CN114460207A - 一种麻牛膝掺伪川牛膝药材及饮片的鉴别方法 - Google Patents

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Abstract

本发明专利公开了一种麻牛膝掺伪川牛膝药材及饮片的鉴别方法，具体涉及化学检测技术领域。包括如下步骤：S1、取川牛膝皂苷B配置成对照品溶液，注入高效液相色谱仪进行检测，得到对照品的高效液相色谱图；S2、取待测川牛膝药材或饮片粉末制成的供试品，注入高效液相色谱仪进行检测，得到供试品的高效液相色谱图；S3、比较对照品和供试品高效液相色谱图，判断川牛膝药材及饮片中麻牛膝掺伪情况，若出现与川牛膝皂苷B保留时间相同的色谱峰，则证明川牛膝药材及饮片中有麻牛膝掺伪。采用本发明技术方案解决了川牛膝和麻牛膝缺乏相应鉴别方法的问题，可用于鉴别川牛膝和麻牛膝。

Description

一种麻牛膝掺伪川牛膝药材及饮片的鉴别方法
技术领域
本发明涉及化学检测技术领域，特别涉及一种麻牛膝掺伪川牛膝药材及饮片的鉴别方法。
背景技术
川牛膝为著名川产道地药材，是苋科植物川牛膝(Cyathula officinalis Kuan)的干燥根，收载于2020年版《中国药典》，有逐瘀通经，通利关节，利尿通淋之功效。但目前的川牛膝市场较为混乱，调研发现有麻牛膝(基原：头花杯苋Cyathula capitata(Wall.)Moq.)混入或冒充正品使用的情况。混淆品的原植物在四川省内分布广泛，二者在植物形态和药材性状上都颇为相似，难以区分，且现有的《中国药典》标准也无法将二者进行区分。因此，亟需一种行之有效的鉴别方法，为川牛膝的检验提供依据。
发明内容
本发明意在提供一种麻牛膝掺伪川牛膝药材及饮片的鉴别方法，解决了川牛膝和麻牛膝缺乏相应鉴别方法的问题。
为了达到上述目的，本发明的技术方案如下：一种麻牛膝掺伪川牛膝药材及饮片的鉴别方法，包括如下步骤：
S1、取川牛膝皂苷B配置成对照品溶液，注入高效液相色谱仪进行检测，得到对照品的高效液相色谱图；
S2、取待测川牛膝药材或饮片粉末制成的供试品，注入高效液相色谱仪进行检测，得到供试品的高效液相色谱图；
S3、比较对照品和供试品高效液相色谱图，判断川牛膝药材及饮片中麻牛膝掺伪状况。
进一步的，步骤S3的判断方法如下：比较供试品高效液相色谱图和对照品高效液相色谱图的保留时间，若供试品高效液相色谱图出现与对照品高效液相色谱图保留时间相同的色谱峰，则判定川牛膝药材及饮片中有麻牛膝掺伪；否则判定无麻牛膝掺伪。
进一步的，步骤S1和S2的色谱条件为：
流动相：以0.1％的磷酸水为流动相A，乙腈为流动相B，进行等度洗脱：0～40min，33％B；
色谱柱：以十八烷基键合硅胶为填充剂；
流速：1ml/min；
柱温：30℃；
进样量：10μL。
进一步的，所述对照品溶液为川牛膝皂苷B的甲醇溶液。
进一步的，步骤S2中供试品溶液的配置方法如下：取待测川牛膝药材或饮片，并加入80％乙醇溶液，水浴回流后放冷、滤过，滤液蒸干，用水洗出，用石油醚、正丁醇萃取后，合并正丁醇部位，蒸干，加甲醇溶解，定容至容量瓶中，滤过即得。
与现有技术相比，本方案的有益效果：
本方案可建立筛选川牛膝药材及饮片中皂苷类检查项补充检验方法，为鉴别川牛膝及其混淆品麻牛膝提供依据，规范川牛膝的使用，保证四川作为川牛膝的道地产区的地位。
附图说明
图1是本实施例中不同来源川牛膝色谱图；
图2是本实施例中不同来源麻牛膝色谱图；
图3是本实施例中川牛膝与麻牛膝的对比色谱图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细的说明：
实施例
如附图1至图3所示：一种麻牛膝掺伪川牛膝药材及饮片的鉴别方法，包括如下步骤：
S1、取川牛膝皂苷B配置成对照品溶液，对照品溶液为川牛膝皂苷B的甲醇溶液，注入高效液相色谱仪进行检测，得到对照品的高效液相色谱图；
S2、取待测川牛膝药材或饮片粉末制成的供试品，步骤S2中供试品溶液的配置方法如下：取待测川牛膝药材或饮片，并加入80％乙醇溶液，水浴回流后放冷、滤过，滤液蒸干，用水洗出，用石油醚、正丁醇萃取后，合并正丁醇部位，蒸干，加甲醇溶解，定容至容量瓶中，滤过即得。注入高效液相色谱仪进行检测，得到供试品的高效液相色谱图；
S3、比较对照品和供试品高效液相色谱图，判断川牛膝药材及饮片中麻牛膝掺伪状况。
步骤S3的判断方法如下：比较供试品高效液相色谱图和对照品高效液相色谱图的保留时间，若供试品高效液相色谱图出现与对照品高效液相色谱图保留时间相同的色谱峰，则判定川牛膝药材及饮片中有麻牛膝掺伪；否则判定无麻牛膝掺伪。
步骤S1和S2的色谱条件为：
流动相：以0.1％的磷酸水为流动相A，乙腈为流动相B，进行等度洗脱：0～40min，33％B；
色谱柱：以十八烷基键合硅胶为填充剂；
流速：1ml/min；
柱温：30℃；
进样量：10μL。
本实施例中采用不同产地的川牛膝药材和麻牛膝药材来进行试验。
川牛膝药材来源如下表1所示：
表1川牛膝样品信息
Figure BDA0003510246900000031
麻牛膝药材来源如下表2所示：
表2麻牛膝样品信息
Figure BDA0003510246900000032
Figure BDA0003510246900000041
本实施例所采用的试剂：
乙腈(色谱纯，sigma)；磷酸(色谱纯，sigma)。
乙醇、正丁醇、石油醚(60-90℃)(分析纯，成都市科龙化工试剂厂)。
水为超纯水。
本实施例中供试品溶液的制备方法如下：
取川牛膝或麻牛膝粉末约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入50ml浓度为80％的乙醇，水浴回流45min，放冷，滤过，滤液至蒸发皿中蒸干，用20ml的水洗出，加入20ml的石油醚(60-90℃)萃取，弃石油醚部位，水层用水饱和正丁醇萃取3次，每次20ml，合并正丁醇部位，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
色谱条件
流动相：以0.1％的磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，进行等度洗脱，0～40min，33％B；
色谱柱：以十八烷基键合硅胶为填充剂；
流速：1ml/min；
柱温：30℃；
进样量：10μL。
高效液相色谱仪的检测结果如下：
(1)10份不同来源川牛膝色谱图如图1所示；
(2)6份不同来源麻牛膝色谱图如图2所示；
(3)川牛膝与麻牛膝的对比色谱图如图3所示。
通过附图1至3可知，麻牛膝有区别于川牛膝的特征峰，可用于川牛膝和麻牛膝的鉴别。
本实施例的工艺筛选实验
1样品前处理研究
1.1提取溶剂考察
