CN111617203B - 组合物在预防或治疗因感染大肠杆菌所引发的疾病中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提出了组合物及其在制备药物中的用途,所述组合物包括:8~12重量份的五味子;2~8重量份的吴茱萸;2~8重量份的补骨脂;2~8重量份的陈皮;2~8重量份的肉边桂;2~8重量份的炙麦芽;2~8重量份的甘草;以及8~12重量份的连翘。本发明的组合物可以有效地起到预防或者治疗机体因感染大肠杆菌所引发的疾病,具有理论研究及临床应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域。具体地,本发明涉及组合物在预防或治疗因感染大肠杆菌所引发的疾病中的应用。
背景技术
禽致病性大肠杆菌侵入机体后,会引发急性大肠杆菌病。肉鸡大肠杆菌病是养殖过程中经常发生的爆发性疾病,该病初期表现为败血症,随后出现猝死或在机体的多个重要器官中出现炎性病变,如肝脏、心脏、气囊等出现炎症病灶等,是一种发病率、死亡率较高的疾病,给世界范围内的家禽生产者造成严重的经济负担。抗生素和化学抗菌药物的使用虽然能够有效缓解病原微生物对机体的侵害,但抗生素的残留及细菌耐药性的出现造成了食品安全隐患和公共卫生问题,因此,需要开发安全、有效的抗生素替代品来防治大肠杆菌病。
中草药在我国临床上应用广泛,积累了十分宝贵且丰富的经验。中药能直接抑制并杀灭细菌、病毒等多种感染源,清除其产生的毒素,消除机体因感染而引发的炎症,也能通过提高机体的免疫功能抵御外来异物的入侵及破坏,其安全性较抗生素高,对机体的毒副作用小,在替代抗生素方面具有很大的潜力。
中草药发挥作用主要依靠其有效成分,依据药理性质将不同的中药进行组合,能够充分发挥各种中草药的最大作用,达到标本兼治的效果。
然而,目前适于预防或治疗因感染大肠杆菌而引发疾病的中草药仍有待研究。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。
为此,本发明提出了一种组合物。根据本发明的实施例,所述组合物包括:8~12重量份的五味子;2~8重量份的吴茱萸;2~8重量份的补骨脂;2~8重量份的陈皮;2~8重量份的肉桂;2~8重量份的炙麦芽;2~8重量份的甘草;以及8~12重量份的连翘。五味子、连翘2种药物为该组合物的主药,五味子具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心的功效,连翘发挥清热解毒、消肿散结、疏散风热的作用,而且五味子属于温性药,连翘属凉性药物,温凉组合能够增强药效。主药辅以清热解毒、消肿散结、疏散风热的吴芋,补肾壮阳、补脾健胃的补骨脂,理气健脾、燥湿化痰的陈皮,补火助阳、引火归源、散寒止痛、活血通经的肉桂,行气消食、健脾开胃的炙麦芽。甘草为使药,调和各种药物。该组合物多以温、热性药物入药,辅以清热解毒类药物。将各种单味中药进行组合能够保证体内阴阳平衡,能够增强药效。该组合物可以有效地起到预防或者治疗机体因感染大肠杆菌所引发的疾病,具有理论研究及临床应用价值。
根据本发明的实施例,上述组合物还可以具有下列附加技术特征:
根据本发明的实施例,所述组合物包括:10重量份的五味子;5重量份的吴茱萸;5重量份的补骨脂;5重量份的陈皮;5重量份的肉桂;5重量份的炙麦芽;5重量份的甘草;以及10重量份的连翘。由此,可以进一步提高预防和治疗效果。
在本发明的另一方面,本发明提出了组合物在制备药物中的用途。根据本发明的实施例,所述药物用于预防或治疗因感染大肠杆菌所引发的疾病。如前所述,该药物可以有效地起到预防或者治疗机体因感染大肠杆菌所引发的疾病,具有理论研究及临床应用价值。
根据本发明的实施例,感染对象为动物,包括:鸡、鸭、兔、鼠、猪、牛、羊、人。
根据本发明的实施例,所述组合物用于提高空肠绒毛高度,降低隐窝深度,提高空肠绒毛高度与隐窝深度的比值,提高空肠中胰蛋白酶活性,提高乳酸杆菌和双歧杆菌数量。由此,可以有效地起到保护肠道结构的功能,减少肠道损伤,从而有效地预防和治疗因感染大肠杆菌所引发的疾病。
