CN114591971B - 一种葡萄抗旱VvCCD7基因及其氨基酸序列和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种葡萄抗旱VvCCD7基因及其氨基酸序列和应用，属于分子生物学和生物学技术领域，其中，葡萄抗旱基因VvCCD7的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明采用上述的一种葡萄抗旱VvCCD7基因及其氨基酸序列和应用，VvCCD7基因可用来提高植物的抗旱能力，用于葡萄抗旱品种的选育，在改良作物抗旱能力方面具有重要的意义。

Description

一种葡萄抗旱VvCCD7基因及其氨基酸序列和应用

技术领域

本发明涉及分子生物学和生物技术领域，尤其是涉及一种葡萄抗旱VvCCD7基因及其氨基酸序列和应用。

背景技术

葡萄(Vitis vinifera L.)是世界主要的经济作物之一，在世界各地广泛种植，主要分布在干旱半干旱气候区，尤其是南澳和西北地区。葡萄中包括蛋白质、碳水化合物、粗纤维、钙、磷、铁、钾等微量元素，由于具有丰富的营养价值，所以葡萄有“水果皇后”的美称。

葡萄在生长发育过程中由于受到干旱、高温等非生物胁迫的作用，产量和品质降低，从而影响葡萄酒的品质，是葡萄产业发展的重大问题。我国葡萄生产主要集中在干旱、半干旱地区，如我国西北地区和黄土高原地区。

干旱胁迫对葡萄生长的影响主要是由于气孔导度、电子传递、叶片水势、叶绿素、荧光、渗透势和叶片离子浓度的变化。在分子水平上，干旱胁迫导致活性氧(ROS)的形成、膜障碍、代谢毒性、养分利用率降低以及某些植物激素相关基因的上调。因此，在干旱胁迫下获得稳定且高的产量，需要抗旱基因型，提高葡萄抗旱能力，促进高产稳产，对我国葡萄产业发展十分必要。

发明内容

本发明的目的是提供一种葡萄抗旱VvCCD7基因及其氨基酸序列和应用，VvCCD7基因可用来提高植物的抗旱能力，用于葡萄抗旱品种的选育，由此来提高作物抗旱性，保证作物高产稳产，在改良作物抗旱能力方面具有重要的意义。

为实现上述目的，本发明提供了一种葡萄抗旱VvCCD7基因，葡萄抗旱基因VvCCD7的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

优选的，葡萄抗旱基因VvCCD7编码的VvCCD7蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

一种具有葡萄抗旱VvCCD7基因的重组载体，该重组载体含有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

优选的，重组载体包括克隆载体或植物过表达载体。

优选的，重组载体为由PRI101-an载体构建成的PRI101-an-VvCCD7载体。

一种包含所述重组载体的转化体。

优选的，所述转化体为根癌农杆菌和/或植物细胞(或生物体)；所述生物体为转基因抗旱植物，为水稻、玉米、小麦、大麦、烟草、大豆、高粱、棉花、麻类、花生、油菜、芝麻、甘蔗、葡萄或甜菜中之一，其中优选为葡萄。

一种葡萄抗旱VvCCD7基因在提高植物抗旱性中的应用。

一种重组载体在提高植物抗旱性中的应用。

一种转化体在提高植物抗旱性中的应用，植物为拟南芥。

因此，本发明采用上述一种葡萄抗旱VvCCD7基因及其氨基酸序列和应用，将VvCCD7基因构建到表达载体PRI101-an，通过农杆菌介导的转化方法，将PRI101-an携带的VvCCD7基因转入拟南芥，获得转基因拟南芥。转基因拟南芥以及非转基因拟南芥(野生型)同时干旱胁迫21天后，与野生型拟南芥相比，转基因拟南芥抗旱能力大大提高。表明过表达VvCCD7基因的转基因植株在干旱胁迫下抗逆性增强。因此该葡萄抗旱基因VvCCD7的过量表达可用来提高植物的抗旱能力以便用于葡萄抗旱品种的选育。

