CN115060811B - 一种金樱子肉配方颗粒的特征图谱检测方法及其质控方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种金樱子肉配方颗粒的特征图谱检测方法及其质控方法，其中，一种金樱子肉配方颗粒的特征图谱检测方法，包括采用高效液相色谱法进行检测，高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长：250～270nm；以乙腈为流动相A，0.05‑0.2％的磷酸水溶液或0.05‑0.2％的甲酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱程序进行洗脱。本发明的方法获得的特征图谱中特征峰更多，基线更加平稳；且本发明的方法具有快速高效、检测时间短，该特征峰中包含的已知成分种类更多，更加适用于金樱子肉配方颗粒的整体质量控制。

Description

一种金樱子肉配方颗粒的特征图谱检测方法及其质控方法

技术领域

本发明涉及中药检测和质量控制领域，具体涉及一种金樱子肉配方颗粒的特征图谱检测方法及其质控方法。

背景技术

金樱子肉是指取净金樱子，略浸、润透、纵切两瓣，除去毛、核的干燥品。金樱子肉来源于啬薇科植物金樱子的外层果肉，以色红，肉质厚，纯净无籽者为佳。属中医临床常用药，具有固精缩尿、涩肠止泻作用。

金樱子肉配方颗粒是以金樱子肉为原料，经过水提、浓缩、干燥制备得到的颗粒剂。现有技术中公开的金樱子肉配方颗粒的高效液相色谱方法，其检测得到的特征图谱，存在基线不平稳、特征峰少的问题，并且，检测的得到的图谱中各特征峰之间分离度不高，导致存在特征峰不纯的情况。同时，现有公开的检测方法还存在检测时间长的问题，极大地浪费资源。

发明内容

因此，本发明要解决的问题是，现有技术中公开的高效液相色谱方法检测得到的特征图谱存在基线不平稳、特征峰少的问题；本发明提供了一种金樱子肉配方颗粒的特征图谱检测方法，该方法获得的特征图谱中特征峰更多，基线更加平稳；因此，更加适用于金樱子肉配方颗粒的质量控制。

一种金樱子肉配方颗粒的特征图谱检测方法，采用高效液相色谱法进行检测，高效液相色谱法的色谱条件为：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长：250～270nm；以乙腈为流动相A，0.05-0.2％的磷酸水溶液或0.05-0.2％的甲酸水溶液为流动相B，按以下梯度洗脱程序进行洗脱：

所述t1为40～53min，所述A1为3～5，A2为25，A3为40～90。

所述梯度洗脱程序还包括：

其中，t2＝t1+a,a为0.1～1；t3＝t2+b，b为3～5。

所述高效液相色谱法中色谱柱的柱温为25℃～35℃，流速为0.8ml/min～1.2ml/min。

所述色谱柱的柱温为28℃～32℃，流速为0.9～1.1ml/min。

所述流动相B为0.08-0.12％的磷酸水溶液，检测波长为260nm；色谱柱为WatersAtlantis^TM T3。

所述梯度洗脱程序为：

检测时采用的供试品溶液的制备过程为：取金樱子肉配方颗粒，加溶剂，密塞，超声处理，冷却后摇匀，过滤后获得滤液，滤液即为供试品溶液。

所述超声处理的功率为功率300W，频率40kHz；超声时间为30-60min，优选为45min；

所述溶剂为甲醇、70％以下的醇溶液或水；

每克金樱子肉配方颗粒中添加的溶剂的量为20-100ml，优选的，每克金樱子肉配方颗粒中添加的溶剂的量为30-35ml。

采用上述的一种金樱子肉配方颗粒的特征图谱检测方法构建得到的特征图谱进行质控的方法，金樱子肉配方颗粒的特征图谱中包括没食子酸、鞣花酸-4-O-a-L-阿拉伯糖苷、鞣花酸、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡糖苷酸所对应的特征峰，该没食子酸为峰1，鞣花酸-4-O-a-L-阿拉伯糖苷为峰6，鞣花酸为峰7，槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡糖苷酸为峰8；以峰7为S峰，其他特征峰相对峰7的相对保留时间为规定值的±10％，所述各特征峰的规定值为：

