CN1144560A - 被分析物的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及检测唾液样品中被分析物的方法,该方法克服了已知的唾液试验方法存在的问题。所述方法涉及包含棕榈酸和/或硬脂酸的聚氧乙烯山梨糖醇酐衍生物的表面活性剂溶液的使用,对检测特别易于给出假性阳性结果的新鲜唾液样品非常有用。
Description
本发明涉及检测被分析物(特别是特异性结合分子,例如唾液样品中的抗体或抗原)的方法,本发明尤其涉及在未经贮存或冷冻的新鲜唾液样品中的分析物的检测方法。
唾液中抗体的检测是诊断各种疾病和病态(特别是肠道感染)的一种方便的方法。哺乳动物(特别是人)中的肠道感染刺激分泌粘液的免疫反应,例如通过激活普通粘膜免疫系统分泌唾液。这一反应开始时常常与血清中的抗体反应平行,一般以存在IgA抗体为特征。然而,在抗原(如细菌或病毒)从机体消除后,分泌粘液(包括唾液)的免疫反应迅速减弱。因此,唾液中抗体的存在反映出当时的,即同时发生的感染。在微生物感染的情况下,例如,唾液中的抗体(此后称作分泌抗体)反映出例如肠道中微生物定居的当时的状态,因此是同时发生感染有用的监视物。另一方面,在微生物从机体消除后,血清抗体持续一段时间。因此,阳性血清抗体试验反映出过去和当时抗原的出现,对临床医生较少有帮助。阳性分泌抗体试验指示出当前或同时发生的微生物感染。
由病人提供唾液样品比提供其它液体样品(特别是血清样品)要好得多。而且,在获得唾液样品的过程中,对病人或医生感染的危险性都非常低,因为它不需要使用取血清样品时所需的针头。
从唾液样品诊断的方法是公知的。具体地说,AU-A-9067676涉及检测对粘液分泌物(例如唾液)中Helicobacter pylori抗原有特异性的IgG,从而提供了一种监测该微生物在哺乳动物中的当前(即同时)感染的方法。相应的学术出版物是Witt et al.Fron-tiers in Mucosal Immunology 1 693-696(1991)。
WO-A-9322682涉及有关H.pylori的基于唾液的试验,其中检测针对H.pylori的IgG抗体。
目前可用的基于唾液试验的方法的一个缺点是,在某些情况下,它们可能是不可靠的。试验中获得的假性阳性数量可以高得不可接受。在试图开发有关针对H.pylori的唾液抗体的免疫测定方法而进行的实验中,要求78个受试者将唾液收集到干净的无菌容器中。当试验样品中H.pylori抗体的存在时,由于大量假性阳性结果,发现其与血清试验的结果不能很好地吻合。
与其它大多数类型的诊断试验一样,基于唾液的试验的另一个缺点是,为了获得结果,必须将样品依所要分析的顺序送入实验室。这一过程可能花去几天时间,部分抵销了能够获得微生物当前感染指示的优点。此外,病人可能忘记去获取试验结果,特别是在提交样品和取得试验结果之间症状消失时。
因此,在几分钟内提供可靠结果的检测唾液样品中被分析物的试验试剂盒将是很有价值的,因为在一般医疗工作者的诊断期间可以进行试验。这将有另一个优点,那就是保证病人取得结果,必要时开处方治疗。然而,当在收集的几分钟内分析唾液样品时,任何基于唾液的试验所存在的假性阳性结果的问题更加严重,过去,假性阳性结果多得使对新鲜唾液样品进行试验获得的结果几乎完全没有意义。
人们相信,尤其在新鲜唾液样品中可以出现不足的可靠性,这是由于在样品中存在非特异性结合试验试剂并由此给出假性阳性结果的试剂。当然,向样品中加入降低非特异性结合的试剂是可能的,但也证明存在问题,因为许多这类试剂也降低特异性结合,使得真正的阳性结果与假性阳性一同消失。本发明使解决这一问题,并且在保留真正的阳性结果的同时消除假性阳性结果成为可能。
本发明的第一方面提供了检测唾液样品中被分析物存在的方法,该方法包括使唾液样品与能够和被分析物形成特异性结合复合物的特异性结合剂接触,并且检测特异性结合复合物的存在;其特征在于,首先将唾液样品与包含棕榈酸和/或硬脂酸的聚氧乙烯山梨糖醇酐衍生物的溶液接触。
