CN110699362B

CN110699362B - Afp5基因及其应用

Info

Publication number: CN110699362B
Application number: CN201911117789.8A
Authority: CN
Inventors: 马建忠; 邓子兵; 王永刚; 张伟杰; 蒲秀瑛
Original assignee: Lanzhou University of Technology
Current assignee: Lanzhou University of Technology
Priority date: 2019-11-15
Filing date: 2019-11-15
Publication date: 2023-03-24
Anticipated expiration: 2039-11-15
Also published as: CN110699362A

Abstract

本发明提供一个新基因AFP5的序列及其应用，通过ABI5蛋白为诱饵筛选拟南芥cDNA文库，克隆到一个新的基因，根据其与ABI5相互作用的特点而命名为：AFP5。进一步通过AFP5基因的亚克隆并转化拟南芥，最终实现了过表达转基因拟南芥植株的种子萌发率提高、莲座叶叶片数目增多、莲座叶叶片变宽、植株高度增高、植株提前开花等应用。

Description

AFP5基因及其应用

技术领域

本发明涉及植物基因工程领域，具体涉及拟南芥的一个新基因(申请人将其命名为AFP5)及其应用。

背景技术

植物激素脱落酸(ABA)在植物种子和芽休眠的起始和维持、植物对逆境尤其是水分逆境的响应中起主要作用。此外，ABA通过与其它植物激素相互作用影响着植物生长发育的诸多方面。

ABI5是植物ABA信号通路中发现并明确的第5个突变体，它是一个碱性亮氨酸拉链型(bZIP)转录因子。ABI5相互作用蛋白AFPs(ABI Five Binding Proteins)是一类植物特异性的、可能参与了ABA信号转导及其它植物生长发育过程调控的蛋白质亚家族。以ABI5为诱饵蛋白，利用酵母双杂交系统筛选拟南芥cDNA文库，我们克隆了一个与ABI5可相互作用的新基因AFP5。经氨基酸残基序列比对分析，发现AFP5与先前发现的4个拟南芥AFPs的氨基酸残基序列的一致性分别为：与AFP1具有23.19％的一致性，与AFP2具有24.07％的一致性，与AFP3具有25.00％的一致性，与AFP4具有21.25％的一致性。尽管AFPs亚家族氨基酸残基序列的整体一致性并不高，但该亚家族成员的氨基酸残基序列仍然存在着三个高度保守区域A、B和C。除了保守区B中存在推测的核定位序列外，A和C的功能均为未知。我们的结构分析工作表明，AFPs的保守区C单独与ABI5的作用似乎更强。5个AFPs之间也存在较弱的相互作用，但这种相互作用的生理意义目前尚不清楚。过表达AFP5基因的拟南芥植株(OE2、OE4、OE5)与野生型拟南芥植株(Columbia生态型)相比，表现出种子萌发率提高、开花提前以及株型较高等遗传表型。

现有技术存在的问题：(1)ABI5的第5个相互作用蛋白AFP5(ABI Five BindingProtein5)的基因序列未曾报道。(2)现有研究未曾报道AFP5的生物学功能。

发明内容

本发明要解决的关键技术问题在于提供新基因AFP5序列及其应用，通过克隆AFP5并转化拟南芥，最终实现了过表达转基因拟南芥植株的种子萌发率提高、莲座叶叶片数目增多、莲座叶叶片变宽、植株高度增高、植株提前开花等应用。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

1、一种拟南芥新基因AFP5，其CDS序列如No.1所示；其全长cDNA序列如No.2所示。

2、一种拟南芥新基因AFP5克隆方法，包括：(1)总RNA提取反转录；(2)AFP5全长扩增；(3)AFP5酵母双杂交载体构建及序列测定。

3、AFP5互作蛋白筛选及基因名称确定方法，包括：(1)酵母感受态细胞的制备；(2)重组质粒转化酵母感受态细胞；(3)AFP5与ABI5相互作用验证。

4、AFP5超表达转基因拟南芥植物遗传转化方法，包括：

(1)AFP5超表达载体构建；(2)AFP5超表达载体转化农杆菌GV3101；(3)农杆菌浸花法转化拟南芥；(4)AFP5超表达转基因系拟南芥植株的筛选及鉴定。

5、AFP5在提高拟南芥种子萌发率中的应用。

6、AFP5在增加幼苗莲座叶数量中的应用。

7、AFP5在提前花期中的应用。

8、AFP5在增加植株高度中的应用。

9、AFP5在增加植株对ABA敏感性中的应用。

附图说明

图1为本发明AFPs家族成员的序列比对分析。

其中，(上)使用DNAMan软件的AFPs家族氨基酸序列比对分析，I，II，III，IV是四个保守区域。(下)家系进化树分析。AFP1和AFP2属于同一进化分支，AFP4和AFP5属于同一进化分支。

