CN115212239B - 一种家禽用复合免疫增强剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种家禽用复合免疫增强剂及其制备方法，本发明的家禽用复合免疫增强剂由以下重量份的原料组成：篦齿虎耳草提取物10‑16份、复合益生菌粉2‑4份、焦性没食子酸0.5‑2份、黄芩素0.01‑0.1份；所述复合益生菌粉由丁酸梭菌(Clostridium butyricum)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)配制而成；所述复合益生菌粉中的活菌数大于或等于108cfu/g。本发明的家禽用复合免疫增强剂能够提高家禽的脏器指数，从而显著提高机体的免疫力；同时还能提高家禽的生长性能和改善肉的品质。

Description

一种家禽用复合免疫增强剂及其制备方法
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种家禽用复合免疫增强剂及其制备方法。
背景技术
近年来随着家禽养殖业的迅速发展，集约化程度也越来越高。相应的，疾病传播机会随之增加，传染病爆发流行，老的疾病还未得到有效控制，新的疾病不断发生，病原结构变异增加，血清型增多；多种类型病原混合感染，免疫抑制性疾病危害增大，造成机体免疫功能紊乱，抗病力下降，疫苗免疫效果不佳，容易遭受病原侵扰，引起发病率上升，给家禽养殖业造成严重损失。
免疫增强剂是一类通过非特异性途径提高动物机体对抗原或微生物特异性反应的物质。它有利于加强机体的免疫系统功能，改善机体的免疫应答，增强机体的免疫水平。免疫器官是动物机体发挥免疫功能的组织机构，其发育状况直接影响到机体免疫力的高低。家禽免疫器官主要由胸腺、脾脏及淋巴组织等组成。目前把测定免疫器官脏器指数作为研究机体免疫状况的方法之一。一般认为免疫器官脏器指数降低为免疫功能抑制所致；而免疫器官指数增加则为免疫增强的表现，表明免疫器官能够提供更好的具有活性的免疫细胞。免疫增强剂逐渐引起家禽养殖界的关注和重视，成为近年来十分活跃的研究领域，相关报道日趋增多。
现有的免疫增强剂主要有：化学合成物，例如左旋咪唑等；多糖类，包括酵母细胞壁多糖、银耳多糖等；寡糖类，包括壳寡糖、甘露寡糖等；微生物、中药制剂、细菌提取物、维生素、多肽类等。目前免疫增强存在的主要问题是：单一的免疫增强剂其免疫增强效果有限；而复合免疫增强剂由于成分复杂，各种成分之间的关系，抑制或者是促进等，需要系统深入的研究。因此，复合免疫增强剂仍是当前研究的热点和难点。
发明内容
针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种家禽用复合免疫增强剂及其制备方法。本发明的家禽用复合免疫增强剂能够提高家禽的脏器指数，从而显著提高机体的免疫力；同时还能提高家禽的生长性能和改善肉的品质。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明的第一方面，提供一种家禽用复合免疫增强剂，由以下重量份的原料组成：
篦齿虎耳草提取物10-16份、复合益生菌粉2-4份、焦性没食子酸0.5-2份、黄芩素0.01-0.1份；
所述复合益生菌粉由丁酸梭菌(Clostridium butyricum)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)配制而成；所述复合益生菌粉中的活菌数大于或等于108cfu/g。
进一步的，上述家禽用复合免疫增强剂，由以下重量份的原料组成：
篦齿虎耳草提取物12份、复合益生菌粉3份、焦性没食子酸1份、黄芩素0.05份。
优选的，所述篦齿虎耳草提取物由如下方法制备而成：