本发明方法的优点是可以用非侵入性方法快速并可靠地获得试验结果,此外,它克服了当使用新鲜唾液时出现的问题,能够从“点滴”试验获得可靠的结果。在本发明的内容中,“新鲜唾液”指已贮存的时间不长于30分钟,优选地不长于10分钟,常常是短于上述时间的唾液。
有必要非常仔细地选择表面活性剂,本发明一个惊人的特征是,在大范围的可获得的表面活性剂中,能使我们获得可靠结果的仅有的一些是以上限定的那些。合适的表面活性剂可以按以下商标获得:Tween 40、Tween 60、Tween 61、Tween 65和Tween 80。
含有40%-65%硬脂酸衍生物的表面活性剂是优选的,包含约55%硬脂酸衍生物及剩余量为棕榈酸衍生物的Tween60是特别优选的,它明显能给出比大多数其它表面活性剂更可靠的结果。
当使用以下讨论的固体基质时,最好选择表面活性剂存在的量,以使样品通过基质的流量最大。当表面活性剂以0.1%到1%体积(典型地约0.5%体积)的量存在时,所述流量通常最大。这种量的表面活性剂给出消除非特异性结合而不明显影响特异性结合的最好的结果和可由本发明的方法获得的检测极限值。
当溶液缓冲到pH约6.8到约7.8,获得最好的结果,但发现溶液缓冲到7.4时最佳。只要导致溶液的pH值保持在优选的范围内,任何缓冲溶液都可以使用。磷酸盐是用于本发明特别优选的缓冲液,但可以用来保证溶液的pH值在优选范围内的缓冲液的其它例子是本领域技术人员熟知的。
尽管钠盐通常给出最好的结果,但任何水溶性盐(例如钠盐、钾盐或铵盐)均可用于制备所述的缓冲溶液。已发现使用0.001-0.05M,最好是0.02M的磷酸钠溶液可以获得有效的缓冲。
其它试剂可以存在在溶液中,以便降低试验样品中的粘蛋白和颗粒物质对试验试剂的非特异性结合,这些试剂包括无机盐如氯化钠和蛋白质和牛血清白蛋白(BSA)。
氯化钠可以以约0.1到0.2M的浓度存在。不超过0.2M的浓度上限是非常好的,因为这样有助于特异性结合。典型地,存在于溶液中的氯化钠的浓度是约0.125M。
如果存在BSA,则典型地含有约0.05到0.5%(重量),优选0.1%(重量)的量。
所述的被分析物可以是能够与特异性结合剂反应形成特异性结合复合物的任何特异性结合分子。特异性结合复合物的例子包括抗原——抗体复合物,因此,被分析物可以是抗体或抗原。
在被分析物是抗体的情况下,它可以是任何同种型的,并且可以是针对任何病原体的抗体。唾液样品分析在由病原体(例如Heli-cObacter pylori,以前称作Camplobacter pylori)引起的肠道感染的诊断中特别有用。如以上的讨论,H.pylori感染由唾液中存在IgG指示,因此,如果试验的目标是检测H.pylori感染,则被分析物可以是对H.pylori抗原有特异性的IgG。
术语“抗原”以其最广泛的含义被使用,包括完整的病原体细胞,或来源于病原体的同质的、近同质的或异质的抽提物,所有这些都能结合到唾液中的特异性抗体上。
当特异性结合剂是抗原时,它可以是蛋白质、多糖或脂质或它们的任何组合。优选的是抗原的特异性结合剂包括用例如超声波、压力分解、去污剂抽提或分级分离制备的病原体蛋白质、脂多糖或细胞提取物。
当本发明的方法用于检测H.pylori感染时,特异性结合剂可以是得自H.pylori的抗原。适于在本发明的方法中用作特异性结合剂的得自H.pylori的抗原在WO-A9322682中公开。然而,任何H.pylori来源的抗原都可以用作特异性结合剂。
方便的和优选的是将特异性结合剂结合到固体支持物上。合适的固体支持物包括硝化纤维素膜、玻璃或聚合物固体支持物。这一用途最常用的聚合物是纤维素、聚丙烯酰胺、尼龙、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯,但本发明不限于这些。固体支持物可以呈条状、管状、珠状、盘状或微板状,或者适于进行免疫测定的任何其它表面的形式。
