CN114375765A - 一种杏鲍菇菌种复壮筛选方法 - Google Patents
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Abstract
本发明适用于农业生物技术领域，提供了一种杏鲍菇菌种复壮筛选方法，包括以下步骤：将需要提纯复状的杏鲍菇菌种接入第一培养基中；当接入第一培养基中的菌落直径达到1.5cm时，切割尖端1.2mm移接于第二培养基中；当接入第二培养基中的菌落直径达到1.5cm时，切割尖端1.2mm移接于第三培养基中；当接入第三培养基中的菌落直径达到1.5cm时，切割尖端1.2mm移接于第四培养基中；将接入第四培养基中的菌落，在30摄氏度培养，将培养出来的子实体进行组织分离，实现杏鲍菇菌种的提纯复壮；本发明采用三次菌落尖端切割，脱毒和提纯同时进行，周期短，效率高。
Description
技术领域
本发明属于农业生物技术领域，尤其涉及一种杏鲍菇菌种复壮筛选方法。
背景技术
杏鲍菇是典型的亚热带草原—干旱沙漠地区的野生食用菌，于春末至夏初腐生、兼性寄生于大型伞型花科植物如刺芹、阿魏、拉瑟草的根上和四周土中。杏鲍菇是欧洲南部、非洲北部以及中亚地区高山、草原、沙漠地带的一种品质优良的大型肉质伞菌，隶属于真菌门、担子菌亚门、真担子菌纲、层菌亚纲、伞菌目、侧耳科、侧耳属。
目前的筛选方法对病毒起不到抑制和灭杀的作用；另一方面目前的培养基营养不充足，使得复壮过程中菌丝生长状态不好。
发明内容
本发明提供一种杏鲍菇菌种复壮筛选方法，旨在解决目前的筛选方法对病毒起不到抑制和灭杀的作用；另一方面目前的培养基营养不充足，使得复壮过程中菌丝生长状态不好的问题。
本发明是这样实现的，一种杏鲍菇菌种复壮筛选方法，包括以下步骤：将需要提纯复状的杏鲍菇菌种接入第一培养基中；当接入第一培养基中的菌落直径达到1.5cm时，切割尖端1.2mm移接于第二培养基中；当接入第二培养基中的菌落直径达到1.5cm时，切割尖端1.2mm移接于第三培养基中；当接入第三培养基中的菌落直径达到1.5cm时，切割尖端1.2mm移接于第四培养基中；将接入第四培养基中的菌落，在30摄氏度培养，将培养出来的子实体进行组织分离，实现杏鲍菇菌种的提纯复壮。
优选的，第一培养基按重量份计算，主要由葡萄糖15-25份、酵母粉3-5份、土豆100-120份、蛋白胨3-5份和细胞分裂素0.3-0.5份制成。
优选的，第二培养基按重量份计算，主要由葡萄糖18-22份、酵母粉7-10份、土豆180-200份、蔗糖5-10份和贝壳粉10-15份制成。
优选的，第三培养基按重量份计算，主要由玉米芯30-50份、米糠30-40份、麸皮10-20份、轻质碳酸钙1-5份制成。
优选的，第四培养基按重量份计算，主要由黄芪10-20份、苦参1-10份、九里香1-10份、紫花地丁5-15份、土豆150份和黄连口服液30份制成。
优选的，所述第一培养基按下述步骤制备：
(1)土豆切片，加3-4倍量水煮沸20-30分钟，过滤，滤渣加3-4倍量水继续，加热至50-60℃，得A品；
(2)A品中依次加入葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、细胞分裂素，边加边搅拌，搅匀后，得B品；
(3)B品分装至200ml试管的1/5，木塞密封，6-8支用纸包好，100-120℃下灭菌20-30min后，冷却至50-60℃，倾斜5-15度放置于20-35℃的烘箱中，放置24-48小时后，取出，即得。
优选的，所述第二培养基按下述步骤制备：
(1)土豆切片，加3倍量水煮沸20分钟，过滤，滤渣加3倍量水继续，加热至50-60℃，得A品；
(2)A品中依次加入葡萄糖、酵母粉、蔗糖、贝壳粉，边加边搅拌，搅匀后，得B品；
(3)B品分装至200ml试管的1/5，木塞密封，7支用纸包好，100-120℃下灭菌30min后，冷却至55℃，倾斜15度放置于20-35℃的烘箱中，放置36小时后，取出，即得。
优选的，所述第三培养基按下述步骤制备：
