CN115236224B - 皂角刺中药饮片标准汤剂中东莨菪内酯的含量的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及药物分析的技术领域,特别涉及皂角刺中药饮片标准汤剂中东莨菪内酯的含量的测定方法。所述方法包括以下步骤:提供东莨菪内酯对照品溶液;制备待测皂角刺中药饮片标准汤剂样品溶液;对所述东莨菪内酯对照品溶液和所述待测皂角刺中药饮片标准汤剂样品溶液进行超高效液相色谱测定;所述超高效液相色谱的色谱条件包括:流动相包括流动性A和流动相B,所述流动相A包括乙腈,所述流动相B包括甲酸的水溶液,洗脱方式为等度洗脱。本发明可以测定待测皂角刺饮片标准汤剂样品中东莨菪内酯的含量,为研究皂角刺饮片标准汤剂的抗癌抑癌及抑菌等活性功效提供物质基础。
Description
技术领域
本发明涉及药物分析的技术领域,特别涉及皂角刺中药饮片标准汤剂中东莨菪内酯的含量的测定方法。
背景技术
皂角刺又称皂角针,为豆科落叶乔木植物树的棘刺。皂角刺含有黄酮类、酚类、氨基酸和香豆素等成分,具有消肿托毒,排脓,杀虫之功效。关于皂角刺质量标准的研究并不多,2020年版《中国药典》皂角刺药材和饮片的质量标准项下仅有性状、显微鉴别和薄层鉴别项,质量标准仍不完善。
中药饮片标准汤剂是以中医理论为指导,临床应用为基础,参考现代提取方法,经标准化工艺制备而成的单味中药饮片水煎剂,作为一种标准物质和标准体系,能够用于标化临床用药,规范目前临床广泛使用的包括配方颗粒在内的新型饮片形式,保障用药的准确性和剂量的一致性。因此,采用现代分析技术,建立中药饮片标准汤剂的质量标准,能够为相应的配方颗粒以及经典名方等现代中药制剂质量标准的建立提供重要参考。
皂角刺的物质基础研究薄弱,化学成分复杂且含量较低,研究难度较大。且关于皂角刺的研究主要在药材和配方颗粒上,基本集中在对皂角刺黄酮和酚酸类成分的研究,对其他成分研究较少。而现代药理研究表明,以东莨菪碱为代表的香豆素类成分是皂角刺具有抗癌抑癌及抑菌等活性的物质基础,有鉴于此,有必要对皂角刺饮片标准汤剂中东莨菪碱进行含量测定。
发明内容
本发明提供一种皂角刺中药饮片标准汤剂中东莨菪内酯的含量的测定方法。其技术方案如下:
一种皂角刺中药饮片标准汤剂中东莨菪内酯的含量的测定方法,包括以下步骤:
提供东莨菪内酯对照品溶液;
混合待测皂角刺中药饮片标准汤剂样品和提取溶剂,进行提取处理,将所得提取物溶解进行萃取处理,将所得萃取物溶解,制备待测皂角刺中药饮片标准汤剂样品溶液;
对所述东莨菪内酯对照品溶液和所述待测皂角刺中药饮片标准汤剂样品溶液进行超高效液相色谱测定;
所述超高效液相色谱的色谱条件包括:
流动相包括流动性A和流动相B,所述流动相A包括乙腈,所述流动相B包括甲酸的水溶液,洗脱方式为等度洗脱。
在一些实施例中,所述流动相A的体积分数保持8%~12%,所述流动相B的体积分数保持88%~92%。优选地,所述流动相A的体积分数保持10%,所述流动相B的体积分数保持90%。
在一些实施例中,所述甲酸的水溶液中,所述甲酸的体积分数为0.05%~0.2%。优选地,所述甲酸的水溶液中,所述甲酸的体积分数为0.1%。
在一些实施例中,所述超高效液相色谱的色谱条件还包括:固定相为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱。
可选的色谱柱包括但不限于:Waters CORTECS T3色谱柱(2.1mm×100mm,1.6μm)、Waters BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm,1.7μm)、Agilent SB C18色谱柱(2.1mm×100mm,1.8μm)。
在一些实施例中,所述超高效液相色谱的色谱条件还包括:流速为每分钟0.28mL~0.32mL,和/或柱温为28℃~32℃,和/或检测波长为320nm-360nm。优选地,流速为每分钟0.3mL,和/或柱温为30℃,和/或检测波长为340nm。
