实施例3 TW I型鸡传染性支气管炎弱毒疫苗的制备
取弱毒疫苗株(LDL-T株),培养条件恢复至37℃,增殖生产用毒种,用灭菌PBS稀释10万倍,接种9日龄SPF鸡胚尿囊腔,每胚接种0.1ml,接种后密封针孔,置37℃孵育。鸡胚接种24小时照胚,弃去死胚,将于37℃条件下孵育36-72小时的鸡胚气室向上,置于4℃冷却24小时。收获病毒尿囊液,将若干个鸡胚尿囊液混合为一组,置灭菌瓶中,在2-8℃保存,同时做无菌检验,同时测得病毒含量应≥106.0EID50/0.1ml。
经无菌检验和病毒含量测定合格的病毒尿囊液混合后再与蔗糖明胶保护剂按8.5:1(病毒液:保护剂)配苗,冻干保护剂以40℃-50℃为宜(8%明胶、40%蔗糖保护剂,经115℃高压灭菌40分钟,放4℃保存,72小时内用完)。在添加过程中应不断摇动病毒液,充分混合均匀后,即为疫苗原液。将疫苗原液无菌定量分装,迅速冷冻真空干燥,加盖密封。
实验例4毒株制备疫苗(LDL-T株)的免疫效力验证
1实验材料
试验用疫苗:按照实施例3的方法分3个批次制备疫苗,批号分别为:201601、201602、201603。1000羽份/瓶。疫苗保存条件及有效期:-20℃保存,有效期为12个月。
用法与用量 按瓶签标注羽份用生理盐水稀释,用滴管吸取疫苗,每只鸡滴鼻一滴(约0.03~0.05ml)。
2实验方法
将1~3组5日龄SPF雏鸡分别接种3批次疫苗,每只滴鼻接种1个使用剂量(约0.03~0.05ml)。第4组5日龄SPF鸡每只滴鼻一滴灭菌生理盐水。免疫后20日,4组鸡滴鼻方法攻击ck/CH/LDL/140520P2(106EID50)株强毒,攻毒后5天每组随机采集10个咽拭子,同时持续观察各组鸡临床表现,记录发病和死亡情况。经处理后的咽拭子接种9日龄SPF鸡胚,根据鸡胚感染情况并结合RT-PCR方法判定免疫和非免疫鸡感染强毒后病毒分泌情况。
3实验结果
各批疫苗免疫组免疫20日后,以强毒攻击,其中生理盐水对照组全部发病,均出现甩头、精神萎靡,羽毛松乱等传染性支气管炎临床症状,在观察期内有9/10发病,其中4/10死亡,解剖发现均有肾脏肿大,“花斑肾”特异病变。而疫苗免疫组均正常。通过检测攻强毒后5d采集的咽拭子,结果其中201602批次免疫组10只咽拭子中有1只阳性,其他两批次均未检测出IBV病毒,而对照组鸡咽拭子的检测结果均为阳性,表明LDL-T作为疫苗免疫鸡后能够对同源强毒产生良好的免疫保护反应。详细结果见表5。
表5鸡传染性支气管炎活疫苗主动免疫效力试验数据
4结论
结果表明,本发明毒株LDL-T株制备成活疫苗主动免疫保护率达到90%,说明本发明毒株对鸡传染性支气管炎具有良好的保护效力。
实验例5 LDL-T株制备疫苗的安全性验证
1实验材料
试验用疫苗:按照实施例4所描述的3个批次疫苗201601、201602、201603批次,1000羽份/瓶。疫苗保存条件及有效期:-20℃保存,有效期为12个月。
用法与用量 按瓶签标注羽份用生理盐水进行适当稀释,用滴管吸取疫苗,每只鸡滴鼻途径接种。
2实验方法
2.1单剂量接种试验
单剂量接种安全试验用5日龄雏鸡,每批疫苗使用10只,另设对照组鸡10只,试验组滴鼻接种疫苗1羽份,对照组滴鼻等量的生理盐水,观察20日;剖检,观察是否出现鸡传染性支气管炎特异病变如:部分发病鸡气管、鼻窦内有浆液性或卡他性分泌物,或肾脏出现肿胀,出现典型的“花斑肾”变化。
2.2单剂量重复接种试验
单剂量重复接种安全试验用5日龄雏鸡,每批疫苗使用10只,另设对照组鸡同单剂量接种试验对照鸡,试验组滴鼻接种疫苗1羽份,每只鸡于14天后重复滴鼻接种相同剂量的疫苗,观察20日;剖检,观察是否出现鸡传染性支气管炎特异病变。
2.3大剂量接种组试验
大剂量接种试验用5日龄SPF雏鸡,每批疫苗使用10只,将疫苗稀释至10羽份/0.1ml的剂量,试验组滴鼻接种稀释好的疫苗0.1ml,同单剂量接种试验对照鸡,观察20日。剖检,观察是否出现鸡传染性支气管炎特异病变。
3实验结果
从SPF雏鸡单剂量接种试验、单剂量重复接种试验、大剂量试验结果来看,本发明毒株制备的鸡传染性支气管炎活疫苗对5日龄的SPF雏鸡安全可靠,生理活动正常,剖检无传染性支气管炎特异病变;证明了该疫苗对小日龄鸡也是安全可靠的,鸡的采食、饮水、日常活动不受影响。试验组和对照组试验数据无明显差异。试验数据详见表7、表8和表9。
表7鸡传染性支气管炎活疫苗雏鸡单剂量接种安全试验
表8鸡传染性支气管炎活疫苗雏鸡单剂量重复接种安全试验
表9鸡传染性支气管炎活疫苗雏鸡大剂量安全试验
4实验结论
4.1本发明毒株LDL-T株制备的鸡传染性支气管炎活疫苗对雏鸡是安全的。
实验例6 LDL-T株制备的鸡传染性支气管炎活疫苗免疫持续期实验
1材料和方法
1.1疫苗 按照实施例4所述的鸡传染性支气管炎活疫苗:批号为201601。
1.2试验用鸡 5日龄SPF雏鸡。
1.3攻击用强毒 ck/CH/LDL/140520P2株强毒(106.0EID50/0.1ml)由哈尔滨兽医研究所分离、鉴定、保存和供应。
1.4实验动物分组 5日龄SPF雏鸡120只,随机分为12组,其中免疫组6组,对照组6组。
1.5免疫 用疫苗免疫5日龄其中6组SPF雏鸡60只,作为免疫组。免疫组免疫疫苗的剂量为一个羽份,对照组鸡滴鼻0.1ml生理盐水。
1.6不同时期免疫保护检测 6组免疫鸡分别于免疫后第30、60、90、120、150和180天分别进行攻毒试验,在不同时间分别与一组对照鸡10只滴鼻方法攻击106.0EID50的ck/CH/LDL/140520P2株强毒,分别观察20日,记录发病情况,统计结果,同时于攻毒后5天每组采集咽拭子,经处理后的咽拭子接种9日龄SPF鸡胚,根据鸡胚感染情况并结合RT-PCR方法判定免疫和非免疫鸡感染强毒后病毒分泌情况。评价疫苗免疫提供的免疫持续期。
2实验结果
2.1临床保护持续期 如表13所示,201601批次疫苗以1羽份的剂量免疫雏鸡后疫苗免疫后30~180天临床发病率均维持在8/10以上,免疫后180天临床保护下降至8/10。
2.2攻毒后咽拭子病毒分泌保护率 如表13所示,免疫后第30、60、90、120、150和180天通过攻毒发现,免疫组在免疫后30~180天攻毒保护率达到8/10以上,但是免疫后180天已经将保护值降低至8/10。
表13免疫持续期雏鸡攻毒保护结果(201601批次)
3实验结论鉴于本发明毒株制备的疫苗免疫后临床保护和呼吸道分泌病毒保护率均保持在8/10及以上,可见本发明毒株制备疫苗免疫持续期至少可达5个月。
实验例7本发明母本毒株TWI型传染性支气管炎病毒的鉴定
2014年5月,在辽宁省大连市某养鸡场采集病料样本,通过接种SPF鸡胚分离到一株疑似鸡传染性支气管炎病毒,通过对致SPF鸡胚病变特征、病毒对鸡外周血红细胞凝集特性、病毒粒子形态学特征、对SPF鸡致病性及死亡率、基因特征等方面的研究,结果发现分离的病毒为鸡传染性支气管炎病毒;可致鸡胚生长发育障碍(侏儒胚)、胚体严重卷曲;病毒尿囊液不凝集鸡的外周血红细胞;在电镜下呈典型的冠状病毒粒子的形态特征;将病毒通过滴鼻途径接种1、5、15日龄SPF雏鸡,同时设未攻毒对照组,在攻毒后第3-14天,攻毒组出现萎靡、死亡临床症状,发病率100%,死亡率30-70%,死亡鸡呈现典型的“花斑肾”。攻毒后的康复母鸡持续养殖,在5月龄时剖杀发现母鸡中1/3-3/5出现典型的输卵管发育不全,输卵管水样化,成为“假母鸡”。以上结果表明鸡传染性支气管炎病毒ck/CH/LDL/140520是我国流行的一种既能造成肾脏严重损伤而致死的肾型传染性支气管炎病毒类型,而且能够导致存货母鸡产蛋性能的明显损伤,也成为一种重要的输卵管型传染性支气管炎病毒。
在此基础上,用RT-PCR方法对ck/CH/LDL/140520株全基因组进行了进行了克隆、测序和分析,该毒株基因全长约为27851bp,基因组组成为5′-UTR-ORF1-S-ORF3-M-ORF5-N-UTR-3′,符合IBV基因组特征;并对筛选的代表不同类型毒株的免疫原基因S1基因进行亲缘关系对比(如表14-15),同时绘制了系统发育进化树(如表16),确证了该毒株为传染性支气管炎病毒,免疫原基因S1与其他毒株的核苷酸及氨基酸的同源性均在95%以下,而与台湾地区分离的TW I型毒株同源性达到97.4%和98.5%。基于以上发现,筛选出代表不同基因型的传染性支气管炎病毒株进行遗传进化分析,结果表明我们分离的ck/CH/LDL/140520株传染性支气管炎病毒株为TW I型毒株,是我国大陆流行的新的基因型毒株,而且近年来流行形势严峻,逐渐呈现出传染性支气管炎病毒主导流行毒株类型。
表14不同基因型的传染性支气管炎病毒株
“a”表示病毒分离的国家(省)
表15不同基因型的传染性支气管炎病毒株核酸和氨基酸亲缘关系
*病毒S基因的前端1632bp大小的核苷酸对比,始于AUG翻译起始密码子
为了明确现有商品化疫苗对该类型毒株的防控效果以及该类型毒株在抗原性上与现有流行毒株的关系,将ck/CH/LDL/140520株与现有商品化疫苗毒株以及我国以往主要流行的毒株进行血清交叉中和试验,结果显示ck/CH/LDL/140520株(nrTW I)与LDT3有部分交叉反应之外,与其他类型的疫苗株和野毒株无交叉反应,说明该类型毒株与其他类型毒株在抗原性上差异明显(如表16)。
同时,利用我国现有商品化疫苗以及本实验室致弱的QX型弱毒株进行动物免疫试验,于免后20天攻击ck/CH/LDL/140520株强毒,同时在攻毒后采集咽拭子,在临床观察和病毒分泌检测两方面评价不同疫苗或弱毒株对TW I型强毒株的免疫效力,结果表明现有的商品化疫苗以及致弱的QX型弱毒株均不能对TW I型强毒株提供良好的交叉保护(如表17)。这便给免疫防控该类型毒株的感染提出了新的挑战,也提示针对该类型毒株研发新型疫苗毒株的必要性和紧迫性,本发明正是基于该研究基础,利用分离的ck/CH/LDL/140520株强毒通过实验室建立和优化的连续梯度冷适应致弱技术培育在75代即培育成针对TW I型强毒株的弱毒疫苗株。
表16 TW I型毒株(ck/CH/LDL/140520)与其他类型毒株抗原交叉中和实验结果
“-”表示未测定;“a”表示血清中和滴度
表17不同类型疫苗对ck/CH/LDL/140520强毒攻击的免疫保护情况
表18 ck/CH/LDL/140520强毒株(P1代)与通过梯度冷适应致弱后LDL-T株(P75代)的基因组核苷酸和氨基酸的对比
虽然本发明已以较佳实施例公开如上,但其并非用以限定本发明,任何熟悉此技术的人,在不脱离本发明的精神和范围内,都可做各种的改动与修饰,因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
SEQUENCE LISTING
<110> 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
<120> 鸡传染性支气管炎致弱疫苗株LDL-T株及其应用
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 27851
