CN114410658B

CN114410658B - 一种降低水稻糙米镉含量的基因OsWNK9及其编码蛋白和应用

Info

Publication number: CN114410658B
Application number: CN202210237414.0A
Authority: CN
Inventors: 余海英; 郭静怡; 李廷轩; 黄化刚; 张锡洲; 叶代桦; 郑子成; 王永东; 唐毓
Original assignee: Sichuan Agricultural University
Current assignee: Sichuan Agricultural University
Priority date: 2022-03-11
Filing date: 2022-03-11
Publication date: 2023-04-25
Anticipated expiration: 2042-03-11
Also published as: CN114410658A

Abstract

本发明公开了一种降低水稻糙米镉含量的基因OsWNK9及其编码蛋白和应用。该基因OsWNK9的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明为水稻茎秆镉高富集、糙米镉低积累育种提供了一个新的控制镉在水稻体内转运的功能型基因OsWNK9，该基因通过调控镉在水稻茎秆和下部节点中的富集来降低镉在糙米中的积累，从而实现水稻糙米镉浓度的降低；OsWNK9还同时影响水稻对铁的吸收、积累及糙米中的铁浓度，有助于水稻可食部位微量元素的强化。

Description

一种降低水稻糙米镉含量的基因OsWNK9及其编码蛋白和应用

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种降低水稻糙米镉含量的基因OsWNK9及其编码蛋白和应用。

背景技术

降低糙米镉含量、培育可食部位重金属含量安全的作物是解决污染农田安全利用、保障粮食安全的重要策略。水稻糙米镉含量属于受多基因控制的复杂数量性状，同时受多个生理过程的调控影响。水稻对镉的吸收能力较强，因此其茎秆对镉具有较强的富集能力。培育茎秆镉高积累、可食部位镉含量低的水稻品种是实现“边修复边生产”的有效途径。

鉴定调控水稻糙米镉含量的基因及编码蛋白，不仅是理论研究和国际基因资源竞争的需要，更是通过分子育种方法获得籽粒镉安全且兼具其他优良性状的水稻品种的需要。目前已有多个调控不同生理转运过程的基因或蛋白被鉴定，但已有基因功能大多为增加水稻糙米镉含量，难以直接用于籽粒镉低积累水稻的育种应用中。因此，挖掘、鉴定可增加水稻茎秆镉富集、降低糙米镉含量的基因及其编码蛋白功能可为创制理想的在镉污染农田土壤上兼具镉富集修复和可食部位安全生产的水稻品种提供基础。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种降低水稻糙米镉含量的基因OsWNK9及其编码蛋白和应用，本发明从控制水稻糙米镉含量的数量性状座位 (QTL)位点qBCdC-12区间内筛选到一个响应镉胁迫、具有镉转运活性的基因 OsWNK9，该基因控制着水稻茎秆对镉的富集、并可降低糙米中镉积累水平。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种降低水稻糙米镉含量的基因OsWNK9，该基因OsWNK9的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

进一步地，基因OsWNK9还可以是与如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列具有 80％以上的同源性，且表达相同功能蛋白的序列。

上述基因OsWNK9编码的蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

一种表达载体，包括上述基因。

一种降低水稻糙米镉含量的制剂，制剂包括促进基因OsWNK9表达的活性成分。

一种降低水稻糙米镉含量的药物，药物包括上述的蛋白。

上述基因OsWNK9在促进水稻茎秆镉富集中的应用。

上述基因OsWNK9在水稻种质资源改良或水稻糙米低镉品种培育中的应用。

本发明的有益效果：

本发明为培育水稻茎秆镉高富集、糙米镉低积累的水稻品种提供了一个新的控制镉在水稻体内转运的功能型基因OsWNK9，该基因通过调控镉在水稻茎秆和下部节点中的富集来降低镉在糙米中的积累，从而实现水稻糙米镉浓度的降低；OsWNK9还同时影响水稻对铁的吸收、积累及糙米中的铁浓度，有助于水稻可食部位微量元素的强化。

本发明基因OsWNK9对镉污染农田土壤上栽种水稻的安全生产及微量元素强化具有重要意义，通过对OsWNK9的功能解读，有助于进一步阐明水稻糙米镉积累的遗传机制，为创建秸秆镉高富集、糙米镉低积累的优良水稻新种质打下基础。

