CN114395514B - 一株嗜酸乳杆菌、菌剂及其应用 - Google Patents

一株嗜酸乳杆菌、菌剂及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114395514B
CN114395514B CN202210183963.4A CN202210183963A CN114395514B CN 114395514 B CN114395514 B CN 114395514B CN 202210183963 A CN202210183963 A CN 202210183963A CN 114395514 B CN114395514 B CN 114395514B
Authority
CN
China
Prior art keywords
lactobacillus acidophilus
enhancing
macrophages
infection
product
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202210183963.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114395514A (zh
Inventor
姜琳琳
张兴晓
赵尘培
陈国忠
张建龙
于馨
朱洪伟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ludong University
Original Assignee
Ludong University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ludong University filed Critical Ludong University
Priority to CN202210183963.4A priority Critical patent/CN114395514B/zh
Publication of CN114395514A publication Critical patent/CN114395514A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114395514B publication Critical patent/CN114395514B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明提供了一株嗜酸乳杆菌、菌剂及其应用，属于微生态制剂技术领域。嗜酸乳杆菌YB‑02，拉丁文名称为Lactobacillusacidophilus，保藏编号为CGMCCNO.22206。本发明的嗜酸乳杆菌能够针对微生物感染早期，发挥免疫激活功能，使其具有较强的杀菌活性以及免疫调节功能。本发明的嗜酸乳杆菌YB‑02能够促进M1型巨噬细胞的极化，升高促炎细胞因子的表达，增强对微生物的杀伤活性，以增强抗感染的能力。

Description

一株嗜酸乳杆菌、菌剂及其应用
技术领域
本发明属于微生态制剂技术领域，具体涉及一株嗜酸乳杆菌、菌剂及其应用。
背景技术
乳杆菌是肠道中的一种重要菌群，具有调节肠道菌群、增强免疫力、改善肠道功能、促进消化等作用。嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)是乳杆菌属重要成员，革兰氏阳性菌。嗜酸乳杆菌在营养、免疫以及治疗预防等方面发挥重要的作用。许多研究发现，嗜酸乳杆菌的免疫作用可以通过调节宿主的免疫系统、抑制病原体在肠道的定植以及调节代谢等，进而影响宿主的健康。
巨噬细胞分为M1型和M2型巨噬细胞，在非特异性免疫和特异性免疫过程中发挥重要作用。其中微生物早期感染后，巨噬细胞被激活极化成M1型，并产生大量的促炎介质，包括TNF-α、IL-1β和一氧化氮(NO)，具有较强的杀菌作用。研究证明，乳杆菌可以显著增强巨噬细胞吞噬活性和提高NO分泌水平，表明对免疫细胞的激活及细胞因子的分泌都具有免疫增强作用。例如，粪肠球菌能够诱导巨噬细胞的iNOS酶表达水平升高且Arg-1表达降低，这表明，粪肠球菌可诱导巨噬细胞M1型极化。因此，在微生物感染时炎症发生的早期，乳酸菌可以促进巨噬细胞分泌大量促炎因子可以杀伤胞内的病原菌。
嗜酸乳杆菌在调节肠道免疫系统，增强机体免疫功能方面具有重要作用。但是，目前缺乏一株在细菌感染早期发挥免疫调节功能的嗜酸乳杆菌。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一株嗜酸乳杆菌、菌剂及其应用，本发明的嗜酸乳杆菌能够针对微生物感染早期，发挥免疫激活功能，使其具有较强的杀菌活性以及免疫调节功能。
本发明提供了一株嗜酸乳杆菌YB-02，拉丁文名称为Lactobacillusacidophilus，保藏编号为CGMCC NO.22206。
本发明还提供了一种包含上述方案所述嗜酸乳杆菌YB-02的菌剂。
本发明还提供了一种增强免疫调节功能的产品，包括上述方案所述的嗜酸乳杆菌YB-02或所述的菌剂。