图2为本发明酵母双杂交系统验证AFP5与ABI5的相互作用。

其中，1:BD+AD,2:BD-AFP5+AD,3:BD+AD-ABI5,4:BD-AFP5+AD-ABI5。

图3为本发明AFP5超表达转基因拟南芥植株幼苗生长7d之后进行RT-PCR鉴定结果。

图4为本发明AFP5超表达转基因拟南芥株系表现出高萌发率表型。

其中，(上)在1/2MS培养基(16小时光照，8小时黑暗)上生长7天后种子萌发情况。(下)统计种子在1/2MS培养基上萌发率的情况。(n＝30-60，误差棒为±SE，16h光和8h黑暗)。

图5为本发明AFP5超表达转基因拟南芥株系表现出莲座叶叶片变宽的表型。

图6为本发明AFP5超表达转基因拟南芥株系表现出莲座叶叶片数目增多的表型。

图7为本发明AFP5超表达转基因拟南芥株系的早花表型。

图8为本发明AFP5超表达转基因拟南芥株系的种子萌发对ABA更敏感表型。

具体实施方法

本发明专利下述实施例中使用方法和装置，如无特殊说明，均为常规方法和装置；所用器材、试剂均为试剂公司购买的常规器材和试剂。为使本发明专利的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体实施例对本发明专利的具体实施方式进行详细说明。这些优选实施方式的示例在具体实施例中进行了例示。

在此，还需要说明的是，为了避免因不必要的细节而模糊了本发明专利的技术方案，在实施例中仅仅示出了与根据本发明专利的方案密切相关的技术方案和/或处理步骤，而省略了关系不大的其他细节。

实施例1

本实施例提供了AFP5基因的克隆与载体构建方法，包括：

(1)总RNA提取与反转录

取在1/2MS固体培养基上生长一周左右的哥伦比亚生态型拟南芥(Arabidopsisthaliana Columbia)整株按照总RNA提取试剂盒说明书(Tiangen,DP437)进行总RNA提取。提取的RNA用NanoDrop2000测定RNA的浓度后按照以下顺序进行反转录：

冰上混合以下物质：

65℃反应5min后，迅速取出冰浴10min，再在管中加入以下物质，并轻轻混匀：

37℃反应60min后，于70℃放置15min以终止反应。反转录完成后，加入ddH₂O稀释cDNA浓度至20ng/μl。

(2)AFP5全长扩增

根据编码AFP5基因的序列设计特异性引物对，以(1)中得到的cDNA模板进行PCR扩增。PCR体系为：

PCR的扩增参数为：95℃预变性5min，30个循环包括95℃变性15s、57℃退火30s、72℃延伸1min，最后72℃延伸10min。PCR结束之后进行琼脂糖凝胶电泳。

(3)AFP5酵母双杂交载体构建及序列测定

根据编码AFP5的全长cDNA序列，设计一对特异性扩增引物为：

F1:5’-CCGGAATTCATGTTTGTTGAATCTTTATCAAT-3’；

R1:5’-AACTGCAGTCACAAAGTTGAGGGAAC-3’。

上下游引物5’端分别引入限制性内切酶位点(下划线)EcoR I和Pst I，并添加2-3个保护碱基。以cDNA为模板经特异性引物对扩增的PCR产物经回收后与载体pGBKT7分别用限制性内切酶EcoR I和Pst I双酶切，经T4 DNA连接酶连接并转化大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞，挑选6个单菌落进行菌落PCR鉴定及双酶切鉴定后送苏州金唯智生物科技有限公司进行测序，测序正确的重组质粒命名为pGBKT7-AFP5。

