CN114365850A - 一种具有改善软骨健康的多肽组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种具有改善软骨健康的多肽组合物及其制备方法，其包含如下组份：蛋白质：乳清蛋白、酪蛋白；肽类：牛骨胶原蛋白肽粉、鱼胶原蛋白肽、地龙蛋白肽；功效成分：酶解骨粉、软骨提取物；其他成分：壳聚糖、亚麻籽油微囊粉、牛磺酸、维生素K2和D3；辅料：低聚麦芽糖。本发明的具有改善软骨健康的多肽组合物能够通过补充营养物质修复关节软骨，同时能够为新生的软骨提供充足的营养，有效预防关节病痛，预防关节炎的发生，有效改善软骨健康。

Description

一种具有改善软骨健康的多肽组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及功能性食品技术领域，具体的说涉及一种具有改善软骨健康的多肽组合物及其制备方法。

背景技术

软骨健康，是关节健康的保障。骨关节炎引起疼痛的原因，主要是随着年龄的增长，关节软骨磨损后变得粗糙不平，甚至软骨被磨掉，使关节活动时骨头磨骨头引起的疼痛。另外，软骨磨损后的碎片掉到关节腔内，还会刺激滑膜组织分泌出大量关节液和炎性介质，使关节出现酸胀和疼痛。

由于软骨中无神经、血管及淋巴系统，在遭受不太严重的损伤时，人是没有感觉的。仅当软骨磨损殆尽或因病理变化失去柔软“衬垫”的保护作用时，人们才感觉到痛苦。而关节软骨一旦受损，自身修复能力又十分有限。骨关节炎就像人的衰老一样无法避免，30-40岁开始应该提前保养，如果过度使用关节，会提前到达使用寿命，出现骨关节炎。

修复关节软骨，才能有效预防和改善关节炎，远离关节疼痛。软骨组织出现磨损，退化的时候，其病理包括软骨组织里的营养物质减少，但是人体内自然补充不够，继而引起软骨损伤，所以我们可以适当的补充营养来修复关节软骨，并为新生的软骨提供充足的营养，有效预防关节病痛，预防关节炎的发生。

因此，有必要开发一种具有改善软骨健康的组合物。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的不足，提供一种具有改善软骨健康的多肽组合物，并提供该组合的制备方法，并为相关产品的生产提供研究思路。为达成上述目的，本发明的技术方案如下：

本发明提供了一种具有改善软骨健康的多肽组合物，其包含如下组份：

蛋白质：乳清蛋白、酪蛋白；肽类：牛骨胶原蛋白肽粉、鱼胶原蛋白肽、地龙蛋白肽；功效成分：酶解骨粉、软骨提取物；其他成分：壳聚糖、亚麻籽油微囊粉、牛磺酸、维生素K2和D3；辅料：低聚麦芽糖。

进一步的，本发明的一种具有改善软骨健康的多肽组合物，包含如下重量份的组份：

蛋白质：乳清蛋白15-30份、酪蛋白10-20份；肽类：牛骨胶原蛋白肽粉8-14份、鱼胶原蛋白肽7-12份、地龙蛋白肽8-11份；功效成分：酶解骨粉3-6份、软骨提取物0.5-2份；其他成分：壳聚糖1-4份、亚麻籽油微囊粉0.2-0.7份、牛磺酸0.3-0.6份、维生素K2和D3 0.1-0.4份；辅料：低聚麦芽糖10-15份。

具体的，本发明的具有改善软骨健康的多肽组合物，包含如下重量百分比含量的组份：

蛋白质：乳清蛋白30份、酪蛋白20份；肽类：牛骨胶原蛋白肽粉10份、鱼胶原蛋白肽9份、地龙蛋白肽6份；功效成分：酶解骨粉5份、软骨提取物1份；其他成分：壳聚糖2份、亚麻籽油微囊粉0.5份、牛磺酸0.3份、维生素K2和D3 0.2份；辅料：低聚麦芽糖12份。

