CN1476852A - 一种中药的制备方法及质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中药的制备方法及质量控制方法，该方法为：以金银花、黄芩、连翘为原料药，黄芩经水提酸沉得黄芩提取物，连翘提取挥发油，药渣与金银花水提醇沉得清膏，再与黄芩提取物合并，加入挥发油及辅料，制成临床可接受的剂型。本发明方法制备的软胶囊的质量控制方法包括鉴别方法及含量测定方法。

Description

一种中药的制备方法及质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种中药的制备方法及质量控制方法，特别是涉及一种具有清热解毒作用的中药的制备方法及质量控制方法。

背景技术

中医治疗热性疾病的历史悠久，长期以来主要有伤寒学派与温病学派，他们各自均积累了丰富的经验，亦有共同的理论基础，对于急性热病发病快，病情变化亦快的特点，他们建立了合伤寒和温病为一体的辩证的治疗方法，尽快控制病情，进而达到医治的目的，现在治疗本病的中成药虽然品种繁多，但是确有高效速效的品种还很奇缺，现有双黄连注射剂，含有金银花、黄苓和连翘，还有双黄连口服液、双黄连气雾剂等剂型，尚未有服用方便、疗效更好的双黄连胶囊剂。

技术内容

本发明目的在于提供一种服用方便、疗效更好的双黄连制剂及其制备方法；本发明目的还在于提供一种双黄连制剂的质量控制方法。

本发明目的是通过如下技术方案实现的：

金银花1000-3000重量份     黄芩1000-3000重量份

连翘2000-6000重量份

以上三味，取黄芩加水6-10倍，煎煮2-4次，每次1-2小时，滤过，滤液合并；并浓缩至适量，加盐酸调至pH1-2，静置，滤过，沉淀用热水洗至PH5-6，沉淀物减压干燥，得黄芩提取物，粉碎，备用；连翘加水6-10倍，浸泡2-4小时，水蒸气蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与金银花加水8-12倍，煎煮1-3次，每次1-2小时，滤过，滤液与蒸馏后的水溶液合并，并浓缩至相对密度约为70-80℃热测1.20-1.25，冷却，加入乙醇，使药液含醇量达60-80％，静置12-24小时，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度约为80℃热测1.30-1.40的清膏，减压干燥，粉碎，与黄芩提取物合并，过筛，加入挥发油及辅料，制成临床可接受的剂型。如片剂、颗粒剂、口服液、胶囊等。

本发明方法制备的软胶囊的质量控制方法为：

鉴别方法：取本品内容物0.5g，加乙醇25ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取连翘对照药材0.5g，加乙醇10ml，超声提取20-40分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；再取黄芩甙、绿原酸对照品，分别加乙醇制成每1ml含0.1g的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各1-2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

含量测定：照高效液相色谱法测定。

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：45-50∶48-55∶0.1-0.4甲醇—水—磷酸为流动相，检测波长为280nm，理论塔板数按黄芩甙峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备精密称取在60℃真空干燥4小时的黄芩甙对照品适量，加甲醇制成每1ml含60g的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物，混匀，精密称取0.4g，用甲醇转移至100ml量瓶中，超声处理8-10分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；

测定法分别精密吸取上述两种溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积训计算，即得，每粒软胶囊内容物含黄芩以黄芩甙计，不得少于110mg。

实验例1：双黄连抗呼吸道合胞病毒作用的试验观察

试验方法：(1)药物对细胞毒性试验，用细胞维持液，将双黄连软胶囊内容物稀释成0.1％、0.3％、0.5％、0.7％、1.0％、1.2％和1.5％7个稀释度，分别加入已长成单层细胞的培养瓶中，每个稀释度用6瓶细胞，37℃连续培养观察7天，选用对细胞无毒性的药液浓度为试验用药液浓度。(2)病毒毒力测试：用细胞维持液将病毒稀释成不同浓度，分别感染长成单层的细胞，每个稀释度用6瓶细胞，37℃连续培养观察7天。(3)双黄连软胶囊抗合胞病毒作用的实验观察：用细胞维持液将病毒稀释不同浓度，每个稀释度感染36瓶细胞，37℃感染二小时，然后弃去病毒液，每个稀释度6瓶细胞分别加入细胞维持液稀释成0.3％、0.6％的双黄连软胶囊、双黄连口服液及3.2×10^-6g/ml的病毒唑分别作为实验组和阳性对照组，37℃连续培养观察7天，对照组：病毒稀释方法同实验组，浓度增加一个10-4.5，感染病毒后，每瓶力口入细胞维持液稀释成0.6％的赋形剂，37℃培养观察7天。

