CN114606244B

CN114606244B - 紫云英agl18基因及其应用

Info

Publication number: CN114606244B
Application number: CN202210350283.7A
Authority: CN
Inventors: 张贤; 王建红; 庄俐; 曹凯; 徐静; 斯林林
Original assignee: Zhejiang Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Zhejiang Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2022-04-02
Filing date: 2022-04-02
Publication date: 2023-05-26
Anticipated expiration: 2042-04-02
Also published as: CN114606244A

Abstract

本发明提供紫云英AGL18基因及其应用。紫云英AGL18基因及其编码蛋白的序列分别如SEQ ID NO:1和2所示。本发明首次从紫云英中克隆得到AGL18基因，并通过农杆菌介导的遗传转化方法，在拟南芥中验证了AGL18基因具有调控植物开花的功能，具体为延迟植株开花。转AGL18基因的拟南芥株系出现抽薹提前，开花提前，抽薹天数比野生型平均晚10.78天，开花天数比野生型平均晚11.28天。这表明紫云英AGL18基因与成花关系密切，其具有调节开花时间的功能。将该基因应用于植物性状改良，具有良好的应用前景。本发明提供的AGL18基因及其编码蛋白为培育植物新品种提供了宝贵资源。

Description

紫云英AGL18基因及其应用

技术领域

本发明涉及基因工程和植物遗传育种领域，具体地说，涉及紫云英AGL18基因及其应用。

背景技术

紫云英(Astragalus sinicus L.)是豆科，黄耆属越年生草本植物，主要分布于中国长江流域，是重要的绿肥作物，对土壤资源的可持续利用，具有重要意义。

成花是植物从营养生长向生殖生长的关键转换，同时也是实现世代交替的中心环节，在很大程度上决定了植物繁殖的成功与否。紫云英按开花早晚可分特早花型、早花型、中花型和晚花型，开花时间直接决定了有效生长季的长短。作为绿肥，紫云英的种植和收获时间取决于主作物，保证紫云英产量的同时还要与主作物的生育期相协调。在合适的时间促使或避免开花，根据当地的耕作制度选育花期适当的品种是重要的育种目标。因此，成花基因研究对紫云英生长发育及遗传改良具有重要意义。但目前对于紫云英成花机制的研究以及开花相关基因在此过程中的作用尚不清楚。

发明内容

本发明的目的是提供紫云英AGL18基因及其应用。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种紫云英AGL18基因，AGL18基因为编码如下蛋白质(a)或(b)的基因：

(a)由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)SEQ ID NO:2所示序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等功能的由(a)衍生的蛋白质。

本发明利用RACE技术获得AGL18基因的全长cDNA序列大小为957bp(SEQ ID NO:1)，含有一个738bp的开放阅读框，5’和3’非编码区的长度分别为134bp和85bp。PolyA尾巴信号肽区域位于928-933bp处。

第二方面，本发明提供含有所述紫云英AGL18基因的生物材料，所述生物材料包括但不限于重组DNA、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体、工程菌或非可再生的植物部分。

第三方面，本发明提供所述紫云英AGL18基因或含有该基因的生物材料在调控植物开花时间中的应用。

所述调控是指延迟植物开花时间。

前述应用包括：

1)使植物包含紫云英AGL18基因；或者，

2)使植物过表达紫云英AGL18基因。

所述应用包括但不限于转基因、杂交、回交、自交或无性繁殖。

可选地，过表达紫云英AGL18基因的方法选自以下1)～4)，或任选的组合：

1)通过向植物中导入具有紫云英AGL18基因的质粒；

2)通过增加植物染色体上紫云英AGL18基因的拷贝数；

3)通过将强启动子与紫云英AGL18基因可操作地连接；

4)通过导入增强子。

本发明中，所述植物包括但不限于拟南芥、紫云英。

进一步地，所述应用包括利用Ti质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、基因枪、电导或农杆菌介导等方法将包含紫云英AGL18基因的重组表达载体导入植物，获得转基因植株。