本发明还提供了一种具有改善软骨健康的多肽组合物的制备方法，包含如下步骤：

（1）称量步骤：将上述各个原料按照配方准确称量，称量过程中每种原料单独称量，控制称量偏差在标准之内；

（2）过筛步骤：在进行混合之前，对各组分分别进行粉碎并过30目筛。此步骤用来清除异物或者大型颗粒，确保物料颗粒大小均匀，颗粒流动性良好；

（3）混合步骤：将上述过完震动筛的各组分物料混合，采取等量递增方式通过混料机混合，所述等量递增混合指的是取小含量组分和等量的大含量组分，混合均匀，再加入同混合物等量的大含量组分混合均匀，如此倍量增加直至加完全部的大含量组分为止；

（4）包装步骤：将混合步骤中得到的复合营养粉用包装机按照一定重量分袋包装，严格控制包装精度，整个包装过程中保持充氮，控制样品中残余的氧含量，保持活性成分稳定。

优选的，所述的改善软骨健康的多肽组合物的产品形态包括了功能食品、补充剂、茶饮料、普通食品如咀嚼片、含片、袋泡茶等，所述的改善软骨健康的多肽组合物的产品形态还包括成药学上可以接受的产品形态如胶囊、片剂、口服液、颗粒剂、茶剂、牙膏剂或者饮料等。

优选的，所述的改善软骨健康的多肽组合物包括了关节酸痛、关节肿胀、关节僵硬、关节活动受限、颈项痛、腰痛、胸背痛、肢体麻木等骨关节炎和骨质疏松症，这些均属于本发明中的多肽组合物改善软骨健康的范畴。

本发明的一种具有改善软骨健康的多肽组合物中：

乳清蛋白：利用现代工艺技术从牛乳中提取出来的一类蛋白质，在营养学中被誉为“蛋白之王”，具有易消化、高生物利用率等优点，是公认的优质蛋白补充剂。乳清蛋白本身具有较高的谷氨酸等物质，能够为糖原异生提供原料，进而维持谷氨酸胺的水平，保证免疫细胞的功能。

酪蛋白：含有很多人体生长所必需的氨基酸，具有很高的营养价值，进入肠、胃等消化道后，也可被生物体内的蛋白酶水解，释放出多种具有特殊生理功能的生物活性肽，能够对个体的消化系统、免疫系统起到调节作用。

胶原蛋白肽：由健康的猪、牛和鱼的骨骼和皮肤水解制得，体外实验和体内实验显示，胶原蛋白肽能刺激关节软骨产生Ⅱ型胶原蛋白、透明质酸、黏多糖和蛋白聚糖，抑制关节软骨破坏，增加成骨细胞介导的骨形成，减少破骨细胞介导的骨吸收，以增加骨密度，胶原蛋白肽作为营养素具有预防和治疗骨关节炎和骨质疏松症的潜在效用。胶原蛋白肽富含甘氨酸、脯氨酸和羟脯氨酸，增强人体对钙的吸收。经常服用胶原蛋白肽可以提高人体骨骼的强度，防止骨质疏松。

地龙蛋白肽：鲜地龙提取物能够加速伤口的恢复，减少炎症物质的渗出，缩短炎症期，推测其良好的抗炎能力可能与其增强巨噬细胞的免疫活性有关。地龙蛋白多肽类成分的抗炎活性是其具备其他药理作用的基础，如止咳平喘作用、抗肿瘤作用以及对神经系统的作用等。

酶解骨粉：硫酸软骨素和骨胶原是关节软骨和腔体滑液的重要组成部分，酶解骨粉具有辅助补充作用。酶解骨粉主要利用酶水解法促进骨骼中钙的转化，使骨钙充分分离出来，并与氨基酸作用生成可溶性氨基酸钙，能较好的促进机体对钙的利用。