根据本发明的实施例,所述组合物用于减轻肝脏的炎性细胞浸润。由此,以便提高肝脏损伤恢复能力。
根据本发明的实施例,所述组合物用于提高机体免疫力。由此,以便起到预防和治疗疾病的目的。
根据本发明的实施例,所述组合物用于提高脾脏指数,提高血清溶菌酶活性,降低血清NDV抗体滴度。由此,以便提高机体免疫力,起到预防和治疗疾病的目的。
根据本发明的实施例,所述组合物用于降低血清谷草转氨酶活性,减轻肝脏的炎性细胞浸润。由此,以便降低大肠杆菌对肝脏的损伤程度。
根据本发明的实施例,所述组合物用于提高空肠促炎因子IFN-γ和IL-4的含量。由此,可以有效地起到保护肠道结构的功能,减少肠道损伤,从而有效地预防和治疗因感染大肠杆菌所引发的疾病。
试验采用玉米-豆粕型基础日粮,以中国鸡饲养标准(2004)为标准。
根据本发明的实施例,所述组合物的给药剂量为0.2~1.4%。由此,以便起到预防和治疗目的。
根据本发明的实施例,所述组合物的给药剂量为0.2~0.6%,用于预防因感染大肠杆菌所引发的疾病。由此,能够降低感染肉鸡的死亡率,提高了系统免疫和肠道免疫,对肠道损伤和肝脏损伤具有预防保护作用,增加肠道益生菌数量,起到较好的预防目的。
根据本发明的实施例,所述组合物的给药剂量为0.8~1.2%,用于治疗因感染大肠杆菌所引发的疾病。由此,能够降低感染肉鸡的死亡率,对肠道损伤和肝脏损伤具有治疗作用,提高肠道消化酶活性,恢复肠道微生物平衡,起到较好的治疗目的。
根据本发明的实施例,所述药物包含一种或多种药学上或食品学上可接受的辅料。例如,可以为碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖或者乳糖。由此,方便食用,并可起到较好的治疗目的。该药物的剂型可以选自合剂、注射液、片剂、颗粒剂、糖浆剂、胶囊、口服液、气雾剂以及喷雾剂之一。由此,便于根据给药对象不同,采用不同的剂型。例如,为了便于给药,可以采用片剂、颗粒剂、糖浆剂、胶囊和口服液,并且,可以根据药物的吸收部位和药物的释放需求,对药物的剂型进行调整,从而提高药物的生物利用度,延长药物的释放时间。对于病情严重者,可以采用注射液,进而实现大剂量的给药需求,并且,避免胃肠循环对药物有效成分的影响。
术语“治疗”用于指获得期望的药理学和/或生理学效果。所述效果就完全或部分预防疾病或其症状而言可以是预防性的,和/或就部分或完全治愈疾病和/或疾病导致的不良作用而言可以是治疗性的。本文使用的“治疗”涵盖哺乳动物、特别是人的疾病,包括:(a)在容易患病但是尚未确诊得病的个体中预防疾病(例如预防由大肠杆菌引发的疾病)或病症发生; (b)抑制疾病,例如阻滞疾病发展;或(c)缓解疾病,例如减轻与疾病相关的症状。本文使用的“治疗”涵盖将药物或化合物给予个体以治疗、治愈、缓解、改善、减轻或抑制个体的疾病的任何用药,包括但不限于将含本文所述组合物的药物给予有需要的个体。
本领域技术人员能够理解的是,前面针对组合物所描述的特征和优点,同样适用于该用途,在此不再赘述。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出,部分将从下面的描述中变得明显,或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解,其中:
图1显示了根据本发明一个实施例的组合物对大肠杆菌感染肉鸡的治疗效果示意图;
图2显示了根据本发明一个实施例的1%的组合物对肉鸡空肠形态的影响示意图,其中, A代表空白对照组,B代表大肠杆菌O78感染对照组,C代表感染后添加组合物组,21d表示肉鸡21日龄,25d代表肉鸡25日龄,放大倍数为50倍;
图3显示了根据本发明一个实施例的1%的组合物对肉鸡肝脏的影响示意图,其中,A 代表空白对照组,B代表大肠杆菌O78感染对照组,C代表感染后添加组合物组,21d表示肉鸡21日龄,25d代表肉鸡25日龄,放大倍数为400倍;