附图说明

图1为OsWNK9转化子对镉离子的转运活性；

图2为OsWNK9转化子对锰离子的转运活性；

图3为OsWNK9转化子对锌离子的转运活性；

图4为oswnk9突变体及野生型苗期株高对比柱形图；

图5为oswnk9突变体及野生型苗期最长根长对比柱形图；

图6为oswnk9突变体及野生型苗期生物量对比柱形图；

图7为oswnk9突变体及野生型成熟期千粒重对比柱形图；

图8为oswnk9突变体及野生型苗期茎基Cd含量对比柱形图；

图9为oswnk9突变体及野生型成熟期各器官Cd含量对比柱形图；

图10为oswnk9突变体及野生型成熟期各器官Fe含量对比柱形图。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式进行描述，以便于本技术领域的技术人员理解本发明，但应该清楚，本发明不限于具体实施方式的范围，对本技术领域的普通技术人员来讲，只要各种变化在所附的权利要求限定和确定的本发明的精神和范围内，这些变化是显而易见的，一切利用本发明构思的发明创造均在保护之列。

实施例1 OsWNK9基因酵母功能互补试验

1、试验材料

本试验所用大肠杆菌DH5α购自于生工生物工程(上海)股份有限公司，所用酵母菌株(包括野生型BY4741、镉敏感型突变体酵母△ycf1、锰敏感型突变体酵母△pmr1和锌敏感型突变体酵母△zrc1)菌购自于欧洲EUROSCARF公司(http://www.euroscarf.de)。

2、试验方法

(1)OsWNK9基因的扩增

以籽粒Cd低积累水稻雅恢2816中OsWNK9(与野生型中花11中OsWNK9 序列相同)的cDNA为模板，按照高保真DNA扩增试剂盒(NEW ENGLAND BioLabs)提供的方法进行PCR，扩增出该基因的编码区片段，琼脂糖凝胶电泳胶回收纯化。

(2)pFL61-OsWNK9载体质粒制备与重组链接

将本实验室储存的pFL61载体质粒用NotI进行酶切，所得酶切片段进行琼脂糖凝胶电泳，选用OMEGA胶回收试剂盒进行回收纯化获得线性载体片段备用。利用快速重组连接试剂盒(赛默飞T4连接酶)提供的反应体系分别加入纯化后的目的片段和线性载体片段，按照方法说明进行载体链接反应。

(3)反应体系转化

取上述反应产物3μL加入到解冻后的DH5α感受态细胞中，轻轻用移液枪吸打混匀，冰浴15min，并在42℃上热激30s，冰浴1min，并加入250μL于37℃预热的LB培养基中，37℃摇菌1h后取100μL涂布于含有卡纳抗生素的固体培养基中，置于培养箱中倒置37℃过夜培养。

(4)单克隆鉴定和质粒提取

同时进行菌落PCR和双酶切验证方法。用无菌牙签挑取单克隆菌落至LB 液体培养基中混匀，并取1μL为模板，以基因特异性引物进行扩增，并送至生工生物工程(上海)股份有限公司进行片段测序，将剩余的阳性菌液转入包含卡纳抗生素的LB液体培养基中扩大培养，并提取质粒，得到pFL61-OsWNK9 质粒。

(5)酵母转化

从培养在YPD固体培养基上划取一接种环的新鲜酵母菌株重悬于500μL Buffer1(100mM醋酸锂，10mM Tris-HCl pH 7.5，1mM EDTA)中并快速离心5s；移除多余上清液，保留100μL Buffer1在离心管中；加入10μL 10mg/mL的鲑鱼精子DNA，并加入1μg质粒(pFL61-OsWNK9和空载体pFL61)后涡旋 10s；加入600μL Buffer2(100mM醋酸锂，10mM Tris-HCl pH7.5，1mM EDTA， 40％PEG3350)后涡旋，并室温下放置4-16h；42℃热震荡15min后快速离心5s并移除上清液；将酵母细胞重悬于200μL灭菌水中，取100μL涂于缺失相应氨基酸的选择性SD-URA固体培养基上。30℃培养2-3天便可获得转化成功的酵母单克隆。