软骨提取物：含有丰富的Ⅱ型胶原蛋白和软骨多糖，软骨多糖和软骨复合物能有效提高机体的抗氧化能力，从而预防关节炎的产生。软骨多糖和软骨复合物均能不同程度的减轻体内炎症反应，缓解组织的损伤从而预防软骨的破坏。

壳聚糖：甲壳素经脱乙酰化后得到的一种生物活性阳离子多糖，来源丰富，制备简单，是自然界存在的唯一的碱性多糖，不同原材料或不同工艺制备的壳聚糖具备的平均相对分子质量、脱乙酰度、氨基含量及红外光谱等基本特性会有所不同。而壳聚糖普遍具有的良好生物相容性、天然降解性和粘膜吸附性等理化性能，可发挥降血脂、降血糖、抗氧化、抗炎症、抗菌抑菌及增强免疫等医学功效。

亚麻籽油微囊粉：亚麻籽油中含有丰富的ω-3脂肪酸，其能够很好的缓解和修复关节的软骨组织，而且其还有很好的改善组织器官发炎的现象。

牛磺酸：可通过细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）信号途径促进成骨细胞的CTGF表达。牛磺酸还能够通过抑制NF-κB信号转到通路减轻小鼠甲醛源性的神经炎性疼痛，降低血浆炎症因子，抑制凋亡。

维生素K2和D3：长期缺乏维生素K2和D3缺乏会影响免疫系统、骨骼肌肉系统、神经系统和内分泌系统的发育和稳定性。研究表明，维生素K2和维生素D3联合应用能改善青壮年膝骨关节炎患者的骨营养代谢，并促进成骨作用从而改善膝关节疼痛症状和活动能力。

低聚麦芽糖：被吸收利用的速度比但双糖慢，一次摄入后可以维持较长时间的能量补充，同时引起的胰岛素的反应平衡，客服了运动中服用单双糖引起的回跃性低血糖反应。

与现有技术相比，本发明提供了一种具有改善软骨健康的多肽组合物及其制备方法，具有以下有益效果：

1）本发明提供的一种具有改善软骨健康的多肽组合物中含有胶原蛋白多肽，关节软骨主要由胶原蛋白、蛋白多糖和软骨细胞组成，由于胶原蛋白是固定蛋白多糖的网状结构，当胶原蛋白严重缺乏时就会使网状结构变得稀疏，甚至发生断裂，造成蛋白多糖流失，使软骨遭到破坏。胶原蛋白多肽能够在软骨组织中合成大量的胶原纤维，修复磨损软骨，并为新生的软骨提供充足的营养。

2）本发明提供的一种具有改善软骨健康的多肽组合物，能够稳定软骨的养分、提供软骨细胞营养、保护骨头减少冲击力、维护软骨的健康形态。

3）本发明提供的一种具有改善软骨健康的多肽组合物的制备方法所得的产品的稳定性好，有利于患者的吸收，而且生产周期短，生产过程易于操作，生产效率高，生产成本低，易于大规模生产。

附图说明

图1 小鼠膝关节腔灌洗液中IL-1β含量比较；

图2 小鼠膝关节腔灌洗液中IL-10含量比较；

图3小鼠膝关节腔灌洗液中TNF-ɑ含量比较；

图4 小鼠关节滑膜组织中GAGs含量的比较。

具体实施方式

以下将通过实施例来详细说明本申请的实施方式，借此对本申请如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。

实施例1

一种具有改善软骨健康的多肽组合物，包含如下重量份的组份：

蛋白质：乳清蛋白30份、酪蛋白20份；肽类：牛骨胶原蛋白肽粉10份、鱼胶原蛋白肽9份、地龙蛋白肽6份；功效成分：酶解骨粉5份、软骨提取物1份；其他成分：壳聚糖2份、亚麻籽油微囊粉0.5份、牛磺酸0.3份、维生素K2和D3 0.2份；辅料：低聚麦芽糖12份。

