CN111905017A - 一种抗幽门螺旋杆菌的中药组合物及应用 - Google Patents
一种抗幽门螺旋杆菌的中药组合物及应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于中药制备技术领域，具体涉及一种抗幽门螺旋杆菌的中药组合物及应用，该中药组合物在著名经方左金丸和香连丸的基础上改进，包括黄连提取物、萸黄连提取物和黄柏提取物，其中小檗碱的含量（＞50%），抗幽门螺杆菌的效果好，同时，与吴茱萸和木香的合用，有效的消除了产品的副作用，提高了药物的安全性；该中药组合物与临床上的治疗HP的标准疗法（三联疗法）联合使用，不仅可进一步提高疗效，还可修复三联疗法引起的肠道菌群紊乱以及三联疗法的毒副作用。
Description
技术领域
本发明属于中药制备技术领域，具体涉及一种抗幽门螺旋杆菌的中药组合物及应用。
背景技术
黄连始载于《神农本草经》，列为上品。黄连味苦，性寒，有泻火、解毒、清热、燥湿的功能。用于烦热神昏、心烦失眠、湿热痞满、呕吐、腹痛泻痢、目赤肿毒、口舌生疮、湿疹、烫伤、吐血、衄血等。大量的研究结果表明，黄连具有极强的抗幽门螺旋杆菌(HP)作用(徐艺等。中草药单味与复方对幽门螺杆菌抑菌作用研究。中国中西医结合脾胃杂志，8(5)：292。2000)。
有研究报道显示，黄连素是黄连中抗HP的主要活性成分，黄连素抗HP的生物活性优良(赵小勇。几种天然植物成份治疗幽门螺杆菌感染的实验研究。第三军医大学硕士学位论文，2006)。黄连提取物中黄连素的溶出速度明显优于黄连中黄连素的溶出速度。利用现代天然药物化学技术，提取黄连等中药中的黄连素等有效成分，不仅可以大幅度提高有效成分的浓度，减小体积，便于制作成为胶囊，克服黄连口感较差的不足；而且可以增加有效成分的溶出速度，显著提高杀灭HP的效果。
以黄连为主要原料的著名经方有香连丸和左金丸。无论是左金丸还是香连丸，其制备工艺粗糙，体积大，口感差；研究发现，左金丸和香连丸的有效成分含量偏低，有效成分溶出速度偏慢，剂量偏小，杀灭HP的作用偏弱，导致清除HP的疗效不佳；而单纯的加大黄连用量或者左金丸或者香连丸的用量，虽然可以提高疗效，但是因产品杂质含量偏高，剂量增大以后副作用增大，产生安全性方面的问题。
左金胶囊是以左金丸为基础加工的浓缩提取物，但是，左金胶囊的黄连素含量不高“0.35g含盐酸小檗碱40mg(约11％)”(《中国药典》2015版左金胶囊项下)；浓缩香连丸和香连片是以香连丸为基础加工的浓缩提取物，但是，浓缩香连丸黄连素的含量也不高“每0.17g浓缩香连丸含盐酸小檗碱6.8mg(约4％)”(《中国药典》2015版浓缩香连丸项下)，香连片中黄连素的含量还是不高“每0.1g含盐酸小檗碱5.6mg(约5.6％)”(《中国药典》2015版香连片项下)。因此，直接利用他们杀灭HP的疗效有限，而增加黄连用量，又会增加提取物中的杂质含量，易产生安全性问题。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供一种抗幽门螺旋杆菌的中药组合物，该中药组合物具备有优异的抗幽门螺杆菌效果的同时，具备较高的生物安全性。
一种抗幽门螺杆菌的中药组合物，按重量计，包括60-95份黄柏提取物、1-30份萸黄连提取物和0-30份木香提取物。
优选的，按重量计，所述中药组合物包括70-90份黄柏提取物、5-20份萸黄连提取物、5-20份木香提取物。
优选的，按重量计，所述中药组合物包括75-80份黄柏提取物、10-15份萸黄连提取物、10-15份木香提取物。
优选的，所述黄柏提取物的提取方法为：黄柏用0.1-2％(V/V)的硫酸水溶液浸泡1-48小时，然后渗漉提取；提取液用石灰中和到溶液的pH＝2-5，过滤，滤液减压浓缩到0.1-1g生药(黄柏)/mL；过滤，浓缩液中再添加0.5-5％(W/V)的氯化钠，静止1-24小时，过滤；沉淀在5倍蒸馏水中重结晶一次；得到黄柏提取物。