<212> DNA
<213> 传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus)
<400> 1
actgaaaata gatattatta tatatctatt acactagcct tgcgctagat tttcaactta 60
acaaaacgga cttaaatacc tacagctggt ccctctaggt gttccattgc agtgcacttt 120
agtgccctgg atggcacctg gccacctgtc aggttttagt tattaaataa tattgttgct 180
agtatcactg cttgttttgt tgtgtctcac tttattacat ccgttgcttg ggctacctag 240
tgccagcgtc ctgcaggcgc cgtggtcggt tcgagtgcga agaacctctg gttcatctag 300
cggtacgcgg gtgtgtggaa gtagcacttc agaggtacgt tctgttgtgt gaaacacggg 360
gtcacctccc cccacattcc tctaagggct tttgagccta gcgttgggct acgttctcgc 420
acaaggtcgg ctatacgacg gttgtagggg gtagtgccga acaacccctg aggtgacagg 480
ttctggtggt gtttagtgag cagacataca atagacagtg acaacatggc ttcaagccta 540
aaacagggag tatcttccca aaaccagagg aatgtaattc ttgttgccaa agacattccc 600
gaccaactct gtgacgcttt gttcttctat acgtcacaca acccaaaaga ttacgctgat 660
gctttcgcct ttaggcagaa gttcgaccgt agtctcggtg ctgggaaaca gtttaaattt 720
gaaactgtgt gtggtccatt ctttttgaag ggagtggata aaataacacc aggagtccca 780
gccaaagtta taaaagccac ttcaaagttg gctgatttag aagacatctt tggtgtctca 840
cctcttgcac ggaaataccg tgaactcctg aaaacagcat gccattggtc tctcactgta 900
gaagcgctgg aggctcgtgc acaaactctt gaagaaatct ttgaaccaac tgaaatattt 960
tggcttcaag tggctgcaaa ggttcaggtt tcagccatgg caatgcgcag gcttgttggt1020
gaggttattg caaaagtcat ggactcactt ggctcaaatt tgagcgctct attccaagtt1080
gttaaggaaa caatgaccag aatctttcaa aaggccctgg ccatttttga gagtgtgagt1140
gaattgccac agcgtattgc tgcacttaag atggcttttg tcaagtgtgc aagatcaatt1200
acagttgtgg ttgttggaca tgccctcact attagagagt ttgctggaac ttgtcttgca1260
agcattaatg gtgcagttgc aaaattcttt gaagaacttc caactggctt tatgggcgct1320
aaggtctttt caactcttgc cttctttaaa gaagcagcag taaagattgt agaaaatata1380
ccaaacgcgc caagaggtac taaaggtttt gaagtcgttg gcaatgccaa aggtacacaa1440
gttgttgtcc gtggcatgcg aaatgactta actctgcttg accaaaaagc tgaagttcct1500
gtggaatcag aaggttggtc tgcaattttg gagggacatc tttgctatgt ctttaagagt1560
ggtgatcgtt tttatgcagc acctctttca ggaaattttg cattgcatga tgtgcattgc1620
tgtgagcgtg tagtctgtct gtctgatggt gtaacaccgg agataaatga tgggcttgtt1680
cttgctgcaa tttactcatc ttttagtgtt tcggaacttg tggcagcact taaaaaaggt1740
gaaccattta agttcttggg gcacaaattt gtctatgcga aggaagcggc agtttctttc1800
accttggcaa aagcagcaac cattggagat gtcctgaagc tgtttcaatc agcaagagta1860
aagacgaaag atgtgtggtc tgcacttact gaacagtctt tcgaattctg gaaacttgcg1920
tacaatagag tgcgcaatct tgaagaattc ctgaagactc atttttgtaa agctcaaatg1980
tcaattgtgg tcctagcagc agtgcttggt gagggcattt ggcatctctg ttcgcaagtc2040
atttataaat tgagtggcct gttttccaaa gtcgttgact tctgtgaaaa acactggaaa2100
ggtttctgca cgcagttgcg aaaagttagg cttgttgtta cagaaaacct ttgtgtgttg2160
aaaggaattg ctcagcattg ttttcaactt ttgctggaag cactacactt tatgtacaag2220
agttttaaga aatgtgcact tggtagactt tctggggatt tatttttctg gaaaggcggt2280
gtgcataaaa ttgtgcagga tggcgatgaa atttggtttg acgccattga tacgattgaa2340
gttgaagatc tgggtattgt ccaagaaaaa cctatagatt ttgaggtttg tgaagatgtg2400
atacttccag aaaatcaacc tggccacatg gttcaaatcc aggatgacgg aaagaactat2460
atgttcttcc gtttcaagaa ggatgagaac atttattata caccaatgtc acaacttggt2520
gctattaatg ttatttgcaa agcgggtggc aagactgtca cgtttggtga aacaactgta2580
aaggaaatac catcacctga tgttgtgcct attaaggtaa gcattgagtg ctgtggtgaa2640
ccatggaata caatcttcaa gaaggcttat aaagagccca ttgaagttga gactgacctc2700
acagtagaac aactgctcac tgtgatctat gataaaatgt gtgaagatct caaattgttt2760
ccagaggcac cagaacctcc accatttgag aatgtcgcac ttgttgataa aaacggtaaa2820
gatctggatt gcataaaatc atgccacctc atttaccgtg attatgagag cgatgatgac2880
atcgaggaag acgatgctga ggagtgtgat acagatccag ctgatgctga ggaatgtgat2940
actgcttcag agtgtgaaca agaagatgag gatacaaagg tgctgtctct tttgcaagac3000
ccagccagta acaagtatcc tctacctctt gatgatgatt atagtgtcta taatggatgt3060
attgttcata atgacgctct agatgttgtt aatttaccat ctggtgaaga aacttttgtt3120
gtcaataact gtttcgaagg ggctgtgaaa ccgcttccgc agaaggttgt tgatgttcta3180
ggagattggg gagaggccgt tgatgcacaa gaacaattgt gtgaacaaga gtctgaatct3240
gttaaagaac cagttgagaa acctactggt attggtggtt cagcaattga agaagctgtt3300
gtcgtagagc aggaagtggt tcctgttgtt gaagagtctc aagaagtagt tgtttttaca3360
tctgctgatt tagaagttgc taaagaaaca ccagaggatg ttgacgagtt tgttcttatt3420
gctgatgttc ctacagaaga agttgtgcct caagaaaaag aagagccaca agtagaacag3480
gagcctattc aagttgtcaa atcacaacgt gagaaaaagg ctaaaaagtt caaagtcagg3540
caaaccacat gtgaaaaacc caaattcttg gagtacacaa catgtgtagg tgatttgacc3600
gttgtaattg ccaaagcatt ggatgaattt aaagagttct gcgttgttaa cgctgcaaat3660
gagtatatgt ctcatggtgg tggcgttgcg aaggcaattg ctgacttttg tggacctgat3720
tttgtggaat attgtgagga ctatgttaag aaacatgggc cacaacaaag acttgtcaca3780
ccttcatatg tcaaaggcat tcaatgtgtg aataatgttg taggaccccg ccatggtgac3840
aaagatttgg aagaaaaact tgtcgctgcc tacaagaatg ttcttgtaga tggtgtggtc3900
aattatgttg tgccagttct ctcatcggga atttttggtg tagattttaa aatctcaata3960
