JPH04213059A - 抗体の検出のための棒状プローブ装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、スクリーニング及び診断目的の
ために体液、たとえば唾液中の抗体の検出に関する。特
に、本発明は、そのような体液に少量存在する抗体又は
少量のそのような体液が利用でき、そしてさらに存在す
る抗体が特定の疾病状態の抗原特異性特徴を有し、そし
て診断値である抗体の検出に関する。

【０００２】哺乳類の体液、たとえば血清、血漿、唾液
、涙、尿、ミルク、精液、滑液、等は、疾病、たとえば
細菌及びウィルス感染及び自己免疫起源の疾患の診断に
有用である抗体を含むことができる。体液、たとえば唾
液は、これらの診断的に価値ある抗体の源として血清及
び血漿よりも有意な利点を有する。なぜならば、それら
は設備及び血液サンプルの採取に付随する危険性を伴わ
ないで得られるからである。しかしながら、しばしば抗
体の濃度は、抗体についての従来の試験を実用的にする
のにはこれらの体液には低過ぎる。

【０００３】特に唾液は、診断指示体としての問題を提
供する。これらの問題は、唾液における抗体の低濃度性
及びすばやく行なわれ得る信頼できる診断試験のために
十分な唾液の収集の不便さ及び処理量から生じる。

【０００４】１つの観点において、本発明は、免疫グロ
ブリンと結合することができるリガンドを含む非液体吸
収性非多孔性表面を有する少なくとも１つの部分を有す
る延伸された棒を含んで成る免疫診断アッセイに使用す
るための製品に向けられる。

【０００５】もう１つの観点においては、本発明は、免
疫グロブリンと結合することができる非液体吸収性非多
孔性支持体と体液とを接触せしめ、そして前記支持体か
ら過剰の流体を洗浄する連続段階を含んで成る、体液か
ら免疫グロブリンを単離するための方法に向けられる。

【０００６】もう１つの観点において、本発明は、抗原
と結合することができる非液体吸収性非多孔性支持体と
体液とを接触せしめ、そして前記支持体から過剰の流体
を洗浄する連続段階を含んで成る、体液から抗原を単離
するための方法に関する。

【０００７】本発明はまた、免疫グロブリンと結合する
ことができるリガンドを含む非液体吸収性非多孔性表面
を有する少なくとも１つの部分を有する延伸された棒；
及び緩衝液、ビオチニル化された抗原溶液、酵素結合ア
ビジン溶液、目に見える検出可能な反応生成物を生成す
るために酵素と反応することができる酵素支持体、及び
陽性及び陰性の対照溶液を含んで成る試薬を含んで成る
、診断試験のために唾液における抗体を検出するための
キットにも関する。

【０００８】本発明の追加の観点は、免疫グロブリンと
結合することができる非液体吸収性多孔性支持体と試験
流体とを接触せしめ、そして前記支持体から過剰の流体
を洗浄し；免疫グロブリンのための溶離媒体中に前記支
持体を置き；そして中和化緩衝液により前記溶出液を処
理する連続段階を含んで成る、試験流体から免疫グロブ
リンの回収方法に関する。

【０００９】本発明の好ましい態様は、免疫グロブリン
と結合することができるリガンドを含む非液体吸収性非
多孔性表面を有する少なくとも１つの部分を有する延伸
された棒を含んで成る、免疫診断アッセイに使用するた
めの製品を含んで成り、ここで前記部分は前記棒の一端
である。他の態様において、その棒は舌用圧抵器の形状
を有する。もう１つの態様において、前記棒は球状であ
る一端部分を含んで成る。前記棒は約５０〜１５０　ｍ
ｍの長さ、好ましくは約７６ｍｍの長さのものである。 その棒は、手により操作するために便利であるいづれか
の物質、好ましくはプラスチックから構成される。木材
、厚紙又はスチールが他の例である。

【００１０】本発明のもう１つの好ましい態様は、ビー
ズ及び棒が２つの固定された要素であるように、タンパ
ク質結合性質を有する物質から成るビーズをその上に固
定している少なくとも一端部分を有する棒から成る免疫
診断アッセイに使用するための製品に向けられる。もう
１つの態様においては、ビーズは接着剤により前記棒に
固定される。さらにもう１つの態様においては、ビーズ
は、前記棒の端部分から突出する突起により前記棒に固
定される。ビーズは、直径約１．２７〜１９．０５　ｍ
ｍ、好ましくは約６．３５ｍｍである。ビーズは非球形
であり得る。ビーズは、抗体結合物質の結合のために適
切ないづれかの物質、好ましくはポリスチレンから成る
。一般的に、ビーズは、適切な化学官能基がタンパク質
の共有又は非共有結合のために供給され得る硬質の非液
体吸収性非多孔性表面を有する。これは、カルボキシル
基を提供するモノマー、たとえばメタクリル酸、アクリ
ル酸又は無水マレイン酸と共重合され得るプラスチック
を包含する。アミノ基は、アミノスチレンモノマー又は
脂肪族エチレン主鎖上に第一アミンを有するモノマーに
より供給され得る。他の方法は、タンパク質結合のため
の適切な化学官能基を含むラテックスペイントにより非
誘導体化ビーズを被覆することである。もう１つの方法
においては、１以上のビーズが前記突起により維持され
る。たとえば、１つの棒が３組の突起により装備され、
ここで個々の組は３個の突起から成る。個々の組は棒に
１つのビーズを固定する。個々のビーズは、陽性及び陰
性の対照並びに試験ビーズを付与する種々のタンパク質
により誘導体化される。もう１つの態様においては、リ
ガンドがプロテインＡである。さらにもう１つの態様に
おいては、リガンドはタイプＩＩ，ＩＩＩ，　ＩＶ　，
Ｖ及びＶＩのＦｃ　受容体タンパク質から成る群から選
択される。

【００１１】本発明のさらに好ましい態様は、免疫グロ
ブリンと結合することができる非液体吸収性非多孔性支
持体と体液とを接触せしめ、そして前記支持体から過剰
の流体を洗浄し；前記支持体と抗原溶液とを接触せしめ
、そしてインキュベートし、そして前記支持体から過剰
の溶液を洗浄し；抗原を結合することができる化合物と
前記支持体とを接触せしめ、そしてインキュベートし、
そして前記支持体から過剰の溶液を洗浄し；そして目で
検出できる反応生成物を生成せしめるために前記化合物
と反応することができる物質と前記支持体とを接触せし
め、そしてインキュベートする連続段階を含んで成る、
体液から免疫グロブリンを単離するための方法に関する
。もう１つの態様においては、免疫グロブリンを結合で
きる支持体が患者の腔内に支持体を置くことによって体
液と接触される。その支持体はプロテインＡを含むこと
ができる。支持体はまた、タイプＩＩ，ＩＩＩ，　ＩＶ
　，Ｖ、及びＶＩのＦｃ　受容体タンパク質から成る群
から選択されるリガンドを包含することができる。もう
１つの態様においては、抗原がビオチニル化され、そし
て抗原を結合できる化合物は酵素結合アビジンである。 もう１つの態様においては、抗原はＨＩＶ−１である。