第四方面，本发明提供所述紫云英AGL18基因或含有该基因的生物材料在植物育种中的应用。育种目的为延迟植物开花时间。

第五方面，本发明提供所述紫云英AGL18基因或含有该基因的生物材料在制备转基因植物中的应用。

借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：

本发明首次从紫云英中克隆得到紫云英AGL18基因，并通过农杆菌介导的遗传转化方法，在拟南芥中验证了紫云英AGL18基因具有调控植物开花的功能，具体为延迟植株开花。转紫云英AGL18基因的拟南芥株系出现抽薹延迟，开花延迟，抽薹天数比野生型平均晚10.78天，开花天数比野生型平均晚11.28。这表明紫云英AGL18基因与成花关系密切，其具有调节开花时间的功能。将该基因应用于植物性状改良，具有良好的应用前景。本发明提供的紫云英AGL18基因及其编码蛋白为培育植物新品种提供了宝贵资源。

附图说明

图1为本发明较佳实施例中紫云英AGL18基因5-RACE PCR电泳结果分析。其中，M:DL2000 Marker：100，250，500，750，1000，2000bp；1：AGL18 5-RACE PCR电泳结果(约220bp)。

图2为本发明较佳实施例中紫云英AGL18基因3-RACE PCR电泳结果分析。其中，M:DL2000 Marker：100，250，500，750，1000，2000bp；1：AGL18 3-RACE PCR电泳结果(约217bp)。

图3为本发明较佳实施例中紫云英AGL18基因编码蛋白的氨基酸序列与其它9个物种的序列同源性比对结果。

图4为本发明较佳实施例中AGL18蛋白质二级结构预测及功能位点注释。

图5为本发明较佳实施例中利用MEGA 5.2构建的AGL18基因氨基酸序列的NJ系统进化树(数字为置信度)。

图6为本发明较佳实施例中预测的AGL18蛋白的三维结构图及其与模板碳主链的重叠图。其中，A：紫云英AGL18的三维结构图。B：紫云英AGL18结构和质型多角体病毒RNA聚合酶蛋白的碳主链的重叠图。彩色结构的是紫云英AGL18；紫色线是质型多角体病毒RNA聚合酶碳主链。

图7为本发明较佳实施例中超表达AGL18基因拟南芥植株的PCR阳性检测结果。

图8为本发明较佳实施例中转基因(紫云英AGL18基因)拟南芥的表型分析结果。其中，左侧为野生型，右侧为转基因植株。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例均按照常规实验条件，如Sambrook等分子克隆实验手册(Sambrook J&Russell DW,Molecular Cloning:a Laboratory Manual,2001)，或按照制造厂商说明书建议的条件。

实施例1

本发明利用RACE技术从紫云英中获得AGL18基因的全长cDNA序列大小为957bp(SEQ ID NO:1)，含有一个738bp的开放阅读框，5’和3’非编码区的长度分别为134bp和85bp。PolyA尾巴信号肽区域位于928-933bp处。其编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。具体方法如下：

1、试验材料：新鲜紫云英组织样本。

2、RNA提取：紫云英总RNA提取采用RNeasy Plant Mini Kit(Qiagen货号：74904)进行，具体提取过程参照试剂盒说明书。

3、5-RACE-PCR实验

5-RACE模板采用5′RACE System for Rapid Amplification of cDNA Ends,Version2.0(Invitrogen)进行合成。

(1)引物设计及序列

采用Primer Premier 5.0软件设计三条特异性5’RACE引物，由生工生物工程(上海)股份有限公司进行合成。引物序列见表1。

表1 5-RACE引物序列

(2)目的基因第一链cDNA的合成

使用SUPERSCRIPT II RT酶和引物GSP-1对总RNA进行目的基因第一链cDNA的合成，使用RNase Mix对合成的cDNA进行去RNA处理。

(3)使用DNA Purification System:GLASSMAX DNA isolation spin cartridges对经RNAase处理过的cDNA进行纯化。

(4)使用TdT酶和dCTP对纯化后的cDNA进行末端加上多聚C。

(5)使用引物GSP-2和试剂盒里面带的桥连铆钉引物AAP对已经加dC尾的cDNA进行PCR第一轮扩增。

5-RACE PCR反应体系及条件见表2～表5。

表2 5-RACE PCR第一轮反应体系

成分	体积(μl)
		10×PCR缓冲液[200mM Tris-HCl(pH 8.4),500mM KCl]	5.0
25mM MgCl2	3.0
		10mM dNTP mix	1.0
GSP-2(10μM溶液)	2.0
		锚定引物(10μM)	2.0
dC-tailed cDNA	5.0
		H₂O	31.5
Taq DNA聚合酶(5units/μl)	0.5
		总体积	50.0