(1)将玉米芯、米糠、麸皮、轻质碳酸钙依次投入搅拌机，先干拌15-20分钟，再加水，搅拌直至培养基中的各种原料混合均匀，得A品；
(2)A品分装至200ml试管的1/5，木塞密封，6-8支用纸包好，100-120℃下灭菌30min后，冷却至60C，倾斜5-15度放置于20-35℃的烘箱中，放置24小时后，取出，即得。
优选的，所述第四培养基按下述步骤制备：
(1)取黄芪、苦参、九里香和紫花地丁加7倍量水，煎煮2.5h，过滤，取滤渣烘干后，粉碎成细颗粒，得A品；
(2)土豆切片，加3倍量水煮沸25分钟，过滤，滤渣加3倍量水继续，加热至50-60℃，得B品；
(3)B品中依次加入A品和黄连口服液，边加边搅拌，搅匀后，得C品；
(4)C品分装至200ml试管的1/5，木塞密封，7支用报纸包好，100-120℃下灭菌30min后，冷却至55℃，倾斜15度放置于20-35℃的烘箱中，放置36小时后，取出，即得。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
(1)通过在培养基中添加黄连口服液和黄芪，可以杀灭病毒，抑制细菌的生长；
(2)本发明采用三次菌落尖端切割，脱毒和提纯同时进行，周期短，效率高；
(3)本方法的培养基含有广泛的营养元素，特别是粗纤维和粗蛋白以及各种微量元素，提供丰富营养，以达到菌种复壮的目的。
附图说明
图1为本发明的结构示意图；
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
第一培养基原料：葡萄糖15份、酵母粉3份、土豆100份、蛋白胨3份和细胞分裂素0.3份。
第二培养基原料：葡萄糖18份、酵母粉7份、土豆180份、蔗糖5份和贝壳粉10份。
第三培养基原料：玉米芯30份、米糠30份、麸皮10份和轻质碳酸钙1份。
第四培养基原料：黄芪10份、苦参1份、九里香1份、紫花地丁5份、土豆150份和黄连口服液30份。
第一培养基的制作方法：具体包括以下步骤：
(1)土豆切片，加3-4倍量水煮沸20-30分钟，过滤，滤渣加3-4倍量水继续，加热至50-60℃，得A品；
(2)A品中依次加入葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、细胞分裂素，边加边搅拌，搅匀后，得B品；
(3)B品分装至200ml试管的1/5，木塞密封，6-8支用纸包好，100-120℃下灭菌20-30min后，冷却至50-60℃，倾斜5-15度放置于20-35℃的烘箱中，放置24-48小时后，取出，即得。
第二培养基的制作方法：具体包括以下步骤：
(1)土豆切片，加3倍量水煮沸20分钟，过滤，滤渣加3倍量水继续，加热至50-60℃，得A品；
(2)A品中依次加入葡萄糖、酵母粉、蔗糖、贝壳粉，边加边搅拌，搅匀后，得B品；
(3)B品分装至200ml试管的1/5，木塞密封，7支用纸包好，100-120℃下灭菌30min后，冷却至55℃，倾斜15度放置于20-35℃的烘箱中，放置36小时后，取出，即得。
第三培养基的制作方法：具体包括以下步骤：
(1)将玉米芯、米糠、麸皮、轻质碳酸钙依次投入搅拌机，先干拌15-20分钟，再加水，搅拌直至培养基中的各种原料混合均匀，得A品；
(2)A品分装至200ml试管的1/5，木塞密封，6-8支用纸包好，100-120℃下灭菌30min后，冷却至60C，倾斜5-15度放置于20-35℃的烘箱中，放置24小时后，取出，即得。
第四培养基的制作方法：具体包括以下步骤：
(1)取黄芪、苦参、九里香和紫花地丁加7倍量水，煎煮2.5h，过滤，取滤渣烘干后，粉碎成细颗粒，得A品；
(2)土豆切片，加3倍量水煮沸25分钟，过滤，滤渣加3倍量水继续，加热至50-60℃，得B品；
(3)B品中依次加入A品和黄连口服液，边加边搅拌，搅匀后，得C品；
(4)C品分装至200ml试管的1/5，木塞密封，7支用报纸包好，100-120℃下灭菌30min后，冷却至55℃，倾斜15度放置于20-35℃的烘箱中，放置36小时后，取出，即得。