【００１２】本発明のもう１つの好ましい態様は、抗原
と結合することができる非液体吸収性非多孔性支持体と
体液とを接触せしめ、そして前記支持体から過剰の流体
を洗浄し；前記支持体と前記抗原を結合することができ
る抗体の溶液とを接触せしめ、そしてインキュベートし
、そして前記支持体から過剰の溶液を洗浄し；抗体を結
合することができる化合物の溶液と前記支持体とを接触
せしめ、そしてインキュベートし、そして前記支持体か
ら過剰の溶液を洗浄し；そして目で検出できる反応生成
物を生成せしめるために前記化合物と反応することがで
きる物質と前記支持体とを接触せしめ、そしてインキュ
ベートする連続段階を含んで成る、体液から抗原を単離
するための方法に関する。もう１つの好ましい態様にお
いて、抗原を結合できる支持体が、患者の腔内に支持体
を置くことによって体液と接触せしめられる。支持体は
、リガンドにより結合される抗−抗原タンパク質を含む
ことができる。追加の態様において、リガンドはプロテ
インＡであり、又は支持体はタイプＩＩ，ＩＩＩ，　Ｉ
Ｖ　，Ｖ及びＶＩのＦｃ受容体タンパク質から成る群か
ら選択されたリガンドにより結合される抗−抗原タンパ
ク質を含んで成る。もう１つの態様において、抗体は、
前記支持体を結合するＦｃ　部分を欠き、そして前記抗
原を結合できるモノクローナル抗体のＦａｂフラグメン
トである。抗−抗原タンパク質及びＦａｂ抗体は、前記
抗原の種々のエピトープに対して特異的である。もう１
つの態様において、抗体はビオチニル化され、そして抗
体を結合できる化合物は酵素結合アビジンである。もう
１つの態様において、抗原は　ＨＩＶ−１である。

【００１３】もう１つの態様においては、本発明はまた
、免疫グロブリンと結合することができるリガンドを含
む非液体吸収性非多孔性表面を有する少なくとも１つの
部分を有する延伸された棒；及び緩衝液、ビオチニル化
された抗原溶液、酵素結合アビジン溶液、目に見える検
出可能な反応生成物を生成するために酵素と反応するこ
とができる酵素支持体、抗原に対して特異的なポリクロ
ーナル又はモノクローナル抗体及びビオチニル化された
Ｆａｂモノクローナル抗体、及び陽性及び陰性の対照溶
液を含んで成る試薬を含んで成る診断試験のために唾液
における抗体を検出するためのキットにも関する。

【００１４】本発明のもう１つの好ましい態様は、免疫
グロブリンと結合することができる非液体吸収性非多孔
性支持体と試験流体とを接触せしめ、そして前記支持体
から過剰の流体を洗浄し；免疫グロブリンのための溶離
媒体中に前記支持体を置き；そして中和化緩衝液により
前記溶出液を処理する連続段階を含んで成る試験流体か
ら免疫グロブリンの回収方法に向けられ、ここで前記溶
離媒体がｐＨ３．０の０．１モル濃度のクエン酸緩衝液
であり、そして前記緩衝液が１モル濃度のトリスである
ことを特徴とする。

【００１５】本発明のもう１つの好ましい態様は、プロ
テインＡ物質、すなわちプラスチックハンドルに固定さ
れたポリスチレンビーズに化学的に結合される抗体分子
に急速に結合するタンパク質を好ましくは有する棒状プ
ローブ装置を通して体液から抗体を急速に単離する方法
を含んで成る。前記ハンドルを用いて、ビーズは試験さ
れるべき個人の口腔内に置かれ、そして数分間、舌の下
又は口腔空間下に維持される。その方法は、経口温度計
により体温を計る技法に類似する。従って、抗体は、そ
れがビーズと接触するにつれて流体から急速に除かれ、
そして抗体はまた、ビーズ上に濃縮される。腔内での数
分後、ハンドルにより保持されるビーズは、リン酸緩衝
溶液又は水道水の流れにすばやく浸すことによって洗浄
される。腔内抗体はプロテインＡによりビーズに結合し
たまま存続する。次に、ビーズは、ビオチニル化された
抗原及び他の酵素−支持体試薬にゆだねられる。ビーズ
は、洗浄及び個々の試薬による平衡化を促進するために
連続的な試薬に急速に浸され得る。最終のクロモゲン色
は、ビーズ上に暗青色沈殿物として進行する。従って、
プロテインＡビーズは、抗体が回収され、そして腔口か
ら濃縮される表面並びに陽性試験のための色の進行が進
行する表面上に存在する。プロテインＡビーズは、腔口
内のすすぎ、唾液又は痰を診断抗体の源として、汚染、
操作及び危険を伴って得るための必要性を排除し、そし
てまれに急速な酵素結合免疫診断のために適切な表面上
にこれらの抗体を供給する。

【００１６】ビーズはポリスチレン、ヒドラジドビーズ
、アルキルアミンビーズ、又はサンガー試薬ビーズであ
ることが好ましい。そのようなビーズは良く知られてお
り、そして市販されている。たとえば誘導体化されてい
ないポリスチレンビーズは、商業的な供給者、たとえば
Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ　Ｐｌａｓｔｉｃ　Ｂａｌｌ　Ｃｏ
．，　Ｃｈｉｃａｇｏ，　ＩＬ　から得られる。次にポ
リスチレンビーズは、イギリス特許第８１６５８３号（
１９５９年７月１５日）に概略され、そしてＣｈｅｍｉ
ｃａｌ　Ａｂｓｔｒａｃｔｓ　５３：２３０７９ｉに記
載されている方法に従ってクロロメチル化される。前記
開示は、引用により本明細書に組込まれる。ヒドラジド
ビーズは、中性ｐＨで過剰のグルタルアデヒド又は他の
二官能価脂肪族又は芳香族アルデヒドと反応せしめられ
る。次にアルデヒド誘導体化されたビーズは、アミン−
フリー緩衝液中において酸性ｐＨでプロテインＡと反応
せしめられる。最後に、共有結合されたプロテインＡを
含むビーズが、還元剤、たとえば硼水素化ナトリウムに
より処理される（ビーズ４ｇ当たり１ｍｇのＮａＢＨ４
）。対照ビーズ（抗体と非反応性）は、プロテインＡと
ゼラチンを上記方法において置換することによって生成
される。サンガー試薬ビーズは、ポリスチレンビーズ表
面中に共重合される脂肪族鎖の末端上にサンガー試薬（
１−フルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）を供給する
ポリスチレンビーズである。サンガー試薬は、下記の化
１に示されるようにビーズへのそれらのアミノ基を通し
てのタンパク質の具有結合を可能にする：