图4显示了根据本发明一个实施例的0.5%的组合物对大肠杆菌O78感染肉鸡的预防保护效果示意图;
图5显示了根据本发明一个实施例的0.5%的组合物对肉鸡肝脏的影响示意图,其中, A代表空白对照组,B代表大肠杆菌O78感染对照组,C代表添加组合物后感染组,21d 表示肉鸡21日龄,25d代表肉鸡25日龄,放大倍数为400倍;
图6显示了根据本发明一个实施例的0.5%的组合物对肉鸡空肠形态的影响示意图,其中,A代表空白对照组,B代表大肠杆菌O78感染对照组,C代表添加组合物后感染组,21d表示肉鸡21日龄,25d代表肉鸡25日龄,放大倍数为50倍。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解,下面的实施例仅用于说明本发明,而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的,按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例
抑菌圈直径的测定
采取平板琼脂打孔法测定组合物对大肠杆菌O78的抑菌圈直径。取0.1mL浓度为108 CFU/mL的菌液置于制备的无菌麦康凯培养平板中,均匀涂抹,待涂布器与平板有一定的黏度时停止涂板,用直径为6mm的打孔器在平板上进行打孔,分别在孔内加满浓度为1 g/mL的组合物药液及生理盐水。将平板正置放置于37℃恒温培养箱中,培养24h后取出平板,用游标卡尺测量抑菌圈直径。
最小抑菌浓度的测定
采用试管二倍稀释-平板法测定组合物对禽致病性大肠杆菌O78的最小抑菌浓度。取9 只灭菌试管,在试管上标记数字1-9,向每个试管中分别加入1mL灭菌LB肉汤,在标号为1的试管中加入1mL药液,逐级二倍稀释至标号为9的试管,最后一管混匀后弃1mL,标号为1至9的试管中的药物浓度分别为500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.81、3.9、 1.95mg/mL。同时设置阴性对照和阳性对照,阳性对照管管中仅加入菌液和LB肉汤,阴性对照管除了LB肉汤外不加任何物质。上述11管中每管加入浓度为106CFU/ml的菌液 100μL,混合均匀后,水平放置于37℃恒温培养箱培养24h。由于中药复方药液颜色较深,会影响肉眼观察结果,需要结合平板培养的方法进一步验证结果。从每个试管中吸取100μl 液体于制备的无菌普通琼脂培养平板中,涂抹均匀后,37℃恒温培养24h,无细菌生长的平板对应的浓度作为本药物的最小抑菌浓度。
预防实验和治疗实验
治疗试验:试验采取单因子随机设计,将210只1日龄AA公雏鸡随机分为3组,每组7个重复,每个重复10只鸡,分别为空白对照组、大肠杆菌处理组、组合物+大肠杆菌处理组,组合物的添加剂量为每千克日粮中添加10克(即1%,用于替代基础日粮中的沸石粉用量),添加时间为19-25d。整个饲养期为25d。除空白对照外其余各组于19日龄对肉仔鸡进行腹腔注射攻毒,试验组每只肉仔鸡腹腔注射备用的大肠杆菌O78菌液1mL,空白对照组注射相同量的生理盐水。
预防试验:试验采取单因子随机设计,将210只1日龄AA公雏鸡随机分为3组,每组7个重复,每个重复10只鸡,分别为空白对照组、大肠杆菌处理组、组合物+大肠杆菌处理组,组合物的添加剂量为每千克日粮中添加5克(即0.5%,用于替代基础日粮中的沸石粉用量),添加时间为15-21d。整个饲养期为25d。除空白对照外其余各组于19日龄对肉仔鸡进行腹腔注射攻毒,试验组每只肉仔鸡腹腔注射备用的大肠杆菌O78菌液1mL,空白对照组注射相同量的生理盐水。
在21d和25d进行样品采集。
死亡率的测定
大肠杆菌攻毒后,记录肉鸡的死亡数,以全期死亡数与鸡只总数的比值作为死亡率。
肠道形态的测定