峰1：0.28、峰2：0.53、峰3：0.54、峰4：0.72、峰5：0.92、峰6：0.95、峰8：1.03。

以峰7为S峰，峰6的相对峰面积值不得小于0.13。

本发明技术方案，具有如下优点：

本发明的一种金樱子肉配方颗粒的特征图谱检测方法可以获得基线更加平稳、特征峰更多的特征图谱，且各个特征峰分离效果较好。因此，该特征图谱能够全面地反应金樱子肉配方颗粒的特征峰信息，适用于金樱子肉配方颗粒的整体质量控制。

并且，本发明的方法检测时间可以将梯度洗脱时间缩短到40min，而且在明显缩短洗脱时间的情况下还能获得更多分离效果较好的特征峰，效果十分显著。因此，本发明具有快速高效、检测时间短、特征峰的信息量多等优点，该特征峰中包含的已知成分种类更多，更加适用于金樱子肉配方颗粒的整体质量控制。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明中金樱子肉配方颗粒的对照特征图谱。

图2是本发明中没食子酸和鞣花酸与金樱子肉配方颗粒的定位指纹图谱。

图3是本发明中鞣花酸-4-O-a-L-阿拉伯糖苷与金樱子肉配方颗粒的定位指纹图谱。

图4是本发明中槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡糖苷酸与金樱子肉配方颗粒的定位指纹图谱。

图5是本发明中金樱子肉配方颗粒在230nm下检测的特征图谱。

图6是本发明中金樱子肉配方颗粒在250nm下检测的特征图谱。

图7是本发明中金樱子肉配方颗粒在260nm下检测的特征图谱。

图8是本发明中金樱子肉配方颗粒在270nm下检测的特征图谱。

图9是本发明中金樱子肉配方颗粒在290nm下检测的特征图谱。

图10是本发明中金樱子肉配方颗粒采用色谱柱1检测的特征图谱。

图11是本发明中金樱子肉配方颗粒采用色谱柱2检测的特征图谱。

图12是本发明中金樱子肉配方颗粒采用色谱柱3检测的特征图谱。

图13是本发明中金樱子肉配方颗粒采用表1的梯度洗脱程序获得的特征图谱。

图14是本发明中金樱子肉配方颗粒采用表18的梯度洗脱程序获得的特征图谱。

图15是本发明中金樱子肉配方颗粒采用水作为供试品的提取溶剂获得的特征图谱。

图16是本发明中金樱子肉配方颗粒采用甲醇作为供试品的提取溶剂获得的特征图谱。

图17是本发明中金樱子肉配方颗粒采用乙醇作为供试品的提取溶剂获得的特征图谱。

具体实施方式

实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品，本发明中未注明的百分比均为体积百分比。

仪器：

色谱仪1:Waters e2695色谱系统，包括四元梯度输液泵(Alliance2695型)、120位高性能自动进样器、原装进口色谱柱温箱、Waters 2998二极管阵列紫外检测器、Empower色谱管理系统；

色谱仪2：岛津色谱系统，包括LC-20AT型四元泵、SIL-20AC型自动进样器、SPD-M20A型PDA二极管阵列检测器、CTO-20AC型柱温箱、CBM-20A系统控制器，Empower色谱管理系统；

色谱仪3：UltiMate 3000色谱系统，包括LPG-3400A四元泵、WPS-3000TSL自动进样器、PDA二极管阵列检测器、色谱工作站；

XS204、XS205、XSE205万分之一天平(瑞士梅特勒)、ME36S百万分之一天平(瑞士梅特勒)、超声仪(上海科导超声仪器有限公司)、水浴锅。

试药：

没食子酸(批号：110831-201605，供含量测定用，以90.8％计算)购于中国食品药品检定研究院

鞣花酸(批号：111959-201602，供含量测定用，以89.3％计算)购于中国食品药品检定研究院

鞣花酸-4-O-a-L-阿拉伯糖苷(批号：22012502)购于上海诗丹德标准技术服务有限公司

槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡糖苷酸(批号：080097-202111)购于上海鸿永生物科技有限公司