将篦齿虎耳草(Saxifraga umbellulata var.pectinata)全草干燥、粉碎，用体积分数为60-70％的乙醇水溶液浸提2-4次，合并浸提液，减压浓缩得到浸膏；将浸膏分散于蒸馏水中，加入乙酸乙酯进行萃取，收集乙酸乙酯相，浓缩，干燥，即制备得到篦齿虎耳草提取物。
优选的，所述复合益生菌粉由丁酸梭菌(Clostridium butyricum)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)按重量比1:1配制而成；所述丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)，其中，丁酸梭菌(Clostridium butyricum)的菌种编号为CICC 10390；植物乳杆菌的菌种编号为CICC 21809。
本发明的第二方面，提供上述家禽用复合免疫增强剂的制备方法，包括以下步骤：
将篦齿虎耳草提取物、复合益生菌粉、焦性没食子酸和黄芩素按重量份混合均匀，即得。
本发明的第三方面，提供上述家禽用复合免疫增强剂在制备饲料添加剂中的应用。
上述应用中，所制备的饲料添加剂能够增强家禽的免疫力，提高家禽的生长性能，改善肉的品质。
本发明的有益效果：
本发明的家禽用复合免疫增强剂能够提高家禽的脏器指数，从而显著提高机体的免疫力；同时还能提高家禽的生长性能和改善肉的品质。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
如前所述，免疫增强剂具有提高机体免疫系统功能，增强机体免疫力，减少疾病发生的特点，在家禽养殖界中的应用日渐增多。但单一组分的免疫增强剂，其提高机体免疫力的效果有限；而复合组分的免疫增强剂，由于组分间复杂的作用关系，开发具有协同增效作用的复合免疫增强剂的难度很大。
基于此，本发明从植物提取物、益生菌和化学合成物的复配入手，开发设计了一种新的家禽用复合免疫增强剂。其中：
对于植物提取物组分，篦齿虎耳草是篦齿虎耳草科篦齿虎耳草属的多年生草本植物。古今药理研究发现篦齿虎耳草不仅具有祛风清热、凉血解毒之功效，还兼具抗菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种药用价值。兽医临床中常用于脓耳、风热咳喘的治疗。其主要化学成分包括黄酮类、萜类、酚酸类、异香豆精类等化合物。篦齿虎耳草药用疗效显著，但由于其成分复杂，药理活性及作用机理不清楚，篦齿虎耳草在兽医临床的应用有限。本发明研究发现，篦齿虎耳草提取物在改善肉鸡生长性能和提高机体免疫力方面有一定的作用，所以选择将其作为复合免疫增强剂的植物提取物组分。
丁酸梭菌作为动物肠道内分布普遍的一种重要菌类，多能在动物粪便中通过细菌分离得到。在动物饲料营养添加的试验性研究中，该菌也是动物肠道生态菌群结构健康与否的重要指示细菌之一。而且，丁酸梭菌也是国家批准的允许作为饲料添加剂的菌株。植物乳杆菌所起的免疫调节作用与其菌本身和代谢产物有关，甚至死的菌体也有免疫调节作用；其对革兰氏阳性和革兰氏阴性致病菌均有抑制作用，它通过与病原菌对限制性营养素的能力竞争，来抑制病原菌的生长，调节肠道微生态的组成，形成生物学屏障，并通过其代谢所产生的乳酸、细菌素等物质对其他细菌的作用，调整菌群之间的关系，维持和保证菌群最佳优势组合，通过拮抗致病菌的生长及其毒素的粘附，阻止其侵入和定植。因此，选择丁酸梭菌和植物乳杆菌作为益生菌组分进行考察。
本发明研究发现：菌种编号为CICC 10390的丁酸梭菌和菌种编号为CICC 21809的植物乳杆菌之间无拮抗作用；并且，将菌种编号为CICC 10390的丁酸梭菌和菌种编号为CICC 21809按一定比例复配形成的复合益生菌粉还能显著改善肉鸡的生长性能和提高肉鸡的免疫功能。
