CN113234730B - 重组基因片段4IIA1bZIP及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了重组基因片段4IIA1bZIP及其应用。通过将拟南芥ABI5亚家族中AtDPBF4的CRII片段与ABF1的bZIP片段连接，获得了具转录激活活性的简易转录因子并将其命名为4IIA1bZIP。重组基因片段4IIA1bZIP克隆至pCAMBIA1304质粒获得了植物遗传转化载体：p1304‑4IIA1bZIP。重组载体p1304‑4IIA1bZIP导入农杆菌后遗传转化拟南芥(Arabidopsis thaliana Columbia)，最终实现了过表达转重组基因的拟南芥植株，命名为：A.thaliana A1。其抽薹数目增多，种子提前萌发、植株高度增高等的应用。
Description
技术领域
本发明涉及植物基因工程领域，具体涉及拟南芥的一个重组基因片段4IIA1bZIP及其应用。
背景技术
自第5个不响应ABA的拟南芥突变体(ABA-insensitive mutant)基因ABI5鉴定至今已整二十年。作为亮氨酸拉链型(bZIP)转录因子，拟南芥基因组中还有8个与ABI5高度同源的基因，它们被共同归为ABI5亚家族(ABI5 subfamily)。Thomas研究组最先报道了ABI5亚家族的5个同源基因：AtDPBF1、AtDPBF2、AtDPBF3、AtDPBF4和AtDPBF5。其中，AtDPBF1即ABI5，AtDPBF5则是ABF3的不同剪接本。对拟南芥全基因组的比对分析表明，拟南芥ABI5亚家族共有9个成员：ABI5/AtDPBF1、AtDPBF2、AtDPBF3/AREB3、AtDPBF4/EEL、ABF1、ABF2/AREB1、ABF3/AtDPBF5、ABF4/AREB2和At5G42910。其中第9个成员----At5G42910是通过序列同源性比对发现的。
ABI5亚家族基因参与了植物生长发育的多个阶段，如种子成熟、种子萌发、根的生长、开花时间和逆境响应等等。虽然有超表达ABI5亚家族成员基因的植株获得抗旱抗盐的报道，但ABI5亚家族9个成员其单个突变体或超表达植株或者无明显的表型变化或者表型变化很弱。其中，ABF1的生物学功能和发挥功能的分子机制目前仍不完全清楚。在基因冗余的情况下，为了看到单个基因过表达对植物生长发育的表型的影响，我们在前期工作的基础上(ABI5亚家族中AtDPBF4的CRII片段具有最强的转录激活活性)，通过重组AtDPBF4的转录激活区CRII片段和ABF1的DNA结合区片段(碱性亮氨酸拉链区，bZIP)获得具较强转录激活活性状态的重组转录因子基因4IIA1bZIP。通过构建过表达转重组转录因子基因4IIA1bZIP的拟南芥植株植株，以期深入了解ABF1对植物生长发育和逆境适应性中的作用。过表达重组基因片段4IIA1bZIP的拟南芥植株(A.thaliana A1-1～A.thaliana A1-10)与野生型拟南芥植株(Columbia生态型)相比，表现出种子萌发率提高、抽薹数目增多、植株高度增高的遗传表型。
现有技术存在的问题：(1)尚未完全明确ABF1基因调控的植物生长发育过程及相应的信号通路。(2)现有研究未曾报道p1304-4IIA1bZIP的生物学功能。
发明内容
本发明要解决的关键技术问题在于提供了一个重组基因片段4IIA1bZIP的序列及其应用，通过将拟南芥ABI5亚家族中AtDPBF4的CRII片段与ABF1的bZIP片段连接，最终实现了过表达转基因拟南芥植株的抽薹数目增多，种子提前萌发、植株高度增高等应用。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
1、拟南芥重组基因片段4IIA1bZIP，其编码区的序列包括：AtDPBF4保守区II(CRII)含有22个氨基酸残基，编码该肽段的核苷酸残基序列如序列表SEQ No.1所示；ABF1碱性亮氨酸区(bZIP)含有115个氨基酸残基，编码该肽段的核苷酸残基序列如序列表SEQNo.2所示；重组基因4IIA1bZIP的总长度为143个氨基酸残基(包括CRII与bZIP之间的连接肽RSGG以及CRII之前的2个氨基酸残基MG)，编码该肽段的核苷酸残基序列如序列表SEQNo.3所示。
