CN114432370A - 一种俄色果提取物及其制药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种俄色果提取物及其制药用途。该俄色果提取物的制备方法包括以下步骤：取俄色果，以50％～80％乙醇作为提取溶剂提取，过滤，取滤液，即得。实验表明，该俄色果提取物不仅能够有效抑制胃癌细胞的生长，而且具有良好的抗氧化功能，还对CC14引起的肝损伤具有良好的保护作用。因此，俄色果及其提取物在制备预防和/或治疗胃癌的药物，保护肝损伤的药物或保健品，抗氧化的药物或保健品中具有非常好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于中药提取物领域，具体涉及一种俄色果提取物及其制药用途。
背景技术
俄色果为蔷薇科植物变叶海棠Malus toringoides(Rehd.)Hughes.和花叶海棠Malus transitoria(Batal.)Schneid.的干燥成熟果实。在甘孜藏区，俄色果习称瓦多、红瓦多、白瓦多等，此外在甘肃又称大白石枣、小白石枣、涩枣子等，另还有花叶杜梨(陕北)、马杜梨、细弱海棠等别名。俄色果在《新修晶珠本草》、《中华藏本草》和《藏汉大辞典》中均有记载，具有“健胃、降血压，治肝病、高血压、腹泻、眼病、月经不调”等作用。
俄色果在藏区的药用历史悠久，但其现代药理作用研究甚少。中国专利申请CN105878449A公开了一种俄色果提取物在制备保肝的药物或保健食品中的用途。中国专利申请CN108815252A公开了一种俄色果提取物在制备降压药物中的用途。
但是，目前还未见俄色果或其提取物用于制备治疗胃癌的药物的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种俄色果提取物，及该俄色果提取物在制备预防和/或治疗胃癌的药物中的用途。
本发明提供了一种俄色果提取物，所述俄色果提取物的制备方法包括以下步骤：取俄色果，以50％～80％乙醇作为提取溶剂提取，过滤，取滤液，即得。
进一步地，所述提取溶剂为60％～70％乙醇，优选为60％乙醇。
进一步地，所述俄色果与提取溶剂的质量体积比为1：(10～40)g/mL，优选为1：(20～30)g/mL，更优选为1：20g/mL。
进一步地，所述提取方式为超声提取或回流提取，优选为回流提取。
进一步地，所述提取次数为1～4次，优选为2次。
进一步地，所述提取时间为每次0.5～2.0小时，优选为每次1.0小时。
进一步地，所述俄色果为蔷薇科植物变叶海棠Malus toringoides(Rehd.)Hughes.和花叶海棠Malus transitoria(Batal.)Schneid.的干燥成熟果实。
本发明还提高了一种药物或保健品，它是以上述的俄色果提取物为活性成分，加上药学领域或保健品领域可接受的辅料制得的制剂。
本发明还提供了俄色果或其提取物在制备预防和/或治疗癌症的药物中的用途。
进一步地，所述俄色果提取物为上述的俄色果提取物；
和/或，所述癌症为胃癌。
本发明中，乙醇的浓度为体积浓度。比如60％乙醇指体积浓度为60％的乙醇水溶液。
实验结果表明，本发明通过特定的提取工艺得到了一种俄色果提取物，该俄色果提取物不仅能够有效抑制胃癌细胞的生长，而且具有良好的抗氧化功能，还对CC14引起的肝损伤具有良好的保护作用。因此，该俄色果提取物在制备预防和/或治疗胃癌的药物，保护肝损伤的药物或保健品，抗氧化的药物或保健品中具有非常好的应用前景。
本发明的俄色果提取物提取工艺简单，条件温和，适合工业化生产。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
实施例1、本发明俄色果提取物的制备
精密称取1g俄色果药材粉末，然后加入10mL 60％乙醇，回流提取1小时；过滤，得到第一次滤液和滤渣；在滤渣中再加入10mL 60％乙醇，回流提取1小时，过滤，得到第二次滤液和滤渣。合并两次的滤液，即得俄色果提取物。
实施例2、本发明俄色果提取物的制备
精密称取1g俄色果药材粉末，然后加入20mL 60％乙醇，回流提取1小时；过滤，得到第一次滤液和滤渣；在滤渣中再加入20mL 60％乙醇，回流提取1小时，过滤，得到第二次滤液和滤渣。合并两次的滤液，即得俄色果提取物。
实施例3、本发明俄色果提取物的制备
精密称取1g俄色果药材粉末，然后加入30mL 60％乙醇，回流提取1小时；过滤，得到第一次滤液和滤渣；在滤渣中再加入30mL 60％乙醇，回流提取1小时，过滤，得到第二次滤液和滤渣。合并两次的滤液，即得俄色果提取物。
实施例4、本发明俄色果提取物的制备
