JPH05297003A - 固相法による免疫測定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 レーヨン不織布よりなる免疫測定用固相支持
体、及び当該支持体に被検物質に対する抗体、抗原又は
これらの標識体を固定化した固相体を用いる免疫測定
法。 【効果】 本発明の固相体を用いた免疫測定法によれ
ば、バックグラウンドノイズが低く、Ｓ／Ｎ比が高いた
め、短時間の反応で、かつ簡便な操作で高感度で各種抗
原及び抗体の定量ができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は固相法による免疫測定法
に関し、より詳細には簡易、迅速かつ高感度に免疫測定
を行うための固相支持体及びこれを用いた免疫測定法に
関する。

【０００２】

【従来の技術】抗原抗体反応を利用したヒト体液、廃
水、食料品等の生物学的流体中の微量分析手段は、この
反応が特異的であり、感度が高いことから広く利用され
ている。このうち、固相支持体上に抗原又は抗体を固定
化した固相体を用いる固相法は、抗原抗体反応物と未反
応物との分離（Ｂ／Ｆ分離）が容易であり、迅速に測定
できることから、現在最も広く用いられている。

【０００３】かかる固相法に用いられる固相支持体とし
ては、パルプに代表される天然繊維、ニトロセルロース
に代表される再生繊維、セルロースアセテート、ジエチ
ルアミノエチルセルロースに代表される半合成繊維、ナ
イロン、ポリビニリデンジフルオリド等に代表される合
成繊維、ポリスチレンに代表されるプラスチック等が知
られている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
従来の固相支持体は、（１）抗原又は抗体を固定化する
能力が充分でない、（２）通常吸光度測定に用いられる
４００〜５００nm付近の吸光値が高く、バックグラウン
ドノイズが大きすぎる、（３）未反応時の吸光度に対す
る反応時の吸光度の比（以下、Ｓ／Ｎ比と略す）が充分
に大きくない等の欠点を有し、感度の面で充分満足でき
るものではなかった。従って、本発明の目的は固相法に
よる免疫測定法において高感度に被検物質を定量するこ
とのできる固相支持体、及びこれを用いた免疫測定法を
提供することにある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】かかる実情において本発
明者らは、前記課題を解決すべく各種素材について種々
検討した結果、多くの素材の中でレーヨン、特にレーヨ
ン不織布が各種物質の吸着能に優れ、バックグラウンド
ノイズが小さく、かつＳ／Ｎ比が高いため固相支持体と
して有用であり、更にレーヨン不織布を固相支持体とし
て用いて固相を形成せしめて免疫測定を行えば簡易、迅
速かつ高感度で微量分析ができることを見出し、本発明
を完成するに至った。

【０００６】すなわち、本発明はレーヨン不織布よりな
る免疫測定用固相支持体を提供するものである。また、
本発明はレーヨン不織布に抗原、抗体又はこれらの標識
体を固定化してなる免疫測定用固相体を提供するもので
ある。更にまた本発明は、固相法による免疫測定法にお
いて、固相としてレーヨン不織布に被検物質に対する抗
体、抗原又はこれらの標識体を固定化してなる固相体を
用いることを特徴とする免疫測定法を提供するものであ
る。

【０００７】本発明の免疫測定用固相支持体（以下、支
持体と略す）を構成するレーヨン不織布は、セルロース
系の再生繊維であるビスコースレーヨンを原料とするも
のである。本発明の支持体は不織布であることが必要で
あり、織布は固定化能が低く好ましくない。