试验结果：双黄连软胶囊稀释至0.7％时细胞无病变(见表1)，病毒稀释至10^-3.5时，有50％细胞产生病变(表2)，双黄连的两种剂型高剂量及病毒唑组除10^-1病毒稀释度有75％以上细胞出现病变外，10^-2.5倍以上均无改变，对照组病毒稀释至10^-3.5时，有50％细胞出现病变(见表3)，表明双黄连的两种剂型均有抗呼道合胞病毒的作用。

    表1    双黄连对细胞毒性试验观察药物稀释浓度％    0.1    0.3    0.5    0.7    1.0    1.2    1.5    空白对照细胞病变程度      -      -      -      -      ++     ++     +++      -

注-细胞无病变，+25％细胞病变，++50％细胞病变，+++75％细胞病变，空白组内无药物。

    表2    病毒毒力测定病毒稀释度    10^-1  10^-2  10^-2.5  10^-3  10^-3.5  10^-4  10^-4.5  空白对照细胞病变程度  ++++   +++    +++      ++     ++       ±          -        -

注：-细胞无病变，+25％细胞病变，++50％细胞病变，+++75％细胞病变，空白组内无药物。

                  表3    双黄连抗毒力测定病毒稀释度             10^-1   10^-2   10^-2.5   10^-3    10^-3.5    10^-4   10^-4.5   空白对照

          0.3％    +++     ++      ±                 -       -          -       -         -双黄连软胶囊

          0.6％    +++     ±              -         -       -         -       -         -

          0.3％    +++     ++      ±                 -       -          -       -         -双黄连口服液

          0.6％    +++     ±             -         -       -          -       -         -病毒唑 3.2×10^-6g/ml  +++     ±             -         -       -          -       -         -对照组                 ++++    +++    +++       ++      ++         ±              -         -

注：++++100％细胞病变，±为12.5细胞病变，空白为无病毒组。

实验例2：双黄连软胶囊对感染流感病毒小鼠的保护作用

主流感病毒鸡胚培养液MLD的测定：流感病毒感染鸡胚后，取出鸡胚尿囊液稀释成10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6倍，分别取其中5μl滴鼻感染小鼠(每组6只)，一周后统计感染小鼠的死亡率，并计算感染流感病毒小鼠的最小致死量，(MLD)，结果见表4。

  表4  感染流感病毒小鼠的最小致死量(MLD)测定(5μl/只)鸡胚尿囊液稀释度    数量死亡数/总数    MLD倍数

  10^-2                6/6           100

  10^-3                6/6           10

  10^-4                6/6           1

  10^-5                0/6           0

  10^-6                0/6           0

以上结果表明，10^-4的感染流感病毒鸡胚培养液为最小致死量(MLD)。10^-3释释液为10倍的MLD。

方法：昆明种小鼠100只，雌雄各半，分别白鼻腔接种10倍量MLD(10^-3)/(一)流感病逝又引还尿囊液5μl^[1]，然后随机分成五组：(1)赋形刑组：灌胃等体积的赋形剂(2)双黄连口服液组：灌服双黄连口服液0.1mg/20g(等效于临床剂量：11.59g生药/kg)(3)双黄连软胶囊小剂量组：灌“服双黄连软胶囊0.1ml/20g(等效于临床剂量：11.59生药/kg)(4)双黄连软胶囊中剂量组：灌服双黄连软胶囊0.2ml/20g(23g生药/kg)(5)双黄连软胶囊大剂量组：灌服双黄连软胶囊0.4ml/20g(46g生药/kg)。以上各组分别经口灌胃给药每日一次，共七天，给药期间统计感染小鼠的死亡率和死亡时间。

