CN114470027A - 复方板蓝根的新应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种复方板蓝根的新应用。本发明具体涉及一种复方板蓝根在制备防治新冠肺炎的药物中的应用,本发明首次发现复方板蓝根对于SARS‑CoV‑2病毒具有良好的抑制作用,可以用于防治新冠肺炎。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域,特别是涉及一种复方板蓝根的新应用。
背景技术
新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019,COVID-19),简称“新冠肺炎”,是由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus2,SARS-CoV-2)引起人肺炎的病毒性传染病。人感染了冠状病毒后常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等;严重者可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭,甚至死亡。这种新出现的传染病在世界各地迅速传播,截至2020年10月,全世界累计确诊已有4000多万例,造成100多万人死亡,COVID-19已成为一个严峻的公共卫生问题。因此,迫切需要开发安全有效的药物来治疗和预防COVID-19。
板蓝根与大青叶分别来源于十字花科植物菘蓝Isatis indigoticaFort.的根与叶,二者临床多同时配伍使用,临床用于热毒发斑、丹毒、咽喉肿痛、口舌生疮、疮痈肿毒等症。
复方板蓝根颗粒剂(标准编号WS3-B-2377-97)由板蓝根与大青叶按2∶3比例经水提、醇沉、浓缩制成,其作为一种传统清热解毒的典型代表,用于温病发热,出斑,风热感冒,咽喉肿烂,流行性乙型脑炎,肝炎,腮腺炎,其用量巨大,患者口碑良好,市场前景广阔。
发明内容
基于此,本发明的目的是提供一种复方板蓝根在制备防治新冠肺炎的药物中的新应用。
具体技术方案如下:
复方板蓝根在制备防治新冠肺炎的产品中的应用。
复方板蓝根在制备抗SARS-CoV-2病毒的产品中的应用。
在其中一些实施例中,所述复方板蓝根由包括板蓝根和大青叶的原料制备而成。
在其中一些实施例中,所述板蓝根和大青叶的质量比为(2±1):3,进一步为(2±0.5):3,更进一步为(2±0.2):3,更进一步为2:3。
在其中一些实施例中,所述复方板蓝根的制备包括:将板蓝根和大青叶用水煎煮,将所得煎煮液浓缩,再加入乙醇,过滤,再将滤液浓缩。
在其中一些实施例中,所述复方板蓝根的制备包括:将板蓝根和大青叶加水煎煮二次,每次1±0.5小时,滤过,合并滤液,将所得滤液浓缩,加入(3±1)倍量乙醇,静置(24±5)小时,滤过,取滤液浓缩至稠膏状。
在其中一些实施例中,所述产品为药品、功能性食品或保健品。
在其中一些实施例中,所述复方板蓝根的剂型为颗粒剂或片剂。
在其中一些实施例中,所述复方板蓝根的剂型为胶囊剂或丸剂。
在其中一些实施例中,所述复方板蓝根的剂型为口服液、茶剂或注射剂。
本发明的另一目的是提供一种防治新冠肺炎的药物,其活性成分包括复方板蓝根,以及包括其他防治新冠肺炎的药物。
本发明的另一目的是提供一种复方板蓝根在制备抑制SARS-CoV-2病毒引起的炎症反应的产品中的应用。
在其中一些实施例中,所述产品为药品、功能性食品或保健品。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
本发明的发明人首次发现复方板蓝根对于SARS-CoV-2病毒具有良好的抑制作用,复方板蓝根可以显著下调SARS-CoV-2病毒感染引发的细胞中TNF-α、IL-6、MCP-1、IL-1β、IP-10炎症介质的过度表达,可以用于防治新冠肺炎。
附图说明
图1为复方板蓝根对新型冠状病毒的药效检测结果;
图2为不同分组Huh-7细胞中IL-1β的表达;
图3为不同分组Huh-7细胞中TNF-α的表达;
图4为不同分组Huh-7细胞中IP-10的表达;
图5为不同分组Huh-7细胞中MCP-1的表达;
图6为不同分组Huh-7细胞中IL-6的表达;
其中,##:与空白对照组相比,P<0.01;*:与病毒对照组相比,P<0.05;**:与病毒对照组相比,P<0.01。
具体实施方式
本发明下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂,均为市售产品。
除非另有定义,本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的,不用于限制本发明。
本发明的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形,意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列出的步骤或模块,而是可选地还包括没有列出的步骤,或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤。
在本发明中提及的“多个”是指两个或两个以上。“和/或”,描述关联对象的关联关系,表示可以存在三种关系,例如,A和/或B,可以表示:单独存在A,同时存在A和B,单独存在B这三种情况。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。
以下结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明。
(一)复方板蓝根效果验证试验
一、试验材料
1.受试药物:1种,复方板蓝根颗粒(流浸膏(即:稠膏状浓缩物),1mL相当于生药5.05g;广州白云山和记黄埔中药有限公司按照编号WS3-2377-97标准生产)。
2.细胞:VeroE6细胞,由广州呼吸健康研究院呼吸疾病国家重点实验室病毒室保存。
3.病毒:SARS-CoV-2,滴度为TCID50=10-6/100μL,由广州海关技术中心BSL-3实验室(呼吸疾病国家重点实验室高致病病原微生物研究室)-80℃保存。使用病毒滴度为100TCID50。
二、实验方法
(一)受试药物抗病毒实验
(1)受试药物:
表1:药物名称、实验浓度和分组
(2)无菌96孔培养板,每孔加入100μL浓度为2×105cells/mL VeroE6细胞,37℃5%CO2培养24小时;