特别有用的固体支持物可以包括衬有吸附垫的硝化纤维素膜,这样,当将样品添加到固体支持物上时,被分析物将被硝化纤维素膜上表面上的特异性结合剂固定,而样品的其它组分通过膜并吸附于垫上。这保证了从检测特异性结合复合物的区域除去任何不需要的物质。
硝化纤维素膜可以具有从约0.5到8μm,优选的是从约1到2μm的孔径。
所述的垫可以由任何吸附性材料形成,但吸附性纸是经常选择的材料,这一般是出于对价格的考虑。
在本发明中有用的特异性结合分子可以共价或非共价(“被动”)结合到固体表面上。合适的结合方法是本领域公知的,一般包括将抗原交联、共价结合或物理吸附到固体支持物上。
由通过检测被分析物和特异性结合剂之间的复合物的形成的本发明的方法判断被分析物的存在。因此,某些形式的检测工具是鉴别特异性结合复合物存在(或者需要时测定其量)所必需的。
检测工具可以是与报道分子结合的抗体,它能特异性结合到特异性结合复合物上。
在检测抗体的情况下,检测工具可以包含对被分析物抗体的同种型的所有抗体特异的标记的第二抗体。在人H.pylori试验中,被分析物抗体常常是IgG同种型的,在这种情况下,第二抗体可以是抗一人IgG。
“报道分子”是化学性质上具有经分析可识别的特征,或提供经分析可识别的信号(可用来检测抗原结合的抗体)的分子或基团。检测可以是定性的,也可以是定量的。用于这类检测的报道分子可以是酶、荧光团或包含放射性核素的分子(即,放射性同位素)。在酶免疫测定的情况下,通常用戊二醛或高碘酸盐的方法将酶结合到第二抗体上。然而,将很容易认识到,存在本领域技术人员容易获得的多种不同的结合技术。其中,通常使用的酶包括辣根过氧化物酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶和碱性磷酸酶。一般选择与特异性酶一起使用的生色团以便当用相应的酶水解时产生可检测的颜色变化。生色团可以是可溶的或不可溶的,取决于所选定的用途。例如,5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸盐/氮蓝四唑盐适于与碱性磷酸酶结合物一起使用。对过氧化物酶结合物来说,通常使用1,2-苯二胺-5-氨基水杨酸,3,3,5,5-四甲基联苯胺、联甲苯胺或联茴香胺。使用产生荧光产物的荧光团而不是以上所述的生色团也是可能的。荧光团的例子是荧光素和罗丹明。当被用特定波长的光照射激活时,荧光团标记的抗体吸收光能,诱发分子的激发状态,接着发射特征颜色的光,该光通常是用光学显微镜可肉眼检测的。
然而,本发明特别适合用于在几分钟内可取得结果并且可以在诊断期间由一般医疗工作者进行的“快速诊断”试验中。由于这一原因,检测方法尽可能简单并且不需要特殊仪器时是非常优选的。因此,本发明中优选的报道分子是颜色试剂,例如胶态金或碳,聚苯乙烯或乳胶粒子。
当使用这类报导物质时,除去未结合的第二抗体以使连接有颜色剂的结合的第二抗体明显可见是重要的。这可以通过采用如上所述的固定在背衬吸附垫的硝化纤维素膜上的特异性结合剂来达到。任何剩余的第二抗体都将通过膜并吸附在垫上,仅留下结合的第二抗体的相关的颜色剂在硝化纤维素膜的表面上。
有关从基于唾液的试验获得可靠结果的问题的进一步的研究表明,产生假性阳性结果的一个可能的原因是存在与试验试剂发生非特异性结合从而产生假性阳性结果的唾液中的粘蛋白和颗粒物质。因此,在本发明的方法中,在尝试检测特异性结合复合物存在之前,包括过滤样品的步骤是有利的。
典型地,滤器具有从约1到15μm,优选地从约3到8μm的有效孔径。这可以由使用任何类型的滤器达到,但优选的类型是由塑料制造的具有典型的5到10μm实际孔径的过滤器板。在这种类型的过滤器板中,有效孔径较实际孔径要小,因为过滤器板相对较深,孔径排列在外。
从唾液样品除去颗粒物质有助于保证特异性结合剂结合到其上的基质不被污染。当基质是一种膜时,这一点特别重要,因为颗粒物质可以阻塞膜孔,阻止未结合的样品通过膜和从试验表面除去,从而增加样品流过时间。