优选的，所述萸黄连提取物的提取方法为：萸黄连切片，用40-70％的乙醇加热回流提取萸黄连片三次，合并提取液，滤过，回收乙醇并浓缩成稠膏，得到萸黄连提取物。
优选的，所述萸黄连的制备方法为：取吴茱萸加水煎煮，煎液与净黄连拌匀，待煎液吸尽，炒干，即得萸黄连。
优选的，所述木香提取物采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，水煎液滤过，浓缩至稠膏状，干燥；合并木香挥发油和提取物得木香提取物。
一种抗幽门螺杆菌的中药制剂，采用上述中药组合物本身或其与药学上可接受的敷料混合制备成丸剂、胶囊、片剂或胶囊剂。
本发明的有益效果在于：
1.本发明的中药组合物在著名经方左金丸和香连丸的基础上改进，包括黄柏提取物、萸黄连提取物和木香提取物，其中小檗碱的含量(＞50％)，抗幽门螺杆菌的效果好；同时，与吴茱萸和木香的合用，有效的消除了产品的副作用，提高了药物的安全性；该中药组合物与临床上的治疗HP的标准疗法(三联疗法)联合使用，不仅可进一步提高疗效，还可修复三联疗法引起的肠道菌群紊乱以及三联疗法的毒副作用；
2.本发明的中药组合物的小檗碱含量高，进而使得制成的中药制剂体积小，便于加工成为胶囊剂、片剂(包衣)和丸剂(包衣)等，可有效提高制剂的口感，显著提高了临床依从性；
3.本发明的中药组合物不仅具有抗幽门螺杆菌的效果，还具有治愈胃部和肠道疾病的效果，对于消化道肿瘤(尤其是胃癌)有较好的预防作用；
4.本发明的中药组合物具有双向调节肠道微生物作用，抑制肠道有害微生物，促进肠道有益微生物，特别有利于改善因为抗生素引发的肠道菌群紊乱，修复肠道功能。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚完整的描述，显然所描述的实施例仅是本发明的部分实施例，而不是全部实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。
另外，除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备均可通过市场购买获得或现有方法制备得到。
实施例1一种抗幽门螺旋杆菌的药组合物的制备
100Kg黄柏用0.1％(V/V)的硫酸水溶液浸泡48小时，然后渗漉提取；提取液用石灰水溶液中和到溶液的pH＝2，过滤，滤液减压浓缩到0.1g生药(黄柏)/mL；过滤，浓缩液中再添加5％(W/V)的氯化钠溶液；静止24小时，过滤；沉淀在5倍蒸馏水中重结晶一次；得到黄柏提取物3kg。HPLC分析黄柏提取物中小檗碱含量98％。
10kg萸黄连，用70％的乙醇加热回流提取三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1.5小时，合并提取液，滤过，回收乙醉并浓缩成稠膏，得到萸黄连提取物2kg。
将黄柏提取物95g(黄柏提取物也可以直接从市场上购买)与萸黄连提取物5g混合均匀，造粒，装胶囊(0.4g/粒)，即得；HPLC分析产品中小檗碱含量为93.85％。每次2粒，每天2次，具有很好的抗HP作用，尤其是与“三联疗法”联用，抗HP效果具有协同作用；该产品还具有治疗腹泻和改善肠道菌群的作用。
实施例2一种抗幽门螺旋杆菌的药组合物的制备
100Kg黄柏用2％(V/V)的硫酸水溶液浸泡1小时，然后渗漉提取；提取液用石灰中和到溶液的pH＝5，过滤，滤液减压浓缩到1g生药(黄柏)/mL；过滤，再添加0.1％(W/V)的氯化钠；静止24小时，过滤；沉淀在5倍蒸馏水中重结晶一次；得到黄柏提取物3.3kg，HPLC分析提取物中小檗碱含量90％。