一种具有改善软骨健康的多肽组合物的制备方法，包含如下步骤：

（1）称量步骤：将上述各个原料按照配方准确称量，称量过程中每种原料单独称量，控制称量偏差在标准之内。

（2）过筛步骤：在进行混合之前，对各组分分别进行粉碎并过30目筛。此步骤用来清除异物或者大型颗粒，确保物料颗粒大小均匀，颗粒流动性良好。

（3）混合步骤：将上述过完震动筛的各组分物料混合，采取等量递增方式通过混料机混合，所述等量递增混合指的是取小含量组分和等量的大含量组分，混合均匀，再加入同混合物等量的大含量组分混合均匀，如此倍量增加直至加完全部的大含量组分为止。

（4）包装步骤：将混合步骤中得到的复合营养粉用包装机按照一定重量分袋包装，严格控制包装精度，整个包装过程中保持充氮，控制样品中残余的氧含量，保持活性成分稳定。

实施例2

一种具有改善软骨健康的多肽组合物，包含如下重量份的组份：

蛋白质：乳清蛋白15份、酪蛋白10份；肽类：牛骨胶原蛋白肽粉8份、鱼胶原蛋白肽7份、地龙蛋白肽8份；功效成分：酶解骨粉3份、软骨提取物0.5份；其他成分：壳聚糖1份、亚麻籽油微囊粉0.2份、牛磺酸0.3份、维生素K2和D3 0.1份；辅料：低聚麦芽糖10份。

制备方法同实施例1。

实施例3

一种具有改善软骨健康的多肽组合物，包含如下重量份的组份：

蛋白质：乳清蛋白30份、酪蛋白20份；肽类：牛骨胶原蛋白肽粉14份、鱼胶原蛋白肽12份、地龙蛋白肽11份；功效成分：酶解骨粉6份、软骨提取物2份；其他成分：壳聚糖4份、亚麻籽油微囊粉0.7份、牛磺酸0.6份、维生素K2和D3 0.4份；辅料：低聚麦芽糖15份。

制备方法同实施例1。

实施例4

本发明的一种改善软骨健康的多肽组合物对小鼠关节炎的治疗作用研究。

1 材料与方法

1.1 实验动物

实验用雄性昆明小鼠，体质量（25 ±3）g，数量25只，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供，动物饲养在正常的环境之中，保持恒定的温度和湿度，动物饲料、蒸馏水都进行消毒处理，动物活动自由，生活在小鼠笼具之中，自行获取食物。开始进行实验前，小鼠25只都在实验动物中心中饲养一周，并且随时观察动物的一般状态，每2天按照标号称量动物的体质量，及时添加动物的饲料和饮用水。

1.2 动物分组

实验将25只小鼠随机分为5组，其中正常对照组5只，模型对照组5只，实施例1组5只，实施例2组5只，实施例3组5只。

2 实验方法

2.1 动物模型的建立与给药方案

将10％木瓜蛋白酶与0.03 mol/L的L-半胱氨酸按1∶1混合静置30 min后备用。于实验第0、3、6天，在模型对照组、实施例1组、实施例2组、实施例3组小鼠膝关节腔内注入0.2mL木瓜蛋白酶混合溶液诱导小鼠骨关节炎模型。实施例1组、实施例2组、实施例3组小鼠按照实施例1组、实施例2组、实施例3组的配方给药，正常对照组注射等体积的生理盐水。每只小鼠每天灌胃给药1次，共计给药4周。

2.2 观测指标

2.2.1 小鼠一般状态

观察各组小鼠的精神状态、毛发、进食量及其活跃状态程度。

2.2.2 小鼠双膝关节宽度变化

测量造模前、给药前，以及给药第1、2、3、4周的小鼠膝关节宽度（mm），每只小鼠测量3次取平均值，按照以下公式计算关节肿胀度：关节肿胀度（mm）＝致炎后（给药后）踝关节宽度（mm）-致炎前踝关节宽度（mm）。