2、拟南芥重组基因片段4IIA1bZIP的重组方法，包括：(1)总RNA提取反转录；(2)AtDPBF4的CRII区与ABF1的bZIP区扩增；(3)构建植物遗传转化载体(p1304-4IIA1bZIP)及序列测定。
3、过表达重组基因片段4IIA1bZIP转基因拟南芥遗传转化方法，包括：
(1)植物遗传转化重组载体p1304-4IIA1bZIP的构建；(2)植物遗传转化重组载体p1304-4IIA1bZIP转化农杆菌(GV3101)；(3)农杆菌浸花法转化拟南芥。(4)转基因拟南芥的抗性筛选；(5)转基因拟南芥基因组与转录本的PCR和RT-PCR鉴定：(6)过表达转重组基因片段4IIA1bZIP的拟南芥植株命名为：A.thaliana A1。
4、重组基因片段4IIA1bZIP在增加抽薹数增多中的应用。
5、重组基因片段4IIA1bZIP在种子提前萌发中的应用。
6、重组基因片段4IIA1bZIP在植株高度增高中的应用。
本发明具有以下有益效果：
1.尽管AtDPBF4和ABF1在拟南芥生长发育和逆境响应过程中都有各自不同的特异性表达模式，但二者的过表达转基因植株目前均无种子萌发提前、植株抽薹数增加和植株高度增高等表型变化的报道。
2.本发明基于我们对ABI5家族保守区II(CRII)的转录激活功能以及AtDPBF4的CRII活性最强的研究工作，首次将AtDPBF4的CRII片段与ABF1的DNA结合区进行了重组，以期获得单独过表达AtDPBF4或ABF1所未能表现出的遗传表型变化。
3.过表达重组基因片段4IIA1bZIP的转基因植株表现出了意料不到的生物学功能，首先是种子的萌发提前、莲座叶变大。这些遗传表型的变化在培育早熟作物/蔬菜中或具有重要应用价值。
4.过表达重组基因片段4IIA1bZIP的转基因植株抽薹数显著增加，从野生型的通常1支薹增加到转基因植株的3～5支薹。抽薹是拟南芥等植物从营养生长转向生殖生长的标志，薹数增加意味着更多的花和果实，这对很多以果实为收获部分的作物如油菜(与拟南芥属于同一科)来说，对提高其产量具有重要的应用前景。
5.过表达重组基因片段4IIA1bZIP的转基因植株高度增高，加之前面提到的莲座叶变大等遗传表型变化，在培育以茎叶为食用部位的蔬菜作物如白菜时可能具有提高其产量的应用价值。
附图说明
图1为ABI5亚家族成员的序列比对分析。
其中，使用DNAMan软件对ABI5亚家族9个成员的氨基酸残基序列比对分析表明，该家族中存在6个保守的区域(CRI～VI)，ABI5亚家族九个成员的一致性为37.79％，其中不同的颜色表示不同程度的同源性。
图2为ABI5家系进化树分析。
其中，使用MEGA-X软件对ABI5亚家族9个成员的氨基酸残基序列的相似度，将它们可进一步分为3个小组，AtDPBF1/ABI5、AtDPBF2、AtDPBF3和AtDPBF4为一小组，ABF1、ABF2、ABF3和ABF4为一小组，而At5g42910为单独一组。
图3为过表达转基因拟南芥植株基因组鉴定电泳图。
对本发明A.thaliana A1过表达转基因拟南芥植株幼苗生长7d之后对10个株系进行基因组鉴定结果。其中，M为Maker；－为阴性对照(以野生型基因组为模板)；+为阳性对照(以重组质粒p1304-4IIA1bZIP为模板)。
图4为过表达转基因拟南芥植株RT-PCR鉴定电泳图。
对本发明A.thaliana A1过表达转基因拟南芥植株幼苗生长7d之后随机选取4个株系进行RT-PCR鉴定结果。其中，M为Maker；－为阴性对照(以野生型基因组为模板)；+为阳性对照(以测序正确的重组质粒p1304-4IIA1bZIP为模板)。
图5为萌发表型及统计图
其中，将过表达转基因拟南芥株系A.thaliana A1种子点于1/2MS培养基观察萌发情况。(上)在1/2MS培养基(16小时光照，8小时黑暗)上生长3天后种子萌发情况，(下)经统计学统计种子在1/2MS培养基上不同时间段的萌发率(n＝30-60，误差棒为±SE，16h光照和8h黑暗)。
图6为莲座叶大小图