本发明还提供了上述方案所述的嗜酸乳杆菌YB-02或所述的菌剂在制备增强免疫调节功能的产品中的应用。
优选的，所述增强免疫调节功能包括以下1)～5)方面的一种或几种：
1)增加动物脾脏中巨噬细胞的数量；
2)增加M1型巨噬细胞的比例；
3)增强巨噬细胞中ROS的水平；
4)增强M1型巨噬细胞的极化；
5)增强促炎性细胞因子的表达。
优选的，所述免疫调节功能包括抗微生物感染的免疫调节功能。
优选的，所述抗微生物感染包括抗微生物早期感染。
优选的，所述M1型巨噬细胞的极化的表面标志物包括F4/80+CD86+。
优选的，所述促炎性细胞因子包括白细胞介素1β和IL-12。
优选的，所述产品包括药品，所述药品的剂型包括口服剂型。
本发明提供了一株嗜酸乳杆菌YB-02，拉丁文名称为Lactobacillusacidophilus，保藏编号为CGMCC NO.22206。本发明的嗜酸乳杆菌能够针对微生物感染早期，发挥免疫激活功能，使其具有较强的杀菌活性以及免疫调节功能。本发明的嗜酸乳杆菌YB-02能够促进M1型巨噬细胞的极化，升高促炎细胞因子的表达，增强对微生物的杀伤活性，以增强抗感染的能力。此外，嗜酸乳杆菌YB-02，分离自发酵乳制品中，具有较安全的来源。嗜酸乳杆菌YB-02具有较强的抑菌活性，可以抑制条件性致病菌金黄色葡萄球菌，维持肠道健康微生态。
附图说明
图1为本发明专利嗜酸乳杆菌YB-02革兰氏染色光学显微镜照片示意图；
图2为本发明专利嗜酸乳杆菌YB-02的16S rDNA琼脂糖电泳图；
图3为本发明专利流式细胞术分析嗜酸乳杆菌YB-02对小鼠巨噬细胞极化的影响示意图；
图4为本发明专利嗜酸乳杆菌YB-02对促炎症细胞因子表达的影响示意图；
图5为本发明专利嗜酸乳杆菌YB-02发酵液对金黄色葡萄球菌的抑菌活性示意图。
生物保藏说明
嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)YB-02，已于2021年4月19日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No:22206。
具体实施方式
本发明提供了一株嗜酸乳杆菌YB-02，拉丁文名称为Lactobacillusacidophilus，保藏编号为CGMCC NO.22206。
在本发明中，嗜酸乳杆菌YB-02，分离自发酵乳制品，在含有碳酸钙的MRS平板划线纯化，经生理生化及16S rDNA基因鉴定，鉴定为嗜酸乳杆菌。嗜酸乳杆菌YB-02具有如下生物学特性：革兰氏染色阳性菌，产酸能力较强，具有较强的耐酸、耐碱、耐热性能，发酵液对金黄色葡萄球菌具有明显的抑菌活性。
在本发明中，菌株的16S rDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。经过BLAST基因比对，与Genebank中的与嗜酸乳杆菌JCM 1132的同源性达99％。
在本发明中，嗜酸乳杆菌YB-02，分离自发酵乳制品中，具有较安全的来源。嗜酸乳杆菌YB-02的发酵液具有较强的抑菌活性，可以抑制条件性致病菌金黄色葡萄球菌，维持肠道健康微生态。嗜酸乳杆菌YB-02能够用于制备免疫调节剂，嗜酸乳杆菌YB-02能够增强M1型巨噬细胞的活化，激活巨噬细胞M1的极化，增加促炎性细胞因子IL-1β和IL-12以及ROS的表达水平，增强抗菌活性，发挥免疫调节的功能，调控早期的炎症反应。
本发明还提供了一种包含上述方案所述嗜酸乳杆菌YB-02的菌剂。
在本发明中，所述菌剂中嗜酸乳杆菌YB-02的浓度优选的≥106CFU/g或≥106CFU/mL。
在本发明中，所述菌剂优选的采用以下方法制备得到：将嗜酸乳杆菌YB-02接种于MRS培养基，进行培养，得到菌剂。本发明对培养的温度和时间没有特殊限制，采用本领域的常规温度和时间设置即可。
本发明还提供了一种增强免疫调节功能的产品，包括上述方案所述的嗜酸乳杆菌YB-02或所述的菌剂。
本发明提供了上述方案所述的嗜酸乳杆菌YB-02或所述的菌剂在制备增强免疫调节功能的产品中的应用。
在本发明中，所述增强免疫调节功能优选的包括以下1)～5)方面的一种或几种：
1)增加动物脾脏中巨噬细胞的数量；
2)增加M1型巨噬细胞的比例；
3)增强巨噬细胞中ROS的水平；
4)增强M1型巨噬细胞的极化；
5)增强促炎性细胞因子的表达。
在本发明中，所述免疫调节功能优选的包括抗微生物感染的免疫调节功能。
在本发明中，所述抗微生物感染优选的包括抗微生物早期感染。
在本发明中，M1型巨噬细胞的极化的表面标志物优选的包括F4/80+CD86+。
在本发明中，所述促炎性细胞因子优选的包括白细胞介素1β和IL-12。
在本发明中，所述产品优选的包括免疫调节剂、保健品、药品或食品。
在本发明中，所述免疫调节剂或药品的剂型优选的包括口服剂型；所述口服剂型优选的包括胶囊剂、片剂或者粉剂。
在本发明中，所述嗜酸乳杆菌YB-02的使用浓度优选的≥106CFU/g或≥106CFU/mL。
在本发明中，所述产品的使用方法包括口服；所述产品的口服次数优选为2～3次，每次的口服剂量优选为106CFU/次/d。