数据处理：用四格表的确切概率法进行生存率组间比较^[8]。用t检验对组间死亡时间进行比较^[8]。结果：

表5    双黄连软胶囊对感染流感病毒小鼠生存率的影响( X±SD)

             剂理                        生存率组别                        n      存活数               死亡时间(d)

          (g生药/kg)                     (％)赋形剂组                    20        2      10         2.44±1.50双黄连口服液    11.5        20        6      30         3.57±2.03

            11.5        20        8      40^*       4.0±2.09^*双黄连软胶囊    23          20        9      45^*       4.09±2.17^*

            46          20        11     55^**      4.44±2.13^*

^*P＜0.05，^**P＜0.01与赋形剂组比较

灌胃临床等效量的双黄连软胶囊能显著降低感染流感病毒小鼠的死亡率和延长小鼠的死亡时间：当双黄连软胶囊剂量增加三倍，即46g生药/kg寸能极显著降低感染流感病毒小鼠的死亡率(P＜0.01)，虽未观察到等剂量的双黄连软胶囊和双黄连口服液之间，有显著差异。但临床等效量的双黄连口服液不能显著降低感染流感病毒小鼠的死亡率和延长小鼠的死亡时间，显示双黄连软胶囊的效果要略强于口服液。

实验例3：双黄连软胶囊对内毒素致家兔发热的实验观察。

选择体温范围38.5～39.5℃内、且体温波动在0.3℃内的家兔36只，按基础体温分层随机分成6组，即：赋形剂组、阿斯匹林组(0.1g/kg)、双黄连软胶囊一组2.7ml/1.5kg(4.2g生药/kg，相当于临床等效显)、双黄连软囊二组8.1ml/1.5kg(12.4生药/kg，相当于临床等效量的三倍)、双黄连口服液一组2.7ml/1.5kg(4.2生药/kg，相当天临床等效量)、双黄连口服液二组8.1ml/1.5kg(12.4g生药/kg，相当于临床等效量的三倍)。以上各给药组均每日灌胃给药，给药的体积相等(低剂量组2.7ml药液用生理盐水补至8.1ml)；赋形剂组则灌胃等体积的赋形剂。连续灌胃三天，第三天药后0.5小时每兔均从耳缘静脉注射大肠杆菌内毒素150μg/kg，于内毒素攻击后0.5、1、2、3、4、6小时后，分别测量体温，以药前测得3次休温平均值为基数，计算各测定点时间兔体温变化值(ΔT)，以温度变化值(ΔT)为纵坐标，时问为横坐标，作出体温随时问变曲线并用梯形分割法求出曲线下面积AUC^[8]。各组数据以X±SD℃表示，作t检验^[8]。

表6双黄连软胶囊对内毒素致家兔发热的影响(n＝6， X±SD℃)

                         体温℃

                                                        体温变化值(ΔT)                                 AUC

         剂量

                实验前                                  内毒素攻击后时间(h)

         (g/kg)

                              0.5          1             2            3              4             6              (h℃)赋形剂组      -      38.7±0.2    1.3±0.2     1.4±0.2      1.1±0.2     1.0±0.1       0.9±0.1      0.9±0.2       19.0±3.9阿斯匹林      0.1    38.8±0.1    0.6±0.2^*** 0.8±0.2^***  0.8±0.1^*   0.7±0.1^*     0.5±0.2^**   0.3±0.1^***   7.8±2.6^***

          42     38.9±0.3    1.2±0.1     1.0±02^**    0.8±0.2^*   0.7±0.1^*     0.4±0.2^***  0.2±0.1^***   6.5±2.8^**双黄连软胶囊

          12.4   38.9±0.3    1.0±02^*    0.9±02^**    0.5±01^**   0.3±0.1^***Δ    0.3±0.2^***  0.1±0.1^***   4.0±2.1^***Δ

          4.2    38.9±0.1    1.2±02      1.1±02^**    0.8±0.1^*   0.7±0.2^*     0.5±0.2^**   0.3±0.1^***   7.9±3.2^***双黄连口服液