对于化学合成物组分，焦性没食子酸，为白色或黄色针状结晶体，其结构如下：
Figure BDA0003747576440000031
焦性没食子酸是一种重要的有机精细化工产品，广泛应用于化工、有机合成、印染、分析、食品、医药等领域。在饲料方面，有研究表明焦性没食子酸对小蚕摄食性和生长发育有显著促进效果。
黄芩素是从黄芩的干燥根中提取出的主要有效成分，其结构式如下：
Figure BDA0003747576440000041
黄芩素作为植物提取物中的优质黄酮类化合物，其对动物氧化应激-炎症反应-免疫三方联动效应具有稳定的促进作用，对动物疾病的预防、治疗具有一定潜力。因此，本发明选择焦性没食子酸和黄芩素作为化学合成物组分进行考察。
本发明在获得植物提取物、益生菌和化学合成物的组分选择之后，尝试将其组合使用，考察复合之后对于动物机体免疫能力的影响。结果发现：将篦齿虎耳草提取物、丁酸梭菌-植物乳杆菌复合菌粉、焦性没食子酸和黄芩素复配，在提高动物机体免疫力方面具有显著的协同增效作用，由此提出了本发明。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。
本发明实施例中所用的试验材料均为本领域常规的试验材料，均可通过商业渠道购买得到。其中：
丁酸梭菌(Clostridium butyricum)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)，其中，丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)的菌种编号为CICC 10390；植物乳杆菌的菌种编号为CICC 21809。
篦齿虎耳草购自青海省西宁市九康药材公司，并由中国科学院西北高原生物研究所鉴定。
焦性没食子酸(HPLC≥98％)购自上海源叶生物科技有限公司，货号为B20619。
黄芩素(HPLC≥98％)购自上海源叶生物科技有限公司，货号为B20571。
实施例1：篦齿虎耳草提取物的制备
将篦齿虎耳草(Saxifraga umbellulata var.pectinata)全草干燥、粉碎，取5kg粉碎后篦齿虎耳草，用体积分数为70％的乙醇水溶液浸提3次，每次浸提时间为48h，乙醇水溶液的用量为30L，合并浸提液，减压浓缩得到浸膏520g；将浸膏分散于2L蒸馏水中，加入乙酸乙酯(1L×3次)进行萃取，收集乙酸乙酯相，浓缩，干燥，即制备得到篦齿虎耳草提取物。
实施例2：复合益生菌粉的制备
以低聚木糖作为菌粉基质，将丁酸梭菌(Clostridium butyricum)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)按重量比1:1复配，再与菌粉基质混合均匀，制备得到复合益生菌粉。所制备的复合益生菌粉中的总活菌数≥2×108cfu/g。
实施例3：家禽用复合免疫增强剂的制备
1、原料组成(按重量份计)：
篦齿虎耳草提取物12份、复合益生菌粉3份、焦性没食子酸1份、黄芩素0.05份；
其中，篦齿虎耳草提取物由实施例1制备而成；复合益生菌粉由实施例2制备而成。
2、制备方法：
按组方量称取篦齿虎耳草提取物、复合益生菌粉、焦性没食子酸和黄芩素，将其混合均匀，即得。
实施例4：家禽用复合免疫增强剂的制备
1、原料组成(按重量份计)：
篦齿虎耳草提取物10份、复合益生菌粉2份、焦性没食子酸0.5份、黄芩素0.01份；
其中，篦齿虎耳草提取物由实施例1制备而成；复合益生菌粉由实施例2制备而成。
2、制备方法：
按组方量称取篦齿虎耳草提取物、复合益生菌粉、焦性没食子酸和黄芩素，将其混合均匀，即得。
实施例5：家禽用复合免疫增强剂的制备
1、原料组成(按重量份计)：