下面通过附图和实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。

附图说明

图1是含有VvCCD7基因的表达载体PRI101-an-VvCCD7凝胶示意图；

图2是成功转入VvCCD7基因的拟南芥T3代植株示意图；

图3是成功转入VvCCD7基因拟南芥T3代的PCR鉴定结果示意图；

图4是转入VvCCD7基因拟南芥T3代植株定量表达验证结果图；

图5是土壤干燥法测定转VvCCD7基因拟南芥T3代植物的抗旱性示意图。

具体实施方式

以下通过附图和实施例对本发明的技术方案作进一步说明。

除非另外定义，本发明使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的主旨或基本特征的情况下，能够以其它的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内，不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其它实施方式。这些其它实施方式也涵盖在本发明的保护范围内。

还应当理解，以上所述的具体实施例仅用于解释本发明，本发明的保护范围并不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明/发明的保护范围之内。

本发明中使用的“包括”或者“包含”等类似的词语意指在该词前的要素涵盖在该词后列举的要素，并不排除也涵盖其它要素的可能。术语“内”、“外”、“上”、“下”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制，当被描述对象的绝对位置改变后，则该相对位置关系也可能相应地改变。在本发明中，除非另有明确的规定和限定，术语“附着”等术语应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或成一体；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。本发明中使用的术语“约”具有本领域技术人员公知的含义，优选指该术语所修饰的数值在其±50％，±40％，±30％，±20％，±10％，±5％或±1％范围内。

本公开使用的所有术语(包括技术术语或者科学术语)与本公开所属领域的普通技术人员理解的含义相同，除非另外特别定义。还应当理解，在诸如通用词典中定义的术语应当被理解为具有与它们在相关技术的上下文中的含义相一致的含义，而不应用理想化或极度形式化的意义来解释，除非本文有明确地这样定义。

对于相关领域普通技术人员已知的技术、方法和设备可能不作为详细讨论，但在适当情况下，所述技术、方法和设备应当被视为说明书的一部分。

本发明说明书中引用的现有技术文献所公开的内容整体均通过引用并入本发明中，并且因此是本发明公开内容的一部分。

实施例一

1.获得葡萄抗旱基因VvCCD7基因

叶片RNA提取按照百泰克公司的植物RNA提取试剂盒说明书步骤进行，cDNA的合成按照Takara公司反转录合成试剂盒说明书步骤进行。根据VvCCD7基因的CDS序列，利用Primer Premier 5设计可以扩增其完整CDS序列的引物，引物序列(包含修饰碱基)及名称如下：

VvCCD7-F：5’-TTGATACATATGCCCGTCGACATGCAGGCCAAACCTTTCCA-3’(如SEQ IDNO.3所示)

VvCCD7-R：5’-GTTGATTCAGAATTCGGATCCCTACTCTTTGGGGGCCCAAA-3’(如SEQ IDNO.4所示)；

2.取赤霞珠葡萄的叶片，提取叶片总RNA，反转录生成cDNA，以反转后的cDNA为模板，利用所述的引物对VvCCD7-F/R进行RT-PCR扩增，将扩增得到的片段进行测序，获得VvCCD7基因序列，如图1所示。

实施例二

VvCCD7基因过表达载体的构建与遗传转化

1.过表达载体的构建

将实施例一克隆得到的抗旱相关的葡萄基因VvCCD7利用同源重组的方法与PRI101-an线性化载体连接构建植物表达载体，命名为PRI101-an-VvCCD7(图1)，具体操作如下：

(1)首先利用双酶切(Sal1和BamH1)(Takara)方法获得线性化载体，然后通过琼脂糖凝胶电泳和胶回收试剂盒(天根生化科技有限公司)获得线性化载体。用核酸蛋白仪检查回收产物的浓度和纯度后，进行下一步实验。

(2)将目的片段DNA和线性化载体以3:1的摩尔比加到1.5mL的离心管中进行重组反应，混匀后在37℃放置约30min，加入10μL的反应液到50μL的DH5α感受态细胞中，用移液器轻轻混匀，于冰上孵育30min，42℃水浴中热激45秒后快速置冰上冷却2min。

(3)加入700μL LB液体培养基，37℃孵育60min。5 000rpm离心2min，收集菌体，弃掉部分上清，用剩余的培养基将菌体重悬，用无菌涂布棒在含有Kan抗性的LB固体培养基上轻轻涂匀，37℃培养箱中倒置培养16-24h。