拍照记录在1/2MS培养基(16小时光照，8小时黑暗)上生长两周龄幼苗生长情况，(左)野生型(右)过表达转基因拟南芥株系A.thaliana A1。
图7为株高差异图
相比于野生型过表达转基因拟南芥株系A.thaliana A1表现出株高度增高的表型
图8为抽薹数增多的表型图。
将A.thaliana A1转基因拟南芥株系T4代种子置于温室培养，拟南芥生长8周进入生长周期末期，结果表明过表达重组基因片段4IIA1bZIP的拟南芥植株抽薹数均表现出3～4个的增多表型。
具体实施方法
本发明专利下述实施例中使用方法和装置，如无特殊说明，均为常规方法和装置；所用器材、试剂均为试剂公司购买的常规器材和试剂。为使本发明专利的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体实施例对本发明专利的具体实施方式进行详细说明。这些优选实施方式的示例在具体实施例中进行了例示。在此，还需要说明的是，为了避免因不必要的细节而模糊了本发明专利的技术方案，在实施例中仅仅示出了与根据本发明专利的方案密切相关的技术方案和/或处理步骤，而省略了关系不大的其他细节。
实施例1
本实施例提供了重组基因片段4IIA1bZIP的重组与载体构建方法，包括：
1.总RNA提取与反转录
取在1/2MS固体培养基上生长一周左右的哥伦比亚生态型拟南芥(Arabidopsisthaliana Columbia)整株按照总RNA提取试剂盒说明书(Tiangen,DP437)进行总RNA提取。提取的RNA用NanoDrop2000测定RNA的浓度后按照以下顺序进行反转录，冰上混合以下物质：
65℃反应5min后，迅速取出冰浴10min，再在管中加入以下物质，并轻轻混匀：
37℃反应60min后，于70℃放置15min以终止反应。反转录完成后，加入ddH2O稀释cDNA浓度至20ng/μl。
2.AtDPBF4的CRII片段的扩增
根据编码AtDPBF4的CRII基因的序列设计特异性引物对，以(1)中得到的cDNA模板进行PCR扩增。PCR体系为：
PCR的扩增参数为：95℃预变性5min，30个循环包括95℃变性15s、57℃退火30s、72℃延伸25s，最后72℃延伸10min。PCR结束之后进行琼脂糖凝胶电泳。
3.ABF1的bZIP片段的扩增
根据编码ABF1bZIP基因的序列设计特异性引物对，以(1)中得到的cDNA模板进行PCR扩增。PCR体系为：
PCR的扩增参数为：95℃预变性5min，30个循环包括95℃变性15s、57℃退火30s、72℃延伸50s，最后72℃延伸10min。PCR结束之后进行琼脂糖凝胶电泳。
4.E.coli DH5α感受态细胞的制备
(1)活化菌株。挑取DH5α单菌落于3mL LB培养基中，37℃振荡培养过夜；
(2)将活化的菌种以1％的比例接种于50mL无抗性LB培养基中，37℃振荡培养，当培养物开始浑浊后，每隔15min测OD600，至OD600＝0.6左右；
(3)将培养液转入一预冷的50mL离心管中，冰浴10min，于4℃下5000rpm离心10min；
(4)弃上清液，用20mL冰预冷的0.1mol/L CaCl2溶液轻轻悬浮菌体至均匀，冰上放置30min；
(5)4℃下5000rpm离心10min；
(6)弃上清液，用2mL冰预冷的0.1mol/L CaCl2溶液轻轻悬浮菌体至均匀，冰上放置1-2min后即制成感受态细胞；
5.AtDPBF4的CRII植物遗传转化载体构建及序列测定
根据编码AtDPBF4的CRII的保守区序列，设计一对特异性扩增引物为：
D4II-F1:5’-CATGCCATGGgtGGAAAACCACTAGGAAGCAT-3’；
D4II-R1:5’-GAAGATCTTTCCTCAGCTGGTGGCAAGA-3’。
上下游引物5’端分别引入限制性内切酶位点(下划线)NcoI和BglII，并添加2-3个保护碱基。以cDNA为模板经特异性引物对扩增的PCR产物经回收后与载体pCAMBIA1304分别用限制性内切酶EcoR I和Pst I双酶切，经T4 DNA连接酶连接并转化大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞，挑选6个单菌落进行菌落PCR鉴定及双酶切鉴定后送苏州金唯智生物科技有限公司进行测序，测序正确的重组质粒命名为pCAMBIA1304-D4II。