          12.4   38.8±0.2    1.1±0.2     0.9±0.2^**   0.6±0.2^**  0.4±0.2^**Δ      0.3±0.2^***  0.2±0.1^***    6.1±1.5^{*** **}P＜0.01，^***P＜0.001与赋形剂组比较，P＜0.05，与阿斯匹林组比较。

由表6可见，阿斯匹林组、双黄连软胶囊组、双黄连口服液组均有显著的解热作用。双黄连软胶囊高剂量、阿斯匹林于给予内毒素后0.5小时有明显解热作用(P＜0.05、P＜0.01)，并可维持6小时。曲线下而枳比较(图2)，双黄连软胶囊在高剂显时，(12.48生药/kg，效应较0.1g/kg的阿斯匹林显著(P＜0.05)，且双黄连软胶囊在高剂量时起效比双黄连口服液快，显示且其解热效果略优于双黄连口服液。

实施例：

金银花2500g     黄芩2500g    连翘5000g

以上三味，取黄芩加水适量煎煮3次，煎煮时间分别为2小时，1小时，1小时，滤过，滤液合并；并浓缩至适量，加2mol/L盐酸调至pH1-2，静置24小时，滤过，沉淀用热水洗至PH5，滤过，沉淀物减压干燥，得黄芩提取物，粉碎，备用；连翘加水8倍浸泡3小时，水蒸气蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与金银花加水煎煮2次，每次1.5小时，滤过，滤液与蒸馏后的水溶液合并，并浓缩至相对密度约为75℃热测1.20-1.25，冷却，加入乙醇，使药液含醇量达75％，，使沉淀，静置12小时，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度约为80℃热测1.30-1.40的清膏，减压干燥，粉碎，与黄芩提取物合并，过筛，加入挥发油及辅料，搅匀，压制成软胶囊。每粒装0.65g，相当于生药10.0g，口服，一次3粒，一日3次。

鉴别方法：取软胶囊内容物0.5g，加乙醇25ml便溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取连翘对照药材0.5g，加乙醇10ml，超声提取30分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；再取黄芩甙、绿原酸对照品，分别加乙醇制成每1ml含0.1g的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各1-2μl，分别点于5×7cm同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

含量测定：照高效液相色谱法测定

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：47∶53∶0.2甲醇—水—磷酸为流动相：检测波长为280nm；理论塔板数按黄芩甙峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备精密称取在60℃真空干燥4小时的黄芩甙对照品适量，加甲醇制成每1ml含60g的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物，混匀，精密称取0.4g，用甲醇转移至100ml量瓶中，超声处理10分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；

测定法分别精密吸取上述两种溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积训计算，即得，每粒含黄芩以黄芩甙(C₂₁H₁₈O₁₁)计，不得少于110mg。

Claims (8)

1、一种中药的制备方法，其特征在于该方法为：

金银花1000-3000重量份        黄芩1000-3000重量份

连翘2000-6000重量份

以上三味，取黄芩加水6-10倍，煎煮2-4次，每次1-2小时，滤过，滤液合并；并浓缩至适量，加盐酸调至pH1-2，静置，滤过，沉淀用热水洗至PH5-6，沉淀物减压干燥，得黄芩提取物，粉碎，备用；连翘加水6-10倍，浸泡2-4小时，水蒸气蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与金银花加水8-12倍，煎煮1-3次，每次1-2小时，滤过，滤液与蒸馏后的水溶液合并，并浓缩至相对密度约为70-80℃热测1.20-1.25，冷却，加入乙醇，使药液含醇量达60-80％，静置12-24小时，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度约为80℃热测1.30-1.40的清膏，减压干燥，粉碎，与黄芩提取物合并，过筛，加入挥发油及辅料，制成临床可接受的剂型。

2、如权利要求1所述的制备方法，其特征在于该方法为：

以上三味，取黄芩加水适量煎煮3次，煎煮时间分别为2小时，1小时，1小时，滤过，滤液合并；并浓缩至适量，加2mol/L盐酸调至pH1-2，静置24小时，滤过，沉淀用热水洗至PH5，滤过，沉淀物减压干燥，得黄芩提取物，粉碎，备用；连翘加水8倍浸泡3小时，水蒸气蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与金银花加水煎煮2次，每次1.5小时，滤过，滤液与蒸馏后的水溶液合并，并浓缩至相对密度约为75℃热测1.20-1.25，冷却，加入乙醇，使药液含醇量达75％，使沉淀，静置12小时，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度约为80℃热测1.30-1.40的清膏，减压干燥，粉碎，与黄芩提取物合并，过筛，加入挥发油及辅料，搅匀，压制成软胶囊。

