CN114478822B - 一种泥鳅多糖的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种泥鳅多糖的提取方法。所述的提取方法包括如下步骤：低温暂养、分泌液收集、浓缩、超声、醇沉、脱蛋白、透析、冻干；本发明采用酒石酸和氯化钾作为脱蛋白剂，提取方法产品回收率高、纯度高，提取的多糖所含杂质少，多糖的纯度大于90％；本发明提取方法工艺简单，所用试剂易得，生产成本低，易于实现工业化。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种泥鳅多糖的提取方法。
背景技术
泥鳅又名鳅、鳅鱼、和鳅，属鳅科、鲤形目。泥鳅栖息于沼泽、胡泊、池塘水田和沟渠中，喜欢静水的底层和水田底部富有植物碎屑的淤泥表层，对环境适应力极强，广泛分布于亚洲沿岸的中国、日本、俄罗斯等地。鱼肉或全体可入药，具有补脾益气、滋阴补肾、清热解毒等功效。
研究表明，泥鳅具有较高营养价值，泥鳅含有丰富的蛋白质、维生素、微量元素等营养成分，脂肪含量很低。泥鳅中氨基酸含量高，种类齐全；4种鲜味氨基酸和7种人体必需氨基酸的含量较丰富，其中谷氨酸、赖氨酸和亮氨酸含量较高。
目前，在冷链运输和加工预处理过程中，泥鳅体表分泌出的大量黏液被废弃，造成极大的资源浪费和环境污染。研究报道，泥鳅的药用价值很高，其体表分泌的黏液可入药，味甘、性平，具有补中益气、利尿除湿等功效。研究报道，鱼皮的黏液层含有各种来自表皮杯状细胞和上皮细胞的分泌物，这些分泌物与许多重要的生物学功能有关。泥鳅多糖具有很好的抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、降血糖、降血脂等功效。但对其的提取回收率不高。
专利CN201510495212公开了一种泥鳅分泌多糖的提取方法，包括以下步骤：分泌液收集浓缩；醇沉；酶解；萃取；透析；冻干。该方法采用由氯仿和正丁醇作为蛋白沉淀剂，提取的产品有氯仿残留，对人身体不利。
发明内容
本发明的目的在于提供一种泥鳅多糖的提取方法。
一种泥鳅多糖的提取方法，按照如下步骤进行：
(1)将鲜活泥鳅用蒸馏水浸没，于低温环境下暂养，过滤收集滤液，得到泥鳅黏液；
(2)将步骤(1)中所得的泥鳅黏液真空浓缩至原体积的1/5-1/10后，并辅以超声波辅助提取，离心取溶液加入3-5倍体积的无水乙醇，静置过夜；
(3)将步骤(2)中静置过夜后的溶液离心，取离心所得固体物质，然后将加水复溶，得到多糖溶液；
(4)将步骤(3)中所得的多糖溶液加入占多糖溶液质量3-7％的酒石酸和3-7％的氯化钾，剧烈振荡20-30min，3-8℃，离心；
(5)将步骤(4)中所得的上清液装入截留分子量为8000-14000的透析袋中，透析30-60h，然后溶液冷冻干燥得白色絮状粉末，即为得到的泥鳅多糖。
步骤(1)中，所述低温的温度为4-6℃。
步骤(1)中，所述暂养时间为8-16h，过滤所用为2-6层纱布。
步骤(2)中，所述的浓缩采用60-80℃下旋蒸的方式浓缩，超声波的功率为80-120W，时间为10-30min。
步骤(3)中，所述的离心所得固体物质用100-150质量倍的水溶解，得到多糖溶液。
所述离心速率为8000-10000rmp，时间为3-8min。
本发明的有益效果：本发明提取方法产品回收率高，纯度好，泥鳅多糖得率大于0.2％，多糖的纯度大于90.0％；本发明提取方法工艺简单，所用试剂易得，生产成本低，易于实现工业化。本发明所用泥鳅收集黏液后室温放置12h后可继续循环多次使用收集黏液。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
实施例1
(1)称取新鲜活泥鳅1kg，加入200mL蒸馏水于4℃环境下暂养12h，收集黏液，使用四层纱网过滤黏液，得到粘液6.22g；
(2)收集的黏液采用旋转蒸发仪在60℃下真空浓缩至原体积的1/6，100W超声20min后，10000rmp，5min离心取溶液加入4倍体积的无水乙醇，静置过夜；
(3)将步骤(2)中静置过夜后的溶液离心，8000rmp，5min离心取沉淀，然后加入120质量倍的水溶解，得到多糖溶液；
(4)将所得的多糖溶液加入占多糖溶液质量5％的酒石酸和5％的氯化钾，剧烈振荡25min，5℃，10000r/min离心，取上清液；
(5)将步骤(4)中所得的上清液装入截留分子量为12000的透析袋中，透析48h，然后溶液冷冻干燥得白色絮状粉末0.15g，即为得到的泥鳅多糖。
样品在200nm处出现多糖特征吸收峰，在260-280nm处无吸收峰。说明提取得到的泥鳅多糖中无蛋白和核酸等杂质。
实施例2