(6)酵母功能互补验证

取转化后的单克隆酵母于液体SD-URA培养基中30℃培养2天后，滴取 10μL菌液至细胞计数板，在光学显微镜下观察酵母数量并计算菌液酵母浓度。将其稀释至10⁷/mL后梯度稀释至10⁶/mL、10⁵/mL、10⁴/mL。

(7)生长互补验证

将各浓度梯度菌液摇匀后，吸取10μL至含有不同金属浓度(如表1所示) 的固体SD-URA培养基上。30℃倒置培养2-3天后拍照。

表1培养基中不同金属处理浓度

金属元素	化合物	浓度
			镉	<![CDATA[CdSO<sub>4</sub>]]>	0,15,30μM
锰	<![CDATA[MnSO<sub>4</sub>]]>	0,0.6,1mM
			锌	<![CDATA[ZnSO<sub>4</sub>]]>	0,5,10mM

结果如图1～3所示，图1中WT表示野生型酵母BY4741，△ycf1+ev表示携带空载体的镉敏感型突变体，△ycf1+OsWNK9表示携带OsWNK9蛋白的镉敏感型突变体。在30μM CdSO₄处理条件下，与野生型相比△ycf1+ev生长受到 Cd胁迫抑制，而携带OsWNK9蛋白的镉敏感型突变体△ycf1+OsWNK9在Cd 胁迫条件下生长进一步受到抑制，表明在酵母中，OsWNK9具有调控镉离子转运的活性，进而提高镉敏感型突变体△ycf1细胞质中的镉浓度并抑制其生长。

图2中WT表示野生型酵母BY4741，△pmr1+ev表示携带空载体的锰敏感型突变体，△pmr1+OsWNK9表示携带OsWNK9蛋白的锰敏感型突变体。在 0.6mM和1.0mM的高锰处理条件下，与野生型相比△pmr1+ev生长明显受到抑制，携带OsWNK9蛋白的锰敏感型突变体对高锰的耐性增强、生长受抑程度减小，表明OsWNK9具有外排锰离子的活性，进而降低锰敏感型突变体△pmr1 细胞质内锰浓度并促进其生长。

图3中WT表示野生型酵母BY4741，△zrc1+ev表示携带空载体的锌敏感型突变体，△zrc1+OsWNK9表示携带OsWNK9蛋白的锌敏感型突变体。在 5.0mM和10.0mM的高锌处理条件下，与野生型相比△zrc1+ev生长明显受到抑制，携带OsWNK9蛋白的锌敏感型突变体对高锌的耐性增强、生长受抑程度减小，表明OsWNK9具有外排锌离子的活性，降低锌敏感型突变体△zrc1细胞质内锌浓度并促进其生长。

综上可以发现OsWNK9是在酵母中具有镉离子、锰离子、锌离子转运活性的基因。

实施例2 OsWNK9突变体的构建及筛选

1、供试材料。

供试植物为野生型水稻中花11，供试载体为pYLCRISPR/Cas9多靶点载体，所用大肠杆菌DH5α购自于生工生物工程(上海)股份有限公司。

2、候选基因CRISPR靶位点设计及载体构建。

根据OsWNK9编码区序列设计2个CRISPR靶位点(20KN120T1：5’-CCATGACAGAGTCATCGATC-3’；20KN120T2：5’-GGCATACTGTGTCAAGCTCC-3’)。同时，根据靶位点设计靶位点接头引物(20KN120T1-F： 5’-GCCGCCATGACAGAGTCATCGATC-3’；20KN120T1-R：5’-AAACGATC GATGACTCTGTCATGG-3’；20KN120T2-F：5’-GTTGGCATACTGTGTCAAGCTCC-3’；20KN120T2-R：5’-AAACGGAGCTTGACACAGTATGC-3’)。

靶位点正向与反向引物退火(两端形成可以与酶切的载体匹配的粘性末端)，同时BsaI酶切gRNA载体与靶位点退火的小片段进行连接。利用带有BsaI 酶切位点的引物进行PCR扩增，获取含有靶位点的gRNA表达框。回收扩增的靶位点扩增片段并用BsaI酶切，同时用BsaI酶切Cas9载体后进行连接。连接产物电转化大肠杆菌感受态细胞后，涂卡那霉素抗性平板。挑选阳性克隆，经测序正确后提取质粒，并完成农杆菌转化。