在一些实施例中,所述提取溶剂为甲醇、甲醇的水溶液或乙醇的水溶液。可选地,甲醇的水溶液中,甲醇的体积分数可以为20%~80%,乙醇的水溶液中,乙醇的体积分数可以为20%~80%。
在一些实施例中,所述提取处理为超声处理或加热回流处理。
可选地,所述提取处理为超声处理,所述超声处理的时间为15min~45min。优选地,所述超声处理的时间为30min。
可选地,所述提取处理为超声处理,所述提取溶剂的用量满足:每0.5g所述皂角刺饮片标准汤剂对应10mL~25mL所述提取溶剂。优选地,每0.5g所述皂角刺饮片标准汤剂对应14mL~16mL所述提取溶剂。
可选地,所述提取处理为超声处理,所述超声处理的功率为400W~600W,频率30kHz~50kHz。
可选地,所述提取处理为加热回流处理,所述加热回流处理的温度为70℃~80℃,时间为15min~45min。
可以理解地,提取处理后,上清液为提取液,将提取液干燥得到提取物。
可以理解地,将所得提取物溶解的溶剂可以为水,将所得提取物溶解后,还可以包括洗涤的步骤。
在一些实施例中,所述萃取处理的次数不少于2次。优选地,所述萃取处理的次数不少于3次。
可选地,萃取剂为正丁醇。
可以理解地,萃取处理后,正丁醇液为萃取液,将萃取液干燥得到萃取物。
可以理解地,将所述萃取物溶解的溶剂可以是甲醇。
在一些实施例中,所述东莨菪内酯对照品溶液的溶剂为甲醇。
与传统方案相比,本发明具有以下有益效果:
本发明对待测皂角刺饮片标准汤剂样品进行高效液相色谱测定,将待测皂角刺饮片标准汤剂样品中的东莨菪内酯洗脱出来,并测定其含量,为研究皂角刺饮片标准汤剂的抗癌抑癌及抑菌等活性功效提供物质基础。通过对本发明的东莨菪内酯的含量的测定方法进行方法学验证,发现本发明的测定方法专属性、精密度、重复性、准确性和耐用性好,本发明为对皂角刺饮片标准汤剂质量标准的建立提供依据,也为皂角刺配方颗粒及其经典名方等现代中药制剂质量标准的建立提供重要参考。
附图说明
图1为皂角刺饮片标准汤剂中东莨菪内酯含量测定方法专属性考察图;
图2为皂角刺饮片标准汤剂中东莨菪内酯含量测定方法峰纯度考察图;
图3为东莨菪内酯标准曲线图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明。本发明可以以许多不同的形式来实现,并不限于本文所描述的实施方式。相反地,提供这些实施方式的目的是使对本发明公开内容理解更加透彻全面。
除非另有定义,本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的,不是旨在于限制本发明。
1仪器与试剂
仪器:旋转蒸发仪(RE-3000A,上海亚荣生化仪器厂),陶瓷保健壶(3L,深圳一枚王有限公司),循环水真空泵(SHZ-DШ,巩义市予华仪器有限公司),低温冷却液循环水泵(DLSB-5/20,郑州长城科工贸有限公司),真空冷冻干燥机(TRL-0.5,大连双瑞科技有限公司),电热恒温鼓风干燥箱(DHG-9626A,上海精宏实验设备有限公司)、Waters CORTECS T3色谱柱(2.1mm×100mm,1.6μm);Waters BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm,1.7μm)Agilent SBC18色谱柱(2.1mm×100mm,1.8μm)。百分之一电子分析天平(JJ600,常熟市双杰测试仪器厂);万分之一电子分析天平(ME204E,梅特勒-托利多公司);百万分之一电子分析天平(XP26,梅特勒-托利多公司);数控超声波清洗器(KQ-500DE,昆山市超声仪器有限公司);恒温水浴锅(HWS28,上海一恒科技有限公司);超纯水系统(Milli-Q Direct,默克股份有限公司)。
2试药