(4)挑取重组反应转化平板上若干个克隆进行菌落PCR鉴定，鉴定为阳性的菌落，挑取相应单菌落于含有Kan抗生素的液体LB培养基中37℃、200rpm培养箱中培养过夜，提取质粒或将菌液直接测序以及通过酶切电泳来鉴定载体准确性。

2.遗传转化

将上述制备的PRI101-an-VvCCD7载体转入根癌农杆菌GV3101(上海生工生物工程股份有限公司)，再导入拟南芥植株中，具体操作如下：

(1)重组载体转入农杆菌GV3101

a、每50μL GV3101农杆菌感受态细胞中加入1μg质粒DNA，用手轻轻拍打管底混匀，依次于冰上静置5min、液氮5min、37℃水浴5min、冰浴5min。

b、加入700μL无抗生素的YEB液体培养基，于28℃振荡培养5h。6000rpm离心1min，收集菌体，留取100μl左右上清，轻轻吹打重悬菌体，将其均匀地涂布于含有Kan、Rif和Gent的YEB固体培养基上，倒置放于28℃培养箱培养2天，挑取若干个阳性克隆利用菌落PCR简单验证结果。

(2)拟南芥的平板培养

a、将一定数量的拟南芥种子装于无菌的1.5mL离心管中。加入1mL 75％乙醇消毒5min，弃上清，ddH₂O洗一次。

b、弃75％乙醇，加入1mL 1％NaClO消毒10min，上下颠倒混匀，弃上清。ddH₂O洗两次。加入1mL 1％NaClO消毒1min，ddH₂O洗4-5次。

c、用枪头将拟南芥种子点种于准备好的平板上。将平板封口，黑暗条件下于4℃春化48h，春化结束后，将平板置于光照培养箱中培养，一周后即可移栽。

d、用镊子移取转基因植株至基质中生长，先用保鲜膜保湿24h，置于植物生长间中培养直至拟南芥生长抽薹时(约一个月)，用于转化实验。

(3)遗传转化：

a、农杆菌活化：将农杆菌接种在10mL含有Rif、Gent和Kan抗生素的YEB液体培养基中，28℃，180rpm摇菌2天。

b、农杆菌扩大培养：吸取适量菌液接种在新的50mL含有抗生素的液体培养基中，28℃，180rpm摇菌16-24小时，直至OD值在1.5-2.0之间。室温下5000rpm离心10min，弃上清液。

c、用5％的蔗糖溶液和0.05％的Silwet L-77配置重悬液，重悬菌液后混匀。

d、将拟南芥花序浸泡在侵染液中，轻轻转动15s，充分侵染后，将其裹上保鲜膜，黑暗条件下培养24小时。一周后再重复转化一次。

3.过表达植株的筛选与鉴定

(1)筛选T3代阳性植株

种植拟南芥T2代所收获的种子，将T2代种子消毒，接种含30mg/L卡纳霉素的MS筛选培养基上，在培养箱中培养7-10天，绿色且健康生长的植株为转基因植株，黄化且逐渐死亡的植株为非转基因植株(图2)。

在获得的12个阳性株系中，将阳性苗移栽到土壤中，用保鲜膜盖上2-3天后揭膜，然后正常生长。筛选出的阳性植株的叶片DNA提取后，利用PCR方法鉴定VvCCD7基因，进行转基因植株的目的基因的分子验证(图3)，最终确认基因已经转入T3代阳性植株。在图3中，M为Marker，1-12为转基因T3代植株。

(2)转基因植株T3代阳性植株定量表达验证

取转基因植株T3代阳性植株和野生型拟南芥植株生长时期的幼嫩叶片，用RNA提取试剂盒(北京百泰克生物技术有限公司)提取叶片总RNA，然后用反转录试剂盒(南京诺唯赞生物科技有限公司)获得cDNA，以各自cDNA为模板，以拟南芥actin2为内参，进行qRT-PCR表达验证(qRT-PCR Mix：南京诺唯赞生物科技有限公司；仪器：Roche480)。