6.4IIA1bZIP植物遗传转化载体构建及序列测定
根据编码ABF1的碱性亮氨酸拉链区(bZIP)序列，设计一对特异性扩增引物为：
A1-F1:5’-GAAGATCTggtggaCCTGGGACGAGCAGTGCAGA-3’；
A1-R1:5’-GACTAGTCCTTCTTACCACGGACCGGT-3’。
上下游引物5’端分别引入限制性内切酶位点(下划线)BglII和SpeI，并添加1-2个保护碱基。以cDNA为模板经特异性引物对扩增的PCR产物经回收后与载体pCAMBIA1304-D4II分别用限制性内切酶BglII和SpeI双酶切，经T4 DNA连接酶连接并转化大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞，挑选6个单菌落进行菌落PCR鉴定及双酶切鉴定后送苏州金唯智生物科技有限公司进行测序，测序正确的重组质粒命名为p1304-4IIA1bZIP。
实施例2
本实施例提供了重组基因片段D4IIA1bZIP拟南芥遗传转化方法，包括：
1.p1304-4IIA1bZIP超表达载体转化农杆菌GV3101
取1μl重组质粒p1304-4IIA1bZIP于1支根癌农杆菌GV3101感受态细胞中混匀。冰上放置30min后，液氮速冻1min，42℃热激90s，迅速冰预2min。加入800μl新鲜的LB液体培养基28℃震荡培养4h。取100μl涂布于抗性LB平板(含Gen 40μg/ml，Rif 20μg/ml，Kan 40μg/ml)，28℃倒置培养2-3d。挑选3个单菌落于3mL新鲜的LB(含Gen 40μg/ml，Rif 20μg/ml，Kan40μg/ml)液体培养基中，28℃、220rpm培养过夜。分别取1μl菌液进行菌落PCR鉴定。菌落PCR阳性的转化菌进一步遗传转化拟南芥。
2.农杆菌浸花法转化拟南芥
(1)转化之前准备好生长25天左右的哥伦比亚生态型拟南芥植株，待拟南芥植株开始抽薹之后，将拟南芥主花序的顶端剪掉同时注意避免伤及腋生花序，以诱导侧花序的生成。待侧枝伸出2-10cm时实施转化。并给需要浸染的拟南芥植株浇水，以有较多未开的花蕾为准。
(2)将含有ABF1超表达载体p1304-4IIA1bZIP的农杆菌接种于5ml新鲜的LB(含Gen40μg/ml，Rif 20μg/ml，Kan 40μg/ml)液体培养基中，30℃、200r/min摇床震荡培养15小时左右。
(3)将上一步中的培养物按1:50的比例转接到200ml含有相应抗生素的新鲜的LB液体培养基中，28℃、200r/min摇床培养15小时左右至OD600＝0.8-1.0。
(4)4000r/min离心15min收集菌体，用渗透缓冲液(1/2MS培养基+5％蔗糖)，调节溶液OD600＝0.8-1.0，并加入终浓度为0.03％的Silwett L-77(SINOPCR S5605)混匀。
(5)用剪刀将已授粉的花、果荚去除，并且提前一天给植物浇足水。用5ml注射器吸取分别含有待转化的四种质粒的农杆菌悬浮液对准备好的拟南芥植株的每一朵花进行浸染。用保鲜袋将浸染过的植物(T0代植物)罩起来以保持湿度。
(6)将浸染过后的拟南芥植株置于暗处培养12h后放回正常条件(22℃，16h光照，8h黑暗)培养，2天后去掉保鲜袋，继续培养到果荚成熟，期间可重复浸染2-3次以提高转化效率。
(7)待植物生长2-3周后其顶端果荚会变黄，在果荚开裂前按照编号收集拟南芥种子(T1代)，待充分干燥后储存，以筛选转基因拟南芥植株。
3.4IIA1bZIP过表达转基因拟南芥植株的筛选及鉴定
加少量无菌水浸没T1代种子，置于4℃冰箱春化3-4天。在超净工作台中消毒后，铺在含25μg/ml潮霉素的1/2MS固体培养基上，置于植物光照培养箱中培养(22℃，16h光照，8h黑暗，湿度60％左右，光照强度3000～5000Lx)。生长两周后，疑似阳性转基因拟南芥植株可以正常生长，而非转基因植株呈现子叶发黄、根短不能生长进入培养基。将阳性转基因拟南芥植株移栽于营养土(丹麦品氏基质5号，pH 5.5)培养(22℃，16h光照，8h黑暗，湿度60％左右，光照强度3000～5000Lx)，分单株收获成熟的种子(T2代种子)。将T2代种子在含有30μg/ml潮霉素抗性的MS培养基上继续筛选至T3代，继而筛选至T4代供表型分析用。