gacgcgatgc gtaaggcctt tgaagggctt aacatacgcg tgcttctttt ttctctgagt4020
caagaacaca ttgagtattt cgatgcaact tgtaagcaga agaaaattta tcttacagaa4080
gatggtgtta aataccgctc tgttgtattg aaacctggcg actctttggg tcaatttggt4140
caggtttttg caaagaacaa gacagttttt acagcggatg atgttgagga cgaagaagtt4200
cttttcactc caacaactga caaagctgtt cttgaatact atggattgga tgcgcaaaag4260
tatgtaatat atttgcaaac actcgcgcag aaatgggaag tccaatatag ggacaatttt4320
atcttactta aatggcgtga cggaaactgc tggattagtt cagctatagt gctccttcag4380
gctgctaaga ttaggtttag aggtttcctt gcagaggcat gggctaaatt cttgggtgga4440
gaccctacgg attttgttgc ttggtgctat gcaagttgca atgctaaagt tggtgatttt4500
tcagactgca attggctttt ggctaacttg gcagaacact ttgatgcaga ttacacaaat4560
gcactgctta agaagcgtgt gtcgtgtaac tgtggtgtta agagttatga acttagaggc4620
cttgaagctt gtattcaacc agtaagggct cctaaccttc tacattttaa gacgcaatac4680
tcaaattgtc caacttgtgg tacaaatagt atggatgaag ttgttgaagc atcactccca4740
tacttgttgc ttgttgctac tgatggtcct gctgcagttg attgtgatga aaatgctgca4800
ggaaatgttg tttttattgg gtccaccaac agtggacact gttatacaca agctgttgga4860
aaagcttttg ataatttggc tcaagatagg aaatttggaa agagatcgcc ttacattact4920
gcaatgtata tgcgcttctc tcttaagagt aaaaattctc tgtctgttgc taaaaagagt4980
aagagcaaga gtgatgtagt aaaagaagat gtttctaatc tcgctacaag ttcaaaattc5040
agttttgatg atcttactga ctttgaacag tggtatgata gtaacatcta tgaaagtctt5100
aaagtgcagg aaacacctga gaatattgat gagtatgtgt cattcacaac aaaggaagat5160
tccaagttgc cactgacact taaagttaga ggtatcaaat cggttgtcga ctttaagtca5220
aaggatggct ttacttataa gttaatacct gacactgatg aaaattcaaa agcaccagtc5280
tactatccta ctttggactc tgtaagtctt aaggcaatat gggtggacgg tactgctaat5340
tttgttgttg gacaccccaa ctataatagt agagctctac gtatccccac attctgggaa5400
tgcgcagaga cctttgtaaa aataggcgaa aaagttgatg gtgtaactat gggcctttgg5460
cgtgcagaac accttaatag acctaatttg gaaaggattt tcaacgtcgt taagaagacg5520
atggttggaa ctagtgttgt tactacacaa tgtggtaaat taattagtaa agcagctaca5580
ttcgttgccg ataaagtagg agatggtgta atccgcaatg ttactgatag aattaagggg5640
tgttttgggt ttactaggga gcattttgaa agaagagtgt ctccgcagtt cttaaaaact5700
ctctttttct tctttttctg tcttgttaag gctagtgcta agggtttaat ggctagctac5760
aagagtgtgt tatgtaaagt gttatttact gctttactta tattgtgggt tgtctacact5820
agtaacccag ttgtatttac tggaacacgt gtgttagatt tcctattcga aggttcattt5880
tgtagtcctt atgtggatta tggtaaagag tcttttgata ttttacgcta ttgtggaagt5940
gattttactt gtcgtgtttg tttacatggt aaggattcgc ttcatttgta taaacatgcc6000
tatagcgtag aacagtttta taaagatgca gttaatggta tcagttttac atggaattgg6060
ctttatatgc tgttcttaat attgtttgtt aagccagtgg caggttttgt tattatttgc6120
tactgtataa gatatttggt tttaagcacg actgtattac aaactggtgt aggattttta6180
gactggttta ttcaaacagt gtttgctaac tttaatttta tgggtgcagg attttatttc6240
tggctttttt ataaggtata tatacaggtg catcatatta tgtactgtaa ggatataaca6300
tgtgaagtgt gtaagcgagt tgcacgtagt aatagacatg aggttagtgt tgttgttaac6360
gggcgtaaac agcttgttca cgtctacact aactcaggtt ataatttctg taagagacat6420
aattggtact gtagaaattg tgacaagtat ggccaccgaa atacatttat gtctcctgaa6480
gttgctggcg agctttctga aaagcttaag cgccatgtta aacctacagc attcgcatac6540
cacgtagtgg atgatgcatg cttagttgat gactttgtta atttgaagta taatgctgcc6600
actccaggta aagaaggtgt gcattctgct gttaaatgtt ttagtgtgtc tgacttctta6660
aagaaagctg tttttcttaa ggatgcacaa aaatgtgagc aaatatctaa tgatagtttt6720
atagtttgta atacacacag tgcgcatgca ttagaggaag caaaaaatgc tgccatctat6780
tatgcgcaat gtctttgtaa accaattctt atacttgacc aggcccttta tgaacaattg6840
gttgtagaac ctgtgtcaaa aagtgtagta gataaggttt gtagtatcct gtctaatata6900
atatctgtag actctgcagc tttgaattat aaggctggca cacttcgtga tgccctcctt6960
tctattacta aagatgaaga agccgtcgat atggctatct tctgtcataa taatgatgtt7020
gaatatacta gtgatggttt tactaatgtt gtgccgtcat atggtataga tactgataaa7080
ttaacacctc gtgatagagg ctttttaata aatgcagatg cctccattgc taatttgaaa7140
gtgaaaaatt caccgccagt agtatggaag tattctgatc ttataaaact gtctgacagt7200
tgtcttaagt atttaatatc ggcaactgtc aaatcaggag gtagattttt cataacaaga7260
tctggtgcta agcaagttgt ttcttgttac actcagaagt tgttagtgga aaagaaggct7320
ggtggtgtcg ttagtagcac tattagtagt tttaagagtt gttgtaaatg gctcttagtg7380
ttttatttaa tctttacagt gtgttgtttg ggttattatc aatgggaaat gagtagagaa7440
tttgctcacc ccatgtatga tattaattcc acaatgcatg tagaagggtt taaggttata7500
gataagggtg tacttcgtga tattgtgcca gaagacacgt gcttttctaa taagtatctt7560
aattttgact cattttgggg aaaatcttat gtaaatagta gggactgtcc tattgtaacc7620
gctattatag acggttctgg aacagtagct gctggtgtgc ctggtttcgt acagtgggtt7680
atggatggtg taatgtttat ccatatgaca caaactgagc gaaaaccgtg gtatattcct7740
acttggttta atagagaaat tgttggttac acccacgatt ctattattac agaaggtgag7800
ttttatactt ccatagcatt gtttgcttct agatgtttgt atttaacatc tagtaacaca7860
ccacagcttt attgctttaa tggtgataat gatgctcctg gtgctctatc atttgcaagt7920
atacttcctc atagagtata ctttcaacct aatggagtca ggcttattgt gcctcagcaa7980