表3 5-RACE PCR第一轮反应条件

1	94℃	2min
			2	94℃	30sec
3	55℃	30sec
			4	72℃	2min
5	Go to 2	35times
			6	72℃	7min

(6)使用引物GSP-3和试剂盒中的桥连通用扩增引物AUAP进行巢式PCR第二轮扩增。

(7)目的片段的回收纯化

将第二轮PCR产物进行电泳并对目的条带进行切胶回收纯化，步骤按回收试剂盒说明书进行。

(8)目的片段的克隆及测序

纯化后的PCR产物与pMD18T进行连接，转化后对阳性克隆进行测序。

表4 5-RACE PCR第二轮反应体系

成分	体积(μl)
		10×PCR缓冲液[200mM Tris-HCl(pH 8.4),500mM KCl]	5.0
25mM MgCl2	3.0
		10mM dNTP mix	1.0
GSP-3(10μM溶液)	1.0
		第一轮PCR产物	5.0
AUAP(10μM)	1.0
		H₂O	33.5
Taq DNA聚合酶(5units/μl)	0.5
		总体积	50.0

表5 5-RACE PCR第二轮反应条件

(3)5-RACE PCR电泳结果

PCR结束后，采用1.2％琼脂糖凝胶电泳进行分析(图1)，5-RACE PCR呈现出一条特异性条带，大小220bp左右，切胶回收后，连接pUCm载体，转化高效化学感受态细胞DH5α，送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序。

4、3-RACE-PCR实验

(1)引物的设计及序列

利用转录组测序验证结果，采用Primer Premier 5.0软件设计两条特异性3’RACE引物(表6)，由生工生物工程(上海)股份有限公司进行合成。

表6 3’RACE引物名称及序列

(2)使用逆转录酶SMARTScribe^TM Reverse Transcriptase和引物3’CDS primer A对总RNA进行逆转录合成cDNA.

(3)使用引物3’896-1和UPM

(5'-CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT-3'

(long)；5'-CTAATACGACTCACTATAGGGC-3‘(short))，以前述合成的cDNA为模板进行第一轮PCR扩增。

(4)将第一轮PCR扩增产物稀释50倍，然后用引物3’896-2和UPM进行第二轮PCR扩增。

(5)3-RACE PCR电泳结果

PCR结束后，采用1.2％琼脂糖凝胶电泳进行分析(图2)，3-RACE PCR呈现出一条特异性条带，大小217bp左右，切胶回收后，连接pUCm载体，转化高效化学感受态细胞DH5α，送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序。

5、根据转录组序列验证，5’RAEC和3’RACE结果，拼接出实验目的基因的全长cDNA序列。

PCR结束后，采用1.5％琼脂糖凝胶电泳进行分析，PCR产物呈现出一条特异性条带，大小717bp左右，切胶回收后，连接pUCm-T载体，转化高效化学感受态细胞DH5α，送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序。

紫云英AGL18基因的生物信息分析：

紫云英AGL18基因编码蛋白的氨基酸序列与其它9个物种(Glycine max,Phaseolus vulgaris,Cicer arietinum,Medicago truncatula,Theobroma cacao,Populus euphratica,Citrus sinensis,Pyrus pyrifolia and Populus trichocarpa)序列同源性比对结果见图3。

使用ProtParam进行蛋白质氨基酸含量和理化性质分析。AGL18基因编码的蛋白质含有245个氨基酸，其分子量为27982.74道尔顿，理论等电点为8.40，其化学组分见表7。该蛋白含有38个带负电荷的氨基酸残基和40个带正电荷的氨基酸残基，它的N端以蛋氨酸起始。该蛋白共含有3937个原子，其中碳原子1209个，氢原子1977个，氮原子355个，氧原子386个，硫原子10个，其脂肪族指数为76.86，疏水性指数为-0.811，不稳定性指数为49.85。综合以上数据，该蛋白被归类为不稳定性蛋白。

表7 AGL18基因编码蛋白的化学组分

应用CLC Genomics Workbench进行AGL18蛋白的二级结构预测，该蛋白由245个氨基酸组成，包含10个α螺旋和1个β折叠。氨基酸序列中的酰胺化位点、蛋白激酶C磷酸化位点和N-糖基化位点见图4。利用NetPhos预测蛋白质中丝氨酸、苏氨酸和络氨酸的磷酸化位点，在AGL18蛋白质中共预测出8个丝氨酸磷酸化位点，1个苏氨酸磷酸化位点和0个络氨酸磷酸化位点(表8)。