根据p1304-4IIA1bZIP重组质粒的序列设计特异性引物(D4II-F1和A1-R)，以RT-PCR鉴定抗生素阳性拟南芥植株中4IIA1bZIP基因的表达状况。从7天龄的野生型和4IIA1bZIP过表达转基因拟南芥植株(培养于1/2MS平板)中提取总RNA，反转录为cDNA后再以特异性引物D4II-F1和A1-R进行扩增。
D4II-F1:5’-CATGCCATGGgtGGAAAACCACTAGGAAGCAT-3’
A1-R:5’-GACTAGTCCTTCTTACCACGGACCGGT-3’
通过基因组分析超表达基因在转基因拟南芥中的表达。基因组PCR电泳结果呈现出具有相应分子量大小(443bp)的专一性条带，超表达株系(A.thaliana A1-1～A.thaliana A1-10)条带。通过RT-PCR分析超表达基因在转基因拟南芥中的表达。RT-PCR电泳结果呈现出具有相应分子量大小(443bp)的专一性条带，超表达株系(A.thaliana A1-2、A.thaliana A1-3、A.thaliana A1-6和A.thaliana A1-10)条带，如附图2所示。结果表明：重组基因4IIA1bZIP成功嵌入拟南芥基因组，并能够超表达。
实施例3
本实施例提供了重组基因4IIA1bZIP在提高拟南芥种子萌发率中的应用。将收获的成熟的T4代种子和野生型种子加入ddH2O置于4℃冰箱春化3-4天。在超净工作台中消毒后，铺在同一块含30μg/ml潮霉素的1/2MS固体培养基上，置于植物光照培养箱中培养(22℃，16h光照，8h黑暗，湿度60％左右，光照强度3000～5000Lx)。统计1-7d种子萌发率情况。A.thaliana A1转基因拟南芥株系(A.thaliana A1-2、A.thaliana A1-6和A.thaliana A1-10)3d后萌发率明显高于野生型拟南芥植株，如附图3所示。
结果表明：过表达重组基因4IIA1bZIP可显著提高拟南芥种子的萌发率。
实施例4
本实施例提供了重组基因4IIA1bZIP在增高植株高度中的应用，包括：
(1)所有植物均选用相同规格的口径为正方形的花盆，每个花盆中放入一定的营养土(丹麦品氏基质5号，pH5.5)，将花盆放在同一个平底的托盘中，托盘加水以便盘中花盆里的土壤自主吸水。
(2)将A.thaliana A1转基因拟南芥株系(A.thaliana A1-2、A.thaliana A1-6和A.thaliana A1-10)T4代种子和野生型种子纯化后点播于营养土(丹麦品氏基质5号，pH5.5)，然后置于温室培养(22℃，16h光照，8h黑暗，湿度60％左右，光照强度3000～5000Lx)。一周后剔除生长状况不良的幼苗及多余的幼苗，使每个花盆保留1株生长状况较为一致的幼苗。
(3)观察、统计拟南芥植株高度的状况
A.thaliana A1转基因拟南芥株系(A.thaliana A1-2、A.thaliana A1-6和A.thaliana A1-10)于8周进入生长周期末期。此时，转基因株系A.thaliana A1-2的平均株高42cm、A.thaliana A1-6的平均株高40cm、A.thaliana A1-10平均株高44cm，野生型株高35cm(图4)
结果表明：过表达重组基因4IIA1bZIP可显著增高拟南芥植株高度。
实施例5
本实施例提供了重组基因4IIA1bZIP在增加抽薹数目中的应用，包括：
(1)所有植物均选用相同规格的口径为正方形的花盆，每个花盆中放入一定的营养土(丹麦品氏基质5号，pH5.5)，将花盆放在同一个平底的托盘中，托盘加水以便盘中花盆里的土壤自主吸水。
(2)将A.thaliana A1转基因拟南芥株系(A.thaliana A1-2、A.thaliana A1-6和A.thaliana A1-10)T4代种子和野生型种子置于4℃春化3-4天，点播于营养土(丹麦品氏基质5号，pH5.5)，置于温室培养(22℃，16h光照，8h黑暗，湿度60％左右，光照强度3000～5000Lx)。一周后剔除生长状况不良及多余的幼苗，使每个花盆保留1株生长状况相似的幼苗。