【００１７】

【化１】

【００１８】アルキルアミンビーズは、共重合を通して
ビーズに共有結合される第一アミンを供給する。このア
ミンは、次の方法でビーズにタンパク質を結合するため
に使用される：アルキルアミンビーズが下記に記載され
るようにｐＨ６のリン酸緩衝液において無水琥珀酸と一
晩反応せしめられる（ビーズ２ｇ当たり無水琥珀酸１ｇ
）：

【００１９】

【化２】

【００２０】次に、ビーズ表面上のカルボキシル基が、
標準のカルボジイミド反応を用いてタンパク質上で利用
できるアミノ基とアミドを形成するために使用される。 典型的なカルボジイミドは、エチル−３−（３−ジメチ
ルアミノプロピル）−カルボジイミドである。カルボキ
シル基−誘導体化ビーズ（１０個のビーズ）が、ｐＨ１
０でカルボジイミド（２００ｍｇ）５ｍｌ中で２時間イ
ンキュベートされる。それらのビーズはすぐに蒸留水で
洗浄され、そしてタンパク質溶液（５ｍｇ／５ｍｌ）と
共に１時間インキュベートされる。すべての反応は室温
で行なわれる。上記引用された誘導化されたビーズのす
べては、製造業者の説明書によれば、６．３５ｍｍの鏡
のような非多孔性ビーズの表面上に約３μモルの官能基
を含む。

【００２１】他のタイプのビーズは、それらがタンパク
質及び官能基、たとえばヒドロキシル、カルボキシル又
はアミノ基の低い非特異的結合又は抗体を結合するプロ
テインＡ又は他のタンパク質の共有結合を可能にする独
特の化学的性質を有する場合、本発明の目的のために適
切である。タンパク質の共有結合のための化学的反応性
基をそれらの表面上に含むポリスチレンビーズは、Ｐｉ
ｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ，　Ｒｏ
ｃｋｆｏｒｄ，　Ｉｌｌｉｎｏｉｓ　から入手できる。 そのようなビーズは、反応性ヒドラジド基、アルキルア
ミン基又はサンガー試薬を含むものを包含する。 ポリスチレンプローブのための球状以外の形状、たとえ
ばパドル形状もまた企画され、そしてそれは洗浄及びイ
ムノアッセイ開発段階において好都合であり得る。平ら
な表面がそのようなプローブ上に存在する場合、プロテ
インＡは、図３に示されるように“＋”（プラス又は陽
性）の印の形で表面に適用され得る。図３におけるパド
ル５を形成するポリスチレンが誘導体化され、そして活
性化される場合（カルボジイミドにより）、プロテイン
Ａの溶液がパドル上で“＋”の印を示すために使用され
得る。プロテインＡとの反応後、パドルの残留物が抗体
、たとえば血清アルブミンと特異的に反応しないゼラチ
ン又はいづれか他のタンパク質と反応せしめられる。 患者からのサンプル、ビオチニル化された疾病特異的抗
原、酵素結合のストレプトアビジン（又は酵素結合の抗
原）及び適切なクロマゲンとの反応後、陽性の患者のサ
ンプルはパドル上に“＋”の印を生成し、そして陰性の
サンプルは口腔内における妨害物質による高いバックグ
ラウンドの可能性ある存在にもかかわらずそのような印
は生成しないであろう。“＋”の形での色は、抗体由来
の反応性を示す。ビーズが使用される場合、その好まし
い大きさは直径６．３５ｍｍである。ビーズは、直径１
．２７〜１９．０５　の大きさの範囲であり得るが、但
し２．５４〜１２．７ｍｍがより便利且つ経済的である
。パドルのための好ましい大きさは１２．７ｍｍである
が、但し６．３５〜１９．０５　ｍｍがより機能的であ
る。本発明に企画されるプローブのための追加の形は、
スプーンの様な又はウェルの様な末端部分を有するプラ
スチック棒である。ハンドルは約７６ｍｍの長さ及び１
０ｍｍの幅及び１ｍｍの厚さであるが、但しこれだけに
は限定されない。スプーンの様な端は、１５ｍｍの内部
直径及び約１７ｍｍの外部直径を有する。ウェルの体積
は約０．３２ｍｌである。ウェルの底で、３ｍｍの円形
のプロテインＡ又は膜に共有結合される他の抗体結合タ
ンパク質を有する厚さ　１００ミクロンの多孔性ポリビ
ニリデンジフルオリドが存在する。プロテインＡの結合
は、非アミノ緩衝液中、プロテインＡの１ｍｇ／ｍｌ溶
液２μｌの膜上への配置により行なわれる。他の膜は、
陽性試薬対照を提供するゼラチン（陰性対照を提供する
）又はビオチニル化されたゼラチンと反応せしめられる
。

【００２２】ビーズ、パドル又は膜に結合されるプロテ
インＡの量は、眼による検出可能な反応生成物が生成さ
れるように体液において最適の抗体を結合するために十
分な量である。これらのプローブは、続く比色分析アッ
セイのために適切な表面サイズを提供する。

【００２３】プロテインＡは、細菌スタフィロコーカス
　　アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　　ａ
ｕｒｅｕｓ）　（Ｃｏｗａｎ株１）の細胞壁から単離さ
れるタンパク質である。プロテインＡ（また、タイプＩ
　　Ｆｃ　受容体と呼ばれる）は、この細菌から単離さ
れるタンパク質として及び他の細菌に発現される組換え
形で市販されている。Ｅ．コリに発現されるような組換
えタンパク質は、Ｒｅｐｌｉｇｅｎ　Ｃｏｒｐｏｒａｔ
ｉｏｎ，　Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，　Ｕａｓｓａｃｈｕｓ
ｅｔｔｓから精製形で得られる。 プロテインＡは、通常使用される数種の化学反応のいず
れかによりビーズに共有結合され得る。これらの技法の
いくつかの例は次の通りである：アミノ基又はカルボキ
シル基がこれらの官能基を含むモノマー、たとえばメタ
クリル酸又はアミノスチレンによる共重合によりビーズ
上に導入される。次にこれらの誘導体化されたビーズが
、通常使用されるカルボジイミド化学的性質の使用によ
り又はＯ−ブロモアセチル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイ
ミドによりアミノ誘導体化されたビーズ上に導入される
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドのような通常使用される
脱離基（強酸の接合体基材）の使用によりタンパク質上
のカルボキシル基又はアミノ基に結合される。他の既知
の技法は、ポリスチレンビーズ又は他の組成のビーズに
プロテインＡを共有結合するために使用され得る。

【００２４】抗体を急速且つ多量に結合する他のタンパ
ク質が、プロテインＡの代わりに本発明に従がって使用
され得る。これらのタンパク質は、グループＡスタフィ
ロコーカスから単離された一定のタンパク質（タイプＩ
Ｉ　　Ｆｃ　受容体）、ほとんどのヒトＣ及びＧスタフ
ィロコーカス株から単離されたプロテインＧ（タイプＩ
ＩＩ　Ｆｃ　受容体）、いくつかの菌株Ｇスタフィロコ
ーカス株から単離されたタイプＩＶＦｃ　受容体及びス
トレプトコーカス　　ズーエピジミカス（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｃｕｓ　　　ｚｏｏｅｐｉｄｉｍｉｃｕｓ　）
　から単離されたタイプＶ，ＶＩ　　Ｆｃ　受容体を包
含する。これらのタンパク質の個々は、種々の哺乳類種
からのイムノグロブリン及び種々のサブクラスのイムノ
グロブリンに結合するその強度において他のものよりも
一定の利点を有する。