10kg萸黄连，用40％的乙醉加热回流提取三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1.5小时，合并提取液，滤过，回收乙醉并浓缩成稠膏，得到萸黄连提取物2.1kg。
木香10kg，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，得到0.05kg；水煎液滤过，浓缩至稠膏状，将挥发油与提取物混合，得到木香提取物3kg。
将黄柏提取物60g(黄柏提取物也可以直接从市场上购买)、萸黄连提取物30g、木香提取物10g混合均匀，造粒，压片(0.2g/片)，即得；HPLC分析产品中小檗碱含量为54.1％。每次4片，每天3次，具有很好的抗HP作用，尤其是与“三联疗法”联用，抗HP效果具有协同作用；该产品还具有治疗腹泻和改善肠道菌群的作用。
实施例3一种抗幽门螺旋杆菌的药组合物的制备
100Kg黄柏用0.5％(V/V)的硫酸水溶液浸泡12小时，然后渗漉提取；提取液用石灰中和到溶液的pH＝4，过滤，滤液减压浓缩到0.4g生药(黄柏)/mL；过滤，再添加2％(W/V)的氯化钠；静止12小时，过滤；沉淀在5倍蒸馏水中重结晶一次；得到黄柏提取物3.1kg，HPLC分析提取物中小檗碱含量93％。
10kg萸黄连，用50％的乙醉加热回流提取三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1.5小时，合并提取液，滤过，回收乙醉并浓缩成稠膏，得到萸黄连提取物1.9kg。
木香10kg，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，得到0.05kg；水煎液滤过，浓缩至稠膏状，将挥发油与提取物混合，得到木香提取物3kg。
将黄柏提取物69g(黄柏提取物也可以直接从市场上购买)、萸黄连提取物1g、木香30g混合均匀，造粒，制丸(0.1g/粒)；HPLC分析产品中小檗碱含量为64.5％。每次1g，每天3次，具有很好的抗HP作用，尤其是与“三联疗法”联用，抗HP效果具有协同作用；该产品还具有治疗腹泻和改善肠道菌群的作用。
实施例4一种抗幽门螺旋杆菌的药组合物的制备
100Kg黄柏用0.6％(V/V)的硫酸水溶液浸泡24小时，然后渗漉提取；提取液用石灰中和到溶液的pH＝5，过滤，滤液减压浓缩到0.4g生药(黄柏)/mL；过滤，再添加3％(W/V)的氯化钠；静止24小时，过滤；沉淀在5倍蒸馏水中重结晶一次；得到黄柏提取物3.6kg，HPLC分析提取物中小檗碱含量96％。
10kg萸黄连，用60％的乙醇加热回流提取三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1.5小时，合并提取液，滤过，回收乙醇并浓缩成稠膏，得到萸黄连提取物2.1kg。
木香10kg，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，得到0.05kg；水煎液滤过，浓缩至稠膏状，将挥发油与提取物混合，得到木香提取物3kg。
将黄柏提取物90g(黄柏提取物也可以直接从市场上购买)、萸黄连提取物8g、木香提取物2g混合均匀，造粒，装胶囊(0.4g/粒)；HPLC分析产品中小檗碱含量为87.6％。每次2粒，每天2次，具有很好的抗HP作用，尤其是与“三联疗法”联用，抗HP效果具有协同作用；该产品还具有治疗腹泻和改善肠道菌群的作用。
实施例5抗幽门螺杆菌(HP)效果比较
(1)试验药物1：按照实施例1制备的抗幽门螺旋杆菌的药组合物。给药剂量225mg·kg-1·d-1。
(2)试验药物2：按照实施例2制备的抗幽门螺旋杆菌的药组合物。给药剂量225mg·kg-1·d-1。
(3)试验药物3：按照实施例4制备的抗幽门螺旋杆菌的药组合物。给药剂量225mg·kg-1·d-1。