取川牛膝或麻牛膝粉末约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入50％乙醇/80％乙醇/无水乙醇/甲醇25ml，水浴回流60min，放冷，滤过，滤液至蒸发皿中蒸干，用20ml的水洗出，加入20ml的石油醚(60-90℃)萃取，弃石油醚部位，水层用水饱和正丁醇萃取3次，每次20ml，合并正丁醇部位，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果如表3所示。
表3不同提取溶剂考察
Figure BDA0003510246900000051
结果显示，提取溶剂以80％乙醇的峰面积/取样量最高，提取效果最好。
1.2提取方式考察
取川牛膝或麻牛膝粉末约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入25ml浓度为80％的乙醇，回流/超声60min，放冷，滤过，滤液至蒸发皿中蒸干，用20ml的水洗出，加入20ml的石油醚(60-90℃)萃取，弃石油醚部位，水层用水饱和正丁醇萃取3次，每次20ml，合并正丁醇部位，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果如表4所示。
表4不同提取方式考察
Figure BDA0003510246900000052
结果显示，提取方式以回流提取的峰面积/取样量最高，提取效果最好。
1.3提取时间考察
取川牛膝或麻牛膝粉末约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入25ml浓度为80％的乙醇，水浴回流15/30/45/60min，放冷，滤过，滤液至蒸发皿中蒸干，用20ml的水洗出，加入20ml的石油醚(60-90℃)萃取，弃石油醚部位，水层用水饱和正丁醇萃取3次，每次20ml，合并正丁醇部位，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果如表5所示。
表5不同提取时间考察
Figure BDA0003510246900000061
结果显示，提取时间以回流提取45min的峰面积/取样量最高，提取效果最好。
1.4料液比考察
取川牛膝或麻牛膝粉末约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入10、25、50、100ml浓度为80％的乙醇，水浴回流45min，放冷，滤过，滤液至蒸发皿中蒸干，用水20ml洗出，加入20ml的石油醚(60-90℃)萃取，弃石油醚部位，水层用水饱和正丁醇萃取3次，每次20ml，合并正丁醇部位，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果如表6所示。
表6料液比考察
Figure BDA0003510246900000062
结果显示，料液比以1:200的峰面积/取样量最高，提取效果最好。
1.5萃取次数考察
石油醚萃取次数考察：取川牛膝或麻牛膝粉末约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入50ml浓度为80％的乙醇，水浴回流45min，放冷，滤过，滤液至蒸发皿中蒸干，用20ml的水洗出，加入20ml的石油醚(60-90℃)萃取0/1/2次，弃石油醚部位，水层用水饱和正丁醇萃取3次，每次20ml，合并正丁醇部位，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果如表7所示。
表7石油醚萃取次数考察
Figure BDA0003510246900000063
结果显示，石油醚萃取0次川牛膝有干扰，萃取1次以上川牛膝无干扰。麻牛膝萃取1次的峰面积/取样量最高，故用石油醚萃取1次。
1.6正丁醇萃取次数考察：
取川牛膝或麻牛膝粉末约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入50ml浓度为80％的乙醇，水浴回流45min，放冷，滤过，滤液至蒸发皿中蒸干，用20ml的水洗出，加入20ml的石油醚(60-90℃)萃取1次，弃石油醚部位，水层用水饱和正丁醇萃取1次/2次/3次/4次，每次20ml，合并正丁醇部位，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果如表8所示。
表8正丁醇萃取次数考察
Figure BDA0003510246900000071
结果显示，正丁醇萃取3次能够基本萃取完全，故用正丁醇萃取3次。
1.7提取方法的确定
取川牛膝或麻牛膝粉末约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入50ml浓度为80％的乙醇，水浴回流45min，放冷，滤过，滤液至蒸发皿中蒸干，用20ml的水洗出，加入20ml的石油醚(60-90℃)萃取1次，弃石油醚部位，水层用水饱和正丁醇萃取3次，每次20ml，合并正丁醇部位，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2色谱条件的考察：
2.1检测波长的选择：
在全波谱扫描下，川牛膝皂苷B在195nm处有最大吸收度，但是考虑到各品牌仪器的精密度，未考虑200nm以下的波长，故选择的205nm为检测波长。
2.2流动相的选择：
流动相考察了乙腈-磷酸系统、乙腈-甲酸系统。乙腈-甲酸系统基线不平稳，无鉴别峰；乙腈-磷酸系统可以较好实现特征峰的鉴别。
2.3磷酸溶液浓度的选择：
对流动相中磷酸溶液浓度进行考察。分别考察A1：乙腈-0.1％磷酸溶液、A2：乙腈-0.05％磷酸溶液、A3：乙腈-0.01％磷酸溶液、A4：乙腈-水四个系统。
结果显示：A1、A2、A3系统均能实现良好的分离鉴定，而A4系统色谱峰出峰时间长不利于分离鉴别，初步确定磷酸溶液浓度的可选择范围为0.01％～0.1％。
3精密度
取对照品溶液，连续进样5次，测定峰面积。
表9精密度试验结果
Figure BDA0003510246900000081
4重复性考察
取同一批样品0.2g，共取6分，精密称定，制定6份供试品，分别测定。
表10重复性试验结果
Figure BDA0003510246900000082
结果显示，本方案的重复性良好。
5稳定性考察
取同一供试品溶液于不同时间，分别进样10μL，测定。
表11稳定性实验结果
Figure BDA0003510246900000083
结果显示，本方案的稳定性良好。
以上的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体结构和/或特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。