attattcaca caccatacgt agttaagtta gtttcagaca gctattgtag aggtagtgtt8040
tgtgaggtta ctaaaccagg ttattgtgtc tctatgaact ctcaatgggt tttgtttaat8100
gatgaataca caattaaacc tggtgtattt tgtggttcta ctgttagaga acttttgttt8160
agtatggtta gcacattctt tacgggtgtt aatccaaata tctatatgca attggcaact8220
atgttcttaa cacttgttgc tgttgtgtta gtctttgcaa tggttataaa gtttcaaggt8280
gttttcaaag cttatgcaac cactgtattt actataatgc ttgtttggct tattaatgca8340
tttgtattat gtgtacatag ttataatagt gttttagcta ttatactact tgtgatttat8400
tgttatgcat cacttgtgac gagtcgtaat attgctataa taatgcattg ttggcttgtt8460
ttcacatttg gtttaatagt acctagttgg atagcttgtg tctatttagg ttttgtgcta8520
tatatgtata caccgctggt tttgtggtgc tatggtacaa ctaaaaattg tcgcaagctt8580
tatgaaggca atgagtttgt tggtaattat gatcttgctg cgaagagtac ttttgtaatt8640
cgcggtcctg aatttgttaa acttactaat gagataggcg ataaattcga cgcttgtctc8700
tcagcgtatg ctaggcttaa atattactca ggcactggca gtgagcaaga ttacttgcaa8760
gcctgtcgtg catggttggc ctatgcacta gaccaattta gaagcagtgg tgtagaagta8820
gtttatactc caccacgata ttcaattggt gttagtagat tacaagctgg ttttaagaaa8880
ctagtatccc ctagtagtgc tgttgagaag tgcattgtta gtgtatccta taggggtaat8940
aatcttaatg gattgtggtt gggtgactcc atctactgtc cacggcatgt gttaggtaag9000
tttagtggtg accactgggg tgatgtactt aatcttgcta ataatcatga gtttgaagtt9060
gtaactggaa atggtgttac tttgagtgtt gttagtaggc gtttgaaagg tgcagtttta9120
attttacaaa ctgcaattgt caatgctgaa actccaaagt ataaatttat gaaagcaaat9180
tgtggtgata gttttactat tgcttgctct tatggaggta cagttatagg actttaccct9240
gttactatgc gttctaatgg aactattaga gcatcttttc ttgctggagc atgtggttca9300
gtaggtttta atatagaaaa gggtgtagta aatttttact acatgcacca tctagagtta9360
cctaatgcat tacatacagg gactgaccta atgggtgagt tctatggtgg ctatatagat9420
gaagaggttg ctcagaaagt tcaacccgat aaattagtta ctaataatat tttagcatgg9480
ctttatgcag caattattag tgttaaagag agtagttttt caacacctaa gtggcttgaa9540
agtactactg tcagtattga tgattataat aagtgggcag gtgataatgg ttttacatca9600
tttgtaagct gcactgctat tactaagtta agtgctataa caggagtaga tgtttgtaaa9660
ctccttcgta ctattatggt aaaaagtgca caatggggta gtgaccctat tttgggacaa9720
tataattttg aggatgaaat gacaccagaa tctgtcttta atcaggtggg tggtgttagg9780
ttacagtctt ctgccgtaaa gaaagctgcg tcttggtttt ggagtagatg tgtgctagct9840
tgttttttat ttgtcttgtg ttctattgtg ctgttcacag ctttaccata tagatattat9900
ttacatggcg ctgctgtttt atttgcagct gtgttcttta tttcatttac tgtgaaacat9960
gttatggcat ttatggatac tttcctcttg ccaacattga ttacggttat tataggagtt10020
tgtgctgaag tacctttcat ctacaatact ctaattagtc aaattgttat tttctttagc10080
caatggtatg atccagtagt ctttgacact gtagtaccgt ggatgtttct accattagtc10140
ttgtacacag cttttaaatg tatacaaggt tgttatagtg taaattcctt taatacttct10200
ctgttagtgt tgtatcagtt tatgaagttg ggttttgtta tatatacctc ttctaatact10260
cttacagcct actcagaagg taattgggag ttattttttg agttagtgca cacaactgtg10320
ttggctaatg ttagtagtaa ttccttaatt ggtttaattg tgtttaaatt tgctaagtgg10380
atgctgtatt attgtaatgc ctcatacctt aataattatg tcctaatggc tgttattgtt10440
aatggcatag gttggatgtt tacttgttac tttggattct attggtggat taataaggtt10500
tttggtttaa ccttaggtaa atatagtttc aaagtttcag tagatcaata taggtatatg10560
tgtctccata agattaaccc acctaaaact gtgtgggaag tcttttctac aaatatactt10620
atacaaggta taggtggtga ccgtgtgttg cctatagcta cagtgcaatc caaattgagt10680
gatgtaaagt gtacaactgt tgtcttaatg cagcttttga ctaagcttaa tgttgaagca10740
aactcaaaaa tgcatgctta tcttgtagag ttacacaata aaattcttgc ctcagatgat10800
gttaatgagt gcatggataa tttattgggt atgcttgtaa cactattttg tgtagatagt10860
actattgatt taagtgagta ttgtgatgat atacttaaga ggtctactgt tttacagtca10920
gtcactcaag agttttcaca cataccttct tatgcagagt atgaaagagc taaagatctt10980
tatgaaaagg ttttagctga gtctaaaaat ggtagtgtta cacagcaaga gcttgctgca11040
tatcgtaaag ctgccaatgt tgcaaagtca atctttgata gagacttggc tgttcagaag11100
aagttggata gcatggctga acgtgctatg acaactatgt ataaggaagc gcgtgtcact11160
gatagaagag ctaaacttgt ttcgtcatta catgcgctat tattttctat gcttaagaag11220
atagattctg aaaagcttaa tgtactattt gaccaggcaa gtagtggtgt tgtaccgcta11280
gctactgttc caatagtttg tagtaataag cttactcttg tagtgccaga tccagagacg11340
tggaccaagt gcgtagaggg catgcatgtt acttattcaa cagttgtttg gaatattgat11400
aatgtcattg atgcagatgg cactgaattg caaccaattt ctacaggtaa tggtttaatt11460
tactgtataa gtggtgataa tatagcatgg cctcttaagg tcaatttgac taggaatgtg11520
cataataaag ttgatgtagt attgcagaac aacgagctta tgcctcatgg tgttaaaaca11580
aaggcatgcg tggcaggtgt agatcaagca cactgcagcg tagagtctaa atgttattat11640
actaatatta gtggtaattc agtagtggct gctattacct cttcaaatcc taatttgaaa11700
gttgcctcat ttttaaatga agcaggcaat caaatttatg ttgacttaga cccaccatgt11760
aaatttggca tgaaggtggg tgataaagtg gaagttgttt acttgtattt tataaagaat11820
acaaggtcaa ttgtcagagg tatggtactt ggtgctatat ctaatgtggt ggtcttacag11880
tctaaaggat atgagacaga ggaagttgat gctgttggca tactatcact ttgttctttt11940
gcagtagatc cggctgacac gtatattaaa tatgtggctg caggtaacca acctttaggt12000