【００２５】プラスチック、すなわちポリスチレン製ハ
ンドルは、数滴の接着剤によりビーズに結合される。装
置が腔口内に挿入される予定の場合、非毒性接着剤が必
要とされる。歯科用装置の製造に使用されるようなメチ
ルメタクリレート接着剤が好ましい。木製又は金属製ハ
ンドルも利用できる。ハンドルは好ましくは、約７６ｍ
ｍの長さである。５０〜１５０　ｍｍの長さのハンドル
もまた便利である。図１及び図３に示されるように、ハ
ンドルは、はさむ作用によりビーズを保持するナイロン
又はポリスチレン突起物又は熊手３を有するプラスチッ
ク棒１である。図４に示されるように、装置はまた、棒
１及びパドル形末端５又は図５に示されるように棒１及
び膜結合プロテインＡを含むウェル７を有する舌の押え
導具の形状に類似する１つの単位物として形成され得る
。いくつかの棒−ビーズプローブ又は結合される１以上
のビーズを有する１つの棒（たとえば図３に示されるよ
うに棒上での突起物の数を増すことによって）を用いて
、複数アッセイのためのいくつかのビーズが１つの対象
から同時に回収され得、又はプロテインＡを有さない（
むしろゼラチンを有する）追加のビーズが陰性対照とし
て作用することができる。図１（ａ及びｂ）に示される
ようなさらにもう１つの態様においては、棒１がスプー
ン形状化された末端９を有し、ここで膜１１が結合され
ている。その膜は、プロテインＡが結合される微小多孔
性膜、たとえばポリビニリデンジフルオリドである。

【００２６】本発明に記載される棒プローブは、（１）
結合のための適切な表面積を有し、（２）ビーズの容易
な観察を可能にし、（３）体液中の溶質とビーズに結合
されるプロテインＡとの間の適切な接触表面による体液
の試験を可能にし、（４）体液中の抗体の比色分析試験
を行なうために使用される試薬との連続的な反応及びそ
の試薬の洗浄を可能にするであろう装置の不可欠な必要
条件を満たす。

【００２７】上記のようにビーズへの抗体の結合の後、
過剰量の体液が適切な水性緩衝液により洗浄することに
よってビーズから除去される。次に、結合された抗体を
有するビーズが、結合された抗体の抗原特異性をアッセ
イするために支持体として使用される。

【００２８】いくつかの方法が、単離された抗体の抗原
特異性のアッセイのために利用できる。これらは、対象
の抗原に共有結合される酵素、たとえばホースラディシ
ュペルオキシダーゼ又はアルカリホスファターゼの使用
を包含する。この技法は、Ｔ．Ｋｉｔａｇａｗａなど．
，“新規結合試薬を用いてのインシュリンの酵素結合イ
ムノアッセイ（Ｅｎｚｙｎｅ　ｃｏｕｐｌｅｄ　Ｉｍｍ
ｕｎｏａｓｓａｙ　ｏｆ　ｉｎｓｕｌｉｎｅ　ｕｓｉｎ
ｇ　ａ　ｎｏｖｅｌｃｏｕｐｌｉｎｇ　ｒｅａｇｅｎｔ
），”　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏ　ｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ，　７９：　２３３〜２３６　ページ、１９７６
に例示される。これらの酵素は、抗原の存在を示す色の
反応を信号せしめるために使用される。利用できるもう
１つの方法は、抗原へのビオチンの共有結合である。Ｇ
．Ｒ．Ｄｒｅｅｓｍａｎなど．，アメリカ特許第　４，
５３５，０５７号；Ｄ．Ａ．Ｆｕｃｃｇｌｌｏ，　“微
生物学におけるアビジン−ビオチン技法の用途（Ａｐｐ
ｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｖｉｄｉｎ−ｂｉ
ｏｔｉｎ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｉｎ　ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌｏｇｙ），”　　Ｂｉｏ−Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，
　３：　４９４〜５０１　ページ、１９８５；及びＭ．
Ｗｉｃｈｅｋなど．，分子生物学における導具としての
アビジン−ビオチンの使用（Ｔｈｅ　ｕｓｅ　ｏｆ　ｔ
ｈｅ　ａｖｉｄｉｎ−ｂｉｏｔｉｎ　ｃｏｍｐｌｅｘ　
ａｓ　ａ　ｔｏｏｌ　ｉｎ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂｉ
ｏｌｏｇｙ），　”Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈ
ｅｍｉｃａｌ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　，　２６：１〜４５
を参照のこと。それは、タンパク質アビジンによりひじ
ょうに高い結合活性（Ｋｄ　　１０〜１５Ｍ）で結合さ
れる。４個のビオチン分子がアビジン分子当たりに結合
される。酵素、たとえばホースラディシュペルオキシダ
ーゼ又はアルカリホスファターゼがアビジン分子に化学
結合される場合、アビジン−ビオチンの相互作用は、対
象の抗原と抗原の存在を示す色の反応を進行せしめるた
めに使用される酵素との間に分子架橋を構成することが
できる。個々のアビジン分子はビオチン結合部位を有す
るので、抗体分子当たりの酵素分子の数は過剰のビオチ
ニル化された抗原の存在下で高められ、そしてそのアッ
セイの感度は高められる。抗原とビオチン分子との間の
化学結合は、利用できる多くの種々の化学反応配列によ
り形成され得る。これらの反応は典型的には、抗原のタ
ンパク質構造体において誘導アミノ又はスルフヒドリル
基への結合を促進せしめるためにＮ−ヒドロキシスクシ
ンイミジル又はヨード脱離基を利用する。典型的な試薬
は下記に示される：

【００２９】

【化３】

【００３０】炭水化物抗原は、ビオチンヒドラジドと過
ヨウ素酸との反応の後、多糖構造で生成されるアルデヒ
ド基との反応によりビオチニル化され得る。これらの及
び他の利用できる化学反応の間の最良のビオチニル化シ
ステムの選択は、試験される抗原の特定の性質に依存す
る。ＨＩＶ抗原は、次のスケムに従ってビオチニル化さ
れ得る：

【００３１】

【化４】

【００３２】本発明は、酵素検出システムと抗原を結合
するためにビオチン−アビジン反応の使用の独得な用途
を表わす。抗原は、それが特異的抗体がプロテインＡに
より固定されているビーズと接触するように固定されて
いる。

【００３３】過剰のビオチニル化された抗原の存在下で
、多くのアビジン−酵素接合体がプロテインＡにより固
定されるあらゆる抗体のためにビーズに結合することが
できる。これはその技法にその高い感度を付与する。