2.1皂角刺饮片的制备
按照《中国药典》2020版皂角刺项下炮制规定制成皂角刺饮片。具体炮制方法为:皂角刺药材去除杂质,剪成适合的段,放置清洗筐内,快速洗净,用干净的湿毛巾覆盖在净药材上,闷润,润透,切成厚片,规格为2~4mm,在50℃下干燥4~5小时,取出,放凉。
2.2皂角刺饮片标准汤剂的制备
取皂角刺饮片200g,加水煎煮两次,第一次煎煮加水10倍量水,浸泡30分钟,武火(500W)煮沸后文火(200W)保持微沸30分钟,用350目筛网趁热过滤,滤液迅速冷水冷却;第二次加水8倍量,武火(500W)煮沸后文火(200W)保持微沸25分钟,350目筛网趁热过滤,滤液迅速用冷水冷却,合并两次滤液。将煎液转移至2000mL圆底烧瓶中,采用旋转蒸发仪减压低温浓缩(温度:65℃;真空度:-0.08~-0.1MPa)至100mL;在磁力搅拌下,分装至10mL西林瓶中,每瓶分装体积为2mL,分装完毕后转移至真空冷冻干燥机中冻干,取出,轧铝盖,即得标准汤剂冻干粉,18批不同产地皂角刺饮片制备的标准汤剂冻干粉批号见表1所示。
表1
2.3对照品溶液的制备
精密称取东莨菪内酯对照品(批号:110768-202105,含量为99.7%)3.880mg,置20mL量瓶中,加甲醇制成每1mL含193.418μg的对照品储备液;精密移取上述对照品储备液1.0mL置10mL量瓶中,加甲醇制成每1mL含19.342μg的东莨菪内酯对照品溶液。
2.4供试品溶液的制备
取皂角刺饮片标准汤剂(批次GT1708021)适量,研细,取约0.5g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入甲醇15mL,超声处理(功率500W,频率40kHZ)30分钟,离心,取上清液蒸干,残渣加水10mL使溶解,另加氨水10mL洗涤,转移至分液漏斗中,用正丁醇振摇萃取3次,每次20mL,合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇使溶解,转移至5mL量瓶,加甲醇至刻度,摇匀,过滤,取续滤液,即得供试品溶液。
3色谱条件
选择Waters CORTECS T3(2.1mm×100mm,1.6μm)色谱柱,以乙腈为流动相A,以体积分数为0.1%的甲酸水溶液为流动相B,等度洗脱,其中流动相A的体积分数保持10%,流动相B的体积分数保持90%。流速为每分钟0.3mL;柱温为30℃;进样量为2μL;检测波长为340nm。
4供试品溶液制备方法考察
4.1提取溶剂考察
参照“2.4”项下的供试品溶液的制备方法,分别以甲醇、体积分数为50%的甲醇水溶液、乙醇、体积分数为50%的乙醇水溶液为提取溶剂,制备供试品溶液。按“3”项下的色谱条件,将上述供试品溶液和“2.3”项下的东莨菪内酯对照品溶液分别进样测定。记录对照品溶液和供试品溶液色谱图中东莨菪内酯色谱峰的峰面积,并计算供试品溶液中东莨菪内酯的含量,结果见表2。
表2
结果显示,除乙醇外,其余提取溶剂提取的东莨菪内酯含量差异不大。最终选择甲醇为皂角刺饮片标准汤剂中东莨菪内酯含量测定的提取溶剂。
4.2提取方式考察
参照“2.4”项下的供试品溶液的制备方法,分别采用超声提取和加热回流两种提取方式进行处理,制备供试品溶液。其中,超声提取(功率500W,频率40kHZ)30分钟,加热回流(水浴锅温度为70~80℃)30分钟。按“3”项下的色谱条件,将上述供试品溶液和“2.3”项下的东莨菪内酯对照品溶液分别进样测定。记录对照品溶液和供试品溶液色谱图中东莨菪内酯色谱峰的峰面积,计算供试品溶液中东莨菪内酯的含量,结果见表3。
表3
结果显示,超声处理与加热回流两种提取方式测定的东莨菪内酯含量无显著差别,说明两种方式提取效率相当,从操作方便考虑,选择超声提取处理。
4.3超声提取时间考察