实施例2

本实施例提供了AFP5互作蛋白筛选及确定基因名称，包括：

(1)酵母感受态细胞的制备

从YPDA固体培养基表面选择年龄为2周左右、直径为3mm左右的酵母AH109单菌落，接种于0.5ml YPDA液体培养基中，涡旋振荡约3min以分散聚集在一起的酵母细胞，然后全部接种于10ml YPDA液体培养基中，30℃、250r/min振荡培养约18h,直到菌体OD₆₀₀值达到1.5以上。将过夜培养物接种于250ml YPDA液体培养基中并使初始菌体OD₆₀₀值在0.2-0.3之间，30℃、250r/min振荡培养约4h,直到菌体OD₆₀₀值在0.4-0.6之间。1000×g、室温离心5min，小心倒掉上清，加入20ml 1×TE/LiAc溶液重悬酵母细胞，1000g、室温离心5min，小心弃上清，重复一次。向沉淀的酵母细胞中加入约3ml 1×TE/LiAc溶液并轻轻悬起细胞，即为酵母感受态细胞。可将感受态细胞暂存于4℃冰箱或冰浴中，暂存时间勿超过4小时。

(2)重组质粒转化酵母感受态细胞

分别吸取待转化重组质粒按照Table 1置于1.5ml灭菌离心管中混合，再加入10μl鲑鱼精子DNA(Sperm DNA，10mg/ml)，用移液器反复吹打混匀，酵母感受态细胞缓缓颠倒混匀并分别吸取100μl加入到上述离心管中，并用移液器缓慢吹打混匀。每个离心管加入600μl1×PEG/LiAc，涡旋振荡混匀，30℃、150rpm振荡培养40min，各加入70μl 100％DMSO，缓慢颠倒混匀后，置于42℃水浴15min，迅速冰浴2min。12000rpm、室温离心30s，轻轻吸取弃上清，加入500μl 1×TE并吹打混匀，吸取100μl悬浮液均匀涂布于SD/-LW营养缺陷型固体培养基表面，待表面的液体挥发后，于30℃恒温培养箱倒置培养4-6天，直至长出的菌落直径约为1～2mm。

Table I.酵母双杂交重组载体共转组合

(3)AFP5与ABI5相互作用验证

分别挑取几个步骤(2)中单菌落于3ml新鲜的SD-LW液体培养基中，30℃、220rpm过夜培养。用在移液器吸取1μl培养物点在SD-LW、SD-AHLW、X-α-Gal+SD-AHLW固体培养基中，30℃恒温培养箱倒置培养2-3天观察菌落生长状况如附图2所示。

结果表明：AFP5可与ABI5相互作用。

实施例3

本实施例提供AFP5超表达转基因拟南芥植物遗传转化方法，包括：

(1)AFP5超表达载体构建

根据编码AFP5的全长cDNA序列，设计一对特异性扩增引物为：

F2:5’-GGACTAGTATGTTTGTTGAATCTTTATCAAT-3’；

R2:5’-GGACTAGTACTCAAAGTTGAGGGAAC-3’。

上下游引物5’端分别引入限制性内切酶位点(下划线)Spe I，并添加2-3个保护碱基。以pGBKT7-AFP5质粒为模板经特异性引物对扩增的PCR产物经回收后与植物表达载体pCAMBIA1304分别用限制性内切酶Spe I酶切(pCAMBIA1304经Spe I酶切后进行去磷酸化处理)，经T4 DNA连接酶连接并转化大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞，挑选6个单菌落进行菌落PCR鉴定及酶切鉴定后送苏州金唯智生物科技有限公司进行测序，测序正确的质粒命名为pCAMBIA1304-AFP5。

(2)AFP5超表达载体转化农杆菌GV3101

取1μl重组质粒pCAMBIA1304-AFP5于1支根癌农杆菌GV3101感受态细胞中混匀。冰上放置30min后，液氮速冻1min，42℃热激90s，迅速冰预2min。加入800μl新鲜的LB液体培养基28℃震荡培养4h。取100μl涂布于抗性LB平板(含Gen 40μg/ml，Rif 20μg/ml，Kan40μg/ml)，28℃倒置培养2-3d。挑选3个单菌落于3mL新鲜的LB(含Gen 40μg/ml，Rif 20μg/ml，Kan40μg/ml)液体培养基中，28℃、220rpm培养过夜。分别取1μl菌液进行菌落PCR鉴定。菌落PCR阳性的转化菌进一步遗传转化拟南芥。