【００３４】アビジンに結合される酵素は、生物学的流
体におけるある種のタイプの抗体の存在についての試験
である、抗原の検出に使用される比色分析アッセイを決
定する。より一般的に使用される２種の酵素は、アルカ
リホスファターゼ及びホースラディシュ　　ペルオキシ
ダーゼである。これらの酵素は、グルタルアルデヒドの
使用又は他のヘテロ官能（同一の結合基を含む）及びヘ
テロ官能（類似しない結合基を含む）試薬、たとえばジ
スクシンイミジルスベレート及びスクシンイミジル−Ｎ
−（４−カルボキシ−シクロヘキシルメチル）−マレイ
ミド〔Ｓ．Ｙｏｓｈｉｔａｋｅ　など．，　”Ｎ−（４
−カルボキシ−シクロヘキシルメチル）−マレイミドの
Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミドエステルを用いてのア
スペルギラスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇ
ｅｒ）からのグルコースオキシダーゼ及びウサギ抗体の
接合（Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎｏｆ　ｇｌｕｃｏｓｅ　
ｏｘｉｄａｓｅ　ｆｒｏｍ　　Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
　ｎｉｇｅｒ　　ａｎｄ　ｒａｂｂｉｔ　ａｎｔｉｂｏ
ｄｉｅｓ　ｕｓｉｎｇＮ−ｈｙｄｒｏｘｙ　−ｓｕｃｃ
ｉｎｉｍｉｄｅ　ｅｓｔｅｒ　ｏｆ　　Ｎ−（４−ｃａ
ｒｂｏｘｙ　−ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｍｅｔｈｙｌ）　
−ｍａｌｅｉｍｉｄｏ，”　Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ　，　１０１　：　３９５〜３９９　ページ〕の使用
を含む、タンパク質−タンパク質共有結合のための一般
的に使用される化学的経路を用いてアビジン分子に化学
結合され得る。 これらの物質上の結合基は、タンパク質上の反応基、た
とえばアミノ又はスルフヒドリル基と共有結合を形成す
ることができる化学的に反応性の官能基である。上記引
用された化学は、スクシンイミジルエステルとタンパク
質のアミノ基との反応性及びマレイミド成分とタンパク
質の遊離ＳＨ基との反応性を利用する。

【００３５】ホースラディシュ　　ペルオキシダーゼが
検出酵素として使用される場合、典型的な基質はジアミ
ノベンジジン、４−クロロ−１−ナフトール又は３，３
′，５，５′−テトラメチルベンジジンであろう〔Ｓｈ
ｅｌｄｏｎ，　Ｅ．Ｌ．，など．，　”遺伝子分析のた
めの非アイソトープ性Ｍ１３プローブの使用：ＨＬＡク
ラス部位への適用（Ｕｓｅｏｆ　ｎｏｎｉｓｏｔｏｐｉ
ｃ　ＭＢ　ｐｒｏｂｅｓ　ｆｏｒ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ａ
ｎａｌｙｓｉｓ：ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｔｏ　ＨＬ
Ａ　ｃｌａｓｓｌｏｃｉ），”　　Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ
．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．　，　８３：９０８５〜９０８９
〕。これらの材料のいづれかが過酸化水素と共に混合さ
れ、そして酵素に暴露される場合、暗黒色のポリマー材
料が形成される。この着色生成物は安定性であり、すな
わち固体支持体上で不溶性であり、そして沈殿する。こ
の着色された沈殿物の生成は、酵素の存在及び本発明に
おいては、研究される抗原に対して特異的な抗体の存在
を指摘する。高い着色沈殿物を生成する他の材料は、ア
ルカリホスファターゼ、たとえば５−ブロモ−４−クロ
ロ−３−インドリル−ホスフェート及びニトロブル−テ
トラゾリウムの混合物の存在を指摘するために使用され
る。

【００３６】本発明においては、ビーズに結合されるプ
ロテインＡによる抗体の捕獲は、約１０分の合計アッセ
イ時間で生じる。棒プローブ技法の使用は、本発明に速
度及び便利さを付与し、そして多量の流体からの抗体の
濃縮を可能にする。

【００３７】アッセイ時間は、反応のビオチン−アビジ
ン成分の排除により及びホースラディシュペルオキシダ
ーゼに直接共有結合される　ＨＩＶ−１抗原の調製によ
りさらに短くされる。そのようなタンパク質−タンパク
質結合は、標準の方法、たとえばグルタルアルデヒド結
合又はヘテロ二官能価架橋試薬、たとえば前記の４−（
Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン
酸のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルの使用によ
り生成され得る。直接　ＨＩＶ−１−ペルオキシダーゼ
接合体の使用は、反応時間を短くするが、試験の感度は
いく分低い。

【００３８】この技法は、抗体が口腔内分泌に生じる場
合、感染性物質又は自己抗体に対するいづれかの口腔内
抗体の検出に容易に適合される。例は、適切なビオチニ
ル化された又はペルオキシダーゼ接合された抗原の使用
により検出されるＨＴＬＶ−１、Ａ型肝炎又はＢ型肝炎
に対する腔口内抗体を包含する。これらのいづれかの抗
原の混合物は、１又は複数のこれらの物質により感染さ
れた人々をこの単純な経口試験によりスクリーンするた
めに使用され得る。たとえばウィルスＨＴＬＶ−１，　
ＨＩＶ−１及び　ＨＩＶ−２からの抗原が等重量で一緒
に混合され、そして前記のようにしてビオチニル化され
得る。そのような混合物が、患者の口における唾液に暴
露された後、プロテインＡ−誘導体化ビーズとの反応の
ために抗原源として使用される場合、アビジン−ペルオ
キシダーゼによる処理の後、陽性の色の進行は、患者が
前記３種のウィルスの１又は複数種に対する抗体を有し
たことを指摘する。個々のウィルスに対する抗体につい
ての続く試験が示され得る。そのような試験は、これら
のウィルスのいづれかに対する抗体の頻度が低い多くの
人口を試験することにおいて明らかに価値があるであろ
う。

【００３９】より明確に本発明を記載するためには、次
の非制限的な例が提供される。例において、すべての部
及び％は、特にことわらない限り重量によってである。

【００４０】

【実施例】例　　１ アルキルアミン、カルボキシル、カルボキシヒドラジン
及びヒドロキシ誘導体化されたポリスチレンビーズの調
製がこの例で行なわれる。

【００４１】この方法は次の通りである：メチラール８
４ｇ中、１／４インチのビーズ　１００ｇを、塩化エチ
レン　２００ｃｃ、パラホルムアルデヒド３３ｇ及び４
０ｇのＡｌＣｌ３　により連続的に処理する。その反応
は５５度Ｃで２時間攪拌される。室温への冷却の後、ビ
ーズを塩化エチレン及びテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）
　により洗浄する。最終生成物においては、約２１％の
ベンゼン環がパラ位置でクロロメチル化される。