在本发明中，通过口服所述产品能够增强机体免疫力。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。本发明实施例中试验方法和条件如无特别说明，均为常规方法。这些实施例仅用于说明本发明，本发明的保护范围不受这些实施例的限制。本发明所述技术方案，如未特别说明，均为本领域的常规方案；所述的试剂耗材，如未特别说明，均来源于商业渠道。
实施例1：嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)YB-02的分离、纯化与鉴定
1.嗜酸乳杆菌菌株分离纯化
取内蒙古地区传统发酵乳制品，加入5mL的PBS溶液进行稀释，用PBS进行10倍梯度稀释至10-5，每个样品取100μL涂布于含CaCO3的MRS固体平板上，置于厌氧罐中，放在37℃恒温培养箱中培养48h。挑取平板上单菌落，Z字型划线进行菌株纯化。挑取阳性单菌落进行革兰氏染色鉴定。该菌株革兰氏染色阳性，油镜下均呈紫色短杆状。菌体革兰氏染色特性见图1。
利用梅里埃全自动微生物鉴定系统分析，可以得到具体生化反应为：乙醇脱氢酶1阴性、β-半乳糖苷酶阳性、α-葡萄糖苷酶阴性、α-半乳糖苷酶阴性、D-半乳糖阳性、乳酸阳性、N-乙酰-β-D葡萄糖甘酶阳性、新生霉素耐受阳性、D-甘露醇阴性、D-甘露糖阳性、蔗糖阳性等。结果最终显示有99％的可能性为嗜酸乳杆菌，可初步确定为一株嗜酸乳杆菌。
2.嗜酸乳杆菌菌株16S rDNA测序鉴定
挑取的阳性菌株在MRS液体培养基中进行扩增。利用生工细菌基因组试剂盒进行乳酸菌DNA的提取。利用16S通用引物(27F和1492R，引物序列为27F：5’-agagtttgatcctggctcag-3’，如SEQ ID NO.1所示；1492R:5’-ggttaccttgttacgactt-3’，如SEQ ID NO.2所示)对菌株16S rDNA进行PCR扩增，并进行琼脂糖凝胶电泳进行鉴定(图2)，胶回收产物送至华大基因有限公司进行测序，菌株的16S rDNA的核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示，具体为：
cggctttgggcattgcagactcccatggtgtgacgggcggtgtgtacaaggcccgggaacgtattcaccgcggcgtgctgatccgcgattactagcgattccagcttcgtgcagtcgagttgcagactgcagtccgaactgagaacagctttaagagattcgcttgccttcgcaggcttgctcctcgttgtactgtccattgtagcacgtgtgtagcccaggtcataaggggcatgatgacttgacgtcatccccaccttcctccggtttgtcaccggcagtctcattagagtgcccaacttaatgctggcaactaatgacaagggttgcgctcgttgcgggacttaacccaacatctcacgacacgagctgacgacagccatgcaccacctgtcttagtgtccccgaagggaactccgtatctctacggattgcactagatgtcaagacctggtaaggttcttcgcgttgcttcgaattaaaccacatgctccaccgcttgtgcgggcccccgtcaattcctttgagtttcaaccttgcggtcgtactccccaggcggagtgcttaatgcgttagctgcagcactgagaggcggaaacctcccaacacttagcactcatcgtttacggcatggactaccagggtatctaatcctgttcgctacccatgctttcgagcctcagcgtcagttgcagaccagagagccgccttcgccactggtgttcttccatatatctacgcattccaccgctacacatggagttccactctcctcttctgcactcaagaaaaacagtttccgatgcagttcctcggttaagccgagggctttcacatcagacttattcttccgcctgcgctcgctttacgcccaataaatccggacaacgcttgccacctacgtattaccgcggctgctggcacgtagttagccgtgactttctggttgattaccgtcaaataaaggccagttactacctctatccttcttcaccaacaacagagctttacgatccgaaaaccttcttcactcacgcggcgttgctccatcagactttcgtccattgtggaagattccctactgctgcctcccgtaggagtttgggccgtgtctcagtcccaatgtggccgatcagtctctcaactcggctatgcatcattgccttggtaggccgttaccctaccaactagctaatgcaccgcggggccatcccatagcgacagcttacgccgccttttataagctgatcatgcgatctgctttcttatccggtattagcacctgtttccaagtggtatcccagactatggggcaggttccccacgtgttactcacccatccgccgctcgcgttcccaacgtcatcaccgaagtgaatctg。