菌种复壮方法：具体包括以下步骤：
S1，将需要提纯复状的杏鲍菇菌种接入第一培养基中；
S2，当接入第一培养基中的菌落直径达到1.5cm时，切割尖端1.2mm移接于第二培养基中；
S3，当接入第二培养基中的菌落直径达到1.5cm时，切割尖端1.2mm移接于第三培养基中；
S4，当接入第三培养基中的菌落直径达到1.5cm时，切割尖端1.2mm移接于第四培养基中；
S5，将接入第四培养基中的菌落，在30摄氏度培养，将培养出来的子实体进行组织分离，实现杏鲍菇菌种的提纯复壮。
实施例2
第一培养基原料：葡萄糖20份、酵母粉4份、土豆110份、蛋白胨4份和细胞分裂素0.4份。
第二培养基原料：葡萄糖20份、酵母粉8.5份、土豆190份、蔗糖7.5份和贝壳粉12.5份。
第三培养基原料：玉米芯40份、米糠40份、麸皮15份和轻质碳酸钙2.5份。
第四培养基原料：黄芪15份、苦参5份、九里香5份、紫花地丁10份、土豆150份和黄连口服液30份。
第一培养基的制作方法：具体包括以下步骤：
(1)土豆切片，加3-4倍量水煮沸20-30分钟，过滤，滤渣加3-4倍量水继续，加热至50-60℃，得A品；
(2)A品中依次加入葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、细胞分裂素，边加边搅拌，搅匀后，得B品；
(3)B品分装至200ml试管的1/5，木塞密封，6-8支用纸包好，100-120℃下灭菌20-30min后，冷却至50-60℃，倾斜5-15度放置于20-35℃的烘箱中，放置24-48小时后，取出，即得。
第二培养基的制作方法：具体包括以下步骤：
(1)土豆切片，加3倍量水煮沸20分钟，过滤，滤渣加3倍量水继续，加热至50-60℃，得A品；
(2)A品中依次加入葡萄糖、酵母粉、蔗糖、贝壳粉，边加边搅拌，搅匀后，得B品；
(3)B品分装至200ml试管的1/5，木塞密封，7支用纸包好，100-120℃下灭菌30min后，冷却至55℃，倾斜15度放置于20-35℃的烘箱中，放置36小时后，取出，即得。
第三培养基的制作方法：具体包括以下步骤：
(1)将玉米芯、米糠、麸皮、轻质碳酸钙依次投入搅拌机，先干拌15-20分钟，再加水，搅拌直至培养基中的各种原料混合均匀，得A品；
(2)A品分装至200ml试管的1/5，木塞密封，6-8支用纸包好，100-120℃下灭菌30min后，冷却至60C，倾斜5-15度放置于20-35℃的烘箱中，放置24小时后，取出，即得。
第四培养基的制作方法：具体包括以下步骤：
(1)取黄芪、苦参、九里香和紫花地丁加7倍量水，煎煮2.5h，过滤，取滤渣烘干后，粉碎成细颗粒，得A品；
(2)土豆切片，加3倍量水煮沸25分钟，过滤，滤渣加3倍量水继续，加热至50-60℃，得B品；
(3)B品中依次加入A品和黄连口服液，边加边搅拌，搅匀后，得C品；
(4)C品分装至200ml试管的1/5，木塞密封，7支用报纸包好，100-120℃下灭菌30min后，冷却至55℃，倾斜15度放置于20-35℃的烘箱中，放置36小时后，取出，即得。
菌种复壮方法：具体包括以下步骤：
S1，将需要提纯复状的杏鲍菇菌种接入第一培养基中；
S2，当接入第一培养基中的菌落直径达到1.5cm时，切割尖端1.2mm移接于第二培养基中；
S3，当接入第二培养基中的菌落直径达到1.5cm时，切割尖端1.2mm移接于第三培养基中；
S4，当接入第三培养基中的菌落直径达到1.5cm时，切割尖端1.2mm移接于第四培养基中；
S5，将接入第四培养基中的菌落，在30摄氏度培养，将培养出来的子实体进行组织分离，实现杏鲍菇菌种的提纯复壮。
实施例3
第一培养基原料：葡萄糖25份、酵母粉5份、土豆120份、蛋白胨5份和细胞分裂素0.5份。
第二培养基原料：葡萄糖22份、酵母粉10份、土豆200份、蔗糖10份和贝壳粉15份。
第三培养基原料：玉米芯50份、米糠40份、麸皮20份和轻质碳酸钙5份。
第四培养基原料：黄芪20份、苦参10份、九里香10份、紫花地丁15份、土豆150份和黄连口服液30份。
