CN114383911B - 甘氨脱氧胆酸用于制备诊断心力衰竭的试剂盒的用途 - Google Patents
甘氨脱氧胆酸用于制备诊断心力衰竭的试剂盒的用途 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了甘氨脱氧胆酸用于制备诊断心力衰竭的试剂盒的用途。本发明发现，甘氨脱氧胆酸在心力衰竭患者和健康受试者血清中的含量存在显著差异，以甘氨脱氧胆酸为标志物可以有效诊断区分心力衰竭患者和健康受试者。因此，甘氨脱氧胆酸具有开发成诊断心力衰竭的血清检测试剂盒的前景。
Description
技术领域
本发明属于生物化学领域，涉及甘氨脱氧胆酸用于制备诊断心力衰竭的试剂盒的用途。
背景技术
心力衰竭(heart failure，HF)，简称心衰，是指由于心脏的收缩功能和(或)舒张功能发生障碍，不能将静脉回心血量充分排出心脏，导致静脉系统血液淤积，动脉系统血液灌注不足，从而引起心脏循环障碍症候群，此种障碍症候群集中表现为肺淤血、腔静脉淤血。患者主要表现为呼吸困难、活动受限、体液潴留等症状。
在实际的临床实践中，被广泛用于HF诊断或疾病活动性的少数标志物仍然局限于抗核抗体、补体、几种自身抗体。
更多的诊断标志物有待开发。近年来“组学”领域的生物标志物作为辅助手段用于预先、准确、灵敏地判断出疾病发生情况，取得了较好的效果。生物标志物诊断可以区分疾病的类型以及疾病所处的阶段，辅助临床治疗。而且以血清标志物为例，该方法具有简便、快速、经济且相对无创的优点而被广泛采用，对患者非常友好。
发明内容
本发明的目的在于提供甘氨脱氧胆酸用于制备诊断心力衰竭的试剂盒的用途。
本发明上述目的通过如下技术方案实现：
甘氨脱氧胆酸用于制备诊断心力衰竭的血清检测试剂盒的用途。
进一步地，所述血清检测试剂盒中含有检测血清中甘氨脱氧胆酸含量的试剂。
有益效果：
本发明发现，甘氨脱氧胆酸在心力衰竭患者和健康受试者血清中的含量存在显著差异，以甘氨脱氧胆酸为标志物可以有效诊断区分心力衰竭患者和健康受试者。因此，甘氨脱氧胆酸具有开发成诊断心力衰竭的血清检测试剂盒的前景。
附图说明
图1为健康受试者(HCs)和心力衰竭患者(HF)血清中甘氨脱氧胆酸相对含量比较；
图2为训练集中甘氨脱氧胆酸区分心力衰竭患者和健康受试者的ROC曲线。
具体实施方式
下面结合实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。
实施例1：甘氨脱氧胆酸对心力衰竭的诊断效能
一、实验样本和试剂
收集江苏省中医院35例健康受试者和83例心力衰竭患者。健康受试者为体检健康的正常人，心力衰竭患者根据美国纽约心脏病学会心力衰竭分类标准纳入。各组患者的年龄、性别和体重指数匹配，无显著性差异。
按表1将各组受试者或患者随机分为训练集样本和验证集样本。
表1训练集样本和验证集样本样本数量
排除标准：①合并有其他心脏疾病；②合并有心脑血管、肝、肾脏和造血系统等严重原发性疾病；③患有精神疾病不能合作者；④近1个月内参加其它临床试验者；⑤不愿接受本研究者。
主要实验试剂：乙腈、甲醇、水。
二、实验方法
1、血清样本的采集及储存
采集健康受试者和心力衰竭患者清晨空腹外周血并将其置于不含抗凝剂的试管内，在室温下自然凝集30-60min，待血液凝固，以2000rpm速度离心10min，小心吸取上层清亮血清液体于无菌冻干管中，标记后放入4℃冰箱储存备用。
2、HPLC-MS技术测定血清中甘氨脱氧胆酸的相对含量