【０００８】かかるレーヨン不織布は、湿式法、乾式法
のいずれの方法で製造したものでもよく、その一部にス
パンレース、スパンボンド、メルトブローン、ニードル
パンチ、ステッチボンド等の加工が施されていてもよ
い。また、レーヨン不織布の目付は、固定化能との関係
で１０〜１００ｇ／m²のものが好ましい。なお、レーヨ
ン不織布の形状に制限はなく、市販の不織布を適当な大
きさに切断して使用するのが簡便である。また、免疫反
応を試験管、ビーカー等の中で実施する場合には、図１
のようにガラス又はプラスチック製の攪拌棒の先端部に
レーヨン不織布を接着せしめた形態とすればＢ／Ｆ分離
が容易となり、特に好ましい。免疫反応を固相体上で実
施する場合には、レーヨン不織布のマトリックス中で免
疫反応を行い、それらの廃液をマトリックス下部に設置
した吸収手段により吸収してＢ／Ｆ分離を行う方式とす
るのが好ましい。かかる装置は例えば、特開昭６２−２
２８１６７号、同６３−９６５５９号、同６３−１９８
９６９号、特開平１−２９９４６４号、同１−１９９１
６５号及び同１−１２４７６８号公報等に記載のものを
利用することができる。

【０００９】本発明の免疫測定用固相体（以下、本発明
固相体と略す）は、上記レーヨン不織布よりなる支持体
に抗原、抗体又はこれらの標識体を常法により固定化す
ることにより得られる。

【００１０】固定化される抗原は、測定対象が抗体であ
る場合の当該抗体に対応する抗原であって、その例とし
ては、ヒト体液中の成分、腫瘍マーカー、細菌由来の病
原物質、ウイルスの表面抗原、細菌、ウイルス等が挙げ
られる。また、固定化される抗体は、測定対象に対する
抗体であって、その例としては上記固定化される抗原に
対するポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体が挙
げられる。これらの抗原又は抗体の標識に使用し得る標
識物としては、放射性物質、酵素（β−Ｄ−ガラクトシ
ダーゼ、アルカリフォスファターゼ、ペルオキシダーゼ
等のＥＬＩＳＡ法や免疫蛍光法に適用され得る酵素）、
補酵素、色素、金及び銀コロイド等が挙げられるが、こ
のうち酵素が好ましい。また、これらの標識物を抗原又
は抗体に標識する方法は、特に制限されず、例えばグル
タールアルデヒド法、過ヨウ素酸法、マレイミド法など
を用いることができる。

【００１１】これらの抗原、抗体又はその標識体の支持
体への固定化手段は、自体公知の方法、例えば物理的吸
着法、あるいはジアゾ法、ペプチド法（酸アミド誘導体
法、カルボキシクロリド樹脂法、カルボジイミド樹脂
法、無水マレイン酸誘導体法、イソシアナート誘導体
法、臭化シアン活性化多糖体法、セルロースカルボナー
ト誘導体法、縮合試薬を使用する方法）、アルキル化
法、架橋試薬による担体結合法（架橋試薬としてグルタ
ルアルデヒド、ヘキサメチレンイソシアナート等を用い
る）等の共有結合法を採用することができ、なかでも物
理的吸着法が好ましい。

【００１２】かくして得られる本発明固相体を使用する
ことのできる固相法による免疫測定法としては、競合
法、サンドイッチ法のいずれも挙げることができ、具体
的には２抗体固相競合法、１抗体固相競合法、固相化抗
原と標識抗体を用いる競合法、Ｆｏｒｗａｒｄ ｓａｎ
ｄｗｉｃｈ法（ＥＬＩＳＡを含む）、Ｒｅｖｅｒｓｅｓ
ａｎｄｗｉｃｈ法、Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｔｗｏ
ｓｉｔｅ法が挙げられる。このうち、サンドイッチ法
が特に好ましい。

【００１３】本発明の免疫測定法のうち、特に好ましい
態様は、酵素免疫測定法、すなわち、前記固相体に、被
検液及び被検物質に対する抗体又は抗原のいずれかに対
する抗体の酵素標識体を反応させ、次いで固相体を液相
より分離した後当該固相体上の標識酵素量を測定するこ
とによる被検液中の被検物質の定量法である。