其中拟南芥actin2内参的qRT-PCR引物对为：

aF：5’-TATGAATTACCCGATGGGCAAG-3’(如SEQ ID NO.5所示)；

aR：5’-TGGAACAAGACTTCTGGGCAT-3’(如SEQ ID NO.6所示)；

目标基因定量qRT-PCR引物对为：

VvCCD7：5’-GTGTAACGCAGAAGACATG-3’(如SEQ ID NO.7所示)；

VvCCD7：5’-CGGTGAAAGCCCAAT-3’(如SEQ ID NO.8所示)。

结果表明，以未转基因的野生型拟南芥为对照，VvCCD7基因在检测的12个拟南芥转基因株系的叶片中表达量显著提高，而在未转基因对照拟南芥的叶片中，没有检测到VvCCD7基因的表达(图4)。表明VvCCD7基因均转化并插入到了相应拟南芥基因组中并得到了表达。选取VvCCD7基因表达量最高的三个株系，分别为L1、L5、L12。

实施例三

VvCCD7过表达转基因T3代阳性植株抗旱性能的测定

选取3株实施例二中VvCCD7基因过表达转基因T3代阳性植株进行干旱胁迫实验。具体步骤如下：在每盆营养钵中种植4株转基因拟南芥或野生型拟南芥植株，正常生长3周后，进行干旱胁迫21天，然后观察转基因植株的生长状况。

结果表明，本发明克隆的VvCCD7基因过表达的3个转基因植株的生长在正常条件下与对照株生长状况相比差别不是很大，但在干旱胁迫21天后，野生型拟南芥叶片黄化、枯萎，转基因拟南芥叶片轻微皱缩。结果表明，VvCCD7转基因拟南芥株系抗旱能力明显高于野生型拟南芥对照(图5)，基因VvCCD7的过表达可以提高植物的抗旱能力。

因此，本发明采用上述一种葡萄抗旱VvCCD7基因及其氨基酸序列和应用，VvCCD7基因可用来提高植物的抗旱能力，用于葡萄抗旱品种的选育，在改良作物抗旱能力方面具有重要的意义。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其进行限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而这些修改或者等同替换亦不能使修改后的技术方案脱离本发明技术方案的精神和范围。

序列表

<110> 西北农林科技大学

<120> 一种葡萄抗旱VvCCD7基因及其氨基酸序列和应用

<160> 8

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1833

<212> DNA

<213> 葡萄(Vitis vinifera L.)