第一培养基的制作方法：具体包括以下步骤：
(1)土豆切片，加3-4倍量水煮沸20-30分钟，过滤，滤渣加3-4倍量水继续，加热至50-60℃，得A品；
(2)A品中依次加入葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、细胞分裂素，边加边搅拌，搅匀后，得B品；
(3)B品分装至200ml试管的1/5，木塞密封，6-8支用纸包好，100-120℃下灭菌20-30min后，冷却至50-60℃，倾斜5-15度放置于20-35℃的烘箱中，放置24-48小时后，取出，即得。
第二培养基的制作方法：具体包括以下步骤：
(1)土豆切片，加3倍量水煮沸20分钟，过滤，滤渣加3倍量水继续，加热至50-60℃，得A品；
(2)A品中依次加入葡萄糖、酵母粉、蔗糖、贝壳粉，边加边搅拌，搅匀后，得B品；
(3)B品分装至200ml试管的1/5，木塞密封，7支用纸包好，100-120℃下灭菌30min后，冷却至55℃，倾斜15度放置于20-35℃的烘箱中，放置36小时后，取出，即得。
第三培养基的制作方法：具体包括以下步骤：
(1)将玉米芯、米糠、麸皮、轻质碳酸钙依次投入搅拌机，先干拌15-20分钟，再加水，搅拌直至培养基中的各种原料混合均匀，得A品；
(2)A品分装至200ml试管的1/5，木塞密封，6-8支用纸包好，100-120℃下灭菌30min后，冷却至60C，倾斜5-15度放置于20-35℃的烘箱中，放置24小时后，取出，即得。
第四培养基的制作方法：具体包括以下步骤：
(1)取黄芪、苦参、九里香和紫花地丁加7倍量水，煎煮2.5h，过滤，取滤渣烘干后，粉碎成细颗粒，得A品；
(2)土豆切片，加3倍量水煮沸25分钟，过滤，滤渣加3倍量水继续，加热至50-60℃，得B品；
(3)B品中依次加入A品和黄连口服液，边加边搅拌，搅匀后，得C品；
(4)C品分装至200ml试管的1/5，木塞密封，7支用报纸包好，100-120℃下灭菌30min后，冷却至55℃，倾斜15度放置于20-35℃的烘箱中，放置36小时后，取出，即得。
菌种复壮方法：具体包括以下步骤：
S1，将需要提纯复状的杏鲍菇菌种接入第一培养基中；
S2，当接入第一培养基中的菌落直径达到1.5cm时，切割尖端1.2mm移接于第二培养基中；
S3，当接入第二培养基中的菌落直径达到1.5cm时，切割尖端1.2mm移接于第三培养基中；
S4，当接入第三培养基中的菌落直径达到1.5cm时，切割尖端1.2mm移接于第四培养基中；
S5，将接入第四培养基中的菌落，在30摄氏度培养，将培养出来的子实体进行组织分离，实现杏鲍菇菌种的提纯复壮。
本方法中所谓的脱毒，是采用先进的尖端分离技术、配合对成熟菌丝体不同阶段不同形态自然生成物的分离技术以及选用不同基质使接入种有条件进行选择性生长，并经2-4个循环后，使该菌种彻底摆脱原携病毒、病菌，恢复其原本生物特性。
本方法中所谓的提纯，是改换培养基主料成份，使菌种吸收不同的营养成份，促进复壮。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种杏鲍菇菌种复壮筛选方法，其特征在于，
包括以下步骤：
将需要提纯复状的杏鲍菇菌种接入第一培养基中；
当接入第一培养基中的菌落直径达到1.5cm时，切割尖端1.2mm移接于第二培养基中；
当接入第二培养基中的菌落直径达到1.5cm时，切割尖端1.2mm移接于第三培养基中；
当接入第三培养基中的菌落直径达到1.5cm时，切割尖端1.2mm移接于第四培养基中；
将接入第四培养基中的菌落，在30摄氏度培养，将培养出来的子实体进行组织分离，实现杏鲍菇菌种的提纯复壮。
2.如权利要求1所述的杏鲍菇菌种复壮筛选方法，其特征在于：
第一培养基按重量份计算，主要由葡萄糖15-25份、酵母粉3-5份、土豆100-120份、蛋白胨3-5份和细胞分裂素0.3-0.5份制成。
3.如权利要求1所述的杏鲍菇菌种复壮筛选方法，其特征在于：