3、农杆菌侵染法转化水稻及突变体鉴定。

先用75％酒精将野生型中花11种子消毒1分钟，用无菌水漂洗3次，然后用40％的次氯酸钠漂洗30min，再用无菌水冲洗5次，放置于带滤纸的培养皿中滤干，用镊子接种于NMB培养基上，于28℃、光照条件下培养7天。每7天继代一次。继代2～3次后，挑取从种子上生长出的良好愈伤组织，把它们继代于NMB培养基上，于28℃、黑暗条件下培养4天。将农杆菌加入3mL含有利福平和卡那霉素的50mL YEP液体培养基中，28℃再振荡培养4h，得到活化后的农杆菌菌液。在5000rpm下离心收集菌体，用含有100μM乙酰丁香酮的AAM 液体培养基30mL重悬菌体，将预先挑好的愈伤组织浸于菌体中20min，吸去多余的菌液，平铺于共培养固体培养基上，28℃暗培养2d后用无菌水冲洗至水澄清，然后用含头孢霉素(500mg/L)的无菌水振荡30min杀菌，将愈伤组织用无菌滤纸彻底吸干，然后接种于选择培养基上培养3周。将长出的抗性愈伤组织接种到分化培养基上光照培养1～2月，然后将长出的3cm左右高的幼苗转到生根培养基上进行生根培养，当苗长至约10cm时取叶片提取DNA，利用扩增靶序列的引物OsWNK9-F(5’-TATGATGAGATCGTGGGG-3’)和OsWNK9-R (5’-GCTGGCTTCTGACTGTGC-3’)进行阳性植株苗的鉴定，最终获得3株阳性突变体株系，分别命名为oswnk9-1、oswnk9-2、oswnk9-3。

实施例3突变体苗期生长表型及成熟期产量表型的鉴定

1、供试材料。

供试植物为野生型水稻中花11和OsWNK9突变体；供试营养液为Kimura B 完全营养液。

2、在四川农业大学温江校区实验大棚中将三叶期的野生型和OsWNK9突变体移栽在镉浓度分别为0和50μM的Kimura B完全营养液中，并在镉处理后 10天采集样品用于苗期表型鉴定，如图4～6所示。

图4中WT表示野生型中花11，oswnk9-1、oswnk9-2、oswnk9-3均表示oswnk9 突变体；“*”表示突变体与野生型间差异显著(p＜0.05)。其中对照表示正常处理条件下，镉处理表示50μM镉胁迫条件。无论是对照还是镉处理条件下， oswnk9突变体苗期株高均高于野生型。

图5中WT表示野生型中花11，oswnk9-1、oswnk9-2、oswnk9-3均表示oswnk9 突变体；“*”表示突变体与野生型间差异显著(p＜0.05)。其中对照表示正常处理条件下，镉处理表示50μM镉胁迫条件。无论是对照还是镉处理条件下， oswnk9突变体苗期与野生型最长根长间无明显差异。

图6中WT表示野生型中花11，oswnk9-1、oswnk9-2、oswnk9-3均表示oswnk9 突变体；“*”表示突变体与野生型间差异显著(p＜0.05)。其中对照表示正常处理条件下，镉处理表示50μM镉胁迫条件。对照条件下，oswnk9突变体苗期整株生物量显著高于野生型；镉胁迫条件下，野生型与oswnk9突变体苗期整株生物量无显著差异。

可见，突变体苗期根长与野生型间无显著差异，但株高在对照和镉处理下均大于野生型，且其耐镉系数(镉处理下生物量与对照条件下生物量的比值) 低于野生型，表明OsWNK9具有增强水稻苗期镉耐性的功能。

3、将野生型和oswnk9突变体移栽在四川省成都平原某市的镉污染农田上，株行距为20cm×25cm，每穴1株，于成熟期采集穗部用于产量性状观察，结果如图7所示。

图7中WT表示野生型中花11，oswnk9-1、oswnk9-2、oswnk9-3均表示oswnk9 突变体；“*”表示突变体与野生型间差异显著(p＜0.05)。与野生型相比，oswnk9 突变体成熟期千粒重均显著更低，表明镉胁迫条件下OsWNK9具有增产功能。