aactgcgtaa agatgttgac agttcataat ggtagtggct ttgctataac atcaaagcca12060
agcccaactc ctaaccagga ttcttacgga ggggcttctg tgtgtctcta ttgcagggca12120
catatagctc acccgggaag tgcaggaaat ttagatggac gttgtcaatt taaaggttct12180
tttgtacaaa tacctactac ggagaaagac cctgtgggat tctgtctacg taataaggtt12240
tgcactgttt gtcagtgctg gataggtcat ggatgtcaat gtgattcact tagacaacca12300
aaatctttag ttcaatcaga tgctggtgca cctggttttg ataagaatta tttaaacgga12360
tacggggtag cagtgaggct cggctgatac cccttgctaa tggttgtgaa cctgatgttg12420
tagagcgagc ctttgatgta tgtaataagg aatcagccgg tatgtttaaa aatttgaagc12480
gtaactgtgc tcgattccaa gaagtgtgtg gtactgaaga tggaaatctc gagtatcgtg12540
attcttattt tgtggttaag caaaccactc ctagtaatta tgaacatgag aaagcctgtt12600
atgaggactt aaagtcagaa gtaacggctg atcatgattt ctttgtgttc aataagaaca12660
tttataatat tagtaggcaa cgccttacta agtatactat gatggacttt tgttatgctt12720
tgaggcattt tgaaccaaag gattgcgaag ttcttaaaga aatacttgtc acttatggtt12780
gtatagaaga ttaccatcct aagtggttcg aagaaaataa ggattggtac gatccaatag12840
aaaacccaaa atattatgcc atgttggcta aaatgggacc tattgttcgt cgtgcattgt12900
tgaatgctgt tgagtttggg aatctaatgg ttgagaaggg ttatgtaggt gtagttacac12960
tagataacca ggatctcaat ggcaaatttt atgattttgg tgattttcag aaaacagcac13020
ccggtgctgg tgttcctgtt tttgatacat attattccta catgatgccc atcatagcca13080
tgacggatgc gttagcacat gaaaggtatt ttgaatatga tgtgcataag ggttacaagt13140
cttatgacct cctcaagtat gattatacag aggagaagca agcactgttt caaaagtact13200
tcaagtactg ggatcaagaa taccacccta attgtcgaga ttgtgttgac gataggtgtt13260
tgatacattg tgcaaacttc aacgtacttt tctctacact aataccacaa acttcttttg13320
gtaatttatg tagaaaagtg ttcgttgatg gtgtaccatt tatagctact tgtggctatc13380
actctaagga actcggtgtt attatgaatc aagataacac catgtctttt tcaaaaatgg13440
gtttaagcca gcttatgaag tttgtaggag accccgccct tttagtagga acttctaata13500
atttagttga tcttagaact tcttgcttta gtgtctgtgc gttagcttct ggtataacac13560
accagacagt taagccaggt cactttaata aagatttcta cgattttgct gaaaaagcag13620
gtatgtttaa ggaggggtca tcaattccac ttaaacactt cttctatcca cagactggta13680
atgctgctat aaacgattat gattattatc gttataacag gcctactatg tttgatatac13740
gccagcttct attttgttta gaagtgacgt ctaaatattt tgaatgttat gaaggtggtt13800
gtataccagc tagtcaagtg gttgttacca accttgataa gagtgcaggc tttcccttta13860
ataaatttgg aaaagcccgt ctctattatg aaatgagtct agaagagcag gaccaactct13920
ttgaaagtac aaagaaaaat gtcttgccta ctataactca gatgaatctt aaatatgcta13980
tatccgcgaa aaatagagcg cgtactgtgg caggtgtttc cattctttct actatgacta14040
atagacagtt ccatcagaag gttcttaagt ctatagtcaa tactagaaat gcacctgtag14100
ttattggaac aactaaattt tatggtggtt gggacaatat gctaagaaac ctagttcaag14160
gtgtggaaga cccaatgctt atgggttggg actatcctaa gtgtgataga gcaatgccaa14220
atttgttgcg tatagcagcg tctttggtgc ttgcccgtaa acatactaat tgttgcatat14280
ggtctgagcg catttataga ttgtacaatg aatgcgccca agtattgtct gaaactgtat14340
tagctacagg tggtatatat gtgaaacctg gtggtactag cagtggtgat gccaccactg14400
cttatgccaa cagtgttttt aatataatac aagccacatc tgctaatgtt gcgcgtttac14460
ttagtgttat aacgcgtgat atagtatatg atgacattaa aagcctgcag tatgagttat14520
accagcaggt ttacaggcga gtcaattttg acccctcctt tgttgaaaag ttttattctt14580
acatgtgtaa gaacttttca ttaatgatct tgtctgatga tggtgtagtt tgttataaca14640
acacgcttgc caaacaaggt cttgtagcag acatttctgg ttttagagaa attctctact14700
accagaataa tgtttatatg gctgattcta agtgctgggt tgaaccagac ttggaaaagg14760
gcccacatga attttgttca cagcacacaa tgcttgtaga ggtggatggt gagcctagtt14820
acttaccata tccagacccc tcacgcatct taggtgcatg tgtttttgta gatgaagtgg14880
ataagactga gcctgtggct gttatggagc gctatatcgc tcttgccata gatgcttacc14940
cgcttgtaca tcatgaaaac gaagagtata agaaggtttt ctttgtactt ctttcttaca15000
ttagaaagct ctaccaggag ctctctcaaa gtatgcttat tgactattcc tttgttatgg15060
atatagataa gggtagcaaa ttttgggaac aggagttcta tgaaaatatg tatagggctc15120
ctacaacttt acaatcttgt ggtgtttgtg tagtttgtaa tagtcaaact atactacgct15180
gtggtaattg tattagaaaa ccattcttgt gctgtaagtg ttgctatgac catgtcatgc15240
acactgacca caaaaatgtt ttgtctataa atccatacat ttgctctcaa cctggttgtg15300
gtgaagctga tgttactaaa ctttacctcg gaggtatgtc ttatttctgt ggtaatcata15360
aatctaaatt atcaataccg ttagtatcta atggtactgt ttttggaatt tacagagcca15420
attgtgtggg tagcgaaaac gttgatgatt ttaatcaact agctactact aattggtcta15480
ctgttgaacc ttatatatta gcaaatcgct gtagcgactc attaagacgc tttgctgctg15540
agacagtcaa agcaacagaa gagttgcata aacagcaatt tgctagtgca gaagtcagag15600
aggtaatttc tgaccgtgaa ttaattctat catgggaacc tggtaagaca aggcctccat15660
tgaatagaaa ttatgttttc actggctacc actttaccag gacaagtaag gtacagctag15720
gtgattttac gtttgagaaa ggtgaaggta gagatgttgt ctattatagg gcgacgtcta15780
cagctaaatt gtctcctgga gacatttttt ttcttaacat cacacaatgt tgtttctctt15840
gtagcaccaa ctttgtgtcc tcaacaaact ttttctaggt ttgttaattt aagacctaat15900
gtaatggtac cggagtgttt tgttaataac attccattat accatttagt aggtaaacaa15960
