浓度含量。
(3)治愈率判定标准及计算方式:
治愈为第14天临床症状消失,精神及采食情况恢复正常;无效为第14天临床症状无改善;有效为第14天临床症状减轻,精神及采食情况没有恢复到发病前的状态。计算每组治愈率=治愈数/样本总数×100%。计算每组有效率=有效只数/样本总数×100%。计算每组无效率=无效只数/样本总数×100%。
3.试验结果
试验结果如表1~4所示。
表1各给药组鸡感冒发热的治疗效果
(注:与空白对照组比较,*P<0.05,**P<0.01)
由上表1可见,本发明实施例1~3制备的含挥发油型双黄连口服液的对鸡的风热感冒疾病的治愈率较药物对照组治愈率高,其中实施例2的治愈率为94.5%,有效率为96.5%,为本发明的最佳实施例。而当对比例1~3中改变了乳化剂的组成或比例以及对比例4中只采用煎煮提取的方式时,治愈率明显下降,说明本发明药物对鸡感冒发热具有较好的疗效,治疗效果显著。
表2各给药组鸡体温变化情况
组别 | 鸡数/只 | 用药前体温/℃ | 用药后(第5d)体温/℃ |
实施例1组 | 60 | 42.3±0.2 | 40.5±0.3<sup>*</sup> |
实施例2组 | 60 | 42.2±0.3 | 40.3±0.2<sup>**</sup> |
实施例3组 | 60 | 42.1.±0.3 | 40.4±0.2<sup>*</sup> |
对比例1组 | 60 | 42.3±0.1 | 40.9±0.2 |
对比例2组 | 60 | 42.2±0.1 | 40.9±0.1 |
对比例3组 | 60 | 42.3±0.2 | 40.8±0.2 |
对比例4组 | 60 | 42.2±0.2 | 40.8±0.3 |
药物对照组 | 60 | 42.1±0.3 | 40.9±0.3 |
空白对照组 | 60 | 42.3±0.2 | 41.9±0.2 |
(注:与对照组比较,*P<0.05,**P<0.01)
由表2可知,用药后第5d,服用本发明实施例1~3组制备的含挥发油型双黄连口服液的发病鸡的体温明显下降,较对比例1~4组、药物对照组和空白组均差异显著,说明本发明制得的含挥发油型双黄连口服液对临床表现得感冒发热的降温有显著效果。
表3各试验组鸡的体重变化
由表3可知,用药后第12d,服用本发明实施例1~3组制备的含挥发油型双黄连口服液和药物对照组的发病鸡的增重率均比空白对照组的增重率高,且本发明实施例1~3含挥发油型双黄连口服液试验组的增重率略高于药物对照组。
表4各组鸡血清、溶酶菌、总SOD活力、酸性磷酸酶、GSH、总抗氧化能力、总蛋白浓度测定结果
(注:与空白对照组比较,*P<0.05,**P<0.01)
由表4可知,(1)从发病鸡血清溶酶菌含量检测结果中可知,在用药后第12d后,药物对照组和本发明实施例1~3组制备的含挥发油型双黄连口服液的发病鸡血清溶酶菌含量均有一定程度的升高,与空白对照组对比差异较显著;本发明实施例1~3组的鸡血清溶酶菌水平与药物对照组比较差异不显著。
(2)从发病鸡血清总SOD活力含量的检测结果可知,与空白对照组比较,药物对照组和本发明实施例1~3组制备的含挥发油型双黄连口服液的发病鸡的血清总SOD活力均发生一定程度的下降,但是下降幅度较对比例1~4组和药物对照组的幅度要小,而与空白对照组比较差异均不显著,可以证明本发明制备的含挥发油型双黄连口服液对鸡血清总SOD的活性影响小。
(3)从发病鸡血清GSH含量的检测结果可知,药物对照组和本发明实施例1~3组的血清GSH含量与空白对照组比较均发生一定程度的升高,而本发明实施例1~3组制备的含挥发油型双黄连口服液组的血清GSH含量与空白对照组相比差异较显著,而药物对照组与空白对照组相比,差异不显著;与药物对照组比较,本发明实施例1~3组制备的含挥发油型双黄连口服液试验组的血清GSH含量差异较显著。
(4)从发病鸡血清总抗氧化能力的检测结果可知,与空白对照组比较,药物对照组和本发明实施例1~3组的血清总抗氧化能力分别微小的升高,差异均不显著。
(5)从发病鸡血清总蛋白浓度的检测结果可知,与空白对照组比较,药物对照组发生一定程度的下降,本发明实施例1~3组中血清总蛋白浓度发生一定程度的升高,但差异均不显著;与药物对照组差异也不显著。
综上,通过对本发明提供的含挥发油型兽用双黄连口服液进行临床药学试验,结果显示本发明的含挥发油型兽用双黄连口服液对鸡感冒发热具有较好的疗效,用药14天后,实施例2组的有效率、治愈率分别为96.5%和94.5%,同时能够能使发病鸡的体温下降,并能提供鸡血液中溶菌酶水平,提高鸡非特异性免疫力,达到治疗鸡感冒发热的效果。
而本发明实施例2组和药物对照组的相对增重率分别为108.87%和104.89%。依据双黄连口服液治疗效果和鸡体温、血清溶酶菌等免疫及生化指标变化情况,表明本发明药物在治疗效果方面高于普通市售双黄连口服液。本试验通过对血液中溶酶菌的测定,解释了双黄连口服液治疗发热感冒的可能性机制,为实践生产应用提供了数据支持。
试验例二、本发明制备的含挥发油型双黄连口服液的澄清度检测
1.试验材料:本发明实施例1~3,对比例1~4制备的含挥发油型双黄连口服液。