3、如权利要求1或2所述方法制备胶囊的鉴别方法，其特征在于该方法为：

取本品内容物0.5g，加乙醇25ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取连翘对照药材0.5g，加乙醇10ml，超声提取20-40分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；再取黄芩甙、绿原酸对照品，分别加乙醇制成每1ml含0.1g的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各1-2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

4、如权利要求3的鉴别方法，其特征在于该方法为：取软胶囊内容物0.5g，加乙醇25ml便溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取连翘对照药材0.5g，加乙醇10ml，超声提取30分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；再取黄芩甙、绿原酸对照品，分别加乙醇制成每1ml含0.1g的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各1-2μl，分别点于5×7cm同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

5、如权利要求1或2所述方法制备胶囊的含量测定方法，其特征在于该方法为：含量测定：照高效液相色谱法测定。

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：45-50∶48-55∶0.1-0.4甲醇—水—磷酸为流动相，检测波长为280nm，理论塔板数按黄芩甙峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备精密称取在60℃真空干燥4小时的黄芩甙对照品适量，加甲醇制成每1ml含60g的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物，混匀，精密称取0.4g，用甲醇转移至100ml量瓶中，超声处理8-10分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；

测定法分别精密吸取上述两种溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积训计算，即得，每粒软胶囊内容物含黄芩以黄芩甙计，不得少于110mg。

6、如权利要求5的含量测定方法，其特征在于该方法为：照高效液相色谱法测定

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：47∶53∶0.2甲醇—水—磷酸为流动相：检测波长为280nm；理论塔板数按黄芩甙峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备精密称取在60℃真空干燥4小时的黄芩甙对照品适量，加甲醇制成每1ml含60g的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物，混匀，精密称取0.4g，用甲醇转移至100ml量瓶中，超声处理10分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过。精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；

测定法分别精密吸取上述两种溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积训计算，即得，每粒含黄芩以黄芩甙(C₂₁H₁₈O₁₁)计，不得少于110mg。

7、如权利要求1或2所述方法制备胶囊的质量控制方法，其特征在于该方法为：

取本品内容物0.5g，加乙醇25ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取连翘对照药材0.5g，加乙醇10ml，超声提取20-40分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；再取黄芩甙、绿原酸对照品，分别加乙醇制成每1ml含0.1g的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各1-2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

含量测定：照高效液相色谱法测定，  色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：45-50∶48-55∶0.1-0.4甲醇—水—磷酸为流动相，检测波长为280nm，理论塔板数按黄芩甙峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备精密称取在60℃真空干燥4小时的黄芩甙对照品适量，加甲醇制成每1ml含60 g的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物，混匀，精密称取0.4g，用甲醇转移至100ml量瓶中，超声处理8-10分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；

测定法分别精密吸取上述两种溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积训计算，即得，每粒软胶囊内容物含黄芩以黄芩甙计，不得少于110mg。

8、如权利要求1或2所述方法制备胶囊的质量控制方法，其特征在于该方法为：

鉴别：取软胶囊内容物0.5g，加乙醇25ml便溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取连翘对照药材0.5g，加乙醇10ml，超声提取30分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；再取黄芩甙、绿原酸对照品，分别加乙醇制成每1ml含0.1g的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各1-2μl，分别点于5×7cm同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

含量测定：  照高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：47∶53∶0.2甲醇—水—磷酸为流动相：检测波长为280nm；理论塔板数按黄芩甙峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备精密称取在60℃真空干燥4小时的黄芩甙对照品适量，加甲醇制成每1ml含60g的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物，混匀，精密称取0.4g，用甲醇转移至100ml量瓶中，超声处理10分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过。精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；

测定法分别精密吸取上述两种溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积训计算，即得，每粒含黄芩以黄芩甙计，不得少于110mg。