精密称取1g俄色果药材粉末，然后加入40mL 60％乙醇，回流提取1小时；过滤，得到第一次滤液和滤渣；在滤渣中再加入40mL 60％乙醇，回流提取1小时，过滤，得到第二次滤液和滤渣。合并两次的滤液，即得俄色果提取物。
实施例5、本发明俄色果提取物的制备
参照实施例2的制备方法，将60％乙醇替换为水，其余条件与实施例2相同，得到俄色果提取物。
实施例6、本发明俄色果提取物的制备
参照实施例2的制备方法，将60％乙醇替换为10％乙醇，其余条件与实施例2相同，得到俄色果提取物。
实施例7、本发明俄色果提取物的制备
参照实施例2的制备方法，将60％乙醇替换为30％乙醇，其余条件与实施例2相同，得到俄色果提取物。
实施例8、本发明俄色果提取物的制备
参照实施例2的制备方法，将60％乙醇替换为50％乙醇，其余条件与实施例2相同，得到俄色果提取物。
实施例9、本发明俄色果提取物的制备
参照实施例2的制备方法，将60％乙醇替换为70％乙醇，其余条件与实施例2相同，得到俄色果提取物。
实施例10、本发明俄色果提取物的制备
参照实施例2的制备方法，将60％乙醇替换为80％乙醇，其余条件与实施例2相同，得到俄色果提取物。
实施例11、本发明俄色果提取物的制备
参照实施例2的制备方法，将60％乙醇替换为95％乙醇，其余条件与实施例2相同，得到俄色果提取物。
实施例12、本发明俄色果提取物的制备
参照实施例2的制备方法，将60％乙醇替换为无水乙醇，其余条件与实施例2相同，得到俄色果提取物。
实施例13、本发明俄色果提取物的制备
精密称取1g俄色果药材粉末，然后加入20mL 60％乙醇，超声提取1小时；过滤，得到第一次滤液和滤渣；在滤渣中再加入20mL 60％乙醇，超声提取1小时，过滤，得到第二次滤液和滤渣。合并两次的滤液，即得俄色果提取物。
以下通过实验例证明本发明的有益效果。
实验例1、本发明俄色果提取物对胃癌细胞的生长抑制效果评价
1、实验方法
受试药物：按照实施例2的方法制得俄色果提取物，然后通过倍数稀释法配制成表1所示不同浓度的俄色果提取物。胃癌细胞BGC-803的培养：人胃癌细胞BGC-803生长在含有10％胎牛血清的RPMI-1640培养基中，并含100ug/mL青霉素和50ug/mL链霉素，于37℃、5％C02饱和湿度的恒温细胞培养箱中培养。3株细胞每两天换液，按照1：4传代培养。
取活细胞比例达90％以上的细胞进行实验。细胞增殖抑制试验采用EnoGeneCellTM Counting Kit-8(CCK-8)细胞活力检测试剂盒。当细胞分裂生长呈对数期时，将贴壁细胞BGC-803经胰酶消化制成单细胞悬液之后，细胞经消化、计数制成浓度为1×105个/mL的细胞悬液，96孔板中每孔加入100uL细胞悬液(每孔1×104个细胞)，置于37℃，5％CO2培养箱中培养24h。然后每孔加入100uL含不同浓度的俄色果提取物的培养基；同时设立阴性对照组(加入相同体积的培养基)。每组5复孔。然后将96孔板置于37℃，5％CO2培养箱中培养72h后；每孔加入10uL的CCK-8溶液，将培养板在培养箱内孵育4h，用酶标仪测定在450nm处的OD值，计算俄色果提取物对人胃癌细胞BGC-803的抑制率及半抑制浓度(IC50)值。
2、实验结果
表1、不同浓度的俄色果提取物对胃癌细胞BGC-803的抑制作用
实验结果如表1所示。可以看出，本发明制得的俄色果提取物能够有效抑制胃癌细胞BGC-803的生长，在检测范围内，最佳浓度的抑制率均可达到70％以上。此外，计算得到本发明制得的俄色果提取物抑制胃癌细胞BGC-803的IC50值＝111.5μg/mL。
所以，本发明的俄色果提取物对胃癌细胞的生长具有良好的抑制效果。
实验例2、本发明俄色果提取物的抗氧化功能评价
1、实验方法
受试药物：按照实施例2的方法制得俄色果提取物。
精密吸取0.1ml俄色果提取物，加入2.0ml的DPPH溶液，密塞，摇匀，置于室温下避光环境中反应30min，反应完成后，在517nm处测定吸光度，根据吸光度值将俄色果提取物稀释成最佳反应浓度，即吸光度值在0.2～0.8范围内。通过不同浓度的俄色果提取物的清除率及浓度建立线性关系，用半数清除率(IC50)表示其抗氧化活性。半数清除率即清除率为50％时样品的浓度，该浓度越低，抗氧化活性越强。
清除率(％)＝[1-(As-A0)/A1]×100％
式中：As——样品测定管的吸光度值(样品溶液与DPPH溶液的吸光度)；A0——各样品溶液本底吸光度(样品溶液与乙醇溶液的吸光度)；A1——DPPH溶液的吸光度(样品溶剂与DPPH溶液的吸光度)。
表2、俄色果提取物的抗氧化活性