【００４２】次に、クロロメチル化されたポリスチレン
ビーズを、塩化エチレン　２００ｃｃ中における１．６
ヘキサンジアミン５０ｇとの室温で２時間の反応により
、続く塩化エチレン及びＴＨＦによる洗浄によりアルキ
ルアミン誘導体化ビーズに転換する。

【００４３】カルボキシル化されたビーズは、クロロメ
チル化されたポリスチレンと６−アミノカプロン酸５０
ｍｇとを塩化エチレン下で反応せしめ、次に洗浄するこ
とによって得られる。

【００４４】上記カルボキシル化されたポリスチレンビ
ーズは、酸塩化物を形成するために還流化で３時間、そ
れをチオニルクロリド５０ｃｃにより初めに処理するこ
とによって、その対応するヒドラジドを形成するために
さらに変性される。この後、ビーズを分離し、そして塩
化エチレンにより洗浄し、そして次にＴＨＦ中、ヒドラ
ジン２５ｃｃにより室温で２時間、処理する。次に、ビ
ーズを分離し、そしてＴＨＦにより洗浄する。

【００４５】ヒドロキシル化されたポリスチレンビーズ
は、水中でクロロメチル化されたビーズを３時間、煮沸
することによって得られる。

【００４６】ポリスチレン粒子又は微小球体を誘導体化
するための他の方法は、アメリカ特許第　４，４８０，
０４２号（１０／３０／８４）　及び第　４，１４０，
６６２号（２／２０／７９）　に開示される。

【００４７】上記誘導体化されたビーズに関して、プロ
テインＡの続く共有結合が上記に概略されるようにして
達成され得る。

【００４８】例　　２ 棒プローブ装置の調製がこの例で行なわれる。プロテイ
ンＡ結合のために、例１で調製されたようなビーズ当た
りヒドラジド官能価約３μモルを含む２５個のビーズを
、ｐＨ７．０の０．１モル濃度のホスフェート緩衝液中
、１２．５％のグルタルアルデヒド溶液５ｍｌ中で軽く
振盪しながら２時間インキュベートする。次にビーズを
、蒸留水　１００ｍｌ及び０．１モル濃度のリン酸緩衝
液２０ｍｌにより　Ｂｕｃｈｎｅｒ漏斗を用いて連続的
に洗浄する。２．５ｍｇのプロテインＡを、ｐＨ６．０
の０．１モル濃度のリン酸緩衝液に溶解し、そしてグル
タルアルデヒド反応ビーズと共に室温で２０時間インキ
ュベートする。１ｍｇのシアノボーロヒドリドリドを、
ビーズ及びプロテインＡの組合せのすぐ後及びインキュ
ベーションの前、混合物に添加する。２０時間の反応の
後、ビーズを０．１モル濃度のリン酸緩衝液　１００ｍ
ｌ及びｐＨ８．０の０．１モル濃度の炭酸水素ナトリウ
ム５０ｍｌにより洗浄する。次に、ビーズを、硼水素化
ナトリウム１ｍｇを含む０．１モル濃度の炭酸水素ナト
リウム５ｍｌ中に懸濁する。その混合物を軽く振盪しな
がら１５分間インキュベートする。次に、ビーズを炭酸
ナトリウム１００ｍｌ、次に蒸留水　１００ｍｌにより
洗浄する。次にビーズを、２．５％のゼラチン、０．５
％のＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）、０．３％のＴｗｅ
ｅｎ　２０界面活性剤（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ
　から入手できる）及び１モル濃度のトリス、すなわち
ｐＨ８．０のトリス（ヒドロキシメチルアミノメタン）
から成るブロッキング緩衝液中で２４時間インキュベー
トすることによってタンパク質の非特異的吸収を妨ぐた
めにそれを“阻止”する。ビーズはブロッキング緩衝液
中に貯蔵され又はブロット乾燥せしめられ、そして密封
された管に保持される。

【００４９】例　　３ この例においては、サンプル流体のアッセイを行ない、
患者の口腔内におけるＨＩＶ−１抗体について試験する
。 例２において調製されたような１つのビーズが既知の血
清陽性対象の口腔内に置かれる。ビーズを対象の口腔内
に２分間維持し、時おり舌下から口腔間にそれを動かす
。ビーズを口腔から除き、そして小さな容器においてリ
ン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）１０ｍｌ　中で攪拌する。次に
、ビーズを、１％ゼラチン、０．３％のＴｗｅｅｎ　２
０及び１モル濃度のトリス（ｐＨ８．０）の緩衝液、す
なわち急速なアッセイ希釈剤（ＲＡＤ）　緩衝液中にビ
オチニル化された　ＨＩＶ−１抗原５μｇを含む溶液２
ｍｌに浸す。ビーズをこの溶液に５分間、維持し、そし
て次にＲＡＤ緩衝液により３度及びＰＢＳにより１回急
速に洗浄する。次にビーズを、前記のようにして調製さ
れた酵素ラベルされたアビジン、たとえばストレプアビ
ジン−ホースラディシュ　　ペルオキシダーゼ接合体（
Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ　ａｎｄ　Ｐｅｒｒｙ　Ｌａｂｓ
，　Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，　Ｍａｒｙｌａｎｄか
ら入手できる）５ｍｇを含むＲＡＤ緩衝液２ｍｌに５分
間インキュベートする。ビーズを再び、ＲＡＤ緩衝液及
びＰＢＳにより洗浄し、そしてペルオキシダーゼのため
のクロモゲン性基質、すなわち３，３′，５，５′−テ
トラメチルベンジジン、０．０３％のＨ２Ｏ２及び沈殿
エンハンサー（シリオクチルスルホスクシネート）と共
にインキュベートする。色彩反応がすぐに進行し、暗青
色のビーズを付与し、ところが　ＨＩＶ−１血清陰性対
象により使用される対照ビーズは不透明な白色のままで
ある。ＲＡＤ緩衝液及びＰＢＳにおける洗浄段階は、水
道水のゆるい流れにビーズを単純に維持することによっ
て排除され得る。合計アッセイ時間は約１０分である。

【００５０】前記方法に使用される　ＨＩＶ−１抗原の
ビオチニル化は、次のようにして行なわれる：　ＨＩＶ
−１溶解物；Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｓｙｓｔｅｍ　Ｃｏｒｐ
．，　Ｓｅａｔｔｌｅ，　ＷＡ．から入手できるヒト細
胞系に基づいて生成されるウィルスの界面活性剤（Ｎｏ
ｎｉｄｅｔ−Ｐ４０）　抽出物を、０．５×１０ｃｍの
ゲル濾過カラム（Ｂｉｏ−Ｇｅｌ　Ｐ−６はＢｉｏ−Ｒ
ａｄ　Ｃｏｒｐ．，　Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，　ＣＡ　から
得られる）上に通し、抽出物に含まれるトリス緩衝液を
除き、そしてビオチンの結合のための緩衝液（０．１Ｍ
の炭酸水素ナトリウム、０．５Ｍの塩化ナトリウム）と
それを交換する。ウィルス溶解物　２００μｇ（１００
μｌ）をカラムに通し、そして結合緩衝液　３００μｌ
に回収する。約０．５ｍｇのＮ−ヒドロキシスクシンイ
ミドビオチンをその溶液に添加し、そして一晩インキュ
ベートする。ウィルスタンパク質に結合されなかったビ
オチン化合物を、リン酸緩衝溶液により平衡化されたも
う１つの０．５×１０ｃｍのゲル濾過カラム上に生成物
を通すことによって除去する。