金樱子肉配方颗粒(批号：1808001Y、1808002Y、1808003Y)，制备工艺为：取饮片2000g，加水煎煮2次，第一次加8倍水浸泡30分钟，煎煮30分钟，200目滤过，第二次加6倍水，煎煮25分钟，200目滤过，合并滤液，浓缩至相对密度1.18～1.24g/mL(65～75℃)的流膏，加入麦芽糊精(加入量＝投料量×10％)，将辅料加入浸膏中，在浓缩液贮罐搅拌均匀，带式干燥，粉碎，出膏率为26.0～40.0％，加辅料适量，混匀，干法制粒，制成1000g。

试剂：乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

实施例1

一种金樱子肉配方颗粒的特征图谱检测方法，采用高效液相色谱法(HPLC)进行检测，高效液相色谱法的色谱条件为：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters Atlantis^TM T3，粒径5μm，规格4.6mm×250mm)；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水溶液为流动相B，按下表1中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；柱温为30℃；检测波长为260nm。

表1

参照物溶液的制备：取金樱子对照药材约2.0g，置具塞锥形瓶中，加入水50ml，加热回流45分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，加入70％甲醇25ml，密塞，超声处理(功率300W，频率40kHz)45分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得对照药材参照物溶液。另取没食子酸、鞣花酸对照品适量，精密称定，加甲醇溶液分别制成每1ml各含20μg的混合溶液，即得没食子酸和鞣花酸混合的对照品参照物溶液。分别取鞣花酸-4-O-a-L-阿拉伯糖苷、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡糖苷酸对照品适量，精密称定，加甲醇溶液分别制成每1ml含20μg的对照品参照物溶液。

供试品溶液的制备：取金樱子肉配方颗粒约0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率300W，频率40kHz)45分钟，取出，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取参照物溶液以及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本实施例中采用15批金樱子肉饮片标准汤剂(冻干粉)和3批配方颗粒生成特征图谱；15批金樱子肉饮片标准汤剂(冻干粉)的制备过程如下：

取金樱子药材，根据《中国药典》2020年版的规定进行炮制(炮制工艺：取净金樱子，略浸，润透，纵切两瓣，除去毛、核，干燥)成符合要求的饮片，取金樱子肉饮片混匀，取约100g，置砂锅中，加入800mL纯化水浸泡30分钟，采用电热煲先武火煮沸，再文火煎煮30分钟，200目滤布趁热过滤，滤液迅速冷却至室温；药渣再加600mL去离子水，武火煮沸后，再文火煎煮25分钟，200目滤布趁热过滤，滤液迅速冷却至室温，合并两次滤液，称取滤液重量；滤液减压浓缩(50～65℃)成浓浸膏(相对密度1.18～1.24g/mL)，并且测定浓浸膏的含固量，计算标准汤剂的出膏率；浓浸膏置于冷冻干燥机中，冷冻干燥至干燥状态，取出，研磨成粉末，称重，分装于西林瓶中，即得饮片标准汤剂(冻干粉)。

基于上述获取的18份特征图谱，采用药典委员会编制的指纹图谱相似度评价软件“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版”，采用“多点校正、MARK峰匹配”模式进行拟合、生成对照特征图谱，得到的金樱子肉配方颗粒对照特征图谱；色谱匹配之后，得到8个响应值较合适、分离度较好、纯度较高的共有特征峰，按照色谱峰的顺序重新排列色谱峰序号为峰1～峰8，如图1所示。