实施例4 OsWNK9突变体各器官镉与铁含量分析

1、供试材料。

供试植物为野生型水稻中花11和OsWNK9突变体。

2、在四川农业大学温江校区实验大棚中将三叶期的野生型和OsWNK9突变体移栽在镉浓度分别为0和50μM的Kimura B完全营养液中，并在镉处理后 10天采集茎基样品用于苗期茎基镉含量测定，如图8所示。

图8中WT表示野生型中花11，oswnk9-1、oswnk9-2、oswnk9-3均表示oswnk9 突变体；“*”表示突变体与野生型间差异显著(p＜0.05)。与野生型相比，oswnk9 突变体茎基镉含量明显下降，表明OsWNK9参与苗期茎基对镉的滞留作用。

3、将野生型和OsWNK9突变体移栽在四川省成都平原某市的镉污染农田上，株行距为20cm×25cm，每穴1株，于成熟期采集各器官(糙米、节间、节点I、节点II、节点III、叶片I、叶片II、叶片III)用于镉含量与铁含量的测定，其结果见图9和图10。

图9中WT表示野生型中花11，oswnk9-1、oswnk9-2、oswnk9-3均表示oswnk9 突变体；“*”表示突变体与野生型间差异显著(p＜0.05)。与野生型相比，oswnk9 突变体节点III和各节间镉含量显著更低，而糙米镉含量显著增高，表明OsWNK9 参与水稻下部节点和茎秆对镉的滞留，并降低糙米Cd含量。

进一步结合各器官间镉转运系数可知(表2)，突变体下部节点向上部节点 (节点III-节点II、节点II-节点I)及节间-糙米的Cd转移系数均高于野生型，表明OsWNK9具有降低Cd向上部节点和糙米转运的作用。

因此，OsWNK9的功能是增强水稻下部节点和茎秆对镉的滞留、降低糙米中镉含量。

表2各器官中Cd转移系数

分析突变体各器官铁含量可知(见图10，其中，WT表示野生型中花11， oswnk9-1、oswnk9-2、oswnk9-3均表示oswnk9突变体；“*”表示突变体与野生型间差异显著(p＜0.05))，突变体水稻各节点、节间、叶片III和糙米铁含量均显著低于野生型，表明OsWNK9也具有增强水稻地上部及可食部位铁含量的功能。

序列表

<120> 一种降低水稻糙米镉含量的基因OsWNK9及其编码蛋白和应用

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1254

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

atggatctgg tggaggcgga ggcggaggag cagccgccgg acgaggacgg cgacgaggag 60

gggtacgtcg aggcggaccc cgcaggccgc ttcatccggt atgatgagat cgtggggtca 120

ggggccgtca aaacggtcta caaagccttc gataagctgg agggtgtcga ggtagcatgg 180

agccaatccc ggatcgatga ctctgtcatg gggtcctcta agaagatgaa gcaactaaac 240

acagagattc aacttttgaa gacactcaag cataagaaca ttgagaaaat gtttgcttca 300

tgggttgatg gggagaagaa gactgttaac ataatcacag agttgttcac atccgggagc 360

ttgacacagt accgcagaaa gcacaagaaa gtgaatatga aggctatgaa acgatgggca 420

atacagatat taacagggct agaatatctg cacagtcaga agccagcaat tatacacagg 480

gatttaaaat gtgacaatat attcataaat ggaaatcatg ggaaagtgaa gattggtgat 540

tttggtttgg caacattcat gcagcaacag aaaaaaagta taaaaggcac cttagaattt 600

atggcaccag agctgttaac tgggcattac aatgaattgg ttgatatata ttcatttggg 660

atgtgcatgc ttgaaatggt gacatgcgaa tacccataca gtgaatgtca aggcatggcc 720

catatattca aaaagattga tgagggtaag aaaccagctg cgttctacaa aattaaagat 780

gcagaagtaa gatctttcat agagaactgt ttagctccag tagagaacag aatgtctgca 840

acagagctgt tgaaaagctc tttcctccag gatgatgatc ttatctcagt ctctctggtc 900

aagaatatgt ctgaagatgg gcagcagcct gtcagttgca tgcttcgtaa gggcgagttt 960

ctgctgacag gaaatgttga tgtagccagc catgttgatt tatggctaag atttcctgat 1020

cccagcggtt gtttcaagag tgttgaattc ccattcaatt tgactgaaga tacaagtctt 1080

tctgtggctg tggaaatggt tgagcaattt ggactgacac aagacagcag accgatcatc 1140

gcgcagttga tcgatgcatt cttggtcatc ctgattcctg aatggacacc gtgtgtcgcc 1200

atccgtcagg tggtttctga gggtgcaaac ggcttgacaa ttgagaagcg ctga 1254

<210> 2

<211> 417

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Met Asp Leu Val Glu Ala Glu Ala Glu Glu Gln Pro Pro Asp Glu Asp