参照“2.4”项下的供试品溶液的制备方法,分别超声提取15分钟、30分钟、45分钟,制备供试品溶液。按“3”项下的色谱条件,将上述供试品溶液和“2.3”项下的东莨菪内酯对照品溶液分别进样测定。记录对照品溶液和供试品溶液的色谱图中东莨菪内酯的色谱峰面积,计算供试品溶液中东莨菪内酯的含量,结果见表4。
表4
结果显示,比较不同提取时间对东莨菪内酯含量的影响,其中提取30分钟提取效率最高,因此,选取超声时间为30分钟。
4.4提取溶剂用量考察
参照“2.4”项下的供试品溶液的制备方法,分别加入提取溶剂(甲醇)10mL、15mL、20mL,制备供试品溶液。按“3”项下的色谱条件,将上述供试品溶液和“2.3”项下的东莨菪内酯对照品溶液分别进样测定。记录对照品溶液和供试品溶液色谱图中东莨菪内酯的色谱峰面积,计算供试品溶液中东莨菪内酯的含量,结果见表5。
表5
结果显示,比较不同提取溶剂用量对东莨菪内酯含量的影响,其中提取溶剂用量15mL提取效率最高,因此,选取15mL作为皂角刺饮片标准汤剂中东莨菪内酯含量测定的提取溶剂用量。
4.5供试品溶液制备方法的确认
综上所述,皂角刺饮片标准汤剂特征图谱的供试品溶液制备方法确认为:取本品适量,研细,精密称取0.5g,置锥形瓶中,精密加入甲醇15mL,超声处理(功率500W,频率40kHZ)30分钟,离心,取上清液蒸干,残渣加水10mL使溶解,另加氨水10mL洗涤,转移至分液漏斗中,用正丁醇振摇萃取3次,每次20mL,合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇使溶解,转移至5mL量瓶,加甲醇至刻度,摇匀,过滤,取续滤液,即得。
5方法学验证
5.1专属性考察
取皂角刺饮片标准汤剂(批号:GT1708021)适量,研细,取约0.5g,精密称定,按“4.5”项下确认的供试品溶液制备方法,制备供试品溶液,按“3”项下的色谱条件,将上述供试品溶液、“2.3”项下的东莨菪内酯对照品溶液和空白溶剂(甲醇)分别进样测定,记录色谱图,如图1所示。
结果显示:供试品溶液的色谱与对照品溶液色谱相应的保留时间处有相同的色谱峰,且空白溶剂无干扰,说明皂角刺饮片标准汤剂中东莨菪内酯含量测定方法专属性好。
5.2峰纯度考察
取皂角刺饮片标准汤剂(批号:GT1708021)适量,研细,取约0.5g,精密称定,按“4.5”项下确认的供试品溶液制备方法,制备供试品溶液,精密吸取上述供试品溶液和“2.3”项下的东莨菪内酯对照品溶液,按“3”项下的色谱条件,以DAD检测器进行210~400nm扫描检测,进样测定,计算峰纯度,如图2所示。
结果显示:供试品溶液中东莨菪内酯峰未检测到杂质峰,峰纯度符合要求,说明在“3”项下的色谱条件,东莨菪内酯峰纯度符合要求。
5.3线性关系考察
精密称取东莨菪内酯对照品3.880mg,置20mL量瓶中,加甲醇制成每1mL含193.418μg的对照品储备液;分别精密吸取上述储备液0.02mL、0.04mL、0.2mL、1.0mL、5.0mL、7.5mL置10mL量瓶中,加甲醇定容至刻度,分别制成每1mL含0.387μg、0.774μg、3.868μg、19.342μg、77.367μg、145.064μg的对照品溶液线性溶液,精密吸取上述对照品溶液线性溶液,按“3”项下色谱条件进样测定,记录色谱峰面积。以峰面积为纵坐标(y),对照品浓度为横坐标(x),绘制标准曲线。结果见表6和图3。
表6
结果显示:东莨菪内酯的回归方程为:y=417.13x+0.0111,其相关系数r=1.0000,表明东莨菪内酯在浓度为0.387μg/mL~145.064μg/mL的范围内浓度与峰面积线性关系良好。
5.4精密度考察
精密吸取“2.3”项下东莨菪内酯对照品溶液,按“3”项下色谱条件重复进样6次,记录对照品溶液的色谱图中东莨菪内酯色谱峰的峰面积,并计算峰面积RSD值,结果见表7。
表7
结果显示,同一份对照品溶液连续进样6次,东莨菪内酯峰面积的RSD值为0.95%,小于3.0%,表明仪器精密度良好。