经过BLAST基因比对，与Genebank中的与嗜酸乳杆菌JCM 1132的同源性达99％，为一株嗜酸乳杆菌，命名为嗜酸乳杆菌YB-02。
实施例2：嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)YB-02的产酸能力以及耐受性能评价
1.嗜酸乳杆菌菌株的产酸能力评价
将活菌接种于MRS液体培养基，放入37℃恒温培养箱中进行厌氧培养。分别于培养24h、48h、72h后，取5mL菌液，5000r/min离心10min。吸取上清液，并利用pH计测量pH值的测定。结果表明，对照MRS液体培养基pH值为6.8，在培养24h嗜酸乳杆菌YB-02上清液pH值为4.9，并且pH随培养时间而逐步降低，这表明嗜酸乳杆菌具有较强的产酸能力(表1)。
表1嗜酸乳杆菌具有较强的产酸能力
2.嗜酸乳杆菌菌株的耐酸能力评价
将活菌接种于MRS液体培养基中，放入37℃培养箱中厌氧培养18h。配制无菌的1mol/L的盐酸溶液，调整MRS液体培养基的pH值分别为2.5。按照2％比例将菌液接入pH为2.5的MRS液体培养基中，置于37℃中进行厌氧培养。在培养3h时候，分别进行浓度梯度稀释，稀释数次使浓度稀释至10-5，取150μL涂布于MRS固体平板上，放入培养箱中37℃厌氧培养24h后计数菌落，根据公式，记录结果并计算两株菌株在酸性条件下的存活率。存活率＝细菌培养3小时菌落数/细菌培养0小时菌落数×100％。
分离所得嗜酸乳杆菌YB-02在pH值为2.5的MRS培养基中培养三小时后仍具有很高的存活率，达到93.4％(表2)。由此可见，嗜酸乳杆菌YB-02具有较强的耐酸能力，可耐受胃酸的环境。
表2嗜酸乳杆菌耐酸活性实验
3.嗜酸乳杆菌菌株的耐胆盐能力评价
将活菌接种于MRS液体培养基中，放入37℃培养箱中厌氧培养18h。配制无菌的胆盐浓度为0.3％的MRS液体培养基。按照2％比例将菌液接入含胆盐的MRS液体培养基中，置于37℃中进行厌氧培养。在培养3h时候，分别进行浓度梯度稀释，稀释数次使浓度稀释至10-5，取150μL涂布于MRS固体平板上，放入培养箱中37℃厌氧培养24h后计数菌落，根据公式，记录结果并计算两株菌株在酸性条件下的存活率。存活率＝细菌培养3小时菌落数/细菌培养0小时菌落数×100％。
分离所得嗜酸乳杆菌YB-02在胆盐含量为0.3％的条件下存活率高达95.9％(表3)，说明嗜酸乳杆菌YB-02具有较强的耐胆盐性能，能够适应肠道中的环境。
表3嗜酸乳杆菌耐胆盐活性实验
4.嗜酸乳杆菌菌株的耐热性能评价
将活菌接种于MRS液体培养基中，放入37℃培养箱中厌氧培养24h。分别在37℃、65℃、75℃的MRS液体培养基中，分别处理1min、2min、5min。处理完成后对菌液进行十倍浓度的梯度稀释至10-4，取150μL涂布于MRS固体平板上，放入恒温培养箱中37℃厌氧培养24h后，进行平板菌落计数。
分离所得嗜酸乳杆菌YB-02在37℃下，其活菌数随时间作用逐渐增多。而在65℃和75℃处理下，其活菌数随时间作用减少，但仍有一定的存活率(表4)。由此可见，嗜酸乳杆菌YB-02耐热性较好。
表4嗜酸乳杆菌耐热性实验
实施例3：嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)YB-02对小鼠巨噬细胞极化的影响
使用含10％胎牛血清的DMEM培养基将小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7细胞在37℃、5％CO2的培养箱中培养至对数生长期。将对数生长期的细胞按3×106cell/mL接种于6孔板中，每孔接种2mL，过夜培养待细胞贴壁。收集对数生长期的嗜酸乳杆菌YB-02，DMEM培养基重悬菌体，将菌液按照MOI＝100:1的比例接种于6孔板，阳性对照组加入2μg/mL的LPS，37℃、5％CO2孵育12h。收集细胞，胞外染色孵育FITC标记的F4/80抗体和PE标记的CD86抗体，抗体孵育1h后，PBS清洗三次。最后细胞重悬于500μLPBS溶液中，30min内使用流式细胞仪进行检测。结果表明，嗜酸乳杆菌YB-02可以明显促进M1型巨噬细胞表面CD86分子的表达(图3)。
实施例4：嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)YB-02对促炎症细胞因子表达的影响
使用含10％胎牛血清的DMEM培养基将小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7细胞在37℃、5％CO2的培养箱中培养至对数生长期。将对数生长期的细胞按3×106cell/mL接种于6孔板中，每孔接种2mL，过夜培养待细胞贴壁。收集对数生长期的嗜酸乳杆菌YB-02，DMEM培养基重悬菌体，将菌液按照MOI＝100:1的比例接种于6孔板中，37℃、5％CO2孵育12h。收集细胞上清，ELISA试剂盒进行细胞因子的检测。结果显示，嗜酸乳杆菌YB-02可以明显促进炎性因子IL-1β和IL-12的表达(图4)。