篦齿虎耳草提取物16份、复合益生菌粉4份、焦性没食子酸2份、黄芩素0.1份；
其中，篦齿虎耳草提取物由实施例1制备而成；复合益生菌粉由实施例2制备而成。
2、制备方法：
按组方量称取篦齿虎耳草提取物、复合益生菌粉、焦性没食子酸和黄芩素，将其混合均匀，即得。
试验例：家禽用复合免疫增强剂对白羽肉鸡免疫功能和生长性能的影响
参考“植物提取物对白羽肉鸡生产性能、肌肉品质及抗病力的影响”(吉林农业大学专业硕士学位论文，2019年)进行试验设计，具体如下：
1、试验方法：
(1)试验分组及处理：
以1日龄白羽肉雏鸡为试验对象，将体重、生理状态无显著差异的1日龄白羽肉雏鸡随机分成六个组，分别为复合免疫增强剂组、篦齿虎耳草提取物组、复合益生菌粉组、焦性没食子酸组、黄芩素组和空白对照组；为了减少实验误差以及偶然因素的影响，每组设4个重复，每个重复10只鸡。其中：
空白对照组饲喂基础日粮；
复合免疫增强剂组在基础日粮中添加0.03％(质量分数)实施例3制备的家禽用复合免疫增强剂；
篦齿虎耳草提取物组在基础日粮中添加0.03％(质量分数)实施例1制备的篦齿虎耳草提取物；
复合益生菌粉组在基础日粮中添加0.03％(质量分数)实施例2制备的复合益生菌粉；
焦性没食子酸组在基础日粮中添加0.03％(质量分数)的焦性没食子酸；
黄芩素组在基础日粮中添加0.03％(质量分数)的黄芩素；
试验期间各组鸡的其他管理条件保持一致，试验期为42d。
基础日粮的组成如下：
原料(重量分数) 1-21d 22-42d
玉米(％) 57 59.5
豆粕(％) 31 24
玉米蛋白粉(％) 5 4
羽毛粉(％) 0 1
DDGS(％) 0 2
大豆油(％) 1.5 4.5
石粉(％) 1.4 1.3
磷酸氢钙(％) 1.6 1.4
预混料(％) 2.5 2.3
预混料为每千克全价料提供：Mg 100mg，Zn 50mg，Fe 70mg，I 0.3mg，Cu 8.0mg，Se0.15mg，维生素A 13 000IU，维生素D3 3 000IU，维生素E 20IU，维生素K3 1.0mg，维生素B10.05mg，维生素B2 6.0mg，烟酸11mg，泛酸16mg，维生素B6 3.5mg，生物素0.03mg，叶酸0.7mg，维生素B12 0.02mg，胆碱450mg。
(2)生长性能指标测定：
试验过程中每日记录各组白羽肉鸡的采食量，并于10日龄、42日龄对各重复进行称重，计算平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。以空白对照组为基准，计算其他处理组相较于空白对照组的平均日增重(ADG)和料重比(F/G)的变化情况。
(3)免疫器官指数测定：
42d后，从每个重复中随机选取3只肉鸡，空腹称质量，常规方法屠宰，分离胸腺和脾脏，并称质量，计算免疫器官指数。
脾脏指数＝脾脏重(mg)/体重(g)；
胸腺指数＝胸腺重(mg)/体重(g)。
(4)白羽肉鸡肌肉品质测定：
肌肉滴水损失测定：
42d后，从每个重复中随机选取3只肉鸡，常规方法屠宰，宰后2h取胸肌称重(记为W1)，在4℃冰箱中吊挂24h后称重(记为W 2)，计算肌肉滴水损失。
滴水损失(％)＝(W 1－W 2)/W 1×100％。
剪切力测定：
将肉样置于80℃水浴锅中水浴加热，待肉的中心温度达到75℃时继续水浴30min后，取出肉样待冷却至25℃后，用滤纸擦干肉样表面水分，将样品沿肌纤维方向切割成长×宽×高＝2cm×1cm×1cm的长方体小块，取样后立即置于TA-XT2i物性分析仪上进行测定。平行测定6次取平均值。
总多不饱和脂肪酸(PUFA)含量测定：
测定方法参考文献“饲粮中添加不同水平油菜花粉对蛋黄和鸡肉组织脂肪酸组成的影响”[J].食品安全质量检测学报,2014(7):9.