【００１４】ここで被検液としては、前記の測定対象が
含まれている可能性のあるもの、例えば血液、血漿、血
清、脳脊髄液、羊水、乳、汗、尿、唾液、喀痰、肉汁、
糞便、膿、穿刺液、生殖器分泌物などの体液成分及び微
生物の培養液、工場廃水等が挙げられる。

【００１５】本方法に用いられる被検物質に対する抗体
又は抗原のいずれかに対する抗体は、被検物質が抗原で
ある場合は当該被検物質に対する抗体であり、被検物質
が抗体である場合は２次抗体である。かかる抗体及び被
検液と固相体との反応は、固相体に被検液を作用させた
後抗体を反応させても、これら３者を同時に作用させて
もよい。

【００１６】反応終了後のＢ／Ｆ分離は、固相体を反応
液より物理的に分離し、緩衝液等により洗浄すればよ
い。固相体として、図１のような形態のものを利用すれ
ば試験管やビーカーから、手により容易に取り出すこと
ができるのでＢ／Ｆ分離がより簡便である。

【００１７】反応液より分離した固相体上の酵素量を測
定するには、例えば固相体上の酵素に蛍光基質、発色基
質等を反応させ、遊離する蛍光物質、発色物質の量を光
学的手段により測定することにより行われる。なお、得
られた吸光度より被検液中の被検物質量を定量するに
は、予め作成しておいた検量線を用いて行うのが好まし
い。

【００１８】

【実施例】次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明
するが、本発明はこれら実施例に何ら限定されるもので
はない。

【００１９】実施例１（バックグラウンドノイズの検
討） 〔方法〕５０mM 炭酸緩衝液（pH９．８）にて５０μg
／mlに調整した抗コレラ毒素抗体液中に、表１に示す素
材を図１のようにポリスチレン製の攪拌棒に接着したも
の（以下、ディップスティックと略す）を浸漬し、４℃
下で１〜２日間静置する。これらを精製水にて洗浄後、
ブロックエース（大日本製薬）中に浸漬し、４℃下で１
晩以上静置する。該ディップスティックを精製水にて軽
く洗浄後、１０％ブロックエース含有燐酸ナトリウム緩
衝食塩水液（pH７．０）３ml中に浸漬し、３７℃で３時
間インキュベートした。反応の終わったディップスティ
ックを燐酸ナトリウム緩衝食塩水液（pH７．０）の入っ
たビーカー内に投入し充分に攪拌洗浄した。その後、こ
れらをマレイミド法で作製したペルオキシダーゼ標識抗
コレラ毒素抗体溶液（１０％ブロックエース含有燐酸ナ
トリウム緩衝食塩水液（pH７．０）で希釈して４００ng
／mlに調整）３ml中に浸漬し、３７℃下、１時間インキ
ュベートした。反応の終わったディップスティックを燐
酸ナトリウム緩衝食塩水液（pH７．０）の入ったビーカ
ー内で充分に攪拌洗浄して清浄な試験管に移し、ＰＯＤ
発色剤（テトラメチルベンチジン）０．１Ｍ酢酸ナトリ
ウム緩衝液（pH５．５）溶液を１．８ml、０．０２％Ｈ
₂Ｏ₂含有０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（pH５．５）を
０．６ml添加して発色反応を開始させ、３０℃下、１時
間放置した後に２Ｍ硫酸溶液を０．６ml添加して反応を
停止させた。これの４５０nmにおける吸光値を測定し
た。 〔結果〕これらの結果は表１に示す通りである。本検討
には、使用した抗体に反応する特異的な物質（抗原）は
含まれておらず、吸光値はバックグラウンドノイズと判
断できる。洗浄はどの素材も同じ条件で行っており、バ
ックグラウンドノイズは、素材の特性の違いにより発生
しているものと判断される。この値が１００mAbsを超す
ような素材は、高感度な免疫分析素材として不適当であ
る。レーヨン不織布、ニトロセルロース転写膜、ナイロ
ン転写膜及びＰＶＤＦ転写膜については、バックグラウ
ンドノイズが小さく、中でもレーヨン不織布のバックグ
ラウンドノイズが最も小さかった。なお、表１には用い
た素材の目付（ｇ／m²）も併せて示した。