1 5 10 15

Gly Asp Glu Glu Gly Tyr Val Glu Ala Asp Pro Ala Gly Arg Phe Ile

20 25 30

Arg Tyr Asp Glu Ile Val Gly Ser Gly Ala Val Lys Thr Val Tyr Lys

35 40 45

Ala Phe Asp Lys Leu Glu Gly Val Glu Val Ala Trp Ser Gln Ser Arg

50 55 60

Ile Asp Asp Ser Val Met Gly Ser Ser Lys Lys Met Lys Gln Leu Asn

65 70 75 80

Thr Glu Ile Gln Leu Leu Lys Thr Leu Lys His Lys Asn Ile Glu Lys

85 90 95

Met Phe Ala Ser Trp Val Asp Gly Glu Lys Lys Thr Val Asn Ile Ile

100 105 110

Thr Glu Leu Phe Thr Ser Gly Ser Leu Thr Gln Tyr Arg Arg Lys His

115 120 125

Lys Lys Val Asn Met Lys Ala Met Lys Arg Trp Ala Ile Gln Ile Leu

130 135 140

Thr Gly Leu Glu Tyr Leu His Ser Gln Lys Pro Ala Ile Ile His Arg

145 150 155 160

Asp Leu Lys Cys Asp Asn Ile Phe Ile Asn Gly Asn His Gly Lys Val

165 170 175

Lys Ile Gly Asp Phe Gly Leu Ala Thr Phe Met Gln Gln Gln Lys Lys

180 185 190

Ser Ile Lys Gly Thr Leu Glu Phe Met Ala Pro Glu Leu Leu Thr Gly

195 200 205

His Tyr Asn Glu Leu Val Asp Ile Tyr Ser Phe Gly Met Cys Met Leu

210 215 220

Glu Met Val Thr Cys Glu Tyr Pro Tyr Ser Glu Cys Gln Gly Met Ala

225 230 235 240

His Ile Phe Lys Lys Ile Asp Glu Gly Lys Lys Pro Ala Ala Phe Tyr

245 250 255

Lys Ile Lys Asp Ala Glu Val Arg Ser Phe Ile Glu Asn Cys Leu Ala

260 265 270

Pro Val Glu Asn Arg Met Ser Ala Thr Glu Leu Leu Lys Ser Ser Phe

275 280 285

Leu Gln Asp Asp Asp Leu Ile Ser Val Ser Leu Val Lys Asn Met Ser

290 295 300

Glu Asp Gly Gln Gln Pro Val Ser Cys Met Leu Arg Lys Gly Glu Phe

305 310 315 320

Leu Leu Thr Gly Asn Val Asp Val Ala Ser His Val Asp Leu Trp Leu

325 330 335

Arg Phe Pro Asp Pro Ser Gly Cys Phe Lys Ser Val Glu Phe Pro Phe

340 345 350

Asn Leu Thr Glu Asp Thr Ser Leu Ser Val Ala Val Glu Met Val Glu

355 360 365

Gln Phe Gly Leu Thr Gln Asp Ser Arg Pro Ile Ile Ala Gln Leu Ile

370 375 380

Asp Ala Phe Leu Val Ile Leu Ile Pro Glu Trp Thr Pro Cys Val Ala

385 390 395 400

Ile Arg Gln Val Val Ser Glu Gly Ala Asn Gly Leu Thr Ile Glu Lys

405 410 415

Arg

Claims

1.基因OsWNK9在促进水稻茎秆镉富集中的应用，所述基因OsWNK9的核苷酸序列如SEQID NO.1所示。

2.基因OsWNK9在水稻糙米低镉品种培育中的应用，其特征在于，所述基因OsWNK9的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。