CN114467855A - 一种多病因气囊炎雏鸡模型的构建方法及其应用 - Google Patents
一种多病因气囊炎雏鸡模型的构建方法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114467855A CN114467855A CN202210046501.8A CN202210046501A CN114467855A CN 114467855 A CN114467855 A CN 114467855A CN 202210046501 A CN202210046501 A CN 202210046501A CN 114467855 A CN114467855 A CN 114467855A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- chick
- mycoplasma
- model
- construction method
- staphylococcus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000010276 construction Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims abstract description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims abstract description 12
- 241000711404 Avian avulavirus 1 Species 0.000 claims abstract description 22
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 claims abstract description 18
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 claims abstract description 11
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 13
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims description 11
- 241000204003 Mycoplasmatales Species 0.000 claims description 10
- 241000271566 Aves Species 0.000 claims description 9
- 241001545525 Mycoplasma gallisepticum S6 Species 0.000 claims description 7
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 6
- 241000204022 Mycoplasma gallisepticum Species 0.000 claims description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 5
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 claims description 5
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 claims description 4
- 239000007923 nasal drop Substances 0.000 claims description 2
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 claims 1
- 229940100662 nasal drops Drugs 0.000 claims 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 abstract description 11
- 238000010171 animal model Methods 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 abstract description 2
- 230000004796 pathophysiological change Effects 0.000 abstract description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 2
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 description 18
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 17
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 12
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 9
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 9
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 8
- 201000003146 cystitis Diseases 0.000 description 8
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 8