实验结果如表2所示。可以看出，本发明制得的俄色果提取物具有良好的抗氧化活性，其清除DPPH的IC50为8.2547mg/mL。
所以，本发明的俄色果提取物具有良好的抗氧化功能。
实验例3、本发明俄色果提取物的保肝作用评价
1、实验方法
受试药物：按照实施例2的方法制得俄色果提取物，然后配制成表3所示低、中、高浓度的俄色果提取物。
使用低、中、高不同浓度的俄色果提取物进行人源性正常肝HL7702细胞预处理，12h后添加10mmol·L-1CCl4损伤细胞后，观察俄色果提取物对正常细胞及模型细胞的影响。通过测定体外培养HL7702细胞上清液中ALT、AST、LDH水平和细胞MDA、SOD、GSH水平，探究俄色果提取物对CC14引起的肝HL7702细胞损伤的影响。以联苯双酯作为阳性药物。实验分组及给药剂量如表3所示。
表3、保肝实验分组及给药剂量
| 组别 | 药物浓度(μg/mL) |
| 正常对照组(Control) | - |
| 模型组(Model) | - |
| 联苯双酯组(DDB) | 5 |
| 俄色果提取物低剂量(G-L) | 1 |
| 俄色果提取物中剂量(G-M) | 10 |
| 俄色果提取物高剂量(G-H) | 100 |
2、实验结果
表4、各组对HL7702细胞增殖作用的影响(x±s，n＝3)
| 组别 | 药物浓度(ug/ml) | 平均OD值 |
| control | - | 0.514 |
| GT-L | 1 | 0.528 |
| GT-M | 10 | 0.539 |
| GT-H | 100 | 0.517 |
注：与正常对照组比较：**p<0.01，*p<0.05。
表5、各组对细胞上清液LDH、AST、ALT含量变化的影响(x±s，n＝6)
注：与正常对照组比较：**p<0.01，*p<0.05；与模型组比较：##p<0.01，#p<0.05。
表6、各组对细胞体内SOD、MDA、GSH含量变化的影响(x±s，n＝6)
注：与正常对照组比较：**p<0.01，*p<0.05；与模型组比较：##p<0.01，#p<0.05。
实验结果如表4～6所示。可以看出本发明制得的俄色果提取物能增加正常肝细胞的活力，在一定剂量内无细胞毒性；本发明制得的俄色果提取物能够显著降低损伤肝细胞上清液LDH、AST、ALT含量，同时显著提高损伤肝细胞内SOD、MDA含量，显著降低损伤肝HL7702细胞内GSH含量，对CC14引起的肝损伤具有良好的保护作用。
所以，本发明的俄色果提取物对CC14引起的肝损伤具有良好的保护作用。
综上，本发明提供了一种俄色果提取物，该俄色果提取物不仅能够有效抑制胃癌细胞的生长，而且具有良好的抗氧化功能，还对CC14引起的肝损伤具有良好的保护作用。因此，俄色果及其提取物在制备预防和/或治疗胃癌的药物，保护肝损伤的药物或保健品，抗氧化的药物或保健品中具有非常好的应用前景。
Claims (10)
1.一种俄色果提取物，其特征在于：所述俄色果提取物的制备方法包括以下步骤：取俄色果，以50％～80％乙醇作为提取溶剂提取，过滤，取滤液，即得。
2.根据权利要求1所述的俄色果提取物，其特征在于：所述提取溶剂为60％～70％乙醇，优选为60％乙醇。
3.根据权利要求1所述的俄色果提取物，其特征在于：所述俄色果与提取溶剂的质量体积比为1：(10～40)g/mL，优选为1：(20～30)g/mL，更优选为1：20g/mL。
4.根据权利要求1所述的俄色果提取物，其特征在于：所述提取方式为超声提取或回流提取，优选为回流提取。
5.根据权利要求1所述的俄色果提取物，其特征在于：所述提取次数为1～4次，优选为2次。
6.根据权利要求5所述的俄色果提取物，其特征在于：所述提取时间为每次0.5～2.0小时，优选为每次1.0小时。
7.根据权利要求1～6任一项所述的俄色果提取物，其特征在于：所述俄色果为蔷薇科植物变叶海棠Malus toringoides(Rehd.)Hughes.和花叶海棠Malus transitoria(Batal.)Schneid.的干燥成熟果实。
8.一种药物或保健品，其特征在于：它是以权利要求1～7任一项所述的俄色果提取物为活性成分，加上药学领域或保健品领域可接受的辅料制得的制剂。
9.俄色果或其提取物在制备预防和/或治疗癌症的药物中的用途。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于：所述俄色果提取物为权利要求1～7任一项所述的俄色果提取物；
和/或，所述癌症为胃癌。
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