通过高效液相色谱-高分辨质谱联用方法(HPLC-Q-TOF/MS)对金樱子肉配方颗粒特征图谱特征峰进行分析，根据样品多级质谱信息，结合天然产物高分辨质谱数据库及相关文献，并且采用HPLC进行对照品的定位，具体的相关结果如图2-4以及表2所示。

表2金樱子肉配方颗粒HPLC-Q-TOF/MS分析结果

根据上述结果确定了峰1为没食子酸，峰6为鞣花酸-4-O-a-L-阿拉伯糖苷，峰7为鞣花酸，峰8为槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡糖苷酸。鞣花酸为含量测定指标成分，因此，采用鞣花酸作为参照峰，更好地评价各特征峰的相对保留时间和相对峰面积。以上述15批金樱子肉饮片标准汤剂(冻干粉)和3批配方颗粒生成的特征图谱，以鞣花酸为S峰计算各特征峰的相对保留时间和相对峰面积，如下表3和表4所示。

表3

表4

由表3可知，供试品色谱中应呈现8个特征峰，并应与对照药材参照物色谱中8个特征峰的保留时间相对应，其中1、7号峰应与对应的参照物峰的保留时间相对应，与鞣花酸对照品参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％之内。规定值为：0.53(峰2)、0.54(峰3)、0.72(峰4)、0.92(峰5)、0.95(峰6)、1.03(峰8)。

由表4可知，以鞣花酸为参照峰计算与各个峰的相对峰面积，峰3、峰5、峰6和峰8的相对峰面积，批次间的偏差较少，说明了峰3、峰5、峰6和峰8在批次间的差异较小。结合金樱子肉配方颗粒特征图谱方法学考察数据分析，峰5、峰6和峰8的相对峰面积受到不同因素的影响较小，而峰3的稳定性则较差。通过高效液相色谱-高分辨质谱联用方法(HPLC-Q-TOF/MS)对金樱子肉配方颗粒特征图谱特征峰进行分析，根据样品多级质谱信息，结合天然产物高分辨质谱数据库及相关文献，初步推测峰6为鞣花酸-4-O-a-L-阿拉伯糖苷；因此，采用对峰6的相对峰面积进行控制，提高金樱子肉配方颗粒的质量控制水平。以鞣花酸色谱峰为参照峰(S峰)，计算峰6与S峰的相对峰面积，18批次金樱子肉样品特征图谱峰6的相对峰面积的实测范围为：0.15-0.26，均值为0.19，SD为0.03，因此，以均值-30％规定峰6的相对峰面积值不得小于0.13，通过相对保留时间以及峰6的相对峰面积值可以实现金樱子肉配方颗粒的质量控制。

实施例2

本实施例与实施例1的区别在于，色谱条件不同，具体如下：

1、检测波长

取金樱子肉配方颗粒适量(批号：1808001Y)，研细，按实施例1中供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液，分别采用不同检测波长(230nm、250nm、260nm、270nm、290nm)按实施例1中的相同的其他条件进行测定，检测结果如图5-图9以及表5所示。

表5

不同波长考察结果显示：在230-290nm波长处，随着波长的增加，特征图谱的基线逐渐平稳，但同时峰信息量随着波长的增加有减少，波长在250-270nm下，特征图谱的基线平稳、峰信息量较多，并且各峰的响应值相对较高且各峰响应相对均衡，综合考虑，选择250-270nm为金樱子肉配方颗粒特征图谱的检测波长，优选为260nm为金樱子肉配方颗粒特征图谱的检测波长。

2、流速

取金樱子肉配方颗粒适量(批号：1808001Y)，研细，按实施例1中供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液，分别采用不同流速(0.8ml/min、0.9ml/min、1.0ml/min、1.1ml/min、1.2ml/min)按实施例1中的相同的其他条件进行测定，结果如下表6-表8所示。