(4)对照药物1：黄柏100kg，用0.6％(V/V)的硫酸水溶液浸泡24小时，然后渗漉提取；提取液用石灰石灰到溶液的pH＝5，过滤，滤液减压浓缩到0.4g生药(黄柏)/mL；过滤，再添加3％(W/V)的氯化钠；静止24小时，过滤；沉淀在5倍蒸馏水中重结晶一次；得到黄柏提取物。给药剂量225mg·kg-1·d-1。
(5)对照药物2：萸黄连100kg，用60％的乙醇加热回流提取三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1.5小时，合并提取液，滤过，回收乙醇并浓缩成稠膏，得到萸黄连提取物。给药剂量225mg·kg-1·d-1。
(6)对照药物3：木香100kg，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，得到5kg；水煎液滤过，浓缩至稠膏状，得到提取物30kg；将他们混合以后得到的提取物。给药剂量225mg·kg-1·d-1。
(7)对照药物4：萸黄连80kg，木香20kg，按照对照药物2和对照药物3制备的提取物，混合均匀即得。给药剂量225mg·kg-1·d-1。
(8)对照药物5：黄柏80kg，木香20kg，按照对照药物1和对照药物3制备的提取物，混合均匀即得。给药剂量225mg·kg-1·d-1。
(9)对照药物6：三联疗法组：奥美拉唑6mg/kg，克拉霉素150mg/kg，阿莫西林150mg/kg。
(10)对照药物7：三联疗法组+试验药物3：奥美拉唑6mg/kg，克拉霉素150mg/kg，阿莫西林150mg/kg，试验药物给药剂量225mg·kg-1·d-1。
动物实验(杨晨等。胃幽康胃漂浮片抗幽门螺杆菌和抗胃溃疡的实验研究。中国医院药学杂志，2018，38(5)，482))：(1)HP感染小鼠模型制备：取昆明种小鼠适应性饲养1d后禁食禁水12h，再每只小鼠灌胃乙醇0.2mL消毒，2h后恢复正常饮食饮水。然后将预处理过的小鼠禁食12h，再每只小鼠灌胃HP菌混悬液0.5mL(菌液数为1×109CFU·mL-1)，每间隔12小时重复一次，共4次。距末次灌胃2h后恢复饮食饮水。5周后随机处死5只小鼠，取胃窦部组织进行尿素酶、细菌学涂片检查和组织学检查以确定是否成功感染HP。(2)动物分组及给药：将造模后动物随机分为11组，每组15只，即：正常对照组、模型对照组、试验药物1-3组(225mg·kg-1·d-1)、对照药物1-5组(225mg·kg-1·d-1)。各给药组每只小鼠0.4mL-1(药物用纯化水配成供试药液)，正常对照组及模型组给予等量生理盐水，每次0.4mL，每天1次，连续5周。(3)检测指标：末次给药后禁食24h，处死动物，取胃窦部组织进行尿素酶、细菌学涂片检查和组织学检查以确定HP是否存在。在无菌条件下，取出鼠胃，沿胃大弯剪开，用无菌生理盐水冲洗净残留物后沿纵轴截取胃窦部分，后将胃窦切为三部分，一部分用于涂片镜检：将小鼠胃窦部黏膜面贴于载玻片上进行涂片，革兰染色后镜检；一部分用于组织学检查：胃组织块用甲醛固定，组织切片分别作HE染色和Giemsa染色；另一部分用于尿素酶试验。3种检测方法中只要有2种为阳性即认定小鼠胃黏膜有HP感染。结果见表1。
表1药物对幽门螺杆菌的清除率
从表1中可以看到，试验药物对幽门螺杆菌的清除率比较理想，试验药物1和试验药物3略好，三组间没有显著性差异；对照药物1清除HP的效果也比较理想，对照药物2的效果有所下降，对照药物3没有抗HP的效果；对照药物4(萸黄连和木香的组合)有一定的抗HP作用，但是效果很差；对照药物5(黄柏和木香的组合)有一定的抗HP作用，但是效果也不理想。
从表中还可以看到，三联疗法的抗HP效果优于各药物组，疗效比较理想(对照药物6)；但是，三联疗法与试验药物联用以后，抗HP的效果进一步提高，效果非常理想(对照药物7)，表明他们有很好的协同抗HP作用。
实施例6预防胃癌和抗胃癌效果比较