(3)农杆菌浸花法转化拟南芥

a、转化之前准备好生长25天左右的哥伦比亚生态型拟南芥植株，待拟南芥植株开始抽苔之后，将拟南芥主花序的顶端剪掉同时注意避免伤及腋生花序，以诱导侧花序的生成。待侧枝伸出2-10cm时实施转化。并给需要浸染的拟南芥植株浇水，以有较多未开的花蕾为准。

b、将含有AFP5超表达载体pCAMBIA1304-AFP5的农杆菌接种于5ml新鲜的LB(含Gen40μg/ml，Rif 20μg/ml，Kan 40μg/ml)液体培养基中，30℃、200r/min摇床震荡培养15小时左右。

c、将上一步中的培养物按1:50的比例转接到200ml含有相应抗生素的新鲜的LB液体培养基中，28℃、200r/min摇床培养15小时左右至OD₆₀₀＝0.8-1.0。

d、4000r/min离心15min收集菌体，用渗透缓冲液(1/2MS培养基+5％蔗糖)，调节溶液OD₆₀₀＝0.8-1.0，并加入终浓度为0.03％的Silwett L-77(SINOPCR S5605)混匀。

e、用剪刀将已授粉的花、果荚去除，并且提前一天给植物浇足水。用5ml注射器吸取分别含有待转化的四种质粒的农杆菌悬浮液对准备好的拟南芥植株的每一朵花进行浸染。用保鲜袋将浸染过的植物(T0代植物)罩起来以保持湿度。

f、将浸染过后的拟南芥植株置于暗处培养12h后放回正常条件(22℃，16h光照，8h黑暗)培养，2天后去掉保鲜袋，继续培养到果荚成熟，期间可重复浸染2-3次以提高转化效率。

g、待植物生长2-3周后其顶端果荚会变黄，在果荚开裂前按照编号收集拟南芥种子(T1代)，待充分干燥后储存，以筛选转基因拟南芥植株。

(4)AFP5超表达转基因拟南芥植株的筛选及鉴定

加少量无菌水浸没T1代种子，置于4℃冰箱春化3-4天。在超净工作台中消毒后，铺在含25μg/ml潮霉素的1/2MS固体培养基上，置于植物光照培养箱中培养(22℃，16h光照，8h黑暗，湿度60％左右，光照强度3000～5000Lx)。生长两周后，疑似阳性转基因拟南芥植株可以正常生长，而非转基因植株呈现子叶发黄、根短不能生长进入培养基。将阳性转基因拟南芥植株移栽于营养土(丹麦品氏基质5号，pH 5.5)培养(22℃，16h光照，8h黑暗，湿度60％左右，光照强度3000～5000Lx)，分单株收获成熟的种子(T2代种子)。将T2代种子在含有25μg/ml潮霉素抗性的MS培养基上继续筛选至T3代，继而筛选至T4代供表型分析用。

根据pCAMBIA1304-AFP5重组质粒的序列设计特异性引物(AFP5RTF和AFP5RTR)，以RT-PCR鉴定抗生素阳性拟南芥植株中AFP5基因的表达状况。从7天龄的野生型和AFP5超表达转基因拟南芥植株(培养于1/2MS平板)中提取总RNA，反转录为cDNA后再以特异性引物AFP5RTF和AFP5RTR进行扩增。

AFP5RTF:5’-AFP5RTF:AGCTCTATCAACATGTGTAACGG-3’；

AFP5RTR:5’-AGAAGAGCTGCTAGGATCGG-3’

通过RT-PCR分析超表达基因在转基因拟南芥中的表达。RT-PCR电泳结果呈现出具有相应分子量大小的专一性条带，超表达株系(OE2、OE4和OE5)条带比野生型(Col)条带明显，如附图3所示。