表6

表7

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表8

上述表6中的峰号是基于出峰时间顺序依次进行标注的普通色谱峰，而表7和表8中的峰是对应实施例1中对照图谱中的特征峰标注出的特征峰。

不同流速考察结果显示：分别考察不同流速(0.8ml/min、0.9ml/min、1.0ml/min、1.1ml/min、1.2ml/min)对各峰的理论板数、分离度等均有一定影响，但上述范围内的流速均符合系统适用性要求，其中，0.9-1.1ml/min相对较优，更优选为1.0ml/min。

3、柱温

取金樱子肉配方颗粒适量(批号：1808001Y)，研细，按实施例1中供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液，分别采用不同柱温(25℃、28℃、30℃、32℃及35℃)按实施例1中的相同的其他条件进行测定，检测结果如下表9-表11所示。

表9

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表10

表11

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上述表9中的峰号是基于出峰时间顺序依次进行标注的普通色谱峰，而表10和表11中的峰是对应实施例1中对照图谱中的特征峰标注出的特征峰。

不同柱温考察结果显示：分别考察不同柱温(25℃、28℃、30℃、32℃及35℃)对各峰的保留时间发生、分离度等均有一定影响，但上述范围内的柱温均符合系统适用性要求，其中，28℃-32℃相对较优，更优选为30℃。

4、流动相

取金樱子肉配方颗粒适量(批号：1808001Y)，研细，按实施例1中供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液，分别采用不同种类的流动相B(0.1％磷酸水溶液、0.1％甲酸水溶液、0.1％乙酸水溶液)按实施例1中的相同的其他条件进行测定，检测结果如下表12所示。

表12

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对流动相磷酸、甲酸和乙酸进行比较研究，采用乙腈-0.1％磷酸水溶液、乙腈-0.1％甲酸水溶液作为流动相系统时，6号色谱峰间的分离度稍优于同浓度的乙酸水溶液，因此，选择乙腈-0.1％磷酸水溶液和乙腈-0.1％甲酸水溶液为作为流动相；并且磷酸条件下特征图谱的峰信息量较多，因此优选为乙腈-0.1％磷酸水溶液系统为金樱子肉配方颗粒特征图谱的流动相系统，并且在此基础上对磷酸的浓度进行优化比较，以获得较合适的流动相系统，具体过程如下：

取金樱子肉配方颗粒适量(批号：1808001Y)，研细，按实施例1中供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液，分别采用不同浓度的磷酸水溶液(0.05％、0.08％、0.1％、0.12％、0.2％)按实施例1中的相同的其他条件进行测定，检测结果如下表13-表15所示。

表13

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表14

表15

上述表12和13中的峰号是基于出峰时间顺序依次进行标注的普通色谱峰，而表14和表15中的峰是对应实施例1中对照图谱中的特征峰标注出的特征峰。

不同流动相考察结果显示：分别考察不同浓度的流动相B(0.05％、0.08％、0.1％、0.12％、0.2％)对各峰的对称性、分离度等均有一定影响，但上述范围内的浓度均符合系统适用性要求，其中，0.08％-0.12％相对较优，更优选为0.1％。

5、色谱柱种类

取供试品(批号：1808001Y)按实施例1中的相同的制备方法制备供试品溶液，采用实施例1中的梯度洗脱并采用不同型号色谱柱按实施例1中的相同的其他条件进行测定，结果如表16-17以及图10-图12所示。

色谱柱1：岛津lnertSustain AQ-C18(5μm，4.6mm×250mm)；

色谱柱2：资生堂capcell pak C18 AQ(5μm，4.6mm×250mm)；

色谱柱3：Waters Atlantis^TM T3(5μm，4.6mm×250mm)；

表16

表17

通过上述表16-17以及图10-12可知：采用Waters Atlantis^TM T3色谱柱下，色谱峰的信息量较丰富且分离度较好，因此色谱柱优选为Waters Atlantis^TM T3色谱柱。

6、洗脱梯度

取金樱子肉配方颗粒适量(批号：1808001Y)，研细，按实施例1中供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液，分别采用上表1和下表18的洗脱梯度程序按实施例1中的相同的其他条件进行检测。