【００５１】その結果のより定義的且つ敏感な解釈は、
２個のビーズが試験されるべき対象の口腔内に置かれる
場合に得られる。１つのビーズは例２におけるようにし
てプロテインＡにより誘導体化され、そして第２のビー
ズは抗体と反応しないゼラチン又は他のタンパク質（た
とえばＢＳＡ）により誘導体化される。両ビーズを抗原
及び上記の他の試薬に暴露する。プロテインＡビーズは
、ビーズを保持する棒上の着色されたペイントの印によ
りゼラチンビーズと区別される。クロモゲンとの反応の
後、陽性反応がゼラチンビーズよりも暗色のプロテイン
Ａ上での進行により指摘される。

【００５２】例１に記載されるようにアルキルアミン官
能基を有するビーズを次のようにしてタンパク質により
誘導体化する：１５個のビーズを０．０５Ｍのリン酸ナ
トリウム緩衝液（ｐＨ６）２５ｍｌに置く。無水琥珀酸
１ｇを添加し、そしてその混合物を軽く一晩振盪する。 次に１５個のビーズを水　１００ｍｌにより洗浄する。 １−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カル
ボジイミドの水溶液（ｐＨ１０）５ｍｌを調製し、そし
てすぐにビーズに添加し、２時間インキュベートする。 次に、ビーズを水　１００ｍｌにより洗浄し、そしてす
ぐに、０．１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７）中
において１ｍｌ当たり１ｍｇの濃度で結合されるタンパ
ク質（プロテインＡ又はゼラチンのいづれか）の溶液に
添加する。ビーズを再び水により洗浄し、そして例２に
おけるようにしてブロックする。

【００５３】例　　４ 直接的な免疫診断アッセイのための表面としてのその使
用の他に、対象の口腔内から回収されたプロテインＡビ
ーズを使用し、試験のための可溶性抗体を回収すること
ができる。例１におけるようにして調製された棒プロー
ブを例２におけるようにして対象の口腔内に置く。対象
の口腔内から除去した後、プロテインＡビーズを０．１
モル濃度のクエン酸緩衝液（ｐＨ３．０）（又は他の適
切な溶離媒体）に３０分間置く。これらの条件下で、い
づれかの抗体がビーズから開放されるであろう。ビーズ
を除去した後、クエン酸溶出液を適切な塩基、たとえば
１モル濃度のトリスによりｐＨ７．０に中和する。得ら
れた抗体溶液は、一次試験又は確証のための初期アッセ
イの確認として行なわれるいづれかの免疫診断アッセイ
に使用され得る。

【００５４】例　　５ この例は、本発明に従っての直接的な抗原検出を示す。 対象の抗原に対して特異的な抗体を例１のプロテインＡ
結合ビーズにより固定する。この例においては、　ＨＩ
Ｖ−１のｐ２４コアー抗原に対するマウスモノクローナ
ル抗体を、０．１Ｍの炭酸水素ナトリウム溶液（ｐＨ８
）中、抗体の０．１ｍｇ／ｍｌ溶液と共にプロテインＡ
ビーズ（そのハンドルにより保持される）を室温で１０
分間インキュベートすることによってそのビーズと反応
せしめる。次に、ビーズ複合体を試験流体に暴露し、存
在するいづれかの抗原と反応せしめる。これは、ビーズ
（タンパク質及びモノクローナルにより被覆されている
）を、対象の口腔内に２〜５分間又は同時に対象からの
新しく得られた口腔内すすぎ５ｍｌ中に挿入することに
よって達成される。そのすすぎは、抗細菌剤として０．
１０％の安息香酸又はソルビン酸を含む中性ｐＨの１〜
３％塩溶液により得る。次に、ビーズを次のようにして
調製される第二抗体と共にインキュベートする。マウス
モノクローナル抗体（上記のものとは異なるが、しかし
同じタンパク質と反応する、ｐ２４）を、それがビオチ
ニル化されたＦａｂフラグメント（プロテインＡに結合
する分子のＦｃ　部分を欠くが、しかし抗原を結合する
その能力を保持する）であり、そして次にそれを用いて
、　ＨＩＶ−１抗原／抗体／タンパク質−結合ビーズ複
合体に結合するように変性する。この抗体の典型的な調
製においては、　ＨＩＶ−１　ｐ２４に対して特異的な
マウスＩｇＧ抗体５ｍｇを、４×１０−３Ｍのエチレン
ジアミン四酢酸を含む０．１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝
液（ＰＢＳ）（ｐＨ７．５）１ｍｌに溶解する。次に、
２−メルカプトエタノールを添加し、０．０１Ｍの最終
濃度にする。次にタンパク質分解酵素パパインを添加し
、１ｍｌ当たり　１００μｇの濃度にする。その混合物
を３７℃で一晩インキュベートする。その反応を、その
溶液をヨーダセトアミドにより０．０１Ｍにすることに
よって停止する。その混合物を１×５ｃｍのプロテイン
Ａアガロースカラム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ　Ｃｏｒｐ．）上
に通すことによって、Ｆａｂモノクローナル抗体を損な
われていない抗体及び抗体の遊離Ｆｃ　部分から分離す
る。次に、マウスモノクローナル抗体のこのＦａｂフラ
グメントを例２に記載されているようにしてビオチニル
化する。次に、　ＨＩＶ−１ｐ２４に対するこのビオチ
ニル化されたＦａｂマウスモノクローナル抗体を、その
表面上に　ＨＩＶ−１抗原／抗体／タンパク質−結合複
合体を含む上記ビーズと共に０．１ｍｇ／ｍｌでＰＢＳ
中において２〜５分間インキュベートする。次に、その
複合体を例２におけるようにしてアビジン−酵素検出試
薬と反応せしめる。洗浄の後、クロモゲン性検出を例２
におけるようにして行なう。モノクローナル抗体Ｆａｂ
フラグメントは単にビーズ複合体に結合し、そして従っ
て色の進行は、抗原が存在する場合にのみ見出されるで
あろう。