(1)、试验药物1：按照实施例1制备的抗幽门螺旋杆菌的药组合物。
(2)、试验药物2：按照实施例2制备的抗幽门螺旋杆菌的药组合物。
(3)、试验药物3：按照实施例4制备的抗幽门螺旋杆菌的药组合物。
(4)、对照药物1：黄柏100kg，用0.6％(V/V)的硫酸水溶液浸泡24小时，然后渗漉提取；提取液用石灰石灰到溶液的pH＝5，过滤，滤液减压浓缩到0.4g生药(黄柏)/mL；过滤，再添加3％(W/V)的氯化钠；静止24小时，过滤；沉淀在5倍蒸馏水中重结晶一次；得到黄柏提取物。
(5)、对照药物2：萸黄连100kg，用60％的乙醇加热回流提取三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1.5小时，合并提取液，滤过，回收乙醇并浓缩成稠膏，得到萸黄连提取物。
(6)、对照药物3：木香100kg，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，得到5kg；水煎液滤过，浓缩至稠膏状，得到提取物30kg；将他们混合以后得到的提取物。
(7)、对照药物4：萸黄连80kg，木香20kg，按照对照药物2和对照药物3制备的提取物，混合均匀即得。
(8)、对照药物5：黄柏80kg，木香20kg，按照对照药物1和对照药物3制备的提取物，混合均匀即得。
将100只4周龄BALB/c-nu裸鼠单笼饲养，屏障隔离系统平衡3～5天，无菌饲料和水充足。将裸鼠随机分为10组，每组10只，除阴性对照组外，各组裸鼠均接种胃癌肿瘤细胞(BGC-823)(0.1mL/只)，给予实验药物饲养，剂量225mg/kg，持续30天，30天后，处死老鼠，取下肿瘤块，称重，分析比较每组肿瘤组织平均重量，结果见表2。
表2抗肿瘤效果实验
| 试验组 | 肿瘤平均重量/g | 肿瘤发生率/％ |
| 阴性对照组 | 0.00±0.00 | 0 |
| 阳性对照组 | 1.51±0.54 | 100 |
| 试验组1 | 0.81±0.35* | 90 |
| 试验组2 | 0.71±0.26** | 80 |
| 试验组3 | 0.67±0.23** | 70 |
| 对照组1 | 0.84±0.43* | 90 |
| 对照组2 | 0.80±0.30* | 80 |
| 对照组3 | 1.42±0.53 | 100 |
| 对照组4 | 0.89±0.32* | 90 |
| 对照组5 | 0.86±0.35* | 90 |
试验结果表明，与阳性对照组相比(*组)，药物组和对照药物组均有抗胃癌的效果，只有对照组3(木香提取物)没有抗胃癌作用。药物组之间的比较发现：黄柏提取物和萸黄连提取物的复合物，具有抗胃癌效果，与模型组相比达到显著水平；黄柏、萸黄连和木香的复合物，抗胃癌效果非常明显，达到极显著水平；与对照组相比，黄柏、萸黄连和木香的复合物抗胃癌效果优于黄柏、萸黄连和木香，也优于“黄柏和萸黄连组合”，优于“黄柏和木香组合”，优于“萸黄连和木香组合”。
从表中还可以看到，试验药物组具有预防胃癌的效果，尤其以黄柏、萸黄连和木香的复合物预防效果最好。
实施例7修复肠道菌群效果比较
(1)、试验药物1：按照实施例1制备的抗幽门螺旋杆菌的药组合物。
(2)、试验药物2：按照实施例2制备的抗幽门螺旋杆菌的药组合物。
(3)、试验药物3：按照实施例4制备的抗幽门螺旋杆菌的药组合物。
(4)、对照药物1：黄柏100kg，用0.6％(V/V)的硫酸水溶液浸泡24小时，然后渗漉提取；提取液用石灰石灰到溶液的pH＝5，过滤，滤液减压浓缩到0.4g生药(黄柏)/mL；过滤，再添加3％(W/V)的氯化钠；静止24小时，过滤；沉淀在5倍蒸馏水中重结晶一次；得到黄柏提取物。