第二培养基按重量份计算，主要由葡萄糖18-22份、酵母粉7-10份、土豆180-200份、蔗糖5-10份和贝壳粉10-15份制成。
4.如权利要求1所述的杏鲍菇菌种复壮筛选方法，其特征在于：
第三培养基按重量份计算，主要由玉米芯30-50份、米糠30-40份、麸皮10-20份和轻质碳酸钙1-5份制成。
5.如权利要求1所述的杏鲍菇菌种复壮筛选方法，其特征在于：
第四培养基按重量份计算，主要由黄芪10-20份、苦参1-10份、九里香1-10份、紫花地丁5-15份、土豆150份和黄连口服液30份制成。
6.如权利要求2所述的杏鲍菇菌种复壮筛选方法，其特征在于：
所述第一培养基按下述步骤制备：
(1)土豆切片，加3-4倍量水煮沸20-30分钟，过滤，滤渣加3-4倍量水继续，加热至50-60℃，得A品；
(2)A品中依次加入葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、细胞分裂素，边加边搅拌，搅匀后，得B品；
(3)B品分装至200ml试管的1/5，木塞密封，6-8支用纸包好，100-120℃下灭菌20-30min后，冷却至50-60℃，倾斜5-15度放置于20-35℃的烘箱中，放置24-48小时后，取出，即得。
7.如权利要求3所述的杏鲍菇菌种复壮筛选方法，其特征在于：
所述第二培养基按下述步骤制备：
(1)土豆切片，加3倍量水煮沸20分钟，过滤，滤渣加3倍量水继续，加热至50-60℃，得A品；
(2)A品中依次加入葡萄糖、酵母粉、蔗糖、贝壳粉，边加边搅拌，搅匀后，得B品；
(3)B品分装至200ml试管的1/5，木塞密封，7支用纸包好，100-120℃下灭菌30min后，冷却至55℃，倾斜15度放置于20-35℃的烘箱中，放置36小时后，取出，即得。
8.如权利要求4所述的杏鲍菇菌种复壮筛选方法，其特征在于：
所述第三培养基按下述步骤制备：
(1)将玉米芯、米糠、麸皮、轻质碳酸钙依次投入搅拌机，先干拌15-20分钟，再加水，搅拌直至培养基中的各种原料混合均匀，得A品；
(2)A品分装至200ml试管的1/5，木塞密封，6-8支用纸包好，100-120℃下灭菌30min后，冷却至60C，倾斜5-15度放置于20-35℃的烘箱中，放置24小时后，取出，即得。
9.如权利要求5所述的杏鲍菇菌种复壮筛选方法，其特征在于：
所述第四培养基按下述步骤制备：
(1)取黄芪、苦参、九里香和紫花地丁加7倍量水，煎煮2.5h，过滤，取滤渣烘干后，粉碎成细颗粒，得A品；
(2)土豆切片，加3倍量水煮沸25分钟，过滤，滤渣加3倍量水继续，加热至50-60℃，得B品；
(3)B品中依次加入A品和黄连口服液，边加边搅拌，搅匀后，得C品；
(4)C品分装至200ml试管的1/5，木塞密封，7支用报纸包好，100-120℃下灭菌30min后，冷却至55℃，倾斜15度放置于20-35℃的烘箱中，放置36小时后，取出，即得。
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|---|---|---|---|---|
| CN101456772A (zh) * | 2008-12-16 | 2009-06-17 | 许忠 | 一种杏鲍菇的培养基及其制作方法 |
| CN105613046A (zh) * | 2016-02-04 | 2016-06-01 | 湖南省宇秀生物科技有限公司 | 杏鲍菇原始母种的制作方法 |
| CN110079494A (zh) * | 2019-05-16 | 2019-08-02 | 安徽吾悦农业科技有限公司 | 一种杏鲍菇菌种复壮筛选方法 |
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2021
- 2021-12-07 CN CN202111517169.0A patent/CN114375765A/zh active Pending
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