【図面の簡単な説明】

【図１】これは、それぞれ本発明の好ましい態様の上面
図及び側面図である。

【図２】これは、それぞれもう１つの好ましい態様の側
面図及び末端図である。

【図３】これは、本発明のもう１つの好ましい態様の側
面図である。

【図４】これは、本発明のさらにもう１つの好ましい態
様の側面図である。

【図５】これは、本発明のさらにもう１つの好ましい態
様の側面図である。

【符号の説明】

１…棒 ５…パドル形末端 ７…ウェル

Claims (33)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　免疫診断アッセイに使用するための製
   品であって、免疫グロブリンと結合することができるリ
   ガンドを含む非液体吸収性非多孔性表面を有する少なく
   とも１つの部分を有する延伸された棒を含んで成る製品
   。
2. 【請求項２】　　前記部分が前記棒の一端で存在する請
   求項１記載の製品。
3. 【請求項３】　　前記部分が球状である請求項２記載の
   製品。
4. 【請求項４】　　前記棒が約５０〜１５０　ｍｍの長さ
   である請求項２記載の製品。
5. 【請求項５】　　前記部分が約１．２７〜１９．０５　
   ｍｍの直径を有するビーズを含んで成る請求項２記載の
   製品。
6. 【請求項６】　　前記ビーズ及び棒が２つの固定された
   要素である請求項５記載の製品。
7. 【請求項７】　　前記ビーズが、前記棒から突出する突
   起により前記棒に固定される請求項６記載の製品。
8. 【請求項８】　　前記ビーズがポリスチレンから構成さ
   れる請求項５記載の製品。
9. 【請求項９】　　１以上のビーズを有する請求項７記載
   の製品。
10. 【請求項１０】　　前記リガンドがプロテインＡである
    請求項１記載の製品。
11. 【請求項１１】　　前記リガンドが、タイプＩＩ，ＩＩ
    Ｉ，　ＩＶ　，Ｖ及びＶＩのＦｃ　受容体タンパク質か
    ら成る群から選択される請求項１記載の製品。
12. 【請求項１２】　　体液から免疫グロブリンを単離する
    ための方法であって、免疫グロブリンと結合することが
    できる非液体吸収性非多孔性支持体と体液とを接触せし
    め、そして前記支持体から過剰の流体を洗浄する連続段
    階を含んで成る方法。
13. 【請求項１３】　　前記支持体と抗原溶液とを接触せし
    め、そしてインキュベートし、そして前記支持体から過
    剰の溶液を洗浄し；抗原を結合することができる化合物
    と前記支持体とを接触せしめ、そしてインキュベートし
    、そして前記支持体から過剰の溶液を洗浄し；そして目
    で検出できる反応生成物を生成せしめるために前記化合
    物と反応することができる物質と前記支持体とを接触せ
    しめ、そしてインキュベートする段階をさらに含んで成
    る請求項１２記載の方法。
14. 【請求項１４】　　前記抗原がビオチニル化され、そし
    て前記抗原を結合することができる化合物が酵素結合ア
    ビジンである請求項１３記載の方法。
15. 【請求項１５】　　前記抗原が　ＨＩＶ−１である請求
    項１３記載の方法。
16. 【請求項１６】　　免疫グロブリンを結合することがで
    きる支持体が、患者の腔内にその支持体を置くことによ
    って体液と接触せしめられる請求項１３記載の方法。
17. 【請求項１７】　　前記支持体がプロテインＡを含んで
    成る請求項１３記載の方法。
18. 【請求項１８】　　前記支持体が、タイプＩＩ，ＩＩＩ
    ，　ＩＶ　，Ｖ及びＶＩのＦｃ　受容体タンパク質から
    成る群から選択されたリガンドを含んで成る請求項１３
    記載の方法。
19. 【請求項１９】　　体液から抗原を単離するための方法
    であって、抗原と結合することができる非液体吸収性非
    多孔性支持体と体液とを接触せしめ、そして前記支持体
    から過剰の流体を洗浄する連続段階を含んで成る方法。
20. 【請求項２０】　　前記支持体と前記抗原を結合するこ
    とができる抗体の溶液とを接触せしめ、そしてインキュ
    ベートし、そして前記支持体から過剰の溶液を洗浄し；
    抗体を結合することができる化合物の溶液と前記支持体
    とを接触せしめ、そしてインキュベートし、そして前記
    支持体から過剰の溶液を洗浄し；そして目で検出できる
    反応生成物を生成せしめるために前記化合物と反応する
    ことができる物質と前記支持体とを接触せしめ、そして
    インキュベートする段階をさらに含んで成る請求項１９
    記載の方法。
21. 【請求項２１】　　前記抗原と結合することができる支
    持体が、患者の腔内にその支持体を置くことによって体
    液と接触せしめられる請求項２０記載の方法。
22. 【請求項２２】　　前記支持体がリガンドにより結合さ
    れる抗−抗原タンパク質を含んで成る請求項２０記載の
    方法。
23. 【請求項２３】　　前記リガンドがプロテインＡである
    請求項２２記載の方法。
24. 【請求項２４】　　前記支持体が、タイプＩＩ，ＩＩＩ
    ，　ＩＶ　，Ｖ及びＶＩのＦｃ　受容体タンパク質から
    成る群から選択されたリガンドにより結合される抗−抗
    原タンパク質を含んで成る請求項２２記載の方法。
25. 【請求項２５】　　前記抗体がＦｃ　部分を欠くモノク
    ローナル抗体のＦａｂフラグメントである請求項２０記
    載の方法。
26. 【請求項２６】　　前記抗−抗原タンパク質及び前記Ｆ
    ａｂ抗体が前記抗原の異なったエピトープに対して特異
    的である請求項２４記載の方法。
27. 【請求項２７】　　前記抗体がビオチニル化され、そし
    て前記抗体を結合できる化合物が酵素結合アビジンであ
    る請求項２０記載の方法。
28. 【請求項２８】　　前記抗原が　ＨＩＶ−１である請求
    項２０記載の方法。
29. 【請求項２９】　　診断試験のために唾液における抗体
    を検出するためのキットであって： 免疫グロブリンと結合することができるリガンドを含む
    非液体吸収性非多孔性表面を有する少なくとも１つの部
    分を有する延伸された棒；及び緩衝液、ビオチニル化さ
    れた抗原溶液、酵素結合アビジン溶液、目に見える検出
    可能な反応生成物を生成するために酵素と反応すること
    ができる酵素支持体、及び陽性及び陰性の対照溶液を含
    んで成る試薬を含んで成るキット。
30. 【請求項３０】　　抗原に対して特異的なポリクローナ
    ル又はモノクローナル抗体及びビオチニル化されたＦａ
    ｂモノクローナル抗体をさらに含んで成る請求項２９記
    載のキット。
31. 【請求項３１】　　試験流体から免疫グロブリンの回収
    方法であって、免疫グロブリンと結合することができる
    非液体吸収性非多孔性支持体と試験流体とを接触せしめ
    、そして前記支持体から過剰の流体を洗浄し；免疫グロ
    ブリンのための溶離媒体中に前記支持体を置き；そして
    中和化緩衝液により前記溶出液を処理する連続段階を含
    んで成る方法。
32. 【請求項３２】　　前記溶離媒体がｐＨ３．０の０．１
    モル濃度のクエン酸緩衝液である請求項３１記載の方法
    。
33. 【請求項３３】　　前記緩衝液が１モル濃度のトリスで
    ある請求項３１記載の方法。