每个重复选取1只试验鸡,取相同部位的空肠中段组织置于甲醛溶液中固定,固定完成后,将空肠固定组织样用石蜡进行包埋,用苏木精-伊红进行染色后制成组织切片。用活细胞工作站在显微镜下观察肠道受损状态并拍照,随机选取观察视野下完整肠绒毛10根,用Image pro plus 6.0处理软件分别测量绒毛高度(villus height,VH)与隐窝深度(crypt depth,CD),并计算VH与CD的比值。
肠道消化酶的测定
将21d及25d采集到的空肠食糜用生理盐水制成10%的匀浆,用于测定空肠淀粉酶(cat #C016-1-1)、胰蛋白酶(cat#A080-2-2)、脂肪酶(cat#A054-2-1)的活力,测定步骤以南京建成试剂盒的说明书为参考。采用康为世纪生物科技有限公司的BCA试剂盒(cat#CW0014)测定匀浆液中的总蛋白浓度。最终消化酶活性以每mg蛋白的活性表示。
肠道微生物的测定
称取0.5g回肠食糜,加入无菌生理盐水制成10%的匀浆,连续10倍等倍稀释,预培养确定可以计数的连续三个浓度梯度后,吸取100μL样本到MRS、BL选择培养基中并用无菌涂布器涂抹均匀,待涂布棒与培养基有一定黏度时,停止涂布,将平板放入37℃恒温箱中培养,36-48h后取出平板并对生长出的菌落进行计数,以每克肠内容物所含细菌菌落总数的对数(lg CFU/g)表示。
肝脏病理切片的检测
每个重复选取1只试验鸡,取相同部位的肝脏组织,置于4%多聚甲醛溶液中固定,用于制备肝脏病理切片。操作步骤为:肝脏组织被固定后,用石蜡将肝脏包埋并切片,进行HE染色后制成组织切片,用活细胞工作站的显微镜观察肝脏切片,看是否出现了病变。
血清生化和免疫指标检测
采用比色法测定血清中溶菌酶活性(cat#A050-1-1)、GOT(cat#C010-2-1)及GPT(cat#C009-2-1)活力,试剂盒购自于南京建成生物工程研究所。采用酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定血清中新城疫(Newcastle DiseaseVirus, NDV)抗体滴度,试剂盒(cat#99-09263)购自于美国IDEXX实验室。ELISA测定空肠IFN-γ(cat#ml059838)和IL-4(cat#ml042758)的含量,试剂盒购自于上海酶联生物科技有限公司。操作参见各个试剂盒中的说明书。
统计分析
数据以平均值±SEMs表示,并通过单因素方差分析进行分析。采用spss17.0进行邓肯式多重比较以确定差异,P<0.05被认为差异显著。
结果如表1及表2所示,组合物对大肠杆菌O78的抑菌直径为29.33mm,最小抑菌浓度为250mg/ml。结果表明,组合物对体外培养大肠杆菌O78具有抑制作用。
表1组合物对大肠杆菌O78的体外抑菌圈直径(n=3)
处理 | 平均抑菌圈直径(mm) |
生理盐水 | 0 |
组合物 | 29.33 |
表2组合物对大肠杆菌O78的体外MIC(n=3)
死亡率能够反映组合物对大肠杆菌O78感染肉鸡的治疗和预防效果。结果如图1A和 1B所示,在治疗试验中,添加1%的组合物降低了肉鸡的死亡率,提高了肉鸡的体重。结果表明,1%的组合物对大肠杆菌感染具有治疗效果。
肠道形态结构完整、消化能力正常、肠道菌群平衡是反映肠道健康的重要指标。结果如图所示,添加1%的组合物能够保护肠道结构(图2),显著提高了肉鸡的肠道绒毛高度(图1C)和绒毛高度:隐窝深度比值(图1E),降低了隐窝深度(P<0.05)(图1D),显著提高了空肠胰蛋白酶活性(P<0.05)(图1F),显著提高了乳酸杆菌和双歧杆菌的数量 (P<0.05)(图1G)。
大肠杆菌攻毒会损伤肝脏,肝脏损伤恢复能够表明组合物具有治疗效果。结果如图3 所示,组合物能够减轻肝脏的炎性细胞浸润。
在预防实验中,结果如图4A所示,添加0.5%的组合物降低了肉鸡的死亡率。结果表明,0.5%的组合物对大肠杆菌感染具有预防保护效果。