(3)培养板实验组和病毒对照组加入100TCID50病毒液100μL/孔,37℃,5%CO2培养箱吸附2h;
(4)2h后,弃去96孔培养板中细胞培养液;受试药物稀释成表1中的各个浓度,每个浓度3个复孔,100μl/孔加入上述药液;
(5)同时设立细胞对照、空白对照(溶剂对照)和病毒对照(阴性对照);
(6)细胞37℃,5%C02孵箱孵育3-4天;
(7)光学显微镜下观察细胞病变(CPE),细胞出现病变程度按以下6级标准记录:“-”无病变出现;“±”为细胞病变少于10%;“+”为细胞病变约25%;“++”为细胞病变约50%;“+++”为约75%的细胞出现病变;“++++”为75%以上病变。采用Reed-Muench法或GraphPad Prism5.0计算半数有效浓度(IC50)。判断药效标准:具有50%的抑制病毒CPE的浓度视为有效浓度。
(8)实验条件:以上实验操作均在BSL-3实验室内完成。
三、实验结果
通过观察细胞病变(CPE)并记录实验结果,采用Reed-Muench法或GraphPadPrism5.0计算半数有效浓度(IC50)。
四、结论
实验结果如表2和图1所示,结果表明复方板蓝根在最大无毒浓度1:200稀释时,对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染Vero E6细胞致细胞病变有抑制作用,IC50为复方板蓝根颗粒稀释372.4倍的浓度。
表2复方板蓝根抗新型冠状病毒药效结果
药物浓度(稀释倍数) | 抑制率(%) |
200 | 78.33±2.89 |
400 | 45.00±8.66 |
800 | 20.00±8.66 |
1600 | 3.33±2.89 |
(二)复方板蓝根颗粒体外抑制新型冠状病毒(SARS-CoV-2)致过激炎症应答药效评价
一、实验材料:
1.受试药物:1种,复方板蓝根颗粒(流浸膏,1mL相当于生药5.05g;广州白云山和记黄埔中药有限公司按照编号WS3-2377-97标准生产)。
2.细胞:Huh-7细胞,由广州呼吸健康研究院呼吸疾病国家重点实验室病毒室保存。
3.病毒:SARS-CoV-2,滴度为TCID50=10-6/100μL,由广州海关技术中心BSL-3实验室(呼吸疾病国家重点实验室高致病病原微生物研究室)-80℃保存。使用病毒滴度为MOI=1。
二、实验方法:
(一)受试药物抑制病毒致过激炎症应答实验
(1)受试药物:
表3:药物名称、实验浓度和分组
(2)无菌96孔培养板,每孔加入100μL浓度为2×105cells/mL Huh-7细胞,37℃5%CO2培养24小时;
(3)培养板实验组和病毒对照组加入MOI=1的病毒液100μL/孔,37℃5%CO2培养箱吸附2h;
(4)2h后,弃去96孔培养板中细胞培养液;受试药物稀释成表3中的各个浓度(150、300、600μg生药/mL),每个浓度3个复孔,100μl/孔加入上述药液,作为实验组;
(5)同时设立空白对照(溶剂对照)和病毒对照(阴性对照);
(6)细胞37℃,5%CO2孵箱孵育48h;
(7)采用试剂盒提取各细胞的总RNA并反转录,利用QPCR方法检测细胞中TNF-α、IL-6、MCP-1、IL-1β、IP-10和GAPDH(内参)基因的表达情况。
(8)实验条件:以上实验操作均在BSL-3实验室内完成。
三、实验结果
采用SPSS软件对上述数据进行显著性差异分析(Tukey's honest significantdifference test)。
四、结论
新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染引发过激炎症应答,是新冠肺炎造成肺损伤的主要原因之一,在细胞模型中具体可表现为多种炎症介质表达的显著上调。复方板蓝根颗粒干预结果表明(具体如图2-6所示),复方板蓝根在不同剂量下可显著下调新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染引发的细胞中TNF-α、IL-6、MCP-1、IL-1β、IP-10炎症介质的过度表达,说明复方板蓝根颗粒具有抑制新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染引发的过激炎症应答作用,提示临床使用可能具有减少新冠肺炎致肺损伤的药效。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,只要这些技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.复方板蓝根在制备防治新冠肺炎的产品中的应用。
2.复方板蓝根在制备抗SARS-CoV-2病毒的产品中的应用。
3.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于,所述复方板蓝根由包括板蓝根和大青叶的原料制备而成。
4.根据权利要求1~3任一项所述的应用,其特征在于,所述产品为药品、功能性食品或保健品。
5.根据权利要求1~3任一项所述的应用,其特征在于,所述复方板蓝根的剂型为颗粒剂。
6.根据权利要求1~3任一项所述的应用,其特征在于,所述复方板蓝根的剂型为片剂。
7.根据权利要求1~3任一项所述的应用,其特征在于,所述复方板蓝根的剂型为胶囊剂或丸剂。
8.根据权利要求1~3任一项所述的应用,其特征在于,所述复方板蓝根的剂型为口服液、茶剂或注射剂。
9.一种防治新冠肺炎的药物,其特征在于,其活性成分包括复方板蓝根,以及包括其他防治新冠肺炎的药物。
10.复方板蓝根在制备抑制SARS-CoV-2病毒引起的炎症反应的产品中的应用。
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CN111110819A (zh) * | 2020-02-22 | 2020-05-08 | 梁力 | 治疗或预防新型冠状病毒肺炎、病毒性流感的中药配方 |
CN111298049A (zh) * | 2020-04-22 | 2020-06-19 | 南昌大学第一附属医院 | 一种治疗新型冠状病毒肺炎的中药组合物及其应用 |
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2021
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