2.检测方法:采用《中华人民共和国药典》2020年版四部附录0902澄清度检查法第一法(目视法)对澄清度进行检测。
3.试验结果:
试验结果如表5所示。
表5澄清度检测结果
组别 | 澄清度 |
实施例1 | 澄清 |
实施例2 | 澄清 |
实施例3 | 澄清 |
对比例1 | 表面有油脂,溶液较浑浊 |
对比例2 | 表面有少量油脂 |
对比例3 | 表面有少量油脂 |
对比例4 | 澄清 |
由表5可知,本发明实施例1~3制得的含挥发油型双黄连口服液按照2020年版《中国药典》澄清度检查法检查,符合澄清度的要求,而对比例1中仅采用吐温80作为乳化剂时,得到的双黄连口服液有一定分层现象,表面有油脂,溶液较浑浊;对比例2中采用司盘20和吐温80按重量比1;1组成的乳化剂,得到的双黄连口服液的表面也存在少量油脂,对比例3中用蔗糖脂肪酸酯替换了乳化剂中的烷基糖苷时,得到的双黄连口服液也存在少量油脂。
试验例三、本发明实施例2组制备的含挥发油型双黄连口服液的图谱检测
1.检测方法:采用Agilent 1260型高效液相色谱仪对本发明实施例2组制备的含挥发油型双黄连口服液和市售双黄连口服液进行指纹图谱检测。
2.检测结果见图1,图2。
图1为本发明实施例2制备的含挥发油型兽用双黄连口服液的指纹图谱;图2为普通兽用双黄连口服液的指纹图谱,可见与普通兽用双黄连口服液的指纹图谱相比,本发明实施例2组制得的含挥发油型双黄连口服液指纹图谱峰更多,峰值更高,峰面积更大,说明创新的提取方法使双黄连口服液提出的效成分更多,整体含量更高,其适应症更宽,药效显效性更好。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效,而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下,对上述实施例进行修饰或改变。因此,举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变,仍应由本发明的权利要求所涵盖。
Claims (7)
1.一种含挥发油型兽用双黄连口服液,其特征在于,由如下重量的原料药制成:金银花300~400g、黄芩300~400g、连翘700~800g;
所述的含挥发油型兽用双黄连口服液的制备工艺,包括如下步骤:
S1、将黄芩切片,用逆流提取设备在80~90℃下提取3次,每次加水1000ml,并提取2小时,合并提取液,滤过,滤液浓缩并调节pH后,保温1h,静置12h,滤过,沉淀中加入其重量6~8倍的水,用40%氢氧化钠溶液调pH至7,再加等量95%的乙醇,搅拌使溶解,滤过,滤液用2mol/L盐酸溶液调pH至2,60~70℃保温30min,静置12h,滤过,沉淀加乙醇洗至pH为7,挥尽乙醇备用,得黄芩提取物;
S2、金银花和连翘加水浸泡半小时后,冷凝回流5小时,分别收集回流液和挥发油后,再向金银花和连翘中加入其重量3倍的水继续煎煮1h,合并回流液和煎液,滤过,滤液浓缩,然后降温至40℃时缓慢加入乙醇,使含醇量达75%,充分搅拌,静置12h,滤取上清液,残渣加75%乙醇至1000mL,搅匀,静置12h,滤过,合并乙醇液,并回收乙醇至无醇味,得金银花与连翘提取液;
S3、向步骤S2所得的金银花与连翘提取液中加入步骤S1所得的黄芩提取物,并加水至850mL,以40%氢氧化钠调节pH至7,搅匀,冷藏72h,滤过,滤液调节pH至7,加水至900mL,搅匀,静置12h,滤过,得混合液Ⅰ;
S4、将步骤S2中收集的挥发油,溶于乳化剂中,搅拌均匀,再加入挥发油体积4倍的95%乙醇,搅拌均匀,得混合液Ⅱ;
S5、将步骤S3所得的混合液Ⅰ,缓慢加入步骤S4所得的混合液Ⅱ中,并在60℃下加热,乳化充分后冷却,定容至1000mL,搅匀静置12小时,滤过,灌装,灭菌,即得;
所述步骤S4中的乳化剂为司盘20、吐温80、烷基糖苷按0.8~1.3:2~6:0.8~1.2的重量比组成,添加量为所述挥发油体积的3~5倍。
2.如权利要求1所述的含挥发油型兽用双黄连口服液,其特征在于,由如下重量的原料药制成:金银花375g、黄芩375g、连翘750g。
3.如权利要求1所述的含挥发油型兽用双黄连口服液,其特征在于,所述步骤S1中逆流提取所得的提取液,滤过,滤液浓缩并在80℃时加入2mol/L盐酸溶液调节pH至1~2。
4.如权利要求1所述的含挥发油型兽用双黄连口服液,其特征在于,所述步骤S2中金银花和连翘浸泡时的温度为40~50℃。
5.如权利要求1所述的含挥发油型兽用双黄连口服液,其特征在于,所述步骤S2中合并回流液和煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.2~1.25,于70~80℃下测量。
6.如权利要求1所述的含挥发油型兽用双黄连口服液,其特征在于,所述步骤S3中的冷藏温度为4~8℃。
7.如权利要求1所述的含挥发油型兽用双黄连口服液,其特征在于,所述步骤S4中的乳化剂为司盘20、吐温80、烷基糖苷按1:4:1的重量比组成。
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