实施例5：嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)YB-02发酵液对金黄色葡萄球菌的抑菌活性的影响
将对数生长期的嗜酸乳杆菌YB-02，3500rpm，离心10min，得到发酵上清液。将发酵上清液分别如下处理，一组调节pH值为7；一组加入蛋白酶K，37℃水浴2h；一组煮沸5min。用无菌棉签将金黄色葡萄球菌菌液液均匀的涂到LB平板上，正置待菌液吸收；将灭菌好的牛津杯以合适的深度插入LB平板中，均匀放置四个，每个牛津杯中分别加入200μL不同处理组的发酵液；放于37℃培养箱中正置培养24h，游标卡尺测量抑菌圈直径并观察其抑菌效果。
结果显示发酵上清液原液抑菌效果比中性发酵上清液抑菌效果好，煮沸的发酵上清液比经蛋白酶K处理的抑菌效果好。表明酸性物质是抑制金黄色葡萄球菌的主要物质，同时煮沸抑菌活性有所提高表明发酵上清液具有热稳定性(图5)。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
序列表
<110> 鲁东大学
<120> 一株嗜酸乳杆菌、菌剂及其应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
agagtttgat cctggctcag 20
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ggttaccttg ttacgactt 19
<210> 3
<211> 1381
<212> DNA
<213> 嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)
<400> 3
cggctttggg cattgcagac tcccatggtg tgacgggcgg tgtgtacaag gcccgggaac 60
gtattcaccg cggcgtgctg atccgcgatt actagcgatt ccagcttcgt gcagtcgagt 120
tgcagactgc agtccgaact gagaacagct ttaagagatt cgcttgcctt cgcaggcttg 180
ctcctcgttg tactgtccat tgtagcacgt gtgtagccca ggtcataagg ggcatgatga 240
cttgacgtca tccccacctt cctccggttt gtcaccggca gtctcattag agtgcccaac 300
ttaatgctgg caactaatga caagggttgc gctcgttgcg ggacttaacc caacatctca 360
cgacacgagc tgacgacagc catgcaccac ctgtcttagt gtccccgaag ggaactccgt 420
atctctacgg attgcactag atgtcaagac ctggtaaggt tcttcgcgtt gcttcgaatt 480
aaaccacatg ctccaccgct tgtgcgggcc cccgtcaatt cctttgagtt tcaaccttgc 540
ggtcgtactc cccaggcgga gtgcttaatg cgttagctgc agcactgaga ggcggaaacc 600
tcccaacact tagcactcat cgtttacggc atggactacc agggtatcta atcctgttcg 660
ctacccatgc tttcgagcct cagcgtcagt tgcagaccag agagccgcct tcgccactgg 720
tgttcttcca tatatctacg cattccaccg ctacacatgg agttccactc tcctcttctg 780
cactcaagaa aaacagtttc cgatgcagtt cctcggttaa gccgagggct ttcacatcag 840
acttattctt ccgcctgcgc tcgctttacg cccaataaat ccggacaacg cttgccacct 900
acgtattacc gcggctgctg gcacgtagtt agccgtgact ttctggttga ttaccgtcaa 960
ataaaggcca gttactacct ctatccttct tcaccaacaa cagagcttta cgatccgaaa 1020
accttcttca ctcacgcggc gttgctccat cagactttcg tccattgtgg aagattccct 1080
actgctgcct cccgtaggag tttgggccgt gtctcagtcc caatgtggcc gatcagtctc 1140
tcaactcggc tatgcatcat tgccttggta ggccgttacc ctaccaacta gctaatgcac 1200
cgcggggcca tcccatagcg acagcttacg ccgcctttta taagctgatc atgcgatctg 1260