表8磷酸化位点预测结果

应用BLASTP程序对紫云英的AGL18蛋白与其他9个物种同源蛋白进行了比较分析，结果显示物种之间有一定的相似性。其中，紫云英与Glycine max的AGL18蛋白的相似度达到77.73％，与Cicer arietinum和Phaseolus vulgaris AGL18蛋白的相似度分别达到了77.51％和77.02％，这一结果表明紫云英AGL18蛋白与这三个物种有一定的同源性。用AGL18蛋白构建的进化树显示紫云英与Cicer arietinum和Medicago truncatula聚为一类(图5)。

紫云英AGL18蛋白与其他物种AGL18蛋白的比较分析结果见表9。包括氨基酸数量，相似度，E值，等电点和分子量等指标。

表9紫云英AGL18蛋白与其他物种AGL18蛋白的比较分析

利用MEGA5.2软件构建AGL18基因氨基酸序列的NJ系统进化树，bootstrep设置为1000，采用Jones-Thorton-Taylor模型构建NJ树。建树所涉及到的基因的序列号为：Glycine max:XP_006575259.1,Phaseolus vulgaris:XP_007145592.1,Cicer arietinum:XP_004513865.1,Medicago truncatula:KEH41633.1,Theobroma cacao:XP_007028680.1,Populus euphratica:XP_011048083.1,Citrus sinensis:XP_006492965.1,Pyruspyrifolia:AJW29031.1,Populus trichocarpa:XP_002308020.1。

紫云英AGL18和大豆Lipoxygenase-1分别有245和839个氨基酸组成。大豆Lipoxygenase-1蛋白在PDB数据库里的ID为3ben。紫云英AGL18蛋白的三维结构是以3ben为模板在I-TASSER软件中预测得到的(图6,A和B)。预测的蛋白结构C值为-4.80，表示其与3ben的A链在折叠和二级结构方面非常类似。显示目标蛋白和模板蛋白的结构相似性的TM值为0.438，RMSD值为

实施例2AGL18基因在紫云英各组织中的相对表达水平

1、总RNA提取

紫云英均为温室种植的植物材料，是用普通紫云英植株材料采集种子培养而成的新鲜紫云英组织样本。

2、荧光定量PCR引物设计和合成

采用Primer Premier 6.0和Beacon designer 7.8软件进行定量PCR引物设计，然后由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。所用内参基因为18S rDNA(GenBank：AF359603.1)。

3、Real-Time PCR(Q-PCR)基因表达差异统计分析

每个样品重复三次，各个基因的相对表达水平以2^{(Ct内参基因－Ct目的基因)}进行统计分析。AGL18基因Q-PCR表达量分析结果见表10。

表10 AGL18基因Q-PCR表达量分析

以上结果表明，AGL18基因在各器官中均有表达，表达量由高到低依次为花芽、花、叶、根、叶芽、茎、荚果。可见，AGL18基因的表达具有组织特异性，可能在紫云英花发育过程中起到重要的作用。

实施例3转基因拟南芥的培养及其表型分析

1、含紫云英AGL18基因(SEQ ID NO:1)的重组质粒的构建。

2、转化农杆菌感受态细胞

将测序正确的重组质粒转化农杆菌感受态细胞。菌落PCR鉴定表明载体质粒已成功转入到农杆菌中。

3、拟南芥转化流程(花序浸染法)

(1)种植：选择吸水性好，土质松软的蛭石配合营养土(体积比1:0.5)作为拟南芥种植土壤。直径9cm的花盆，每盆播种100-150颗。播种以后在花盆上罩上薄膜，给植株的生长提供一个湿润的环境。

(2)移栽：播种10-15天，待拟南芥幼苗长至四叶时期开始移栽，每盆4-5棵。

(3)去顶：拟南芥初次开花时将花蕾剪掉，可以促进侧枝更多的花枝的增生。适合转化植株的花卉并没有成熟，也没有产生已受精的角果。

(4)配制浸染液：在5％蔗糖溶液中重悬转化后的农杆菌使OD₆₀₀＝0.8，为了保持蔗糖溶液的新鲜，可以现配现用，无需灭菌。100-200ml浸染2-3个小盆植株，400-500ml浸染，2-3个花盆(9cm)植株。在浸染之前加入表面活性剂至浓度0.05％(500ul/L)。