aagcgtacta cagtacaagg ccctcctggc agtggtaagt cacactttgc cataggcctt16020
gctgcatact ttagtaatgc ccgtgtggtt tttacagcat gttctcatgc tgcagtagat16080
gcgctttgtg aaaaagcgtt taaatttctt aaagttgatg attgcactcg catagtacct16140
caaaggacta ctgttgactg cttctcaaaa tttaaagcta atgacacagg caaaaagtac16200
atttttagta ctattaatgc tttgccagaa gttagttgtg acattctgtt ggtagatgag16260
gttagtatgt tgaccaatta tgaattgtca tttattaatg gtaagataaa ttaccagtat16320
gttgtgtatg taggtgatcc tgctcaatta ccagcacctc gtactttgct taatggttca16380
ctttcaccca aggattataa tgtcatcaca aatcttatgg tttgtgttaa acctgacatt16440
ttccttgcga agtgttaccg ttgtcctaag gaaattgtag acactgtgtc tactcttgtt16500
tatgatggaa agtttgttgc aaacaaccca gaatcacgtg agtgcttcaa ggttgtagtt16560
aataatggta attctgatgt aggtcacgag agtggttcag cctacaacac aacacaattg16620
gaatttgtga aaaattttgt ttgtcgcaat aaacaatggc gagaagcaac attcatttca16680
ccttataatg caatgaacca gagagcctat cgcatgcttg gacttaatgt ccagacggta16740
gactcctcac aaggttcaga gtatgattat gttatattct gtgttacggc tgattctcag16800
catgcgctga atattaacag atttaatgtt gcgcttacaa gagctaagcg tggtatactt16860
gttgtcatgc gccagcgtga cgaattgtat tcagctctta aatttacaga gctagattct16920
gaggcaatcc tgcaaggtac aggtttgttt aaaatttgca ataaggaatt tagtggagta16980
caccctgctt atgcagtaac cactaaagca cttgcggcaa cttataaggt taacgacgag17040
ctagcagcac ttgttaatgt tgaggctggt tcagagatta cttataaaca tcttatttcc17100
ctgttagggt ttaagatgag tgttaatgtt gaaggttgtc acaacatgtt tataacacgt17160
gatgaggcaa ttcgcaatgt aagaggatgg gttggttttg atgtagaagc cacacatgct17220
tgtggcacta atattggcac taaccttcca tttcaagtag gattctccac tggtgctgac17280
tttgtagtca cacctgaggg tcttattgat acatcaatag gcaataattt tgagcctgtg17340
aactctaaag cacctccagg tgaacaattt aaccacttga gagctttgtt taagagtgct17400
aagccttggc atgttataag acctaggata gttcagatgt tagcagacaa tctatgcaat17460
gtttcagatt gtgtagtgtt tgtcacatgg tgtcatggcc tagaactaac tactttgcgc17520
tattttgtta aaataggcaa ggaacaagtt tgttcttgtg gttctagagc tacaactttt17580
aattctcata ctcaggctta cgcttgttgg aggcactgct tgggttttga ttttgtctat17640
aatccacttt tagtggatat tcaacaatgg ggttactctg gtaatctaca gtttaatcat17700
gatttgcatt gtaatgtgca tggccacgct catgtagctt cagcggatgc tattatgact17760
cgctgccttg caattaataa tgcattttgt aaagatgtca actgggaact gcagtatcct17820
catattgcaa atgaggatga agtaaattcc agttgcagat atctacaacg catgtatctt17880
aatgcatgcg ttgatgctct taaagttaat gttatttatg acataggcaa tcctaaaggt17940
ataaaatgcg ttagacgtgg ggatgttaat tttaggtttt atgataagaa cccaattgta18000
cctaacgtca aacagtttga gtatgactat agtcagcata aagataagtt tgctgatggt18060
ctttgtatgt tttggaattg taatgtggat tgttatcctg aaaattcatt agtttgtagg18120
tatgacacac gaaatttgag tgtgtttaat ttacctgggt tgtaatggtg gtagcctgta18180
tgttaataaa catgcattcc acacacctaa gtttgatcgc attagctttc gtaatttgaa18240
agctatgcca ttcttcttct atgactcatc gccctgcgaa actattcaag ttgatggagt18300
agcgcaagac cttgtgtcat tagcaactaa agattgtatc acaaaatgca acattggtgg18360
tgctgtttgt aagaaacatg ctcaaatgta tgcagaattt gtggcttctt ataatgcagc18420
tgttacagct ggttttactt tttgggttac taataatttt aacccttata acttgtggaa18480
gaatttttca gcactccagt ctattgacaa tattgcttat aatatgtata agggtgggca18540
ttacgatgct attgcaggcg aaatacccac agtcataact ggagataaag tttttgttat18600
tgatcaaggt attgaaaagg cagtttttgt taatcaaaca actctgccta catcagttgc18660
atttgagttg tatgcgaaga gaaacattcg cacactgcca aataacagaa tattgagtgg18720
tttaggtgta gacgttacct atggttttgt aatatgggat tacgctaatc aaacgccact18780
gtatcgtaat actgttaaag tatgtgcata tacagacatt gagcctaatg gtttaatagt18840
tctgtatgat gatagatgtg gtgattatca atcttttctt gctgctgata atgctgtttt18900
agtgtctaca cagtgttata agcggtatcc ttatgtagaa ataccatcaa atctgcttgt18960
tcagaatggt atgccactaa aagatggagc gaatctgtat gtttataaga ggagtaatgg19020
agcgtttgta acgctaccaa ccacattaaa cacacagggt cgtaattatg aaacttttga19080
acctcgtagt gatgttgaga gagattttct tgacatgtca gaagaggact ttattgaaaa19140
gtatggtaag gacttaggtc tacaacacat actttatggt gaagtagaaa aaccacaatt19200
gggtggttta cacactgtta taggaatgta cagacttttg cgtgctaata aattagacgc19260
gaagtccgta accaattcag attctgatgt catgcaaaac tattttgttt tggcagacaa19320
tggttcttac aaacaggttt gcacagtcgt agaccttctg cttgatgatt tcttagaact19380
ccttaggaac atacttaaag agtatggtac taataagtcc aaagttgtaa cagtgtctat19440
tgattaccat agcataaatt ttatgacttg gtttgaagaa ggcagtatta aaacatgtta19500
tccacaactt caatcagcgt ggacatgtgg ttataatatg cctgaacttt ataaagttca19560
gaactgtgtt atggaacctt gtaatattcc aaactatggt gttggaatta cattgccaag19620
tggtattatg atgactgtgg caaagtatac acaactttgc cagtaccttt ctaaaactac19680
aatgtgtgta ccgcataaca tgcgagtaat gcattttgga gctggaagtg ataaaggagt19740
tgcccctggc agcactgtcc ttaaacagtg gcttccagaa ggaacactcc ttgttgataa19800
cgatattgta gattatgtat ctgatgcaca cgtatctgtg ctgtcagatt gcaataaata19860
taaaacagag cacaagtttg atcttgtgat atctgatatg tatacagata atgattcaaa19920
gagaaaacat gaaggcatag tagccaataa tggcaatgac gatgtcttca tttatctagc19980
taatttctta aggaacaact tagctctggg tggtagtttt gccattaaag ttacagagac20040
aagttggcat gatagtttat atgatattgc acaggattgt gcatggtgga caatgttttg20100
tacagctgtg aatgcttcat cttcagaagc attcttgatc ggtattaatt atttgggtga20160
cagtggaaaa ttgaaagtta gtggaaaagc actgcacgca aattatatat tttggcggaa20220
ttgtaattat ttacaaacct ctgcttatag tacatttgac gttgctaagt ttggattaaa20280
actaaaagca acgccagttg taaatttgaa aactgaacaa aagaccgact tagttgttaa20340
tctactaagg aacggtaaat tgttgattag agatgttggt gaagtcactg tttttagcga20400
ctcttttgtt tgcactatct agtgctactt tgtatgataa tgatacgtac gtttactact20460
accagagcgc cttcagaccg cctaatggtt ggcatttaca tggtggcgct tatgcagtag20520
taaatgtttc ttcacaaact aacaatgcag gtacagcttc agaatgcact gttggtatta20580
ttagtggtga tacagttgtt aatgcctctt ctatagctat gacagcacct gtaggtcaag20640
gtatgcggtg gtctaagtta caattttgta ctgcacactg caatttttct gattttacag20700
tgtttgttac acattgctat gcctcgggca gcggtaaatg tcctttaacg ggccttatac20760
cacaaggtca tattcgtatt tctgctatgc ggaatcatac tttattctat aatttaacag20820
ttagtgtatc taattaccct acttttaaat ctttgcaatg cgttgataat ttcacatctg20880
tttacttaaa tggtgacctt gtctttactt ctaatcagac ttcatacgtt ataagtgcag20940
gtgtgtactt taaatcaggt gggcctataa cctataaagt tatgaaggaa tttaaggttt21000
tggcttattt tgttaatggt actgtacaag atgttatttt gtgtgatgac acacctagag21060
gtttgctagc atgtcaatat aatactggca atttctcaga tggtttctat ccttttacta21120
atagtagctt agttaagcaa aggtttgttg tttatcgtga gaatggtgtt aatactactc21180
ttactttaac ccaattacac ctttcataat gagactactg ctcagcctaa ttcaggtggt21240
gtccatacta tctcaactta tcaaacacaa actgctcaga gtggttatta taattttaat21300
ttatcatttc tgagtagttt tgtgtataaa gcttctgatt atatgtatgg gtcctaccac21360
ccacgatgta gttttagacc agaaactatt aataatggct tgtggtttaa ttcactgtca21420
gtctcattag cctatggccc ccttcaaggt gggtgtaagc aatcagtttt tcaaggcaga21480
gctacttgtt gttatgcgta ttcctataac ggaccacgta tgtgtaaagg tgtttatagt21540
ggtcagttat tacaagattt tgaatgtgga ctgttggttt atgttactaa gagtgatggc21600
tctcgtgtac aaacagccac aaaaccaccg gtcataactc aacacaatta taataatatt21660
actttaaata cttgtgttga gtacaatata tatgacagag ttggccaagg ctttattact21720
aatgtaactg actccgcagc tagctataat tacttagcag atgctggatt ggcaatttta21780
gatacttcag gtgccataga cactttcgtt gtacaaggtg aatatggtcc caattattat21840
aaggttaacc cttgtgaaga tgttaacaag cagtttgtag tgtcaggcgg taagttagta21900
ggcatcctga cttctcgtaa tgaaactggt tctcagcctc ttgaaaatca gttttatatt21960
aagttaacta atggaagccg tcgttttaga cgttctatta gtagtaatgt tactagttgt22020
ccatatgtta gttatggcag gtattgcatt gaacctgatg gttcacttaa acaaatagta22080
ccacaagaat tagaacagtt cgtggcacct ttacttaatg ttacagaata tgtgctcatt22140
cctaacagtt ttaatttgac tgttacagat gagtacattc aaactcgtat ggataaagtt22200
caaattaatt gccttcaata tgtttgtggc aattctattg aatgcaaaaa attgtttcag22260
caatatggcc ctgtctgtga caacatattg tctgttgtaa atagtgttgg tcagaaagaa22320
gacatggaac ttttaaattt ctattcttct actaaaccaa aaggttttga cacaccagtt22380
ctgagtaatg ttagtactgg tgcttttaat atttcacttt tgttaacacc acctagtagt22440
cgtagtgggc gttcttttat agaagatttg ttatttacaa gtgttgaaac agttggtttg22500
ccaactgatg ctgaatataa aaaatgcaca gcaggacctt taggtactct taaggatctt22560
atctgtgcta gggaatataa tggtttatta gttttgcctc caattattac ggcggatatg22620
caaacaatgt atactgcttc tttagttggt gccatggctt ttggtggtat tacagcagca22680
ggtgccatac catttgcaac tcaggtacaa gccagaatta atcatttggg tattacgcag22740
tctctgttat tgaaaaatca agagaaaatt gcagcttcct ttaataaggc cattggtcat22800
atgcaggaag gttttagaag cacttcgcta gcattacaac aggttcaaga cgttgttaat22860
aagcagagtg ctattcttac ggaaactatg aattctctta ataagaattt tggtgctatc22920
tcatcagtaa ttcaagacat ttatgcgcaa cttgatgcaa ttcaagcaga tgcacaagtt22980
gaccgtctta ttactggcag actctcttct ctctcagtgc tagcctttgc taagcagtct23040
gagtacatca gagtttccca gcaacgtgaa ttagccactc aaaaaattaa tgagtgtgtt23100
aaatcacaat ctaataggta tggtttttgt ggtagtggaa gacatgttct ttcgatacca23160
caaaatgcac ctaatggtat agtgtttata cacttcagtt acactccaca gagttttgtt23220
aatgttaccg caatagtagg tttttgtgta cagcctgcta atgctagtca gtatgcaata23280
gtgcctgtta atggtagagg tatttttata caagttaatg gtagttacta tatcactgca23340
cgtgatatgt atatgcctag agacattact gcaggagata tagttactct tacttcttgt23400
caagcaaatt atgttaatgt aaataaaacc gtcattacta catttgtgga agatgacgat23460
tttgattttg gtgatgagtt gtcgaaatgg tggaatgata ctaagcatga gctaccagat23520
tttgacgact tcaattatac agtacctata ctgaatatta gcggtgaaat tgatcgtatt23580
caaggtgtta tacagggtct taatgactcc attatagacc ttgaagaact gtcaataatc23640
aaaacttata ttaaatggcc ttggtatgtt tggcttgcca taggctttgc cattattatt23700
tttatcctca tcttaggatg ggtgtttttc atgacaggtt gttgtggttg ttgttgtgga23760
tgctttggta tcattcctct aatgagtaag tgtggtaaga aatcttctta ttacacgact23820
tttgataatg atgtggtaac ttaacaatac agacctaaaa agtctgttta atgattcaaa23880