表18

表1和表18的洗脱梯度程序分别检测得到的色谱图如图13和图14所示。采用上述梯度洗脱程序均能有效分离出特征峰1-8，但表1中的梯度洗脱程序获取的图谱中，色谱信息较丰富，色谱峰的分离度较好，基线较平稳，优选为表1的梯度洗脱程序。

实施例3

本实施例与实施例1的区别在于，供试品溶液的制备参数不同，具体如下：

1、供试品溶液的提取溶剂

取金樱子肉配方颗粒约0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入溶剂25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率300W，频率40kHz)45分钟，取出，放冷，再称定重量，用溶剂补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。考察水、30％甲醇水溶液、50％甲醇水溶液、70％甲醇水溶液、甲醇、30％乙醇溶液、50％乙醇水溶液、70％乙醇水溶液、乙醇对供试品提取结果的影响，比较不同提取溶剂对图谱的影响，检测结果如下表19和图15-17所示。

表19

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结果表明：通过比较各种溶剂提取得到的色谱图、色谱峰的系统适应性参数及总峰面积，溶剂为甲醇、70％以下的醇溶液或水时，均能有效获得基线平稳且特征峰信息较多的特征图谱，其中，70％甲醇提取得到的色谱峰信息量较大，峰型较好，系统适应性参数相对较优，故选择70％甲醇作为本试验的最优提取溶剂。

2、供试品溶液的溶剂体积

取金樱子肉配方颗粒约0.4g、0.6g、0.8g、1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入溶剂25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率300W，频率40kHz)45分钟，取出，放冷，再称定重量，用溶剂补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

结果表明：在各个取样量下，色谱峰的系统适应性参数差异不明显，而当取样量为0.8g，色谱峰的峰高及峰宽相对适中，因此，选择0.8g作为本试验的取样量。

3、供试品溶液的提取时间

取金樱子肉配方颗粒约0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入溶剂25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率300W，频率40kHz)30分钟、45分钟、60分钟，取出，放冷，再称定重量，用溶剂补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

结果表明：30min的总峰面积相对其他提取时间小，但在45min-60min，随着提取时间的延长，特征峰的总峰面积差异不大，说明在该范围内，各特征成分能被完全提取，考虑到提取效率，选择45min为提取时间。

实施例4

对实施例1中的方法进行精密度和稳定性考察，验证过程如下：

1、精密度

1.1仪器精密度试验

取同一份金樱子肉配方颗粒供试品溶液，按实施例1色谱条件重复进样6次，测定各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，检测结果如表20所示。

表20

结果表明：各特征峰与参照物S峰(7号峰)的相对保留时间的RSD均小于2％，而相对峰面积的RSD均小于2％，表明该方法的仪器精密度良好。

1.2方法重复性试验

取同一份金樱子肉配方颗粒，按实施例1色谱条件的供试品制备方法重复制备6份，并且按照色谱条件测定各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，检测结果如表21所示。

表21

结果表明：各特征峰与参照物S峰(7号峰)的相对保留时间的RSD均小于2％，而相对峰面积的RSD均小于3％。表明该方法的重复性良好。

1.3中间精密度(不同操作人员)

分别由三名检验员在不同的时间，取同一份金樱子肉配方颗粒，按实施例1色谱条件的供试品制备方法制备样品，并且用同一台设备测定各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，检测结果如表22所示。

表22

结果表明：各特征峰与参照物S峰(7号峰)的相对保留时间的相对平均偏差均小于2％，而相对峰面积的偏差均小于3％。表明该方法的中间精密度良好。

1.4中间精密度(不同高效液相色谱仪)

由同一名检验员在不同的时间，取同一份金樱子肉配方颗粒，按实施例1色谱条件的供试品制备方法制备样品，并且分别用三台不同设备(waters、戴安、岛津)测定各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，检测结果如表23所示。