【００２０】

【表１】

【００２１】実施例２（Ｓ／Ｎ比の検討） 〔方法〕５０mM 炭酸緩衝液（pH９．８）にて５０μg
／mlに調整した抗コレラ毒素抗体液中に、レーヨン不織
布、ニトロセルロース転写膜、ナイロン転写膜及びＰＶ
ＤＦ転写膜をポリスチレン製の攪拌棒に接着したディッ
プスティックを浸漬し、４℃下で１〜２日間静置する。
これらを精製水にて洗浄後、ブロックエース（大日本製
薬）中に浸漬し、４℃下で１晩以上静置する。該ディッ
プスティックを精製水にて軽く洗浄後、１０％ブロック
エース含有燐酸ナトリウム緩衝食塩水液（pH７．０）に
て任意に逓減希釈された精製コレラ毒素３ml中に浸漬
し、３７℃で３時間インキュベートした。反応の終わっ
たディップスティックを燐酸ナトリウム緩衝食塩水液
（pH７．０）の入ったビーカー内に投入し充分に攪拌洗
浄した。その後、これらをマレイミド法で作製したペル
オキシダーゼ標識抗体溶液（１０％ブロックエースを含
有燐酸ナトリウム緩衝食塩水液（pH７．０）で希釈して
４００ng／mlに調整）３ml中にディップスティックを浸
漬し、３７℃下、１時間インキュベートした。反応の終
わったディップスティックを燐酸ナトリウム緩衝食塩水
液（pH７．０）の入ったビーカー内で充分に攪拌洗浄し
て清浄な試験管に移し、ＰＯＤ発色剤（テトラメチルベ
ンチジン）０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（pH５．５）
を１．８ml、０．０２％Ｈ₂Ｏ₂含有０．１Ｍ酢酸ナトリ
ウム緩衝液（pH５．５）を０．６ml添加して発色反応を
開始させ、３０℃下、１時間放置した後に２Ｍ硫酸溶液
を０．６ml添加して反応を停止させた。これの４５０nm
における吸光値を測定した。この時、コレラ毒素０濃度
に対する吸光値をバックグラウンドノイズ値とし、この
値に対する各コレラ毒素濃度に対して得られた吸光値の
比をＳ／Ｎ比として算出した。 〔結果〕結果を表２に示す。バックグラウンドノイズの
低い４つの素材のうち、極めて優れたＳ／Ｎ比を達成し
たのは、レーヨン不織布であった。イムノブロットなど
免疫分析目的に開発された転写膜群は、意外にもＳ／Ｎ
比は低かった。レーヨン不織布につぐ成績を残したナイ
ロン転写膜でもＳ／Ｎ比はレーヨン不織布と比較してコ
レラ濃度１ng／ml及び１０ng／mlでは３分の１以下であ
った。