ctttcttatc cggtattagc acctgtttcc aagtggtatc ccagactatg gggcaggttc 1320
cccacgtgtt actcacccat ccgccgctcg cgttcccaac gtcatcaccg aagtgaatct 1380
g 1381

Claims (10)

1.一株嗜酸乳杆菌YB-02，拉丁文名称为Lactobacillus acidophilus，保藏编号为CGMCC NO.22206。
2.一种包含权利要求1所述嗜酸乳杆菌YB-02的菌剂。
3.一种增强免疫调节功能的产品，包括权利要求1所述的嗜酸乳杆菌YB-02或权利要求2所述的菌剂。
4.权利要求1所述的嗜酸乳杆菌YB-02或权利要求2所述的菌剂在制备增强免疫调节功能的产品中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述增强免疫调节功能包括以下1)～5)方面的一种或几种：
1)增加动物脾脏中巨噬细胞的数量；
2)增加M1型巨噬细胞的比例；
3)增强巨噬细胞中ROS的水平；
4)增强M1型巨噬细胞的极化；
5)增强促炎性细胞因子的表达。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述免疫调节功能包括抗微生物感染的免疫调节功能。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述抗微生物感染包括抗微生物早期感染。
8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述M1型巨噬细胞的极化的表面标志物包括F4/80+CD86+。
9.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述促炎性细胞因子包括白细胞介素1β和IL-12。
10.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述产品包括药品，所述药品的剂型包括口服剂型。
CN202210183963.4A 2022-02-28 2022-02-28 一株嗜酸乳杆菌、菌剂及其应用 Active CN114395514B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210183963.4A CN114395514B (zh) 2022-02-28 2022-02-28 一株嗜酸乳杆菌、菌剂及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210183963.4A CN114395514B (zh) 2022-02-28 2022-02-28 一株嗜酸乳杆菌、菌剂及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114395514A CN114395514A (zh) 2022-04-26
CN114395514B true CN114395514B (zh) 2023-09-01

Family

ID=81234406

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210183963.4A Active CN114395514B (zh) 2022-02-28 2022-02-28 一株嗜酸乳杆菌、菌剂及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114395514B (zh)

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2004277381A (ja) * 2003-03-18 2004-10-07 Japan Research & Development Association For New Functional Foods 免疫機能調節剤および免疫機能調節食品
CN1940060A (zh) * 2005-09-28 2007-04-04 曾浩洋 新颖嗜乳酸菌及其应用
CN103314099A (zh) * 2010-07-30 2013-09-18 株式会社明治 具有代谢综合症改善效果的乳酸菌
CN106011006A (zh) * 2016-06-01 2016-10-12 河北然生物科技有限公司 一株具有免疫调节及抗过敏功能的嗜酸乳杆菌La28及其应用
CN107438666A (zh) * 2015-02-04 2017-12-05 奥瑞丽斯有限公司 重组益生菌
CN112300255A (zh) * 2020-10-10 2021-02-02 内蒙古普泽生物制品有限责任公司 一种嗜酸乳杆菌s-层蛋白对肠道细胞黏附及对巨噬细胞增殖的应用