(1)称取新鲜活泥鳅5kg，加入1L蒸馏水于4℃环境下暂养12h，收集黏液，使用四层纱网过滤黏液，得到粘液31.89g；
(2)收集的黏液采用旋转蒸发仪在60℃下真空浓缩至原体积的1/6，100W超声20min后，10000rmp，5min离心取溶液加入4倍体积的无水乙醇，静置过夜；
(3)将步骤(2)中静置过夜后的溶液离心，8000rmp，5min离心取沉淀，然后加入110质量倍的水溶解，得到多糖溶液；
(4)将所得的多糖溶液加入占多糖溶液质量6％的酒石酸和6％的氯化钾，剧烈振荡20min，5℃，10000r/min离心，取上清液；
(5)将步骤(4)中所得的上清液装入截留分子量为8500的透析袋中，透析48h，然后溶液冷冻干燥得白色絮状粉末0.71g，即为得到的泥鳅多糖。
样品在200nm处出现多糖特征吸收峰，在260-280nm处无吸收峰。说明提取得到的泥鳅多糖中无蛋白和核酸等杂质。
对比例1
(1)称取新鲜活泥鳅1kg，加入200mL蒸馏水于4℃环境下暂养12h，收集黏液，使用四层纱网过滤黏液，得到粘液6.28g；
(2)收集的黏液采用旋转蒸发仪在60℃下真空浓缩至原体积的1/6，100W超声20min后，10000rmp，5min离心取溶液加入4倍体积的无水乙醇，静置过夜；
(3)将步骤(2)中静置过夜后的溶液离心，8000rmp，5min离心取沉淀，然后加入120质量倍的水溶解，得到多糖溶液；
(4)将所得的多糖溶液加入占多糖溶液质量10％的酒石酸，剧烈振荡25min，5℃，10000r/min离心，取上清液；
(5)将步骤(4)中所得的上清液装入截留分子量为12000的透析袋中，透析48h，然后溶液冷冻干燥得白色絮状粉末0.11g，即为得到的泥鳅多糖。
样品在200nm处出现多糖特征吸收峰，在260-280nm处有吸收峰。说明提取得到的泥鳅多糖中无蛋白和核酸等杂质。
对比例2
(1)称取新鲜活泥鳅1kg，加入200mL蒸馏水于4℃环境下暂养12h，收集黏液，使用四层纱网过滤黏液，得到粘液6.33g；
(2)收集的黏液采用旋转蒸发仪在60℃下真空浓缩至原体积的1/6，100W超声20min后，10000rmp，5min离心取溶液加入4倍体积的无水乙醇，静置过夜；
(3)将步骤(2)中静置过夜后的溶液离心，8000rmp，5min离心取沉淀，然后加入120质量倍的水溶解，得到多糖溶液；
(4)将所得的多糖溶液加入占多糖溶液质量10％的氯化钾，剧烈振荡25min，5℃，10000r/min离心，取上清液；
(5)将步骤(4)中所得的上清液装入截留分子量为12000的透析袋中，透析48h，然后溶液冷冻干燥得白色絮状粉末0.09g，即为得到的泥鳅多糖。
样品在200nm处出现多糖特征吸收峰，在260-280nm处有吸收峰。说明提取得到的泥鳅多糖中无蛋白和核酸等杂质。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (1)
1.一种泥鳅多糖的提取方法，其特征在于，按照如下步骤进行：
(1)将鲜活泥鳅用蒸馏水浸没，于低温环境下暂养，过滤收集滤液，得到泥鳅黏液；所述低温的温度为4-6℃；所述暂养时间为8-16h，过滤所用为2-6层纱布；
(2)将步骤(1)中所得的泥鳅黏液真空浓缩至原体积的1/5-1/10后，并辅以超声波辅助提取，离心取溶液加入3-5倍体积的无水乙醇，静置过夜；所述的浓缩采用60-80℃下旋蒸的方式浓缩，超声波的功率为80-120W，时间为10-30min；
(3)将步骤(2)中静置过夜后的溶液离心，取离心所得固体物质，然后将加水复溶，得到多糖溶液；所述的离心所得固体物质用100-150质量倍的水溶解；所述离心速率为8000-10000rmp，时间为3-8min；
(4)将步骤(3)中所得的多糖溶液加入占多糖溶液质量3-7％的酒石酸和3-7％的氯化钾，剧烈振荡20-30min，3-8℃，离心；所述离心速率为8000-10000rmp，时间为3-8min；
(5)将步骤(4)中所得的上清液装入截留分子量为8000-14000的透析袋中，透析30-60h，然后溶液冷冻干燥得白色絮状粉末，即为得到的泥鳅多糖。
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| KR102261998B1 (ko) * | 2020-12-29 | 2021-06-08 | 전라북도 남원시(남원시농업기술센터장) | 엿기름 전분분해효소를 이용한 미꾸리류 무환수 양식방법 |
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