【００２２】

【表２】

【００２３】実施例３（コレラ毒素の測定） 〔方法〕５０mM 炭酸緩衝液（pH９．８）にて５０μg
／mlに調整した抗コレラ毒素抗体液中にポリスチレンビ
ーズもしくはレーヨン不織布貼付ディップスティック
（レーヨンＤＳ）を浸漬し、４℃下で１〜２日間静置す
る。これらを精製水にて洗浄後、２％牛血清アルブミン
（ＢＳＡ）を含む燐酸ナトリウム緩衝食塩水液（pH７．
０）中に浸漬し、４℃下で１晩以上静置する。標準試料
である精製コレラ毒素を０．１％ＢＳＡ含有燐酸ナトリ
ウム緩衝食塩水液（pH７．０）で任意に逓減希釈し、こ
の希釈液（各種濃度のもの）を試験管に０．５mlずつ分
注した。これらの試料に対し、以下の操作についてＡ、
Ｂ、Ｃの３つの測定群にわけ、それぞれの感度比較を行
った。Ａ、Ｂ群は上記ポリスチレンビーズを、Ｃ群はレ
ーヨンＤＳをそれぞれ上記試験管に投入し、Ａ群は３７
℃で３時間、Ｂ、Ｃ群は３７℃で１５分間インキュベー
トした。ついで、Ａ、Ｂ群は試験管内の試料液を吸引廃
棄後、精製水を添加して充分洗浄し、洗浄液を吸引除去
した。一方Ｃ群は、各種濃度の試料と反応の終わった各
々のレーヨンＤＳを燐酸ナトリウム緩衝食塩水液（pH
７．０）の入った同一のビーカー内に投入し充分に攪拌
洗浄した。その後、Ａ群にはマレイミド法で作製したペ
ルオキシダーゼ標識抗コレラ毒素抗体を２％ＢＳＡ含有
燐酸ナトリウム緩衝食塩水液（pH７．０）で希釈して４
００ng／mlとしたものを０．５ml添加し、Ｂ群は同抗体
をＡ群の５倍濃度（２μg ／ml）に調整して同量添加
し、３７℃の条件下、Ａ群は１時間、Ｂ群は１５分間イ
ンキュベートした。一方、Ｃ群は試験管内に予め分注さ
れた０．５mlのＢ群と同様の抗体溶液中にレーヨンＤＳ
を投入し、３７℃下で１５分間インキュベートした。こ
れらのインキュベート後に、Ａ、Ｂ、Ｃ群それぞれ前述
した方法と同様に洗浄を行い、抗原抗体複合体を結合担
持しているポリスチレンビーズあるはいレーヨンＤＳを
別の試験管に移し、ＰＯＤ発色剤（テトラメチルベンチ
ジン）０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（pH５．５）溶液
を０．６ml、０．０２％Ｈ₂Ｏ₂含有０．１Ｍ酢酸ナトリ
ウム緩衝液（pH５．５）を０．２ml添加して発色反応を
開始させ、３０℃下、Ａ群は１時間、Ｂ、Ｃ群は１５分
間放置した後に２Ｍ硫酸溶液を０．２ml添加して反応を
停止させた。この反応液につき、コレラ毒素不含の試薬
ブランクを対照として４５０nmでの吸光値を測定後、
Ａ、Ｂ、Ｃ群それぞれについて検量線を作製した。 〔結果〕これらの結果は表３に示す通りであり、この表
に示される値をプロットしたところ、図２に示す標準検
量線が得られた。これらの結果より、レーヨン不織布デ
ィップスティックを支持体として用いた場合は、ポリス
チレンビーズを支持体として用いた場合に比べ、短い反
応時間でも極めて高感度で測定可能であることがわか
る。