<400> 1

atgcaggcca aacctttcca tgctgtcccg gtcaaattcc cttctccaac aaagctccct 60

cttctccaga aacctccggc catgccggag aaagtactgt caagagctat ttccatttcc 120

acacctgata ctagggtttc agatgtctcg accccgaatt tggatgactc catggctgca 180

ttttgggatt atcagtttct ctttatgtcg caacgctctg aaacagatgg gtctattgct 240

ttacgcgtgg ttgatggtgc aattcccgtt gattttcctt cgggtacgta ttttctagct 300

gggccgggtc tttttagcga tgatcatggg tcgacggtcc atcctttgga tgggcatggg 360

tatttgaggg cttttgccat taatggaccg ggtaaagagg tcaagttctc ggctaggtat 420

gtgaaaacgg aggcccagtt ggaggagcac gacccgatga cccgtgggtg gcgattcacg 480

taccgcggcc cgttttcggt attgaaagga gggaagaagg tggggaacag gaaggtgatg 540

aaaaatgtgg cgaacaccag cgtgttgaag tggggtggac ggttgatgtg cttgtgggag 600

ggtggagacc cctatgagat tgaatctggg acgctggata cgatcggaag gctcgatatg 660

atggagggct gtgattcatt gcatgaaggt ggcagccccg gcagtgatgc ttgggatttg 720

gctgcggcgg cgttgaagcc aattctacat ggagtgttca agatgccgga gaagcggcca 780

ctgtcgcatt ataaaattga tgctaaaaga aataggcttc tgatgatgtg gtgtaacgca 840

gaagacatgt tgctgcctcg gagcaatttt acaatctatg aatttgattc gaaaatgaag 900

gtggtacaaa ggaaagagtt caagattccg gatcatttga tgatccatga ttgggctttc 960

accgattctc attatgtctt gttctccaat cgaatcaagc ttgatattct aggatcaatg 1020

ggggccttaa gtggactatc accaatgata tcagcattat cggcaaaccc tagtaaacca 1080

acctctccaa tctatctcct tcctcgattc tctgacgacg tcactggaaa tcgagattgg 1140

agagttccaa ttgaagttcc ttcacagtta tggctgatac atgttggcaa tgcctatgag 1200

gagagggacg agagaggaaa cttcaacatt caaatacatg ccagtgcttg ctcttatcaa 1260

tggttcaatt tccacaaaat gtttggatat gattggcaaa gtaggaaatt agacccttgt 1320

gttatgaatg ttcaacaagg ccaagaagaa tcacttccac acctcattca agtctccatc 1380

aacttggatg ccaatggtac atccaagaat tgtagtgtcg aacctttgaa tcaatggaac 1440

aaaccctccg acttcccctc catcaatcca tcttcctccg gcataaaaaa cacatacatg 1500

tatgcggcgg ccgcatctgg ttcccgctca accttgccac attttccttt tgacaccatc 1560

gttaaagtaa atgtccctaa caagtcgact cataggtggt ctaccggtac taggaggttc 1620

ataggtgagc ccatctttgt tcccaagggt attgaagaag acgacggtta ccttctggta 1680

gtcgagtatg cagtgtcaat acaaaggtgt taccttgtca tattggatgc taagagaata 1740

ggagagattg atgcacttgt agcaaggctt gaagtcccaa aacatttgac ttttcccatt 1800

ggatttcatg gcttttgggc ccccaaagag tag 1833

<210> 3

<211> 610

<212> PRT

<213> 葡萄(Vitis vinifera L.)