(5)、对照药物2：萸黄连100kg，用60％的乙醇加热回流提取三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1.5小时，合并提取液，滤过，回收乙醇并浓缩成稠膏，得到萸黄连提取物。
(6)、对照药物3：木香100kg，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，得到5kg；水煎液滤过，浓缩至稠膏状，得到提取物30kg；将他们混合以后得到的提取物。
(7)、对照药物4：萸黄连80kg，木香20kg，按照对照药物2和对照药物3制备的提取物，混合均匀即得。
(8)、对照药物5：黄柏80kg，木香20kg，按照对照药物1和对照药物3制备的提取物，混合均匀即得。
将100只4周龄KM小鼠，屏障隔离系统平衡3～5天，饲料和水充足。将小鼠随机分为10组，每组10只。三联疗法对照组(10只)：服用奥美拉唑20mg每日2次(小鼠6mg/kg)，克拉霉素500mg每日2次(小鼠150mg/kg)，阿莫西林0.5g每日2次(小鼠150mg/kg)。试验组(80只)，分为8组，每组10只：8组均服用奥美拉唑20mg每日2次(小鼠6mg/kg)，克拉霉素500mg每日2次(小鼠150mg/kg)，阿莫西林0.5g每日2次(小鼠150mg/kg)；然后，各组小鼠分别服用试验药物或对照药物，剂量均为225mg/kg。持续给药15天，停药2天，然后，收集小鼠粪便，称重，利用微生物组学技术，分析粪便中微生物多样性和丰度(Kai He etc。Biochimica etBiophysica Acta。1862：1696–1709，2016)，结果见表3。
表3药物修复抗生素引发的肠道菌群紊乱结果
试验结果表明，使用三联疗法抗生素以后，小鼠肠道微生物类群迅速下降，肠道微生物的多样性受到严重影响，并将因此导致系列疾病(腹泻、消化不良、营养吸收下降等)；使用黄柏、萸黄连和木香复合物，可以显著恢复肠道微生物的多样性，尤其是试验药物3，基本上可以恢复到正常水平；尽管黄柏、黄连、木香都有恢复肠道微生物多样性的效果，但是以复方尤其是黄柏、萸黄连和木香三味中药材组成的复方，恢复能力最强。
实施例8药物安全性比较
(1)、试验药物1：按照实施例1制备的抗幽门螺旋杆菌的药组合物。
(2)、试验药物2：按照实施例2制备的抗幽门螺旋杆菌的药组合物。
(3)、试验药物3：按照实施例4制备的抗幽门螺旋杆菌的药组合物。
(4)、对照药物1：黄柏100kg，用0.6％(V/V)的硫酸水溶液浸泡24小时，然后渗漉提取；提取液用石灰石灰到溶液的pH＝5，过滤，滤液减压浓缩到0.4g生药(黄柏)/mL；过滤，再添加3％(W/V)的氯化钠；静止24小时，过滤；沉淀在5倍蒸馏水中重结晶一次；得到黄柏提取物。
(5)、对照药物2：萸黄连100kg，用60％的乙醇加热回流提取三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1.5小时，合并提取液，滤过，回收乙醇并浓缩成稠膏，得到萸黄连提取物。
(6)、对照药物3：木香100kg，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，得到5kg；水煎液滤过，浓缩至稠膏状，得到提取物30kg；将他们混合以后得到的提取物。
(7)、对照药物4：萸黄连80kg，木香20kg，按照对照药物2和对照药物3制备的提取物，混合均匀即得。
(8)、对照药物5：黄柏80kg，木香20kg，按照对照药物1和对照药物3制备的提取物，混合均匀即得。
(9)、对照药物6：三联疗法组：奥美拉唑6mg/kg，克拉霉素150mg/kg，阿莫西林150mg/kg。
(10)、对照药物7：三联疗法组+试验药物3：奥美拉唑6mg/kg，克拉霉素150mg/kg，阿莫西林150mg/kg；试验药物3(225mg·kg-1)。(维持比例不变给药)