以空白对照组为基准，计算其他处理组相较于空白对照组的肌肉滴水损失、剪切力和总多不饱和脂肪酸含量的变化情况。
2、试验结果：
(1)生长性能方面：
1-10日龄相较于空白对照组的平均日增重和料重比的结果见表1；11-42日龄相较于空白对照组的平均日增重和料重比的结果见表2。
表1：1-10日龄平均日增重和料重比考察结果
组别 平均日增重(ADG) 料重比(F/G)
复合免疫增强剂组 107.8％ 降低了3.4％
复合益生菌粉组 104.7％ 降低了1.6％
篦齿虎耳草组 103.4％ 降低了0.9％
黄芩素组 103.9％ 降低了1.5％
焦性没食子酸组 104.8％ 降低了1.1％
空白对照组 100％ 1
表2：11-42日龄平均日增重和料重比考察结果
组别 平均日增重(ADG) 料重比(F/G)
复合免疫增强剂组 109.4％ 降低了4.6％
复合益生菌粉组 105.3％ 降低了1.8％
篦齿虎耳草组 103.9％ 降低了1.3％
黄芩素组 104.5％ 降低了2.6％
焦性没食子酸组 103.6％ 降低了1.8％
空白对照组 100％ 1
(2)免疫性能方面：
不同处理组的脾脏指数和胸腺指数测定结果见表3。
表3：脾脏指数和胸腺指数测定结果
组别 脾脏指数 胸腺指数
空白对照组 1.43±0.15 4.36±0.10
复合免疫增强剂组 2.46±0.20 4.99±0.15
复合益生菌粉组 1.62±0.13 4.46±0.10
篦齿虎耳草组 1.59±0.12 4.39±0.10
黄芩素组 1.87±0.19 4.44±0.11
焦性没食子酸组 1.45±0.16 4.42±0.18
(3)肌肉品质方面：
与空白对照组相比，其他组别的白羽肉鸡的肉质的滴水损失比和剪切力测定结果见表4；总多不饱和脂肪酸(PUFA)的含量测定结果见表5。
表4：滴水损失比和剪切力测定结果
组别 滴水损失比 剪切力
复合免疫增强剂组 降低了5.0％ 降低了30.4％
复合益生菌粉组 降低了1.6％ 降低了13.2％
篦齿虎耳草组 降低了1.2％ 降低了10.8％
黄芩素组 提高了3.6％ 降低了2.4％
焦性没食子酸组 提高了4.7％ 降低了2.6％
空白对照组 1 1
表5：总多不饱和脂肪酸(PUFA)的含量测定结果
组别 总多不饱和脂肪酸(PUFA)的含量
复合免疫增强剂组 降低了1.6％
复合益生菌粉组 降低了0.4％
篦齿虎耳草组 降低了0.2％
黄芩素组 降低了0.3％
焦性没食子酸组 降低了0.6％
空白对照组 1
综上，脾脏指数和胸腺指数能够直观的反应动物的免疫功能；平均增重情况能够反应动物胃肠道的吸收情况；滴水损失比、剪切力和总多不饱和脂肪酸(PUFA)的含量能代表肌肉的品质情况。由表1-表5的结果可以看出：将丁酸梭菌、乳酸杆菌、篦齿虎耳草提取物、黄芩素和焦性没食子酸进行复配，能显著提高鸡的免疫功能，改善生长鸡生长性能质量和鸡肉的品质，与单一原料相比，具有协同增效作用。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种家禽用复合免疫增强剂，其特征在于，由以下重量份的原料组成：
篦齿虎耳草提取物10-16份、复合益生菌粉2-4份、焦性没食子酸0.5-2份、黄芩素0.01-0.1份；
所述复合益生菌粉由丁酸梭菌（Clostridium butyricum）和植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）配制而成；所述复合益生菌粉中的活菌数大于或等于108cfu/g；
所述篦齿虎耳草提取物由如下方法制备而成：
将篦齿虎耳草（Saxifraga umbellulata var.pectinata）全草干燥、粉碎，用体积分数为60-70%的乙醇水溶液浸提2-4次，合并浸提液，减压浓缩得到浸膏；将浸膏分散于蒸馏水中，加入乙酸乙酯进行萃取，收集乙酸乙酯相，浓缩，干燥，即制备得到篦齿虎耳草提取物。
2.根据权利要求1所述的家禽用复合免疫增强剂，其特征在于，由以下重量份的原料组成：
篦齿虎耳草提取物12份、复合益生菌粉3份、焦性没食子酸1份、黄芩素0.05份。
3.根据权利要求1或2所述的家禽用复合免疫增强剂，其特征在于，所述复合益生菌粉由丁酸梭菌（Clostridium butyricum）和植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）按重量比1:1配制而成；所述丁酸梭菌（Clostridium butyricum）和植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，其中，丁酸梭菌（Clostridium butyricum）的菌种编号为CICC 10390；植物乳杆菌的菌种编号为CICC 21809。
4.权利要求1-3任一项所述的家禽用复合免疫增强剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将篦齿虎耳草提取物、复合益生菌粉、焦性没食子酸和黄芩素按重量份混合均匀，即得。
5.权利要求1-3任一项所述的家禽用复合免疫增强剂在制备饲料添加剂中的应用。
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中草药抑菌作用及其机制研究进展;吴秋云等;中兽医医药杂志(01);27-31 *

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