5.5稳定性考察
取皂角刺饮片标准汤剂(批号:GT1708021)适量,研细,取约0.5g,精密称定,按“4.5”项下确认的供试品溶液制备方法,制备供试品溶液,按“3”项下的色谱条件,将上述供试品溶液分别在0、2、4、6、10、16、24小时进样测定,记录供试品溶液的色谱图中东莨菪内酯色谱峰的峰面积,并计算峰面积RSD值,结果见表8。
表8
结果显示,同一份供试品溶液,分别在0、2、4、6、10、16、24小时进样测定,东莨菪内酯峰面积的RSD值为2.08%,说明该方法下供试品溶液在24小时内稳定性良好。
5.6重复性考察
取皂角刺饮片标准汤剂(批号:GT1708021)适量,研细,取约0.5g,精密称定,按“4.5”项下确认的供试品溶液制备方法,制备6份供试品溶液,按“3”项下的色谱条件,将上述6份供试品溶液进样测定。记录供试品溶液色谱图中东莨菪内酯色谱峰的峰面积,并计算东莨菪内酯含量及RSD值,结果见表9。
表9
结果显示:同一批样品重复测定6次,东莨菪内酯含量RSD值为1.30%,根据中国药典2020年版“药品质量标准分析方法验证指导原则”规定样品中待测成分含量在0.01%~0.1%时,重复性RSD限度为<3%,说明该分析方法的重复性良好。
5.7中间精密度考察
选择不同实验人员在不同的时间、不同的仪器测定,取皂角刺饮片标准汤剂(批号:GT1708021)适量,研细,取约0.5g,精密称定,按“4.5”项下确认的供试品溶液制备方法,制备6份供试品溶液,按“3”项下的色谱条件,将上述6份供试品溶液进样测定。记录供试品溶液色谱图中东莨菪内酯色谱峰的峰面积,并计算东莨菪内酯含量及RSD值,结果见表10。
表10
结果显示,同一批样品由不同的人员于不同的时间在不同的仪器上操作,重复测定6次,东莨菪内酯含量RSD值为2.22%,与重复性试验6个数据的RSD值为2.18%,根据中国药典2020年版“药品质量标准分析方法验证指导原则”规定样品中待测成分含量在0.01%~0.1%时,中间精密度RSD限度为<4%,说明该方法中间精密度良好。
5.8准确度考察
精密称取东莨菪内酯(批号:110768-202105,含量为99.7%)对照品3.880mg,置20ml量瓶中,加甲醇制成每1ml含193.418μg的对照品储备溶液。精密移取上述对照品储备溶液0.8mL置25mL量瓶中,加甲醇制成每1mL含6.189μg的标准品溶液。
采用加样回收法,按标准品加入量与供试品中待测成分之比为1:1进行加样测定。
取已知东莨菪内酯含量的皂角刺饮片标准汤剂适量,研细,取约0.25g,精密称定,平行6份,置具塞锥形瓶中,分别精密加入标准品溶液5mL,按“4.5”项下确认的供试品溶液制备方法,制备供试品溶液,按“3”项下的色谱条件,将上述供试品溶液进样测定。记录供试品溶液色谱图中东莨菪内酯色谱峰的峰面积,计算东莨菪内酯含量,计算加样回收率,结果见表11。
表11
结果显示,东莨菪内酯回收率为97.68%,东莨菪内酯的加样回收率范围为94.82%~100.65%,平均加样回收率为97.68%,RSD值为2.39%,根据中国药典2020年版“药品质量标准分析方法验证指导原则”规定样品中待测成分含量在0.01%~0.1%时,回收率限度为90%~108%,说明该方法准确度良好。
5.9耐用性考察
5.9.1不同色谱柱耐用性考察
比较不同品牌的色谱柱:Waters CORTECS T3色谱柱(2.1mm×100mm,1.6μm)、Waters BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm,1.7μm)、Agilent SB C18色谱柱(2.1mm×100mm,1.8μm)对皂角刺饮片标准汤剂中东莨菪内酯含量测定的影响。
取皂角刺饮片标准汤剂(GT1708021)适量,研细,取约0.5g,精密称定,按“4.5”项下确认的供试品溶液制备方法,制备供试品溶液,除色谱柱不同外,其他条件按“3”项下的色谱条件,将上述供试品溶液进样分析,并计算东莨菪内酯的含量及RSD值,结果见表12。