结果表明：AFP5成功嵌入拟南芥基因组，并能够超表达。

实施例4

本实施例提供了AFP5在提高拟南芥种子萌发率中的应用，包括：

将收获的成熟的T4代种子和野生型种子加入ddH2O置于4℃冰箱春化3-4天。在超净工作台中消毒后，铺在同一块含25μg/ml潮霉素的1/2MS固体培养基上，置于植物光照培养箱中培养(22℃，16h光照，8h黑暗，湿度60％左右，光照强度3000～5000Lx)。统计1-7d种子萌发率情况。

AFP5超表达转基因拟南芥株系(OE2、OE4和OE5)7d后萌发率明显高于野生型拟南芥植株，如附图4所示。

结果表明：过表达AFP5基因可显著提高拟南芥种子的萌发率。

实施例5

本实施例提供了AFP5在改变幼苗莲座叶片宽中的应用，包括：

a、所有植物均选用相同规格的口径为正方形的花盆，每个花盆中放入一定的营养土(丹麦品氏基质5号，pH5.5)，将花盆放在同一个平底的托盘中，托盘加水以便盘中花盆里的土壤自主吸水。

b、将AFP5超表达转基因拟南芥株系(OE2、OE4和OE5)T4代种子和野生型种子纯化后点播于营养土(丹麦品氏基质5号，pH 5.5)，然后置于温室培养(22℃，16h光照，8h黑暗，湿度60％左右，光照强度3000～5000Lx)。一周后剔除生长状况不良的幼苗及多余的幼苗，使每个花盆保留5株生长状况较为一致的幼苗。

c、生长3周后观察、统计拟南芥莲座叶生长状况

AFP5超表达转基因拟南芥株系(OE2、OE4和OE5)莲座叶均表现出比野生型株系莲座叶叶片变宽的表型如附图5所示。

结果表明：过表达AFP5基因可显著增加拟南芥植株莲座叶叶片宽度。

实施例6

本实施例提供了AFP5在增加幼苗莲座叶数量中的应用，包括：

b、将AFP5超表达转基因拟南芥株系(OE2、OE4和OE5)T4代种子和野生型种子置于4℃春化3-4天，点播于营养土(丹麦品氏基质5号，pH 5.5)，置于温室培养(22℃，16h光照，8h黑暗，湿度60％左右，光照强度3000～5000Lx)。一周后剔除生长状况不良及多余的幼苗，使每个花盆保留5株生长状况相似的幼苗。

c、生长3周后观察、统计拟南芥莲座叶生长状况

AFP5超表达转基因拟南芥株系(OE2、OE4和OE5)莲座叶均表现出比野生型株系多的表型(Fig.6)。

结果表明：过表达AFP5基因可显著增加拟南芥植株莲座叶叶片数量。

实施例7

本实施例提供了AFP5在提前花期中的应用，包括：

a、所有植物均选用相同规格的口径为正方形的花盆，每个花盆中放入相同的营养土(丹麦品氏基质5号，pH5.5)，将花盆放在同一个平底的托盘中，托盘加水以便盘中花盆里的土壤自主吸水。

b、将AFP5超表达转基因拟南芥株系(OE2、OE4和OE5)T4代种子和野生型拟南芥种子置于4℃春化3-4天，点播于营养土(丹麦品氏基质5号，pH 5.5)后置于温室培养(22℃，16h光照，8h黑暗，湿度60％左右，光照强度3000～5000Lx)。一周后剔除生长状况不良及多余的幼苗，使每个花盆保留5株生长状况相似的幼苗。

c、观察、统计拟南芥开花时间及生长状况

AFP5超表达转基因拟南芥株系(OE2、OE4和OE5)于4周后开花。其中OE4开花时间最早，OE2次之，OE5相对于前两个株系略晚。但所有超表达株系开花时间均早于野生型株系(Fig.7)

结果表明：过表达AFP5基因的拟南芥植株的开花时间显著提前。

实施例8

本实施例提供了AFP5在增加植株高度中的应用，包括：

c、观察、统计拟南芥植株高度的状况

AFP5超表达转基因拟南芥株系(OE2、OE4和OE5)于8周进入生长周期末期。此时，转基因株系OE2的平均株高37cm、OE4的平均株高38cm、OE5平均株高34cm，野生型株高32cm(Fig.7)。