CN113088463A (zh) * 2021-03-17 2021-07-09 武汉微康益生菌研究院有限公司 一种具有益生特性的嗜酸乳杆菌及其应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007049917A1 (en) * 2005-10-26 2007-05-03 Korea Institute Of Oriental Medicine The composition comprising extract of cinnamomum cassia bark for improving normal flora and enhancing immune response

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2004277381A (ja) * 2003-03-18 2004-10-07 Japan Research & Development Association For New Functional Foods 免疫機能調節剤および免疫機能調節食品
CN1940060A (zh) * 2005-09-28 2007-04-04 曾浩洋 新颖嗜乳酸菌及其应用
CN103314099A (zh) * 2010-07-30 2013-09-18 株式会社明治 具有代谢综合症改善效果的乳酸菌
CN107438666A (zh) * 2015-02-04 2017-12-05 奥瑞丽斯有限公司 重组益生菌
CN106011006A (zh) * 2016-06-01 2016-10-12 河北然生物科技有限公司 一株具有免疫调节及抗过敏功能的嗜酸乳杆菌La28及其应用
CN112300255A (zh) * 2020-10-10 2021-02-02 内蒙古普泽生物制品有限责任公司 一种嗜酸乳杆菌s-层蛋白对肠道细胞黏附及对巨噬细胞增殖的应用
CN113088463A (zh) * 2021-03-17 2021-07-09 武汉微康益生菌研究院有限公司 一种具有益生特性的嗜酸乳杆菌及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Da Hye Kim 等.Lactobacillus acidophilus suppresses intestinal inflammation by inhibiting endoplasmic reticulum stress.J Gastroenterol Hepatol.2018,第34卷(第1期),全文. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN114395514A (zh) 2022-04-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109679882B (zh) 一株屎肠球菌dt1-1及其应用
US20240091283A1 (en) Application of Lactobacillus Paracasei ET-22 In Improving Intestinal Bacterial Infection Resistance and Intestinal Immunity
CN110157645B (zh) 一种唾液乳杆菌y4及其应用
CN110564638A (zh) 一株具有益生特性的罗伊氏乳杆菌及其用途
CN110495522B (zh) 一种饲料用中药微生态制剂
CN112852679A (zh) 一株益生凝结芽孢杆菌及其应用
CN112812999B (zh) 一株对阴沟肠杆菌具有抑制作用的植物乳杆菌slb01及其衍生产品和应用
CN109666601B (zh) 一株具有抑菌特性的植物乳杆菌及其在腹泻预防中的应用
CN113736683A (zh) 一株抑制幽门螺杆菌的嗜热链球菌及其应用
CN113249244B (zh) 一种拮抗咽炎致病菌乙型溶血性链球菌的副干酪乳杆菌
CN113980853A (zh) 一株高产乳酸的格氏乳球菌wbt0008及其应用
CN117327626A (zh) 一种植物乳杆菌ts1及其培养方法与应用
CN114806953B (zh) 一种具有改善1型糖尿病特性的格氏乳杆菌
CN114395514B (zh) 一株嗜酸乳杆菌、菌剂及其应用
CN113717887B (zh) 一种鹅源植物乳杆菌及其应用
CN113061550B (zh) 一株乳杆菌新菌株z6及其在食品中的应用
CN112063566B (zh) 一株屎肠球菌及其应用
CN113508907A (zh) 一株耐热型发酵乳杆菌在制备促排便食品或药品中的应用
CN111154677B (zh) 嗜酸乳杆菌及其应用
CN117143770B (zh) 一株凝结魏茨曼氏菌glm336及其应用
CN117223790B (zh) 一种生物发酵饲料及其液固双相发酵方法
CN114540236B (zh) 一株发酵乳杆菌及其应用
CN116019842B (zh) 嗜酸乳杆菌la85的抑菌新用途及其在制备缓解eiec腹泻的药物方面的用途
CN116622568A (zh) 一株哈尔滨乳杆菌p1-1及其应用
CN106967630B (zh) 一种发酵乳杆菌及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant