CN114460211A - 一种舒血宁注射液中的山奈素的定量分析方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种舒血宁注射液中的山奈素的定量分析方法，属于药物分析技术领域。舒血宁注射液中的山奈素的定量分析方法，包括如下步骤：对照品溶液的制备、供试品溶液制备和测定。本发明的定量分析方法简便准确、专属性好、重复性好，采用高效液相色谱分析可准确的测定舒血宁注射液中山奈素的含量，为舒血宁注射液的物质基础研究提供依据。
Description
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域，尤其涉及一种舒血宁注射液中的山奈素的定量分析方法。
背景技术
舒血宁注射液是以银杏叶为原料的中药制剂，为黄色的澄明液体，功能主治：扩张血管，改善微循环，用于缺血性心脑血管类疾病、冠心病、心绞痛、脑栓塞、脑血管痉挛等。研究表明，舒血宁注射液中化学成分复杂，有效成分结构不明确，无法进行定性和定量研究，导致产品质量难以有效控制。
其中3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素作为舒血宁注射液中有效成分之一，通过定量分析测定3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素在舒血宁注射液中的含量，能够为舒血宁注射液的物质基础研究提供依据。
鉴于此，有必要提供一种舒血宁注射液中山奈素的定量分析方法，以解决上述至少一项技术问题。
发明内容
本发明提供一种舒血宁注射液中的山奈素的定量分析方法。本发明的定量分析方法简便准确、专属性好、重复性好，采用高效液相色谱分析可准确的测定舒血宁注射液中3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素的含量，为舒血宁注射液的物质基础研究提供依据。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：
一种舒血宁注射液中的山奈素的定量分析方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：对照品溶液的制备
精密称取2.5mg的3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素对照品，置于5mL的量瓶中，先用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得浓度为0.477mg/mL的溶解液；
再用体积比为36：64的甲醇和1％乙酸水溶液的混合溶液将溶解液稀释至浓度为19.1μg/mL，得到3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素溶液，作为对照品溶液；
步骤2：供试品溶液的制备
精密量取1mL舒血宁注射液，置于5mL量瓶中，用体积比为36:64的甲醇和1％乙酸水溶液的混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀后微孔过滤，取续滤液作为供试品溶液；
步骤3：测定
分别取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，读取数据，即得到舒血宁注射液中的3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素的含量。
本发明的有益效果是：本发明的定量分析方法简便准确、专属性好、重复性好，采用高效液相色谱分析可准确的测定舒血宁注射液中3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素的含量，为舒血宁注射液的物质基础研究提供依据。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
进一步的，所述山奈素为3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素。
采用上述进一步方案的有益效果是：通过定量分析方法能够测定舒血宁注射液中的3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素。
进一步的，步骤1中，所述3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素对照品的纯度＞90％。
采用上述进一步方案的有益效果是：采用此纯度要求的3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素对照品，能够为定量分析舒血宁注射液中3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素提供对照。
进一步的，步骤2中，所述微孔过滤的孔径为0.40～0.50μm。
采用上述进一步方案的有益效果是：采用此孔径的微孔过滤能够有效的滤除溶液中的杂质，防止杂质对定量分析造成干扰。
进一步的，步骤3中，所述高效液相色谱仪的色谱条件为：
色谱柱：5μm，4.6mm×250mm，Agilent Eclipse Plus C18色谱柱；
柱温：35℃；流动相：以甲醇为流动相A，以1％乙酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱；流速：1.0mol/min；检测波长：341nm；进样量：10μL。
采用上述进一步方案的有益效果是：在此色谱条件下能够更加准确的测定舒血宁注射液中的山奈素含量，测定过程稳定。
进一步的，所述梯度洗脱具体为：
0～25min，流动相A和流动相B的体积比为36:64；
25～40min，流动相A和流动相B的体积比由36:64调整至39:61；
40～42min，流动相A和流动相B的体积比由39:61调整至36:64；
42～55min，流动相A和流动相B的体积比为36:64。
采用上述进一步方案的有益效果是：采用此梯度洗脱可以使舒血宁注射液中性质差异较大的组分能达到良好的分离。
具体实施方式
以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例
本发明具体实施方式提供一种舒血宁注射液中的山奈素的定量分析方法，舒血宁注射液中的山奈素为3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素；舒血宁注射液中的3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素的定量分析方法包括：
1)色谱条件：
色谱柱：5μm，4.6mm×250mm，Agilent Eclipse Plus C18色谱柱；
柱温：35℃；
流动相：以甲醇为流动相A，以1％乙酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱；梯度洗脱具体为：
0～25min，流动相A和流动相B的体积比为36:64；
25～40min，流动相A和流动相B的体积比由36:64调整至39:61；
40～42min，流动相A和流动相B的体积比由39:61调整至36:64；
42～55min，流动相A和流动相B的体积比为36:64。
流动相的流速：1.0mol/min；
检测波长：341nm；
对照品溶液和供试品溶液的进样量：10μL；
2)对照品溶液的制备：
精密称取2.5mg纯度为95.46％的3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素对照品，置于5mL的量瓶中，先用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得浓度为0.477mg/mL的溶解液；
再用体积比为36：64的甲醇和1％乙酸水溶液的混合溶液将溶解液进行稀释至浓度为19.1μg/mL，得到3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素溶液，作为对照品溶液；
2)供试品溶液的制备：
取舒血宁注射液，精密量取1mL，置于5mL量瓶中，用体积比为36：64的甲醇和1％乙酸水溶液的混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀后经0.45μm微孔过滤，取续滤液作为供试品溶液；
3)测定：
分别取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，读取数据，即得到舒血宁注射液中的3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素的含量，含量为69.15μg/mL；
稳定性试验：
取供试品溶液，按相同的色谱条件，分别在时间为0h、2h、4h、8h、12h和24h进样，测定得到3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素的峰面积积分值，根据峰面积积分值计算RSD值，供试品溶液中的3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素的色谱峰面积RSD值应小于2％；测定所得的供试品溶液的色谱峰峰面积分别为：191233、190543、191176、189058、189366和192700，RSD值＝0.704％＜2％；
表明，在本实施例的色谱条件下，舒血宁注射液中3-O-[2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基]山柰素含量在24h内稳定。本实施例对于舒血宁注射液的放置时间没有严格要求，检测条件相对宽松，便于日常操作，易于实现。
重复性试验：
取同一批号的舒血宁注射液6份，分别制备得到供试品溶液，在相同色谱条件下测定，舒血宁注射液中的3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素的色谱峰面积RSD值应小于3％；测定所得的色谱峰峰面积分别为：195389、195534、196204、193769、197449和196820，测定所得的3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素的含量分别为69.12μg/mL、69.17μg/mL、69.41μg/mL、68.55μg/mL、69.85μg/mL和69.62μg/mL，RSD值＝0.66＜3％；
表明，本实施例的重复性良好，适用于舒血宁注射液中3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素含量的重复测定。
准确度试验；
精密量取1mL舒血宁注射液共6份，分别置于5mL量瓶中，加入0.4mL浓度为50.117μg/mL的3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素对照品溶液，用流动相稀释至刻度，摇匀后进行分别测定，加样回收率应在95～105％之间，RSD值应小于3％；
六组样品中3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素的质量均为139.42μg，六组样品的实测值分别为：140.93μg、140.80μg、140.68μg、140.92μg、141.24μg和142.44μg，求得加样回收率分别为：102.11％、101.92％、101.75％、102.10％、102.55％和104.26％，RSD值＝0.46％＜3％。
表明，本实施例准确度良好，保证检测结果精准可靠。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种舒血宁注射液中的山奈素的定量分析方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：对照品溶液的制备
精密称取2.5mg的3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素对照品，置于5mL的量瓶中，先用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得浓度为0.477mg/mL的溶解液；
再用体积比为36：64的甲醇和1％乙酸水溶液的混合溶液将溶解液稀释至浓度为19.1μg/mL，得到3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素溶液，作为对照品溶液；
步骤2：供试品溶液的制备
精密量取1mL舒血宁注射液，置于5mL量瓶中，用体积比为36:64的甲醇和1％乙酸水溶液的混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀后微孔过滤，取续滤液作为供试品溶液；
步骤3：测定
分别取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，读取数据，即得到舒血宁注射液中的3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素的含量。
2.根据权利要求1所述的舒血宁注射液中的山奈素的定量分析方法，其特征在于，所述山奈素为3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素。
3.根据权利要求1所述的舒血宁注射液中的山奈素的定量分析方法，其特征在于，步骤1中，所述3-O-(2-O-(β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖基)山奈素对照品的纯度＞90％。
4.根据权利要求1所述的舒血宁注射液中的山奈素的定量分析方法，其特征在于，步骤2中，所述微孔过滤的孔径为0.40～0.50μm。
5.根据权利要求1所述的舒血宁注射液中的山奈素的定量分析方法，其特征在于，步骤3中，所述高效液相色谱仪的色谱条件为：
色谱柱：5μm，4.6mm×250mm，Agilent Eclipse Plus C18色谱柱；
柱温：35℃；流动相：以甲醇为流动相A，以1％乙酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱；流速：1.0mol/min；检测波长：341nm；进样量：10μL。
6.根据权利要求5所述的舒血宁注射液中的山奈素的定量分析方法，其特征在于，所述梯度洗脱具体为：
0～25min，流动相A和流动相B的体积比为36:64；
25～40min，流动相A和流动相B的体积比由36:64调整至39:61；
40～42min，流动相A和流动相B的体积比由39:61调整至36:64；
42～55min，流动相A和流动相B的体积比为36:64。
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