在过滤步骤之前可以包括的另一个步骤是初步分离步骤,其中,样品通过粗滤器(如棉花或棉花绒垫)。这可能是通过除去高分子量粘多糖降低了唾液样品的粘度。当特异性结合分子被固定在膜基质上时,降低了粘度的样品是有帮助的,因为粘性唾液样品可能通过膜孔困难,因此,当不存在这一步骤时,试验会花费长得多的时间。此外,如果不包括这一步骤,则残渣常常留在试验表面,会干涉特异性结合反应或检测步骤。
即使当样品已经过预过滤,这些初步过滤步骤在从唾液除去粘蛋白和颗粒物质上并不显得完全有效,流过时间较长,常常获得许多假性阳性结果。
然而,现在已表明,在本发明的试验中,通过在样品吸附到表面上后简单地揩擦基质的表面,降低获得的假性阳性结果的数量是可能的,这是完全意想不到的,因为人们一直认为,所有污染物已由以前尝试的过滤步骤除去,而现在看起来不是这样。
因此,在特异性结合剂吸附在基质上的情况下,本发明的方法优选地包括揩擦基质的步骤,该步骤在样品加入到基质上之后,在尝试测定特异性结合复合物之前。所述揩擦步骤明显缩短样品的流过时间,并减少假性阳性结果的出现。
揩擦可以手工进行,也可以进行自动化操作。一般使用吸附性材料揩擦基质,合适的材料的例子是棉花绒和吸附性纸。
该揩擦步骤应进行得足够强有力,以便从基质表面除去任何不结合到特异性结合分子上的物质。为了确保除去所有不需要的物质,可以向基质上的样品中加入着色剂。为方便起见,着色剂可以包含在表面活性剂溶液中,但这不是必需的。表面活性剂溶液可以包含从约0.005%到0.05%(W/W),优选地从约0.01%到0.02%的颗粒着色剂,但其它类型的着色剂可以以更大的量存在。
着色剂可以是对留在基质上的并且是对唾液试验中发生的假性阳性结果的许多问题的原因的粘蛋白和其它污染物有特异性的试剂。然而,提供作为着色剂的有色颗粒物质(如乳胶、琼脂糖、聚苯乙烯或其它聚合物)常常是比较简单的。当然,粒子应当大于基质孔径,但也必须小于可以使用的任何预过滤滤器的孔径。已经发现在许多情况下使用直径为约3μm的粒子是合适的,因为如以上的讨论,可以选择具有比之更大的孔径的用于任何起始纯化步骤中的滤器。当较小的颗粒通过基质时,有色粒子与引进假性阳性问题的粘蛋白和颗粒杂质一起留在基质表面上。
这样,当使用着色剂时,医疗工作者从基质表面揩擦着色剂,由此保证从基质除去所有表面碎片将是一件简单的事情。
有助于消除假性阳性结果的进一步改进的方法是在基质上提供能够与检测试剂反应的对照试剂。对照试剂与特异性结合分子不处于同一位置,并且能够特异性结合检测试剂。因此,例如,如果检测试剂是抗-人IgG,对照试剂将是人IgG。对照试剂的存在是监测本发明的方法可靠性的一种手段,因为如果不能检测它的存在,则检测方法显然不能正常地起作用。
因此,本发明提供了一种简单并有效的试验唾液样品的方法,即使唾液样品是新鲜的也是如此。
表面活性剂溶液是本发明的一个重要部分,因为已经发现仅以上与本方法有关的讨论中的表面活性剂在阻止试验的假性阳性结果上是完全有效的。
因此,本发明的第二方面提供了一种用于本发明的方法的表面活性剂溶液,该溶液包含0.1%到1%(体积)的棕榈酸和/或硬脂酸的聚氧乙烯山梨糖醇酐衍生物;能够保持溶液的pH值在6.8到7.8水平上的缓冲溶液;以及可有可无的水溶性盐、蛋白质(如BSA)和颗粒着色剂。
优选的缓冲剂及盐、BSA和着色剂的浓度如以上有关本发明第一方面的讨论中讨论的那些。
可以采用试剂盒完成本发明的方法,试剂盒本身构成本发明的另一方面。
本发明的这一方面提供了一种试剂盒,该试剂盒包含:
i)包含棕榈酸和硬脂酸的聚氧乙烯山梨糖醇酐衍生物;
ii)固定在基质上,并且能够与被分析物形成特异性结合复合物的特异性结合剂。
iii)检测特异性结合复合物存在的检测试剂。
本发明在检测针对H.pylori的可能存在H.pylori感染病人唾液中的抗体上特别有用。如以上的讨论,感染产生存在于唾液中的IgG同种型抗体对H.pylori来说并不常见。
因此,本发明的第四方面提供了一种检测对H.pylori有特异性的试剂盒,该试剂盒包含:
i)包含棕榈酸和硬脂酸的聚氧乙烯山梨糖醇酐衍生物的溶液;
ii)固定在基质上的得自H.pylori的抗原;