表12
结果显示:不同品牌色谱柱分离效果良好,东莨菪内酯含量RSD值为3.58%,表明该方法对不同品牌色谱柱耐用性较好。
5.9.2不同柱温耐用性考察
比较不同柱温,分别为28℃、30℃和32℃,对皂角刺饮片标准汤剂中东莨菪内酯含量测定的影响。
取皂角刺饮片标准汤剂(GT1708021)适量,研细,取约0.5g,精密称定,按“4.5”项下确认的供试品溶液制备方法,制备供试品溶液,除柱温不同外,其他条件按“3”项下的色谱条件,将上述供试品溶液进样分析,并计算东莨菪内酯含量及RSD值,结果见表13。
表13
结果显示,在不同柱温(±2℃)下测得的皂角刺饮片标准汤剂中东莨菪内酯含量RSD值为1.13%,表明该分析方法在柱温±2℃范围内耐用性良好。
5.9.3不同流速耐用性考察
比较不同流速,分别为0.28mL/min、0.30mL/min和0.32mL/min,对皂角刺饮片标准汤剂中东莨菪内酯含量测定的影响。
取皂角刺饮片标准汤剂(GT1708021)适量,研细,取约0.5g,精密称定,按“4.5”项下确认的供试品溶液制备方法,制备供试品溶液,除流速不同外,其他条件按“3”项下的色谱条件,将上述供试品溶液进样分析,并计算东莨菪内酯含量及RSD值,结果见表14。
表14
结果显示,在不同流速(±0.02mL/min)下测得的皂角刺饮片标准汤剂中东莨菪内酯含量RSD值为3.79%,表明该分析方法在流速±0.02mL/min范围内耐用性良好。
5.9.4不同比例流动相的耐用性考察
比较不同体积分数的乙腈-0.1%甲酸溶液作为流动相时,对皂角刺饮片标准汤剂中东莨菪内酯含量测定的影响。其中,第一组流动相为:乙腈的体积分数保持8%,0.1%甲酸溶液的体积分数保持92%;第二组流动相为:乙腈的体积分数保持10%,0.1%甲酸溶液的体积分数保持90%;第三组流动相为:乙腈的体积分数保持12%,0.1%甲酸溶液的体积分数保持88%。
取皂角刺饮片标准汤剂(GT1708021)适量,研细,取约0.5g,精密称定,按“4.5”项下确认的供试品溶液制备方法,制备供试品溶液,除流动相乙腈和0.1%甲酸溶液的体积分数不同外,其他条件按“3”项下的色谱条件,将上述供试品溶液进样分析,并计算东莨菪内酯含量及RSD值,结果见表15。
表15
结果显示,在不同比例的流动相下测得的皂角刺饮片标准汤剂东莨菪内酯的含量RSD值为2.80%,表明该方法在流动相A(乙腈)的体积分数为8%~12%,流动相B(0.1%甲酸溶液)的体积分数为88%~92%范围内耐用性良好。
6样品测定
取表1中所示的18批皂角刺饮片标准汤剂,按“4.5”项下确认的供试品溶液制备方法,制备18份供试品溶液,按“3”项下的色谱条件,将上述供试品溶液进样测定,记录供试品溶液的色谱图中东莨菪内酯的特征峰的峰面积,采用外标法计算供试品溶液中的东莨菪内酯的含量,结果见表16。
表16
结果显示,18批皂角刺饮片标准汤剂中东莨菪内酯的含量范围在0.1242mg/g~0.6913mg/g,含量均值为0.3063mg/g,SD为0.1674mg/g,均值的±30%范围为0.2144mg/g~0.3981mg/g,均值±3倍SD范围为-0.1959mg/g~0.8084mg/g。考虑到18批样品的代表性,取均值的70%为下限,均值+3倍SD为上限,确定皂角刺饮片标准汤剂中东莨菪内酯的含量范围应为0.2144mg/g~0.8084mg/g。