【００２４】

【表３】

【００２５】実施例４（キャンピロバクター菌体の検
出） 〔方法〕５０mM 炭酸緩衝液（pH９．８）にて５０μg
／mlに調整した抗Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ Ｊｅｊ
ｕｎｉ（ＣＪ）抗体液中にポリスチレンビーズもしくは
レーヨン不織布貼付ディップスティック（レーヨンＤ
Ｓ）を浸漬し、４℃下で１〜２日間静置する。これらを
精製水にて洗浄後、２％牛血清アルブミン（ＢＳＡ）を
含む燐酸ナトリウム緩衝食塩水液（pH７．０）中に浸漬
し、４℃下で１晩以上静置する。ＣＪの培養菌を燐酸ナ
トリウム緩衝食塩水液（pH７．０）に懸濁させ、０．１
％ＢＳＡ含有燐酸ナトリウム緩衝食塩水液（pH７．０）
で任意に逓減希釈し、この希釈液（各種濃度のもの）を
試験管に０．５mlずつ分注した。これらの試料に対し、
以下の操作についてＡ、Ｂ、Ｃの３つの測定群にわけ、
それぞれの感度比較を行った。Ａ、Ｂ群は上記ポリスチ
レンビーズを、Ｃ群はレーヨンＤＳをそれぞれ上記試験
管に投入し、Ａ群は３７℃で３時間、Ｂ、Ｃ群は３７℃
で３０分間インキュベートした。ついで、Ａ、Ｂ群は試
験管内の試料液を吸引廃棄後、精製水を添加して充分洗
浄し、洗浄液を吸引除去した。一方Ｃ群は、各種濃度の
試料と反応の終わった各々のレーヨンＤＳを燐酸ナトリ
ウム緩衝食塩水液（pH７．０）の入った同一のビーカー
内に投入し充分に攪拌洗浄した。その後、Ａ群にはマレ
イミド法で作製したペルオキシダーゼ標識抗ＣＪ抗体を
２％ＢＳＡ含有燐酸ナトリウム緩衝食塩水液（pH７．
０）で希釈して４００ng／mlとしたものを０．５ml添加
し、Ｂ群は同抗体をＡ群の２．５倍濃度（１μg ／ml）
に調整して同量添加し、３７℃の条件下、Ａ群は１時
間、Ｂ群は２０分間インキュベートした。一方、Ｃ群は
試験管内に予め分注された０．５mlのＢ群と同様の抗体
中にレーヨンＤＳを投入し、３７℃下で２０分間インキ
ュベートした。これらのインキュベート後に、Ａ、Ｂ、
Ｃ群それぞれ前述した方法と同様に洗浄を行い、抗原抗
体複合体を結合担持しているポリスチレンビーズあるい
はレーヨンＤＳを別の試験管に移し、ＰＯＤ発色剤（テ
トラメチルベンチジン）０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液
（pH５．５）溶液を０．６ml、０．０２％Ｈ₂Ｏ₂含有
０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（pH５．５）を０．２ml
添加して発色反応を開始させ、３０℃下、Ａ群は１時
間、Ｂ、Ｃ群は１５分間放置した後に２Ｍ硫酸溶液を
０．２ml添加して反応を停止させた。この反応液につ
き、ＣＪ不含の試薬ブランクを対照として４５０nmでの
吸光値を測定後、Ａ、Ｂ、Ｃ群それぞれについて検量線
を作製した。 〔結果〕これらの結果は表４に示す通りであり、この表
に示される値をプロットしたところ、図３に示す標準検
量線が得られた。これらの結果より、レーヨン不織布デ
ィップスティックを支持体として用いた場合は、ポリス
チレンビーズを支持体として用いた場合に比べ、短い反
応時間でも極めて高感度で測定可能であることがわか
る。