结果表明：AFP5基因过表达显著增加了植株高度。

实施例9

本实施例提供了AFP5在增加植株对ABA敏感性中的应用，包括：

将AFP5过表达转基因株系T4代种子和野生型拟南芥种子加入ddH₂O置于4℃冰箱春化3-4天。在超净工作台中消毒后，点播于ABA含量不同的1/2MS平板上(ABA浓度分别为0.1μM、0.5μM和1μM)，置于植物光照培养箱中培养(22℃，16h光照，8h黑暗，湿度60％左右，光照强度3000～5000Lx)。统计1-7d种子萌发率情况。

AFP5超表达转基因拟南芥株系(OE2、OE4和OE5)7d后萌发率明显低于野生型拟南芥植株(Fig.8)，由此说明AFP5超表达转基因拟南芥株系的种子萌发比野生型植株对ABA更为敏感。

结果表明：过表达AFP5基因可显著增强植株对ABA的敏感性。

有益效果：

本发明至少存在以下有益效果：1.申请人以ABI5基因为诱饵，筛选拟南芥cDNA的酵母双杂交文库，克隆到一个新的基因，根据其与ABI5的相互作用性而命名为AFP5。2.通过与先前报道的4个AFPs亚家族成员的氨基酸残基序列比对分析，显示AFP5蛋白也含有三个共有的保守区：A、B和C。但是，AFP5蛋白与其它AFPs蛋白的氨基酸残基序列的整体一致性并不高：与AFP1具有23.19％的一致性，与AFP2具有24.07％的一致性，与AFP3具有25.00％的一致性，与AFP4具有21.25％的一致性。3.超表达AFP5基因的拟南芥植株的种子萌发率提高、莲座叶叶片变宽、莲座叶叶片数目增多、植株提前开花以及植株高度变高。4.所克隆的AFP5基因的CDS核苷酸残基序列为：Sequence 1。5.所克隆的AFP5基因的全长cDNA核苷酸残基序列为：Sequence 2。