本发明结合超高效液相色谱对待测皂角刺饮片标准汤剂样品中的东莨菪内酯进行含量测定,为研究皂角刺饮片标准汤剂的抗癌抑癌及抑菌等活性功效提供物质基础。通过对本发明的东莨菪内酯的含量的测定方法进行方法学验证,发现本发明的测定方法专属性、精密度、重复性、准确性和耐用性好,本发明为对皂角刺饮片标准汤剂质量标准的建立提供依据,也为皂角刺配方颗粒及其经典名方等现代中药制剂质量标准的建立提供重要参考。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,只要这些技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (7)
1.一种皂角刺中药饮片标准汤剂中东莨菪内酯的含量的测定方法,其特征在于,包括以下步骤:
提供东莨菪内酯对照品溶液;
混合待测皂角刺中药饮片标准汤剂样品和提取溶剂,进行提取处理,将所得提取物溶解进行萃取处理,将所得萃取物溶解,制备待测皂角刺中药饮片标准汤剂样品溶液;所述提取溶剂为甲醇、甲醇的水溶液或50%乙醇的水溶液;
对所述东莨菪内酯对照品溶液和所述待测皂角刺中药饮片标准汤剂样品溶液进行超高效液相色谱测定;
所述超高效液相色谱的色谱条件包括:
流动相包括流动相A和流动相B,所述流动相A是乙腈,所述流动相B是甲酸的水溶液,洗脱方式为等度洗脱;
所述流动相A的体积分数保持8%~12%,所述流动相B的体积分数保持88%~92%;
所述甲酸的水溶液中,所述甲酸的体积分数为0.05%~0.2%;
所述超高效液相色谱的色谱条件还包括:固定相为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱。
2.根据权利要求1所述的皂角刺中药饮片标准汤剂中东莨菪内酯的含量的测定方法,其特征在于,所述超高效液相色谱的色谱条件还包括:流速为每分钟0.28mL~0.32mL,和/或柱温为28℃~32℃,和/或检测波长为320nm-360nm。
3.根据权利要求1~2任一项所述的皂角刺中药饮片标准汤剂中东莨菪内酯的含量的测定方法,其特征在于,所述甲醇的水溶液为50%甲醇。
4.根据权利要求1~2任一项所述的皂角刺中药饮片标准汤剂中东莨菪内酯的含量的测定方法,其特征在于,所述提取处理为超声处理或加热回流处理。
5.根据权利要求4所述的皂角刺中药饮片标准汤剂中东莨菪内酯的含量的测定方法,其特征在于,所述超声处理的时间为15min~45min。
6.根据权利要求4所述的皂角刺中药饮片标准汤剂中东莨菪内酯的含量的测定方法,其特征在于,所述提取处理为超声处理,所述提取溶剂的用量满足:每0.5g所述皂角刺中药饮片标准汤剂对应10mL~25mL所述提取溶剂。
7.根据权利要求1~2任一项所述的皂角刺中药饮片标准汤剂中东莨菪内酯的含量的测定方法,其特征在于,所述东莨菪内酯对照品溶液的溶剂为甲醇。
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CN103760271A (zh) * | 2014-01-27 | 2014-04-30 | 余显维 | 脑心清胶囊的检测方法 |
CN114674958A (zh) * | 2022-03-25 | 2022-06-28 | 天津中医药大学 | 一种大皂角中活性成分含量的测定方法 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
刘艳明 等.中药皂角刺的化学组成及液相色谱研究.精细化工.2006,23(10),967-971,976. * |
尹卫平 等.皂角刺中3个香豆素类化合物及其细胞毒活性研究.中草药.2016,47(14),2424-2427. * |
徐小飞 等.桑白皮蜜炙前后东莨菪内酯含量变化研究.广东药学院学报.2011,27(6),579-581. * |
杨岚 等.青蒿药材中东莨菪内酯的含量测定.中国实验方剂学杂志.2006,12(10),10-11. * |
谭亮 等.高效液相色谱法同时测定旱芹中东莨菪内酯和滨蒿内酯含量.中南药学.2010,8(7),503-506. * |
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