(5)浸染：将盛花期拟南芥的花表面部分浸泡在转化后的农杆菌悬浮液中20-30s，同时轻轻旋转。

(6)暗培养：将浸染后植株套袋保持高度的湿润状态暗室培养24h。

(7)浸染后培养：隔天浇水，保证水分充足即可。

(8)种子收集：种子成熟，角果自然开裂后可以收种子。

(9)转基因种子筛选：在含有潮霉素抗生素的平板上培养浸染后所得种子。40mg的种子大约200颗于含潮霉素10-50μg/ml的1/2MS培养基上春化2天，之后在持续光照条件下培养7-10天。根据生长状况判断是否为转基因种子。成功转入重组质粒的种子能够在抗性培养及上正常生长出4片以上真叶。非转基因种子不能正常生长，仅能长出2片子叶，根的生长也受到严重抑制，一般萌发10天后死亡。

(10)转基因植株转土栽培。转基因种子在MS+潮霉素的平板上萌发2周以后，将阳性植株转入土壤继续培养。

(11)PCR鉴定：取阳性植株叶片进行基因组DNA的提取并使用目的基因序列和载体35S启动子序列引物进行PCR验证，超表达AGL18基因拟南芥植株的PCR阳性检测结果见图7。从左至右依次是目的基因P1234F/P1234R引物检测，引物序列如下(5′-3′)：

P1234F:5'-GGGGTACCATGGGGAGAGGAAAAATTG-3'

P1234R:5'-GCTCTAGATTGTGAAGCCACTTGACTC-3'检测转基因阳性植株。

植物筛选标记潮霉素基因检测：

潮霉素F：GAGCATATACGCCCGGAGTC，潮霉素R：GTCTCCGACCTGATGCAGCTCTCGG。

将AGL18基因转化到农杆菌C5C81，利用花序法侵染拟南芥。将待检测的拟南芥种子在抗性培养基上种植，转化成功的植株能够正常生长，而未转化成功的植株是黄色死亡植株AGL18基因未转化成功。将初筛得到的幼苗移栽到培养钵中继续培养，当生长至10～12片时，剪取叶片进行基因组DNA的提取，并使用目的片段扩增引物及载体35S启动子序列引物进行PCR检测，电泳结果出现目的条带，表明AGL18基因已经整合到拟南芥基因组中。

4、转基因拟南芥表型分析

播种转基因拟南芥T2代，记录转基因株系的开花情况。从播种后开始计算抽薹、开花所需天数，以及开花数，结果见表11和图8。

表11拟南芥表型分析

可见，与野生型拟南芥植株相比，转基因拟南芥的系表现出晚花表型。对转基因拟南芥及野生型拟南芥的抽薹天数、开花天数及开花数进行统计。结果显示，超表达AGL18基因拟南芥株系的抽薹天数比野生型平均晚10.78天，开花天数比野生型平均晚11.28天。这表明AGL18基因的超表达对拟南芥的抽薹、花期均有影响。AGL18基因的表达可以延迟植物开花。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

序列表

<110> 浙江省农业科学院

<120> 紫云英AGL18基因及其应用

<130> KHP221112884.9

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 957

<212> DNA

<213> 紫云英(Astragalus sinicus L.)