iii)能够特异性结合人IgG的标记抗体溶液。
溶液的优选组分、优选基质和检测试剂是本发明第一方面方法中描述的那些。
试剂盒也可以包括唾液收集装置。也可以包括用于样品初步过滤的粗滤器(如棉花或棉花绒垫),需要时其可构成唾液收集装置的一部分。此外,试剂盒可以包括除去样品中颗粒物质的滤器。如以上有关第一方面的方法所讨论的,滤器可以具有从约1到15μm,优选地从约3到8μm的有效孔径。这可以用任何类型的滤器达到,但优选的类型是由塑料材料制造的具有约5到l0μm的典型实际孔径的过滤器板。在这种类型的过滤器板中,有效孔径较实际孔径小,因为过滤器板相对较深,孔排列在外。
如果本发明的方法包括以上提到的揩擦步骤,则也可以包括能保留在基质表面上的着色剂。着色剂可以是能使粘蛋白和颗粒杂质着色的试剂,但优选地包括乳胶、琼脂糖、聚苯乙烯或某些其它聚合物,其中应选择粒子大小,以便在所进行的任何初步过滤步骤中粒子不被除去,但要大得不能通过基质的孔。
下面将参照以下实施例详细描述本发明。实施例1制备表面活性剂溶液
从下列成分制备表面活性剂溶液:
0.02M磷酸钠溶液 100ml
氯化钠 0.73g
牛血清白蛋白 0.1g
TWEEN 60TM 0.5g
深蓝色乳胶粒子(3.0μm直径) 0.1g室温下混合。深蓝色乳胶粒子从Polymer Laboratories,UK获得。实施例2制备H.pylori来说的抗原
按照WO-A-9322682实施例1中提出的方法制备H.Pylori来源的抗原。总的来说,制备和分级分离H.Pylori的粗超声波处理物。除去440kDa蛋白质,留下含265和340kDa蛋白质的混合物。实施例3制备试验装置
将1和5μl之间的实施例2的0.05%(W/W)抗原溶液加到基质上形成试验区。基质是由作为引流材料的Schleicher&Schuell色谱纸3469号(从Anderman&Co,Kinston upon Thames,UK获得)背层支撑的1.2μmSARTORIUSTM硝化纤维素膜。
将1到5μl的0.005%(W/W)纯化的普通人IgG溶液(sigmaChemical Company Ltd,Poole,Dorset,UK)加到基质的明显区别于试验区的对照区上。实施例4制备显示剂
用含有0.05%(体积)表面活性剂(按商标Tween 20购得)和0.1%(重量)BSA的磷酸盐缓冲盐水(PBS)稀释结合到山羊抗-人IgG(重和轻链)上的胶态金(Biocell Research Laboratories,Cardiff,UK)至在520nm下1cm样品池中的0.5光密度单位的吸收值,由此制备显示剂。实施例5测定唾液样品
用以商标OmniSal(Saliva Diagnostic Systems,Vancouver,Wash-ington,USA)购得的收集装置收集唾液(1ml),在所述装置中,样品收集到也兼作粗滤器的垫上。然后,将含有样品的收集装置转移到含有1.0ml实施例1溶液的管中。用Porex Ultrafine血清分离器过滤收集的唾液,分离器分离出约5μm物质,然后加入到实施例3制备的试验装置中。
在稀释过的唾液样品流过硝化纤维素膜至衬有背层的色谱纸后,蓝色乳胶粒子在基质表面形成一层。用棉花绒稳而轻地揩擦至无蓝色留下,由此除去以上所述的一层。
将0.5ml实施例4的显示剂加入到试验装置中。使显示剂流过硝化纤维素膜,然后取得试验结果。
在对照区的单独粉红色斑点表明可靠的阴性试验结果,而在试验区和对照区都产生斑点的试验表明阳性结果。
该试验可以检测低至0.8单位(以从0到10的等级计)的抗-H.pylori IgG,并且不给出假性阳性结果。
Claims (29)
1.一种检测唾液样品中被分析物存在的方法,该方法包括使所说的唾液样品与能和被分析物形成特异性结合复合物的特异性结合剂接触,并且检测特异性结合复合物的存在,其特征在于,首先使唾液样品与包含棕榈酸和/或硬脂酸的聚氧乙烯山梨糖醇酐衍生物的溶液接触。
2.如权利要求1要求的方法,其中的唾液样品包括新鲜唾液。