ctcccacatc ttttgtaata gtattaattc ttctttggtt taaacttgca ttaagttgtt23940
ttagagagtg cgttgtagca ctccaacagc taatacaagt tctactccaa attattaata24000
ataatttaca atctaggctg atcctttggc acagtctaga ttaatgtcag gtttagcttc24060
tagtgttttt aggccagaag attgtgagaa atatattgaa ataggtgaag tagtaataca24120
acaaatcagt ttcaatttac aacatatatc aagtgtctta aacacagaag tgtttgaccc24180
ctttgaattc tgttattaca gaggaggtaa tttttgggaa atagattcag ccgaagaggt24240
tgatgatgaa tatgttgaat aagtcgctag aggagaatgg tagttttcta acagcagttt24300
atgtcttttg tggatttgta gcactctact tactaggtag agcactacaa gcttttgtac24360
aagcagctga tgcttgttgt ctattttggt atacatgggt agtagtcccg ggagctaagg24420
gcactgcatt tgtgtataaa catacatatg gtagaaaact taacaatccg gagttattac24480
taggtagagc actacaagct tttgtacaag cagctgatgc ttgtgtctat tttggtatac24540
atgggtagta gtcccgggag ctaagggcac tgcatttgtg tataaacata catatggtag24600
aaaacttaac aatccggagt tagaacacgt tattgttaac gagttcccga agaacggttg24660
gaataataaa agtctaccaa attttcaaga tgtccaacga gacaaattgc acccttgatt24720
ctgagcaggc tattctgctc ttcaaggaat ataatctatt tataaccgca ttcctactgt24780
ttataaccat actacttcag tatggatacg caactaggag tcggcttatt tacatactga24840
aaatgatagt gttatggtgt ttctggcccc ttaacattgc agtaggtgta atttcatgta24900
tatacccacc aaatacagga ggccttgtag ccgcgataat actcactgtg tttgcgtgtt24960
tttcttttat aggttattgg attcagagca tcagactctt taagcggtgt agatcttggt25020
ggtcttttaa ccccgagagc aatgccgtag gttcaatact cctaacaaat ggtcaacaat25080
gtaattttgc tatagagagt gtgccaatgg tactttctcc tattataaag aatggtgttc25140
tttattgtga gggtcagtgg cttgctaaat gtgaaccaga ccacttgcct aaagacattt25200
ttgtgtgtac accagataga cgcaacattt atcgtatggt gcagaaatat actggtgacc25260
aaagcggaaa taagaaaagg tttgctacat ttgtctatgc aaagcagtca gtagacactg25320
gcgagctaga aagtgtagca acaggaggaa gtagtcttta cacataaatg tgtgtgtgta25380
gagagtattt aaaattactt tttgatagtg cctctatttt aagagcgcat aagagtattc25440
attttgagga tttcaacata aatccacttt gtttcatact ctcttttcaa gagttattat25500
ttaaaaaaca gtttttccac tcttttgtgc caaaaactgt tgttgttaac ggtgtagcct25560
tccaagtaga taatggaaaa gtctactatg aaggaaaacc catttttcag aaaggttgtt25620
gcaggttatg gtcccagtat aagagggatt aaaatagtca taccaccaac aacaatttct25680
tgtgttaaag gtgtttggtt ttacaagcgc ttaaaagaaa caaatacgga atgaaatggt25740
tgtctagttt aggacgagcg ttcacttcgt gttataaagc cctactatta actcaattaa25800
gagttttaga taggttaatt ctagatcacg gaccgaggcg tactttaagt tgtgccaggc25860
gcgtgctttt attccaatta gatttagttt ataggttggt atatactccc aaccagtcgc25920
tggtatgaat aatagtaaag ataacccttt tcgcggagca atagcaagaa aagcgcgaat25980
ttatctgaga ggaggattag attgtgttta ctttcttaac aaagcaggac aagcagagcc26040
ttgtcccgcg tgcacatcac tagtattcca agggaaaact tgtgaggagc acatatataa26100
taacgaattg ttatcatggc gagcggtaaa gtatctggaa agtcagactc acccgcgcca26160
atcatcaaac taggagggcc taaaccacca aaggtagggt catctggaaa tgcatcttgg26220
ttccaagcta taaaggccaa gaaactaaat gcacctgcac ctaagtttga aggtagtggt26280
gttcctgata atgaaaattt aaaaaatagc cagcagcatg gatactggag acgccaagcc26340
aggtataagc caggtaaagg tggaagaaaa ccagtcccag atgcgtggta tttctattac26400
actggaacag gaccagctgc tgacctgaat tggggtgatt ctcaggatgg tatattgtgg26460
gttgctgcta agggtgctga tgtaaaatcc agatccaatc agggtacaag agatcctgat26520
aagtttgacc aatatccact acgattttca gatgggggac ctgacggtaa tttccgttgg26580
gatttcattc ctctgaatcg tggtaggagt gggaggtcga ctgcagcgtc atcagcagca26640
tctagtagag caccatctcg tgaaggttca cgtggtcgta ggagtggagc tgaagatgat26700
ctcattgctc gcgcggcaaa gattattcag gaccagcaac ggaagggtac gcgtattaca26760
aagcaaaagg cagatgaaat ggctcatcgc agattttgta agcgtactat tccaccaggt26820
tatagagtag atcaagtctt tggccctcgt actaaaggta aaggagggaa attttggtga26880
tgacaagatg aatgaggaag gtattaaagg atgggcgtgt tacagcaatg ctcaacctta26940
cacctagccc acatgcttgt ctctttggaa gtagagtgac acccaagctt caaccagatg27000
ggcttcacct taaatttgaa tttactactg gtggtgccta gagatgaccc gcagtttgat27060
attatgtaaa gatttgtgat gagtgtgttg atggtgtagg cacccgccca aaagacgaag27120
ttgtaagacc aaaatcacgc tcaagttcaa gacctgctac aagaggaaat tctccagcgc27180
caaaacaaca gcgccaaaag aaggagaaaa agccaaagaa gcaggaggat gaagtggata27240
aagcattgac ctcagatgag gagaggaaca atgcacagct ggagtttgat gatgaaccca27300
aagtgattaa ttggggtgac tcagcacttg gtgaaaatga actttgagta acataatgga27360
cttgctacat tttatgtggc attgctgttg ttattacttc tctgcttttc tctcaatcat27420
tatgggtttt gattgtgatc atgtgcagta tcttagttgg tttcccttgt tggttgcagt27480
ttgctttctt tctgtgctta ttgtttttat tctgctttat tccttattat atcgtagaag27540
tttattaaag gttaaggaag ataggcatgt agcttgatta cctacatgtc tatcgccagg27600
gaaatgtcta atctgtctac ttagtagcct ggaaacgaac ggtagaccct tagattttaa27660
tttagtttaa tttttagttt agtttaagtt agtttagagt aggtataaag atgccagtgc27720
cggggccacg cggagtacga tcgagggtac agcactagga cgcccgctag gggaagagct27780
aaattttagt ttaagttaat tttaattggc taagtatagt taaaatttat aggctagtat27840
agagttagag c 27851