检测仪器：TripleTOFTM 5600+高分辨质谱仪、ExionLCTM高效液相色谱系统(美国AB SCIEX公司)，色谱柱Phenomenex Kinetex 2.6μm C18100A(2.1×100mm)，美国Phenomenex公司，医用离心机(北京白洋医疗器械有限公司)，100μL、1000μL移液枪(德国Eppendorf公司)，1.5mL离心管(江苏康捷医疗器械有限公司)，震荡涡旋仪(德国IKA公司)，冷冻高速离心机(赛默飞世尔科技有限公司)，KH3200V型超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)，纯水仪(Milli-Q，美国Merck Millipore公司)。
样本处理：每个样品取100μL血浆与400μL乙腈：甲醇(1：1)混合，然后将每个样品涡旋30秒后放在冰浴中超声10min，然后在-20℃冰箱中放置1h，放入低温(4℃)离心机中高速(12000rpm)离心15min。取上清液置于真空冷冻干燥机中挥干，加入100μL乙腈：水(1：1)复溶后涡旋30秒，放在冰浴中超声5min，然后放入低温(4℃)离心机中高速(12000rpm)离心15min。取各样本上清液10μL混合于一管中，作为QC样本，剩余样本分装备用，两管用于两种柱子模式进样(40μL/管)，4℃冰箱保存转移待进样。
以各样本中甘氨脱氧胆酸的检测峰面积表示其中甘氨脱氧胆酸的相对含量。
3、数据处理方法
训练集中，运用Logistic回归建立甘氨脱氧胆酸相对含量的回归方程，产生新变量logit[P]，对该新变量进行ROC曲线分析，并根据ROC曲线得到最佳cut-off值；验证集中，根据SPSS 25.0软件给出的预测概率计算甘氨脱氧胆酸的诊断准确率。
三、实验结果
1、甘氨脱氧胆酸在健康受试者和心力衰竭患者血清中相对含量的差异
训练集中，甘氨脱氧胆酸在健康受试者和心力衰竭患者血清中的相对含量存在明显差异，如图1所示。
2、甘氨脱氧胆酸对健康受试者和心力衰竭患者的诊断区分效能
2.1训练集构建二元逻辑回归方程
在训练集中，以各样本中甘氨脱氧胆酸相对含量为自变量，以组别(健康受试者、心力衰竭)为应变量，构建得到二元逻辑回归方程logit[p]＝8.528X1+9.175，其中：X1为甘氨脱氧胆酸的相对含量。
2.2训练集确定最佳鉴别阈值
在训练集中，将各样本中甘氨脱氧胆酸的相对含量代入上述二元逻辑回归方程，即可得到训练集中各个样本的回归值logit[p]，以可能的回归值作为诊断点，计算灵敏度和特异性，据此绘制ROC曲线(如图2所示)，AUC可达0.9853，具有较高的准确性。根据ROC曲线计算Youden指数，Youden指数最大值时对应的logit[p]值为能进行诊断区分健康受试者和心力衰竭的最佳cut-off值0.57。
2.3验证集验证诊断准确率
在验证集中，将各样本中甘氨脱氧胆酸的相对含量数据导入SPSS 25.0软件，即可得到验证集中各个样本的回归值logit[p]，并获得预测概率，以预测正确的样本数除以总样本数即为甘氨脱氧胆酸区分健康受试者和心力衰竭的准确率，区分准确率为100％(33/33)。
上述实施例说明，甘氨脱氧胆酸在心力衰竭患者和健康受试者血清中的含量存在显著差异，以甘氨脱氧胆酸为标志物可以有效诊断区分心力衰竭患者和健康受试者。因此，甘氨脱氧胆酸具有开发成诊断心力衰竭的血清检测试剂盒的前景。
上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。
Claims (2)
1.甘氨脱氧胆酸用于制备诊断心力衰竭的血清检测试剂盒的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述血清检测试剂盒中含有检测血清中甘氨脱氧胆酸含量的试剂。
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