免疫器官指数和血清NDV抗体滴度能够反映机体对大肠杆菌O78的抵抗力。结果如图所示,组合物显著增加了肉鸡的脾脏指数(P<0.05)(图4B),显著提高了血清溶菌酶活性(图4C),显著降低了血清NDV抗体滴度(P<0.05)(图4D)。结果表明,0.5%组合物能够提高机体的免疫功能,有效预防大肠杆菌O78感染。
大肠杆菌攻毒会损伤肝脏,使肝脏代偿肿大,破坏肝脏结构,肝脏损伤程度低或不损伤能够表明组合物具有预防效果。结果如图所示,0.5%的组合物显著降低了血清谷草转氨酶活性(P<0.05)(4E),减轻了肝脏的炎性细胞浸润(图5)。
肠道形态结构完整、消化能力正常、肠道菌群平衡是反映肠道健康的重要指标。结果如图6所示,0.5%组合物能够保护肠道结构,显著提高了肉鸡的肠道绒毛高度(图4F)和绒毛高度:隐窝深度比值(图4H),降低了隐窝深度(P<0.05)(图4G),显著提高了空肠促炎因子IFN-γ和IL-4的含量(P<0.05)(图4I),显著提高肠道双歧杆菌的数量(P<0.05) (图4J)。
综上所述,肉鸡日粮中添加0.5%的组合物能够有效预防大肠杆菌对肉鸡的感染,添加 1%的组合物对大肠杆菌感染肉鸡的损伤具有治疗效果。本发明结果不仅可以用在生产中预防大肠杆菌病的发生,而且可以在大肠杆菌病爆发后,应用于兽医临床中。
在本说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外,在不相互矛盾的情况下,本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例,可以理解的是,上述实施例是示例性的,不能理解为对本发明的限制,本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (13)
1.一种用于预防或治疗因禽类动物感染大肠杆菌所引发的疾病的组合物,其特征在于,由下列物质组成:
8~12重量份的五味子;
2~8重量份的吴茱萸;
2~8重量份的补骨脂;
2~8重量份的陈皮;
2~8重量份的肉桂;
2~8重量份的炙麦芽;
2~8重量份的甘草;以及
8~12重量份的连翘。
2.根据权利要求1所述的用于预防或治疗因禽类动物感染大肠杆菌所引发的疾病的组合物,其特征在于,由下列物质组成:
10重量份的五味子;
5重量份的吴茱萸;
5重量份的补骨脂;
5重量份的陈皮;
5重量份的肉桂;
5重量份的炙麦芽;
5重量份的甘草;以及
10重量份的连翘。
3.权利要求1或2所述组合物在制备药物中的用途,其特征在于,所述药物用于预防或治疗因禽类动物感染大肠杆菌所引发的疾病。
4.根据权利要求3所述的用途,其特征在于,所述禽类动物包括:鸡、鸭。
5.根据权利要求3所述的用途,其特征在于,所述组合物用于提高空肠绒毛高度,降低隐窝深度,提高空肠绒毛高度与隐窝深度的比值,提高空肠中胰蛋白酶活性,提高乳酸杆菌和双歧杆菌数量。
6.根据权利要求3所述的用途,其特征在于,所述组合物用于减轻肝脏的炎性细胞浸润。
7.根据权利要求3所述的用途,其特征在于,所述组合物用于提高机体免疫力。
8.根据权利要求3所述的用途,其特征在于,所述组合物用于提高脾脏指数,提高血清溶菌酶活性,降低血清NDV抗体滴度。
9.根据权利要求3所述的用途,其特征在于,所述组合物用于降低血清谷草转氨酶活性,减轻肝脏的炎性细胞浸润。
10.根据权利要求3所述的用途,其特征在于,所述组合物用于提高空肠促炎因子IFN-γ和IL-4的含量。
11.根据权利要求3所述的用途,其特征在于,所述组合物的给药剂量为0.2~1.4%日粮。
12.根据权利要求3所述的用途,其特征在于,所述组合物的给药剂量为0.2~0.6%日粮,用于预防因禽类动物感染大肠杆菌所引发的疾病。
13.根据权利要求3所述的用途,其特征在于,所述组合物的给药剂量为0.8~1.2%日粮,用于治疗因禽类动物感染大肠杆菌所引发的疾病。
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