以上所述仅是本申请的具体实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本申请的保护范围。

<110>兰州理工大学

<120> AFP5基因及其应用

<160> 2

<210> 1

<211> 882

<212> DNA

<213> 拟南芥（Arabidopsis thaliana）

<400> 1

1 ATGTTTGTTG AATCTTTATC AATGGCAGAA AAGTTTGTAG AAGATGAGAA TGTGGAGGTC

61 GAGCTCGAGC TCGAGCTATG TCTTTCCCTG GGAGGTCCTT TCAAGAAAAC GGAGAAATCT

121 AAAACATTTG GACAATCTAA CGCCGTCGGA TTCGAGAAGG ATAACGGCGT TAATCTTGAC

181 GGCAGAACGA CGAATGTGAC GAGGATAAAG GAAACACGGA AGAAGCGGGA GGCGAAGCAG

241 CAGCAGAGAA GCGGAGAAGA AGGAGAGTGC AAGAGGATCA GAACAGAATA TAACGGAGTT

301 AGTAACGGCG ATGATATGGA TTTGAGCTCT ATCAACATGT GTAACGGTTA CGGGTCGGGT

361 CGACTCAAGG AAAGCAGTAA AGACGTTACG ATTGGGTCAC CCATTTGCAC CTCCTCCTCC

421 GTATCCGATC CTAGCAGCTC TTCTCGCCAA GAAGGTGGAA GTGGCGACAT TGGGGCACAA

481 TCTGGCCAAA CCAAACAGGT TAGATCTCCG GTTAACAACA TTCTGACCGG TACAGAGCAA

541 ACCGTGCATA ACACAGACGG TTCAAAAGAC GCGGAGACCC AAGAATGGTC CAACTCTTCT

601 GTAACCAAAG AGAGTGGGAA GCCGCCAAAA CCGCATACCA ACAGTAACGG TAACGGCAGT

661 TTGCTTCCGT TTGCTCAGAT GCCTTGCGTG ACTAGCACCG GTAACGGTCC CGAGGGCAAA

721 ACCGTAAATG GTTTTCTATA CCGTTACTCA AAATCAGAGA TCAGTATAAT CTGCGTCTGC

781 CATGGAACGT CTTTCTCGCC GGCTGAGTTC ATCGTTCACG CCGGTGGGAC TAATGTGTCG

841 CATCCGTTGA GGCATATAAC CGTTGTTCCC TCAACTTTGT GA

<210> 1

<211> 1099

<212> DNA

<213> 拟南芥（Arabidopsis thaliana）

<400> 2

1 CGAAGCTTCA AAACCCTTCA AGAGGAAAAT TTTGCGGAAG ACAAGAGACC ATCTTTTTGA

61 CATTATATGT TTGTTGAATC TTTATCAATG GCAGAAAAGT TTGTAGAAGA TGAGAATGTG

121 GAGGTCGAGC TCGAGCTCGA GCTATGTCTT TCCCTGGGAG GTCCTTTCAA GAAAACGGAG

181 AAATCTAAAA CATTTGGACA ATCTAACGCC GTCGGATTCG AGAAGGATAA CGGCGTTAAT

241 CTTGACGGCA GAACGACGAA TGTGACGAGG ATAAAGGAAA CACGGAAGAA GCGGGAGGCG

301 AAGCAGCAGC AGAGAAGCGG AGAAGAAGGA GAGTGCAAGA GGATCAGAAC AGAATATAAC

361 GGAGTTAGTA ACGGCGATGA TATGGATTTG AGCTCTATCA ACATGTGTAA CGGTTACGGG

421 TCGGGTCGAC TCAAGGAAAG CAGTAAAGAC GTTACGATTG GGTCACCCAT TTGCACCTCC

481 TCCTCCGTAT CCGATCCTAG CAGCTCTTCT CGCCAAGAAG GTGGAAGTGG CGACATTGGG

541 GCACAATCTG GCCAAACCAA ACAGGTTAGA TCTCCGGTTA ACAACATTCT GACCGGTACA

601 GAGCAAACCG TGCATAACAC AGACGGTTCA AAAGACGCGG AGACCCAAGA ATGGTCCAAC

661 TCTTCTGTAA CCAAAGAGAG TGGGAAGCCG CCAAAACCGC ATACCAACAG TAACGGTAAC

721 GGCAGTTTGC TTCCGTTTGC TCAGATGCCT TGCGTGACTA GCACCGGTAA CGGTCCCGAG

781 GGCAAAACCG TAAATGGTTT TCTATACCGT TACTCAAAAT CAGAGATCAG TATAATCTGC

841 GTCTGCCATG GAACGTCTTT CTCGCCGGCT GAGTTCATCG TTCACGCCGG TGGGACTAAT

901 GTGTCGCATC CGTTGAGGCA TATAACCGTT GTTCCCTCAA CTTTGTGAAC TACAAATTTA

961 CATATTTTGT TACTCTTTTT GTCTCGTTTT TGTGTATATA AGTTTCACCG ATGGACGTTT

1021 TGAGTTCGAA GGGACTCTCC ATCCATGATT TTCTTAGAGT TTTGTTTTTC CTTGACATTT

1081 TTCAACTAAT TTTACACTT

Claims

1.AFP5在提高拟南芥种子萌发率中的应用，其特征在于，所述应用通过超表达AFP5基因予以实现，所述AFP5的CDS序列如SEQ ID NO：1所示；其全长cDNA序列如SEQ ID NO：2所示。

2.AFP5在增加拟南芥幼苗莲座叶数量中的应用，其特征在于，所述应用通过超表达AFP5基因予以实现，所述AFP5的CDS序列如SEQ ID NO：1所示；其全长cDNA序列如SEQ IDNO：2所示。

3.AFP5在提前拟南芥花期中的应用，其特征在于，所述应用通过超表达AFP5基因予以实现，所述AFP5的CDS序列如SEQ ID NO：1所示；其全长cDNA序列如SEQ ID NO：2所示。

4.AFP5在增加拟南芥植株高度中的应用，其特征在于，所述应用通过超表达AFP5基因予以实现，所述AFP5的CDS序列如SEQ ID NO：1所示；其全长cDNA序列如SEQ ID NO：2所示。

5.AFP5在增加拟南芥植株对脱落酸敏感性中的应用，其特征在于，所述应用通过超表达AFP5基因予以实现，所述AFP5的CDS序列如SEQ ID NO：1所示；其全长cDNA序列如SEQ IDNO：2所示。