表23

结果表明：色谱峰均能在液相上重现，各特征峰的相对保留时间的偏差均小于3％，但个别特征峰的相对峰面积的偏差较大，说明不同仪器对特征峰的相对保留时间的影响较小。

1.5稳定性考察

取同一份金樱子肉配方颗粒供试品溶液，按实施例1色谱条件分别在0、2、4、8、12、18、24小时进样，测定各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，检测结果如表24所示。

表24

结果表明了各色谱峰与参照物S峰(7号峰)的RSD均小于2％，而各特征峰的相对峰面积的RSD在4％以内。表明供试品溶液在24小时内稳定，符合测定要求。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (11)

1.一种金樱子肉配方颗粒的特征图谱检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法进行检测，高效液相色谱法的色谱条件为：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，粒径5µm ，规格4.6mm×250mm；检测波长：250～270nm；以乙腈为流动相A，0.05-0.2%的磷酸水溶液或甲酸水溶液为流动相B，按以下梯度洗脱程序进行洗脱：

所述t1为40～53，所述A1为3～5，A2为25，A3为40～90；

金樱子肉配方颗粒的特征图谱中包括没食子酸、鞣花酸-4-O-a-L-阿拉伯糖苷、鞣花酸、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡糖苷酸所对应的特征峰。

2.根据权利要求1所述的一种金樱子肉配方颗粒的特征图谱检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序还包括：

其中，t2=t1+a,a为0.1～1；t3=t2+b，b为3～5。

3.根据权利要求1或2所述的一种金樱子肉配方颗粒的特征图谱检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法中色谱柱的柱温为25℃～35℃，流速为0.8ml/min～1.2ml/min。

4.根据权利要求3所述的一种金樱子肉配方颗粒的特征图谱检测方法，所述色谱柱的柱温为28℃～32℃，流速为0.9～1.1ml/min。

5.根据权利要求1或2所述的一种金樱子肉配方颗粒的特征图谱检测方法，其特征在于，所述流动相B为0.08-0.12%的磷酸水溶液，检测波长为260nm；色谱柱为WatersAtlantis^TMT3。

6.根据权利要求1或2所述的一种金樱子肉配方颗粒的特征图谱检测方法，所述梯度洗脱程序为：

。

7.根据权利要求1或2所述的一种金樱子肉配方颗粒的特征图谱检测方法，其特征在于，检测时采用的供试品溶液的制备过程为：取金樱子肉配方颗粒，加溶剂，密塞，超声处理，冷却后摇匀，过滤后获得滤液，滤液即为供试品溶液。

8.根据权利要求7所述的一种金樱子肉配方颗粒的特征图谱检测方法，其特征在于，所述超声处理的功率为功率300W，频率40kHz；超声时间为30-60min；

所述溶剂为甲醇、70%以下的醇溶液或水；

每克金樱子肉配方颗粒中添加的溶剂的量为20-100ml。

9.根据权利要求8所述的一种金樱子肉配方颗粒的特征图谱检测方法，其特征在于，所述超声处理的超声时间为45min；

每克金樱子肉配方颗粒中添加的溶剂的量为30-35 ml。

10.采用权利要求1-9任一项所述的一种金樱子肉配方颗粒的特征图谱检测方法构建得到的特征图谱进行质控的方法，其特征在于，金樱子肉配方颗粒的特征图谱中包括没食子酸、鞣花酸-4-O-a-L-阿拉伯糖苷、鞣花酸、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡糖苷酸所对应的特征峰，该没食子酸为峰1，鞣花酸-4-O-a-L-阿拉伯糖苷为峰6，鞣花酸为峰7，槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡糖苷酸为峰8；以峰7为S峰，其他特征峰相对峰7的相对保留时间为规定值的±10%，所述各特征峰的规定值为：

峰1：0.28、峰2：0.53、峰3：0.54、峰4：0.72、峰5：0.92、峰6：0.95、峰8：1.03。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，以峰7为S峰，峰6的相对峰面积值不得小于0.13。

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