- 241000059485 Escherichia coli O78 Species 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 7
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 7
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 6
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 6
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 6
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 4
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 4
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 3
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- MCSXGCZMEPXKIW-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-4-[(4-methyl-2-nitrophenyl)diazenyl]-N-(3-nitrophenyl)naphthalene-2-carboxamide Chemical compound Cc1ccc(N=Nc2c(O)c(cc3ccccc23)C(=O)Nc2cccc(c2)[N+]([O-])=O)c(c1)[N+]([O-])=O MCSXGCZMEPXKIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 210000004712 air sac Anatomy 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 2
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000004879 turbidimetry Methods 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010013952 Dysphonia Diseases 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- VCUFZILGIRCDQQ-KRWDZBQOSA-N N-[[(5S)-2-oxo-3-(2-oxo-3H-1,3-benzoxazol-6-yl)-1,3-oxazolidin-5-yl]methyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C1O[C@H](CN1C1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1)CNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F VCUFZILGIRCDQQ-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010051867 Tracheal injury Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 210000003278 egg shell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 208000027498 hoarse voice Diseases 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- HQOJMTATBXYHNR-UHFFFAOYSA-M thallium(I) acetate Chemical compound [Tl+].CC([O-])=O HQOJMTATBXYHNR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/02—Breeding vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/0004—Screening or testing of compounds for diagnosis of disorders, assessment of conditions, e.g. renal clearance, gastric emptying, testing for diabetes, allergy, rheuma, pancreas functions
- A61K49/0008—Screening agents using (non-human) animal models or transgenic animal models or chimeric hosts, e.g. Alzheimer disease animal model, transgenic model for heart failure
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明属于动物模型构建技术领域，公开了一种多病因气囊炎雏鸡模型的构建方法及其应用。该构建方法为采用支原体、新城疫病毒和葡萄球菌对雏鸡进行接种，构建得到多病因气囊炎雏鸡模型。该构建方法操作简便，建模成功率高，模型构建效果良好，症状明显。该构建方法及其所构建的动物模型可用于研究疾病发病机制和病理生理学变化，而且可以用于治疗方案的筛选和优化，评估治疗方案的有效性和安全性。
Description
技术领域
本发明属于动物模型构建技术领域，尤其涉及一种多病因气囊炎雏鸡模型的构建方法及其应用。
背景技术
目前，在春秋季节高发，常以多种病原混合感染为特征的禽呼吸道疾病对养禽业造成了长期的困扰和阻碍。上述禽呼吸道疾病的主要特征包括气囊纤维素性渗出、气管栓塞等，该疾病不仅会导致动物生产性能下降，并且会造成极高的死亡率，严重制约养禽业的发展。
为了更好开展动物疾病感染机制研究、探索动物疾病治疗，需要构建科学可靠的动物感染疾病模型作为实验研究的材料和工具。然而，现有禽气囊炎模型的构建操作较为复杂，成功率较低，且不能产生典型的气管堵塞等病理变化或明显的呼吸道症状。因此，本发明希望提出一种操作更为简单，建模成功率高，死亡率低，且所构建气囊炎模型症状更为明显的多病因气囊炎模型构建方法。
发明内容
本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种多病因气囊炎雏鸡模型的构建方法。该构建方法操作简便，建模成功率高，模型构建效果良好，症状明显。该构建方法及其所构建的动物模型可用于研究疾病发病机制和病理生理学变化，而且可以用于治疗方案的筛选和优化，评估治疗方案的有效性和安全性。
本发明提供了一种多病因气囊炎雏鸡模型的构建方法，采用支原体、新城疫病毒和葡萄球菌对雏鸡进行接种，构建得到多病因气囊炎雏鸡模型。
本发明采用支原体、新城疫病毒和葡萄球菌等特定病原组合对雏鸡(0-50日龄)进行接种，能够得到气管栓塞和气囊炎症状十分明显的雏鸡模型，其建模效果好，成功率高。其中新城疫病毒是产生雏鸡多病因呼吸道疾病的重要病原，支原体是导致气管栓塞的重要病原，葡萄球菌是导致雏鸡气囊炎的重要病原。此外，本发明无需使用免疫抑制剂即可完成建模，操作简便，成本低廉，并可提高动物福利。
优选地，所述支原体和所述葡萄球菌的接种方式为滴鼻、点眼。
优选地，所述新城疫病毒的接种方式为气管注射。
优选地，所述支原体为鸡毒支原体，所述葡萄球菌为金黄色葡萄球菌。
更优选地，所述支原体为鸡毒支原体S6株，所述葡萄球菌为金黄色葡萄球菌CVCC1885，所述新城疫病毒为新城疫病毒Mukteswar株。
优选地，所述构建方法包括以下步骤：
(1)首先采用支原体和葡萄球菌的混合液对雏鸡进行接种；
(2)再使用新城疫病毒对雏鸡进行接种，构建得到多病因气囊炎雏鸡模型。
优选地，完成步骤(1)的接种后，间隔3-5天，再进行步骤(2)的接种。
更优选地，步骤(1)中所述接种的次数为：每天2-3次，持续接种3-4天。
进一步优选地，步骤(1)中所述接种的次数为：每天2次，持续接种3天。
更优选地，步骤(2)中所述接种的次数为：每天1次，持续接种1-2天。
进一步优选地，步骤(2)中所述接种的次数为：每天1次，接种1天。
本发明还提供了上述构建方法在禽呼吸道疾病研究中的应用。
相对于现有技术，本发明的有益效果如下：
(1)在本发明所述构建方法中，采用支原体和葡萄球菌混合液对雏鸡进行滴鼻、点眼的操作可实现免疫抑制的效果，无需额外使用如环磷酰胺等免疫抑制剂进行处理，可减少操作步骤和成本；
(2)本发明为了避免连续气管注射对动物的伤害及操作的复杂性，首先通过滴鼻、点眼方式接种支原体和葡萄球菌，再通过气管注射方式接种新城疫病毒，从而完成模型的构建，该构建方法具有操作简便、成本低廉且动物福利水平高的优势；
(3)采用本发明所述构建方法进行建模，在保证高建模成功率的同时降低了动物模型的死亡率，且所构建得到的模型具有明显气管栓塞和气囊炎的症状。
具体实施方式
为了让本领域技术人员更加清楚明白本发明所述技术方案，现列举以下实施例进行说明。需要指出的是，以下实施例仅为本发明的优选实施例，对本发明要求的保护范围不构成限制作用，任何未违背本发明的精神实质和原理下所做出的修改、替代、组合，均包含在本发明的保护范围内。
以下实施例和对比例中所用的原料、试剂或装置如无特殊说明，均可从常规商业途径得到，或者可以通过现有已知方法得到。以下鸡毒支原体S6株，禽致病性大肠杆菌O78株，金黄色葡萄球菌CVCC1885和新城疫病毒Mukteswar株均购自中国兽医微生物菌种保藏管理中心。
实施例1
本实施例提供一种多病因气囊炎雏鸡模型的构建方法，包括以下步骤：
1.进行鸡毒支原体S6株，金黄色葡萄球菌CVCC1885和新城疫病毒Mukteswar株的培养；鸡毒支原体S6株的培养
(1)配制培养基：分别吸取7.5mL胎牛血清、5mL酵母浸出液、0.5mL葡萄糖溶液、0.5mL醋酸铊溶液、0.25mL青霉素溶液、1mL酚红溶液于15mL无菌离心管中，混合均匀，调pH至7.8，过滤后，混入35mL PPLO液体培养基中，4℃保存备用。
(2)复苏：复苏鸡毒支原体冻干时，取一只装有支原体冻干粉的西林瓶，加入3mL培养基，吹打混匀，而后各吸取1mL菌液转移至3个装有4mL培养基的无菌15mL离心管内，用封口膜封口后，将离心管垂直放置在37℃，5％CO2培养箱中培养约72h，待培养基颜色由深红色变成橙黄色时，可作为种子液继续传代培养。
(3)传代培养：分别吸取4.5mL培养基于5个灭菌后的西林瓶中，每瓶加入0.5mL鸡毒支原体(MG)种子液。用封口膜封口后置于37℃，5％CO2培养箱中恒温培养。待培养基颜色由深红色变成橙黄色时，MG处于对数生长期，其活力最好，浓度最高，于4℃暂存备用。
(4)检测浓度：利用10倍稀释法将处于对数生长期的MG液体培养物用培养基稀释成1×10-1至1×10-12倍比稀释浓度(共12管，第13管为对照)，于37℃、5％CO2培养箱培养，以培养基由红色变为橙黄色时的最高稀释度作为颜色改变单位(CCU)，菌液浓度以CCU/mL计，并调整菌液浓度为5×109CCU/mL备用。
金黄色葡萄球菌CVCC1885的培养
(1)配置培养基：称取10g蛋白胨，10gNaCl，5g酵母提取物，置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解，滴加NaOH溶液，调节pH值至7.0，加入去离子水将培养基定容至1L，高温高压灭菌后，4℃保存备用。
(2)取2.5mL冻存的金黄色葡萄球菌CVCC1885溶液，室温融化后，按照1:100的比例加入上述培养基中，37℃过夜培养，用麦氏比浊法调节浓度至1×107CFU/mL，4℃保存备用。
葡萄球菌、支原体混合攻毒液的培养
按1:10将过夜培养后的葡萄球菌液接种于传代后培养24小时的支原体培养基中，置于37℃，5％CO2恒温培养箱中过夜培养，用麦氏比浊法调节浓度至1×109CFU/mL，4℃保存备用。
新城疫病毒Mukteswar株的培养
(1)选取8到9日龄的SPF鸡胚，用铅笔画出气室，标出接种点，接种点应选取鸡胚头部的对侧。
(2)配置接种用的病毒悬液，将已经测好血凝效价的新城疫病毒，用工作浓度的双抗稀释至血凝效价为2log2，37℃作用30min，用于清除病毒悬液中的细菌。
(3)用75％酒精消毒鸡胚表面，用开口器在选好的接种点开口，用注射器垂直插入鸡胚，一般接种200μL，注意不要插的过浅，要保证将病毒液注射到尿囊腔中，然后用蜡封住接种孔。
(4)将接种好的鸡胚放入37℃培养箱里培养，每日检测鸡胚，弃掉24h内死亡的鸡胚，24h内死亡的鸡胚不是由于病毒作用而死亡的，收集24h到72h内死亡的鸡胚，放到4℃，冰箱里30min以上。72h以后，无论鸡胚死亡与否，都将鸡胚放到4℃冰箱同样冷冻30min以上，也可以放置过夜。
(5)收获病毒时，消毒鸡胚气室表面，用镊子的另一端打破鸡胚气室上端，用无菌的镊子撕去蛋壳和卵膜，用无菌的枪头收集病毒液，对病毒液进行血凝效价测定，用PBS稀释至血凝效价为4log2，4℃保存备用。
2.挑选0日龄麻黄雏鸡K901，取上述葡萄球菌、支原体混合攻毒液0.4mL，通过滴鼻、点眼的接种方式感染雏鸡(每种接种方式各0.2mL)，持续3天，每天2次；
3.待雏鸡6日龄时，用0.2mL新城疫病毒Mukteswar株(血凝效价为4log2)通过气管注射的方式感染雏鸡1次；
4.待雏鸡9日龄时，即可观察到雏鸡较为严重的呼吸道症状，表现为张口呼吸，声音沙哑等临床症状，并出现以气管栓塞和气囊炎为代表的呼吸系统的临床病理变化。
对比例1
本对比例提供一种多病因气囊炎雏鸡模型的构建方法，采用鸡毒支原体S6株，禽致病性大肠杆菌O78株和新城疫病毒Mukteswar株对雏鸡进行接种。
与实施例1相比，本对比例的区别之处仅在于：采用禽致病性大肠杆菌O78株替代金黄色葡萄球菌CVCC1885，其余病原体培养方法、接种方式和次数均与实施例1相同。
其中，禽致病性大肠杆菌O78株的培养为：
(1)配置培养基：称取10g蛋白胨，10gNaCl，5g酵母提取物，置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解，滴加NaOH溶液，调节pH值至7.0，加入去离子水将培养基定容至1L，高温高压灭菌后，4℃保存备用。
(2)取2.5mL冻存的大肠杆菌溶液，室温融化后，按照1:100的比例加入上述培养基中，37℃过夜培养，用麦氏比浊法调节浓度至1×107CFU/mL，4℃保存备用。
对比例2
本对比例提供一种多病因气囊炎雏鸡模型的构建方法，采用金黄色葡萄球菌CVCC1885、禽致病性大肠杆菌O78株和新城疫病毒Mukteswar株对雏鸡进行接种。
与实施例1相比，本对比例的区别之处仅在于：采用禽致病性大肠杆菌O78株替代鸡毒支原体S6株，其余病原体培养方法、接种方式和次数均与实施例1相同。
其中，禽致病性大肠杆菌O78株的培养为：
(1)配置培养基：称取10g蛋白胨，10gNaCl，5g酵母提取物，置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解，滴加NaOH溶液，调节pH值至7.0，加入去离子水将培养基定容至1L，高温高压灭菌后，4℃保存备用。
(2)取2.5mL冻存的大肠杆菌溶液，室温融化后，按照1:100的比例加入上述培养基中，37℃过夜培养，用麦氏比浊仪调节浓度至1×107CFU/mL，4℃保存备用。
产品效果测试
利用气囊损伤评分系统(表1所示)和气管损伤评分系统(表2所示)对实施例1和对比例1-2所构建得到的模型动物进行评价，并设置空白对照组(即健康雏鸡组)，每组中模型动物各有10只，评价结果如表3所示。
表1气囊损伤评分系统
表2气管损伤评分系统
表3各组评分结果
| 组别 | 死亡率 | 发病率 | 气管评分 | 气囊评分 |
| 实施例1 | 0 | 60％ | 1.3<sup>a</sup> | 1.6<sup>a</sup> |
| 对比例1 | 10％ | 50％ | 1<sup>a</sup> | 1.7<sup>a</sup> |
| 对比例2 | 0 | 20％ | 0.2<sup>b</sup> | 0<sup>b</sup> |
| 空白对照 | 0 | 0 | 0<sup>b</sup> | 0<sup>b</sup> |
注:肩标字母代表差异极显著(P<0.01)
从表1-3可以看出，对比例2并不能构建得到具有明显气管栓塞和气囊炎症状的气囊炎雏鸡模型；而对比例1虽然所构建的模型表现出较明显的气管栓塞和气囊炎症状，但模型构建的成功率有所不足(仅50％)，且死亡率较高(10％)，难以满足模型建立的要求；而实施例1通过选用鸡毒支原体S6株，金黄色葡萄球菌CVCC1885和新城疫病毒Mukteswar株作为混合病原体，能够在保证高建模成功率的同时降低了动物模型的死亡率，且所构建得到的模型具有明显气管栓塞和气囊炎的症状。
上面对本申请实施例作了详细说明，但是本申请不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本申请宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本申请的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
Claims (10)