【００２６】

【表４】

【００２７】実施例５（ＣＲＰの検出） 〔方法〕５０mM 炭酸緩衝液（pH９．８）にて５０μg
／mlに調整した抗ＣＲＰ抗体液中にポリスチレンビーズ
もしくはレーヨン不織布貼付ディップスティック（レー
ヨンＤＳ）を浸漬し、４℃下で１〜２日間静置する。こ
れらを精製水にて洗浄後、２％牛血清アルブミン（ＢＳ
Ａ）を含む燐酸ナトリウム緩衝食塩水液（pH７．０）中
に浸漬し、４℃下で１晩以上静置する。標準試料である
精製ＣＲＰを０．１％ＢＳＡ含有燐酸ナトリウム緩衝食
塩水液（pH７．０）で任意に逓減希釈し、この希釈液
（各種濃度のもの）を試験管に０．５mlずつ分注した。
これらの試料に対し、以下の操作についてＡ、Ｂ、Ｃの
３つの測定群にわけ、それぞれの感度比較を行った。
Ａ、Ｂ群は上記ポリスチレンビーズを、Ｃ群はレーヨン
ＤＳをそれぞれ上記試験管に投入し、Ａ群は３７℃で３
時間、Ｂ、Ｃ群は３７℃で１５分間インキュベートし
た。ついで、Ａ、Ｂ群は試験管内の試料液を吸引廃棄
後、精製水を添加して充分洗浄し、洗浄液を吸引除去し
た。一方Ｃ群は、各種濃度の試料と反応の終わった各々
のレーヨンＤＳを燐酸ナトリウム緩衝食塩水液（pH７．
０）の入った同一のビーカー内に投入し充分攪拌洗浄し
た。その後、Ａ群にはグルタールアルデヒド法で作製し
たアルカリフォスファターゼ標識抗ＣＲＰ抗体を２％Ｂ
ＳＡ含有燐酸ナトリウム緩衝食塩水液（pH７．０）で１
０００倍希釈したものを０．５ml添加し、Ｂ群は同様に
２００倍希釈した抗体を同量添加し、３７℃の条件下、
Ａ群は１時間、Ｂ群は１５分間インキュベートした。一
方、Ｃ群は試験管内に予め分注された０．５mlのＢ群と
同様の抗体溶液中にレーヨンＤＳを投入し、３７℃下、
１５分間インキュベートした。これらのインキュベート
後に、Ａ、Ｂ、Ｃ群それぞれ前述した方法と同様に洗浄
を行い、抗原抗体複合体を結合担持しているポリスチレ
ンビーズあるいはレーヨンＤＳを別の試験管に移し、ア
ルカリフォスファターゼ基質溶液を０．８ml添加して酵
素基質反応を開始させ、３７℃下、Ａ群は３０分間、
Ｂ、Ｃ群は１５分間放置した後に０．８％メタ過ヨウ素
酸ナトリウム０．４mlを添加して発色させた。この反応
液につき、ＣＲＰ不含の試薬ブランクを対照として５０
０nmでの吸光度を測定後、Ａ、Ｂ、Ｃ群それぞれについ
て検量線を作製した。 〔結果〕これらの結果は表５に示す通りであり、この表
に示される値をプロットしたところ、図４に示す標準検
量線が得られた。これらの結果より、レーヨン不織布デ
ィップスティックを支持体として用いた場合は、ポリス
チレンビーズを支持体として用いた場合に比べ、短い反
応時間でも極めて高感度で測定可能であることがわか
る。

【００２８】

【表５】

【００２９】

【発明の効果】本発明の固相体を用いた免疫測定法によ
れば、バックグラウンドノイズが低く、Ｓ／Ｎ比が高い
ため、短時間の反応で、かつ簡便な操作で高感度で各種
抗原及び抗体の定量ができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明免疫測定用固相支持体の一例を示す図で
ある。

【図２】実施例３におけるコレラ毒素測定用の検量線を
示す。

【図３】実施例４におけるキャンピロバクター菌体測定
用の検量線を示す。

【図４】実施例５におけるＣＲＰ測定用の検量線を示
す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 堀米 一己 茨城県結城市北南茂呂1075−２ 日水製薬 株式会社検査薬研究所内

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 レーヨン不織布よりなる免疫測定用固相
   支持体。
2. 【請求項２】 レーヨン不織布に抗原、抗体又はこれら
   の標識体を固定化してなる免疫測定用固相体。
3. 【請求項３】 固相法による免疫測定法において、固相
   としてレーヨン不織布に被検物質に対する抗体、抗原又
   はこれらの標識体を固定化してなる固相体を用いること
   を特徴とする免疫測定法。
4. 【請求項４】 固相法による免疫測定法が、２抗体固相
   競合法、１抗体固相競合法、固相化抗原と標識抗体を用
   いる競合法及びサンドイッチ法から選ばれるものである
   請求項３記載の免疫測定法。
5. 【請求項５】 固相法による免疫測定法が、サンドイッ
   チ法である請求項３記載の免疫測定法。
6. 【請求項６】 レーヨン不織布に被検物質に対する抗体
   又は抗原を固定化してなる固相体に、被検液及び被検物
   質に対する抗体又は抗原のいずれかに対する抗体の酵素
   標識体を反応させ、次いで固相体を液相より分離した後
   当該固相体上の標識酵素量を測定することを特徴とする
   被検液中の被検物質の定量法。