<400> 3

Met Gln Ala Lys Pro Phe His Ala Val Pro Val Lys Phe Pro Ser Pro

1 5 10 15

Thr Lys Leu Pro Leu Leu Gln Lys Pro Pro Ala Met Pro Glu Lys Val

20 25 30

Leu Ser Arg Ala Ile Ser Ile Ser Thr Pro Asp Thr Arg Val Ser Asp

35 40 45

Val Ser Thr Pro Asn Leu Asp Asp Ser Met Ala Ala Phe Trp Asp Tyr

50 55 60

Gln Phe Leu Phe Met Ser Gln Arg Ser Glu Thr Asp Gly Ser Ile Ala

65 70 75 80

Leu Arg Val Val Asp Gly Ala Ile Pro Val Asp Phe Pro Ser Gly Thr

85 90 95

Tyr Phe Leu Ala Gly Pro Gly Leu Phe Ser Asp Asp His Gly Ser Thr

100 105 110

Val His Pro Leu Asp Gly His Gly Tyr Leu Arg Ala Phe Ala Ile Asn

115 120 125

Gly Pro Gly Lys Glu Val Lys Phe Ser Ala Arg Tyr Val Lys Thr Glu

130 135 140

Ala Gln Leu Glu Glu His Asp Pro Met Thr Arg Gly Trp Arg Phe Thr

145 150 155 160

Tyr Arg Gly Pro Phe Ser Val Leu Lys Gly Gly Lys Lys Val Gly Asn

165 170 175

Arg Lys Val Met Lys Asn Val Ala Asn Thr Ser Val Leu Lys Trp Gly

180 185 190

Gly Arg Leu Met Cys Leu Trp Glu Gly Gly Asp Pro Tyr Glu Ile Glu

195 200 205

Ser Gly Thr Leu Asp Thr Ile Gly Arg Leu Asp Met Met Glu Gly Cys

210 215 220

Asp Ser Leu His Glu Gly Gly Ser Pro Gly Ser Asp Ala Trp Asp Leu

225 230 235 240

Ala Ala Ala Ala Leu Lys Pro Ile Leu His Gly Val Phe Lys Met Pro

245 250 255

Glu Lys Arg Pro Leu Ser His Tyr Lys Ile Asp Ala Lys Arg Asn Arg

260 265 270

Leu Leu Met Met Trp Cys Asn Ala Glu Asp Met Leu Leu Pro Arg Ser

275 280 285

Asn Phe Thr Ile Tyr Glu Phe Asp Ser Lys Met Lys Val Val Gln Arg

290 295 300

Lys Glu Phe Lys Ile Pro Asp His Leu Met Ile His Asp Trp Ala Phe

305 310 315 320

Thr Asp Ser His Tyr Val Leu Phe Ser Asn Arg Ile Lys Leu Asp Ile

325 330 335

Leu Gly Ser Met Gly Ala Leu Ser Gly Leu Ser Pro Met Ile Ser Ala

340 345 350

Leu Ser Ala Asn Pro Ser Lys Pro Thr Ser Pro Ile Tyr Leu Leu Pro

355 360 365

Arg Phe Ser Asp Asp Val Thr Gly Asn Arg Asp Trp Arg Val Pro Ile

370 375 380

Glu Val Pro Ser Gln Leu Trp Leu Ile His Val Gly Asn Ala Tyr Glu

385 390 395 400

Glu Arg Asp Glu Arg Gly Asn Phe Asn Ile Gln Ile His Ala Ser Ala

405 410 415

Cys Ser Tyr Gln Trp Phe Asn Phe His Lys Met Phe Gly Tyr Asp Trp

420 425 430

Gln Ser Arg Lys Leu Asp Pro Cys Val Met Asn Val Gln Gln Gly Gln

435 440 445

Glu Glu Ser Leu Pro His Leu Ile Gln Val Ser Ile Asn Leu Asp Ala

450 455 460

Asn Gly Thr Ser Lys Asn Cys Ser Val Glu Pro Leu Asn Gln Trp Asn

465 470 475 480

Lys Pro Ser Asp Phe Pro Ser Ile Asn Pro Ser Ser Ser Gly Ile Lys

485 490 495

Asn Thr Tyr Met Tyr Ala Ala Ala Ala Ser Gly Ser Arg Ser Thr Leu

500 505 510

Pro His Phe Pro Phe Asp Thr Ile Val Lys Val Asn Val Pro Asn Lys

515 520 525

Ser Thr His Arg Trp Ser Thr Gly Thr Arg Arg Phe Ile Gly Glu Pro

530 535 540

Ile Phe Val Pro Lys Gly Ile Glu Glu Asp Asp Gly Tyr Leu Leu Val

545 550 555 560

Val Glu Tyr Ala Val Ser Ile Gln Arg Cys Tyr Leu Val Ile Leu Asp

565 570 575

Ala Lys Arg Ile Gly Glu Ile Asp Ala Leu Val Ala Arg Leu Glu Val

580 585 590

Pro Lys His Leu Thr Phe Pro Ile Gly Phe His Gly Phe Trp Ala Pro

595 600 605

Lys Glu

610

<210> 3

<211> 41

<212> DNA

<213> 上游引物(Forward primer)

<400> 3

ttgatacata tgcccgtcga catgcaggcc aaacctttcc a 41

<210> 4

<211> 41

<212> DNA

<213> 下游引物(Reverse primer)

<400> 4

gttgattcag aattcggatc cctactcttt gggggcccaa a 41

<210> 5

<211> 22

<212> DNA

<213> 内参上游引物(Forward primer)

<400> 5

tatgaattac ccgatgggca ag 22

<210> 6

<211> 21

<212> DNA

<213> 内参下游引物(Reverse primer)

<400> 6

tggaacaaga cttctgggca t 21

<210> 7

<211> 19

<212> DNA

<213> 目的基因上游引物(Forward primer)

<400> 7

gtgtaacgca gaagacatg 19

<210> 8

<211> 15

<212> DNA

<213> 目的基因下游引物(Reverse primer)

<400> 8

cggtgaaagc ccaat 15

Claims (2)

1.一种葡萄抗旱VvCCD7基因在提高拟南芥抗旱性中的应用；

所述葡萄抗旱VvCCD7基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述葡萄抗旱VvCCD7基因编码的VvCCD7蛋白氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。

2.一种重组载体在提高拟南芥抗旱性中的应用，所述重组载体含有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

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