将110只4周龄Km小鼠，屏障隔离系统平衡3～5天，无菌饲料和水充足。将小鼠随机分为11组，每组10只；将试验药物和对照药物分别配制为20％的溶液，除阴性对照组外，各药物实验组分别灌胃0.6mL，8小时灌胃一次，连续灌胃三次(总剂量18g/kg)。然后，让小鼠自由采食，3天以后检测体重，15天以后，统计每组死亡率，结果见表4。
表4安全性评价实验结果
| 试验组 | 三天后小鼠平均重量/g | 15天之内小鼠死亡率/％ |
| 阴性对照组 | 28.35±1.21 | 0 |
| 试验组1 | 24.55±3.22 | 0 |
| 试验组2 | 26.31±1.22 | 0 |
| 试验组3 | 27.85±1.65 | 0 |
| 对照组1 | 22.31±2.25 | 10 |
| 对照组2 | 25.66±1.41 | 0 |
| 对照组3 | 28.11±1.23 | 0 |
| 对照组4 | 27.95±1.54 | 0 |
| 对照组5 | 27.32±1.35 | 0 |
| 对照组6 | 21.56±1.65 | 20 |
| 对照组7 | 24.32±2.35 | 0 |
试验结果表明，黄柏提取物单用，其安全性差，小鼠体重下降明显，甚至有部分小鼠死亡(对照组1)；萸黄连提取物和黄柏提取物复配以后，安全性有所上升(实验组1)；在黄柏提取物中添加木香提取物以后，小鼠体重明显上升，没有小鼠死亡，表明安全性大幅度上升(对照组5)；在萸黄连提取物中添加木香提取物以后(对照组2与对照组4比较)，小鼠体重上升更为明显，安全性进一步提高；黄柏、萸黄连和木香提取物复合以后，小鼠的体重与正常组接近，表明产品的安全性极高。
实验结果还表明，三联疗法易引起实验动物体重降低和死亡，副作用大(对照药物6)；与试验药物复用以后，可以显著改善三联疗法的副作用。
Claims (8)
1.一种抗幽门螺杆菌的中药组合物，其特征在于，按重量计，包括60-95份黄柏提取物、1-30份萸黄连提取物和0-30份木香提取物。
2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，按重量计，所述中药组合物包括70-90份黄柏提取物、5-20份萸黄连提取物、5-20份木香提取物。
3.根据权利要求2所述的中药组合物，其特征在于，按重量计，所述中药组合物包括75-80份黄柏提取物、10-15份萸黄连提取物、10-15份木香提取物。
4.根据权利要求3所述的中药组合物，其特征在于，所述黄柏提取物的提取方法为：黄柏用0.1-2%的硫酸水溶液浸泡1-48小时，然后渗漉提取；提取液用石灰中和至pH=2-5，过滤，滤液减压浓缩至0.1-1g生药（黄柏）/mL；过滤，浓缩液中再添加0.5-5%（W/V）的氯化钠，静止1-24小时，过滤；沉淀在5倍蒸馏水中重结晶一次；得到黄柏提取物。
5.根据权利要求3所述的中药组合物，其特征在于，所述萸黄连提取物的提取方法为：萸黄连切片，用40-70%的乙醇加热回流提取萸黄连片三次，合并提取液，滤过，回收乙醇并浓缩成稠膏，得到萸黄连提取物。
6.根据权利要求3所述的中药组合物，其特征在于，所述萸黄连的制备方法为：取吴茱萸加水煎煮，煎液与净黄连拌匀，待煎液吸尽，炒干，即得萸黄连。
7.根据权利要求6所述的中药组合物，其特征在于，所述木香提取物采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，水煎液滤过，浓缩至稠膏状，干燥；合并木香挥发油和提取物得木香提取物。
8.一种抗幽门螺杆菌的中药制剂，其特征在于，采用权利要求1-7任一项所述的中药组合物本身或其与药学上可接受的敷料制备成的丸剂、胶囊、片剂或胶囊剂。
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