1.一种多病因气囊炎雏鸡模型的构建方法，其特征在于，采用支原体、新城疫病毒和葡萄球菌对雏鸡进行接种，构建得到多病因气囊炎雏鸡模型。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述支原体和所述葡萄球菌的接种方式为滴鼻、点眼。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述新城疫病毒的接种方式为气管注射。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述支原体为鸡毒支原体，所述葡萄球菌为金黄色葡萄球菌。
5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述支原体为鸡毒支原体S6株，所述葡萄球菌为金黄色葡萄球菌CVCC1885，所述新城疫病毒为新城疫病毒Mukteswar株。
6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：
(1)首先采用支原体和葡萄球菌的混合液对雏鸡进行接种；
(2)再使用新城疫病毒对雏鸡进行接种，构建得到多病因气囊炎雏鸡模型。
7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，完成步骤(1)的接种后，间隔3-5天，再进行步骤(2)的接种。
8.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中所述接种的次数为：每天2-3次，持续接种3-4天。
9.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中所述接种的次数为：每天1次，持续接种1-2天。
10.权利要求1-9中任一项所述的构建方法在禽呼吸道疾病研究中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210046501.8A CN114467855A (zh) | 2022-01-14 | 2022-01-14 | 一种多病因气囊炎雏鸡模型的构建方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210046501.8A CN114467855A (zh) | 2022-01-14 | 2022-01-14 | 一种多病因气囊炎雏鸡模型的构建方法及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114467855A true CN114467855A (zh) | 2022-05-13 |
Family
ID=81510974
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210046501.8A Pending CN114467855A (zh) | 2022-01-14 | 2022-01-14 | 一种多病因气囊炎雏鸡模型的构建方法及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114467855A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114752541A (zh) * | 2022-06-16 | 2022-07-15 | 佛山科学技术学院 | 鸡毒支原体感染鸡模型的构建方法及其应用 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020138864A1 (en) * | 1998-05-22 | 2002-09-26 | Jae Yong Han | Method for transfection of avian primordial germ cells |
| CN101317904A (zh) * | 2007-06-07 | 2008-12-10 | 何诚 | 乌梅提取物在抗畜禽病毒、细菌、支原体或衣原体的用途 |
| US20120064151A1 (en) * | 2009-05-14 | 2012-03-15 | Bayer Animal Health Gmbh | Enhanced immune response in avian species |
| CN103599533A (zh) * | 2013-09-23 | 2014-02-26 | 天津瑞普生物技术股份有限公司 | 一种鸡新城疫、传染性支气管炎二联三价活疫苗及制备方法 |
| CN110004249A (zh) * | 2019-03-14 | 2019-07-12 | 华南农业大学 | 一种鉴定新型鹅细小病毒的方法 |
| CN110305975A (zh) * | 2019-05-07 | 2019-10-08 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种快速检测鸡滑液囊支原体的rpa试剂盒及其用途 |
| CN112779193A (zh) * | 2021-02-24 | 2021-05-11 | 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 | 一株滑液囊支原体强毒株及其应用 |
-
2022
- 2022-01-14 CN CN202210046501.8A patent/CN114467855A/zh active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020138864A1 (en) * | 1998-05-22 | 2002-09-26 | Jae Yong Han | Method for transfection of avian primordial germ cells |
| CN101317904A (zh) * | 2007-06-07 | 2008-12-10 | 何诚 | 乌梅提取物在抗畜禽病毒、细菌、支原体或衣原体的用途 |
| US20120064151A1 (en) * | 2009-05-14 | 2012-03-15 | Bayer Animal Health Gmbh | Enhanced immune response in avian species |
| CN103599533A (zh) * | 2013-09-23 | 2014-02-26 | 天津瑞普生物技术股份有限公司 | 一种鸡新城疫、传染性支气管炎二联三价活疫苗及制备方法 |
| CN110004249A (zh) * | 2019-03-14 | 2019-07-12 | 华南农业大学 | 一种鉴定新型鹅细小病毒的方法 |
| CN110305975A (zh) * | 2019-05-07 | 2019-10-08 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种快速检测鸡滑液囊支原体的rpa试剂盒及其用途 |
| CN112779193A (zh) * | 2021-02-24 | 2021-05-11 | 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 | 一株滑液囊支原体强毒株及其应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 刘国辉: "肉杂鸡葡萄球菌与支原体病混合感染了", 《北方牧业》 * |
| 孟冬霞等: "鸡毒支原体感染病理模型复制", 《中国兽药杂志》 * |
| 宋金祥等, 河北科学技术出版社 * |
| 阎继业: "《畜禽药物手册》", 30 November 2007, 金盾出版社 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114752541A (zh) * | 2022-06-16 | 2022-07-15 | 佛山科学技术学院 | 鸡毒支原体感染鸡模型的构建方法及其应用 |
| CN114752541B (zh) * | 2022-06-16 | 2022-09-13 | 佛山科学技术学院 | 鸡毒支原体感染鸡模型的构建方法及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Yoder et al. | Characterization of avian Mycoplasma | |
| CN106906159B (zh) | 一种猪肺炎支原体培养基及其制备方法 | |
| CN102220287B (zh) | 鸡传染性支气管炎冷适应致弱疫苗株及其应用 | |
| CN112779193B (zh) | 一株滑液囊支原体强毒株及其应用 | |
| CN103849632B (zh) | 鸡传染性支气管炎弱毒株s1基因及其弱毒株和应用 | |
| CN106947746B (zh) | 鸡传染性支气管炎致弱疫苗株ldl-t株及其应用 | |
| CN108992674B (zh) | 一种耐热保护剂及其应用 | |
| CN103060220A (zh) | 一种低血清高效培养猪肺炎支原体培养基及其制备方法 | |
| Cookson et al. | Mycoplasma gallisepticum infection in chukar partridges, pheasants, and peafowl | |
| CN114467855A (zh) | 一种多病因气囊炎雏鸡模型的构建方法及其应用 | |
| Power et al. | A comparison of the virulence of three strains of Mycoplasma gallisepticum and one strain of Mycoplasma gallinarum in chicks, turkey poults, tracheal organ cultures and embryonated fowl eggs | |
| CN109055255B (zh) | 猪肺炎支原体培养基及制备方法和其在疫苗中的应用 | |
| Chandiramani et al. | Viability studies with Mycoplasma gallisepticum under different environmental conditions | |
| CN103784951B (zh) | 预防和治疗猪的继发感染的呼吸系统疾病的抗原组合物及其制备方法和应用 | |
| CN102166355B (zh) | 一种用于预防鸡疾病的四联灭活疫苗 | |
| CN109055320B (zh) | 一株传染性支气管炎病毒分离株及在疫苗制备中的应用 | |
| CN113122509B (zh) | 传染性喉气管炎病毒强毒株及其应用 | |
| CN110819599B (zh) | 一种预防台湾型传染性支气管炎的疫苗株 | |
| CN111110839B (zh) | 一种预防雏鹅痛风的鹅星状病毒二价灭活疫苗 | |
| CN1724068A (zh) | 禽霍乱强化灭活疫苗的制备方法 | |
| Panigraphy et al. | Candidiasis in cockatiel nestlings and mucormycosis in a pigeon | |
| CN112646750A (zh) | 一种血清18型鸭疫里默氏杆菌及应用 | |
| CN101716342A (zh) | 鸡新城疫、传染性支气管炎二联灭活疫苗及其制造方法 | |
| CN103667115A (zh) | 副鸡嗜血杆菌的培养方法 | |
| CN114940955B (zh) | 一种鸡毒支原体弱毒疫苗株及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20220513 |