(3)生长4周后观察、统计拟南芥抽薹状况。A.thaliana A1转基因拟南芥株系(A.thaliana A1-2、A.thaliana A1-6和A.thaliana A1-10)抽薹数均表现出比野生型株系多的表型(图4)。
结果表明：过表达重组基因4IIA1bZIP可显著增加拟南芥植株抽薹数量。
以上所述仅是本申请的具体实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本申请的保护范围。
<110>兰州理工大学
<120> 重组基因片段4IIA1bZIP及其应用
<160> 3
<210> 1
<211> 66
<212> DNA
<213> 拟南芥 （Arabidopsis thaliana）
<400> 1
1 GGAAAACCAC TAGGAAGCAT GAACCTTGAT GAGCTTCTCA AGACTGTCTT GCCACCAGCT
61 GAGGAA
<210> 2
<211> 345
<212> DNA
<213> 拟南芥 （Arabidopsis thaliana）
<400> 2
1 CCTGGGACGA GCAGTGCAGA AAACAATACT TGGTCATCAC CAGTTCCTTA CGTGTTTGGT
61 CGGGGAAGAA GAAGCAATAC GGGCCTGGAG AAGGTTGTTG AGAGAAGGCA AAAGAGAATG
121 ATCAAGAATC GGGAATCCGC TGCTAGATCA AGGGCTCGAA AACAGGCTTA TACCTTGGAA
181 CTGGAAGCTG AGATTGAAAG TCTCAAGCTA GTGAATCAAG ATTTGCAGAA GAAACAGGCT
241 GAAATAATGA AAACCCATAA TAGTGAGCTA AAGGAATTTT CGAAGCAGCC TCCATTGCTG
301 GCCAAAAGAC AATGCTTGAG AAGAACCCTT ACCGGTCCGT GGTAA
<210> 3
<211> 345
<212> DNA
<213> 拟南芥 （Arabidopsis thaliana）
<400> 3
1 ATGGGTGGAA AACCACTAGG AAGCATGAAC CTTGATGAGC TTCTCAAGAC TGTCTTGCCA
61 CCAGCTGAGG AAAGATCTGG TGGACCTGGG ACGAGCAGTG CAGAAAACAA TACTTGGTCA
121 TCACCAGTTC CTTACGTGTT TGGTCGGGGA AGAAGAAGCA ATACGGGCCT GGAGAAGGTT
181 GTTGAGAGAA GGCAAAAGAG AATGATCAAG AATCGGGAAT CCGCTGCTAG ATCAAGGGCT
241 CGAAAACAGG CTTATACCTT GGAACTGGAA GCTGAGATTG AAAGTCTCAA GCTAGTGAAT
301 CAAGATTTGC AGAAGAAACA GGCTGAAATA ATGAAAACCC ATAATAGTGA GCTAAAGGAA
361 TTTTCGAAGC AGCCTCCATT GCTGGCCAAA AGACAATGCT TGAGAAGAAC CCTTACCGGT
421 CCGTGGTAA
Claims (1)
1.拟南芥重组基因片段4IIA1bZIP在增加拟南芥抽薹数中的应用，其特征在于所述重组基因片段序列如序列表SEQ No.3所示，所述应用通过超表达4IIA1bZIP予以实现。
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| 与酵母单杂交系统匹配的植物瞬时表达分析载体的构建;张媛 等;《分子植物育种》;第19卷(第08期);第2616-2620页 * |
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