3.如权利要求1或2要求的方法,其中的表面活性剂是可以以商标Tween 40、Tween 60、Tween 61、Tween 65或Tween 80获得的。
4.如权利要求1-3任一要求的方法,其中的表面活性剂以0.1%到1%(体积)的量存在。
5.如权利要求1-4任一要求的方法,其中的表面活性剂溶液被缓冲至PH约6.8到7.8。
6.如权利要求1-5任一要求的方法,其中的被分析物是抗体。
7.如权利要求6要求的方法,其中的被分析物是对H.pylori抗原有特异性的。
8.如权利要求7要求的方法,其中的抗体是IgG同种型的。
9.如权利要求1-8任一要求的方法,其中的特异性结合分子是抗原。
10.如权利要求9要求的方法,其中的抗原得自H.pylori。
11.如权利要求1-10任一要求的方法,其中的特异性结合分子固定在固体支持物(例如硝化纤维素膜或玻璃或聚合物固体支持物)上。
12.如权利要求11要求的方法,其中的固体支持物包括内衬吸附垫的硝化纤维素膜。
13.如权利要求1-12任一要求的方法,其中的特异性结合复合物用与报道分子结合的抗体检测,所说抗体能够特异性结合到特异性结合复合物上。
14.如权利要求13要求的方法,其中的被分析物是H.pylori特异性IgG同种型抗体,特异性结合复合物用能够特异性结合到人IgG上的抗体检测。
15.如权利要求13或14要求的方法,其中的报道分子是酶(例如,辣根过氧化物酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶或碱性磷酸酶)、荧光团(例如荧光素或罗丹明)、包含放射性核素的分子,或颜色试剂(例如胶态金或聚苯乙烯粒子)。
16.如权利要求1-15任一要求的方法,该方法进一步包括在尝试检测特异性结合复合物存在之前过滤样品的步骤。
17.如权利要求16要求的方法,其中的滤器具有从约3到8μm的有效孔径。
18.如权利要求1-17任一要求的方法,该方法进一步包括起始的粗过滤步骤。
19.如权利要求11-18任一要求的方法,该方法进一步包括在样品添加到基质上之后和在尝试检测特异性结合复合物之前揩擦基质。
20.如权利要求19的方法,其中在揩擦步骤前将要保留在基质表面的着色剂添加到样品中。
21.如权利要求20的方法,其中的着色剂包括着色颗粒,其直径小于过滤步骤中使用的任何滤器的孔径,但大于基质的孔径。
22.如权利要求11到21任一要求的方法,其中有固定在基质上的对照试剂,该对照试剂可由相同的方法以特异性结合复合物检测。
23.如权利要求22要求的方法,其中的对照试剂是人IgG。
24.一种适用于权利要求1-23在一要求的方法的表面活性剂溶液,该溶液包含O.1%到1%(体积)的棕榈酸和/或硬脂酸聚氧乙烯山梨糖醇酐衍生物;能够保持溶液的pH值在6.8至7.8水平上的缓冲液;可有可无的水溶性盐、蛋白质(如BSA)和颗粒着色剂。
25.一种试剂盒,该试剂盒包括:
i.包含棕榈酸和硬脂酸的聚氧乙烯山梨糖醇酐衍生物的表面活性剂溶液;
ii.固定在基质上并且能够与被分析物形成特异性结合复合物的特异性结合剂;和
iii.检测特异性结合复合物存在的检测试剂。
26.一种检测对H.pylori有特异性的IgG的试剂盒,该试剂盒包括:
i.包含棕榈酸和硬脂酸的聚氧乙烯山梨糖醇酐衍生物的表面活性剂溶液;
ii.固定在基质上的得自H.pylori的抗原;和
iii.能够特异性结合人IgG的标记抗体的溶液。
27.如权利要求25或26要求的试剂盒,其中的表面活性剂溶液是如权利要求24要求的溶液。
28.如权利要求25到27任一要求的试剂盒,其中的表面活性剂溶液还包括能够保留在基质表面上的着色剂,例如着色颗粒。
29.如权利要求25到28任一要求的试剂盒,该试剂盒还包括以下的一种或多种:
唾液收集装置;
可以构成唾液收集装置一部分的粗滤器,(如棉花或棉花绒垫),和
从样品中除去颗粒物质的滤器。
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