Claims (5)

1.一种麻牛膝掺伪川牛膝药材及饮片的鉴别方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1、取川牛膝皂苷B配置成对照品溶液，注入高效液相色谱仪进行检测，得到对照品的高效液相色谱图；
S2、取待测川牛膝药材或饮片粉末制成的供试品，注入高效液相色谱仪进行检测，得到供试品的高效液相色谱图；
S3、比较对照品和供试品高效液相色谱图，判断川牛膝药材及饮片中麻牛膝掺伪状况。
2.根据权利要求1所述的一种麻牛膝掺伪川牛膝药材及饮片的鉴别方法，其特征在于：步骤S3的判断方法如下：比较供试品高效液相色谱图和对照品高效液相色谱图的保留时间，若供试品高效液相色谱图出现与对照品高效液相色谱图保留时间相同的色谱峰，则判定川牛膝药材及饮片中有麻牛膝掺伪；否则判定无麻牛膝掺伪。
3.根据权利要求1所述的一种麻牛膝掺伪川牛膝药材及饮片的鉴别方法，其特征在于：步骤S1和S2的色谱条件为：
流动相：以0.1％的磷酸水为流动相A，乙腈为流动相B，进行等度洗脱：0～40min，33％B；
色谱柱：以十八烷基键合硅胶为填充剂；
流速：1ml/min；
柱温：30℃；
进样量：10μL。
4.根据权利要求1所述的一种麻牛膝掺伪川牛膝药材及饮片的鉴别方法，其特征在于：所述对照品溶液为川牛膝皂苷B的甲醇溶液。
5.根据权利要求1所述的一种麻牛膝掺伪川牛膝药材及饮片的鉴别方法，其特征在于：步骤S2中供试品溶液的配置方法如下：取待测川牛膝药材或饮片，并加入80％乙醇溶液，水浴回流后放冷、滤过，滤液蒸干，用水洗出，用石油醚、正丁醇萃取后，合并正丁醇部位，蒸干，加甲醇溶解，定容至容量瓶中，滤过即得。
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CN118186065A (zh) * 2024-05-17 2024-06-14 四川省药品检验研究院(四川省医疗器械检测中心) 一种基于its杂合位点判断杂牛膝及其杂交渐渗程度的方法及其应用

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