<400> 1

caagagagtt gtctgttttg tgggcgctga ggttgctgtt tcattcattt tttttctgaa 60

taatgtatgt tgttgggttt agtgtttggt aaagaaaaag aaagaacttt gaaagaagaa 120

agaaaaaaag aacaatgggg agaggaaaaa ttgagattaa gaagattgag aatttgaata 180

gcagacaggt taccttctct aagagacgta atggtttgct caaaaaagca agagagttgt 240

ctgttttgtg tgatgctgag gttgctgtta tcattttctc tagcactgga aaactttatg 300

agtttgcaaa ttcaagcatg gagcatacca tttcaaggta caacaaaggc ctgcaattgg 360

ttgctgcaga acaacaacct agtgatgagc ctccagattt tatggagcct gatacaaacc 420

atttgaagga ggaaataaca aagctacgtt ctgcatactt aaggatgatg ggtaaagagc 480

ttgatggatt gaattttaag gaactacaga acctagaaaa tcaactctct gaaggcatat 540

tagctgtcaa agataaaaag gaacatctaa ttttagaaca gcttaggagg gtcagattac 600

aggagcaaaa agccttgaag gaaaatgaag ctctgcgaaa acaacttgag gaattagaaa 660

gcaaaagaag aacagggttc cctgaattta attcaatgga taggacaatt tctatgaatg 720

gttcaaagcc ccatttcaat tctgcttcag aagataacga attttcagat acttccttgc 780

aattagggtt gtcgtcggat tatggtagga agaggaaagc attgaagatg gaaccttgca 840

atgactcagg gagtcaagtg gcttcacaat gacatttttg tactgaaaaa ctcgtgtctt 900

tttgaaatca gaaaccttta cctagataaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaa 957

<210> 2

<211> 245

<212> PRT

<213> 紫云英(Astragalus sinicus L.)

<400> 2

Met Gly Arg Gly Lys Ile Glu Ile Lys Lys Ile Glu Asn Leu Asn Ser

1 5 10 15

Arg Gln Val Thr Phe Ser Lys Arg Arg Asn Gly Leu Leu Lys Lys Ala

20 25 30

Arg Glu Leu Ser Val Leu Cys Asp Ala Glu Val Ala Val Ile Ile Phe

35 40 45

Ser Ser Thr Gly Lys Leu Tyr Glu Phe Ala Asn Ser Ser Met Glu His

50 55 60

Thr Ile Ser Arg Tyr Asn Lys Gly Leu Gln Leu Val Ala Ala Glu Gln

65 70 75 80

Gln Pro Ser Asp Glu Pro Pro Asp Phe Met Glu Pro Asp Thr Asn His

85 90 95

Leu Lys Glu Glu Ile Thr Lys Leu Arg Ser Ala Tyr Leu Arg Met Met

100 105 110

Gly Lys Glu Leu Asp Gly Leu Asn Phe Lys Glu Leu Gln Asn Leu Glu

115 120 125

Asn Gln Leu Ser Glu Gly Ile Leu Ala Val Lys Asp Lys Lys Glu His

130 135 140

Leu Ile Leu Glu Gln Leu Arg Arg Val Arg Leu Gln Glu Gln Lys Ala

145 150 155 160

Leu Lys Glu Asn Glu Ala Leu Arg Lys Gln Leu Glu Glu Leu Glu Ser

165 170 175

Lys Arg Arg Thr Gly Phe Pro Glu Phe Asn Ser Met Asp Arg Thr Ile

180 185 190

Ser Met Asn Gly Ser Lys Pro His Phe Asn Ser Ala Ser Glu Asp Asn

195 200 205

Glu Phe Ser Asp Thr Ser Leu Gln Leu Gly Leu Ser Ser Asp Tyr Gly

210 215 220

Arg Lys Arg Lys Ala Leu Lys Met Glu Pro Cys Asn Asp Ser Gly Ser

225 230 235 240

Gln Val Ala Ser Gln

245

Claims

1.紫云英AGL18基因，其特征在于，AGL18基因为编码由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的基因。

2.含有权利要求1所述紫云英AGL18基因的生物材料，所述生物材料为重组DNA、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体或工程菌。

3.权利要求1所述紫云英AGL18基因或权利要求2所述生物材料在调控植物开花时间中的应用，所述植物为拟南芥、紫云英。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述调控是指延迟植物开花时间。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述应用包括：

1）使植物包含紫云英AGL18基因；或者，

2）使植物过表达紫云英AGL18基因。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用包括转基因、杂交、回交、自交或无性繁殖。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，过表达紫云英AGL18基因的方法选自以下1）~4），或任选的组合：

1）通过向植物中导入具有紫云英AGL18基因的质粒；

2）通过增加植物染色体上紫云英AGL18基因的拷贝数；

3）通过将强启动子与紫云英AGL18基因可操作地连接；

4）通过导入增强子。

8.权利要求1所述紫云英AGL18基因或权利要求2所述生物材料在植物育种中的应用；育种目的为延迟植物开花时间；

所述植物为拟南芥、紫云英。

9.权利要求1所述紫云英AGL18基因或权利要求2所述生物材料在制备转基因植物中的应用，所述植物为拟南芥、紫云英。