2.2.3 使用ELISA方法小鼠膝关节腔灌洗液中IL-1β、IL-10、TNF-ɑ的含量

小鼠麻醉后双膝关节腔内注射生理盐水进行灌洗，将关节灌洗液在4℃条件下12000 r/min离心15 min，分离上清后进行分装，-80℃冻存备用。取其上清液按照ELISA试剂盒说明书的要求测定灌洗液中IL-1β、IL-10及TNF-ɑ的含量。

2.2.4小鼠关节滑膜组织中GAGs含量测定

取小鼠双膝关节滑膜组织，液氮速冻后转-80℃冻存备用。取适量滑膜组织，加入冰生理盐水，置于冰浴中用组织匀浆器制成2％滑膜组织匀浆，离心取上清液，离心条件4℃下，3500 r/min，10 min。取适量上清液，采用二甲基亚甲蓝分光光度法根据说明书的指导测定关节滑膜组织中糖胺多糖（GAGs）的含量。

2.3 统计学处理

全部实验数据均采用SPSS 17.0软件进行。根据检验数据资料的正态性和方差齐性，各组数据均用（x̅±s）表示，组间比较采用t检验比较差异的显著性。P<0.05即有统计学意义。

3 实验结果

3.1 小鼠一般情况

实验开始前，各组小鼠膝关节活动度正常，各关节局部无肿胀；活泼好动，眼睛有神，皮毛整齐光洁，对食物敏感，饮水正常，逃避反应快。

造模过程中未出现小鼠死亡。造模结束后各造模组小鼠均出现精神不振，膝关节稍有跛行现象。

治疗4周后正常对照组小鼠膝关节活动正常，饮食、饮水正常，毛色光亮，反应灵敏；模型对照组小鼠均出现膝关节局部肿胀，少动，饮食、饮水减少，反应迟钝等现象；其余各组小鼠膝关节肿胀程度，反应敏捷性等均有不同程度的减轻，其中实施例1组恢复程度最好。

3.2小鼠双膝关节宽度变化结果

实验结果表明，正常对照组给生理盐水前后膝关节直径无明显变化（P>0.05）。与正常对照组相比，各造模组小鼠膝关节直径显著升高（P<0.01），各造模组之间比较无统计学意义（P>0.05）；与模型对照组相比，实施例各组的小鼠膝关节直径显著降低（P<0.01），且实施例1组的小鼠膝关节直径明显降低（P<0.05）。结果见表1。

表1 小鼠膝关节肿胀度的比较（x̅±s）

注：与正常对照组比较，**P<0.01；与模型对照组比较，#P<0.05。

3.3 小鼠膝关节腔灌洗液中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的结果

与正常对照组相比，模型组小鼠膝关节腔灌洗液中IL-1β、IL-10、TNF-ɑ含量显著升高（**P<0.01）；与模型对照组相比，实施例1组、实施例2组和实施例3组的小鼠膝关节腔灌洗液中的IL-1β、IL-10、TNF-ɑ含量显著降低（#p<0.05），且实施例1组的IL-1β、IL-10、TNF-ɑ含量明显降低最为显著（##P<0.01）。结果见图1、图2、图3。

3.4 小鼠关节滑膜组织中GAGs含量测定

与正常对照组相比，模型组小鼠关节滑膜组织中GAGs含量显著降低（**P<0.01）；与模型组相比，实施例1组、实施例2组和实施例3组的小鼠的GAGs含量显著升高（#P<0.05），且实施例1组的的GAGs含量升高最为显著（##P<0.05）。结果见图4。

综上所述，实施例在缓解木瓜蛋白酶诱导的大鼠骨关节炎的同时，降低了膝关节腔灌洗液中IL-1β、IL-10、TNF-ɑ的表达，提高了软骨组织中糖胺多糖的含量。这表明本发明在一定程度上具有改善软骨健康的作用。

以上所述仅为本发明的具体实施例，所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，并非因此限制本发明的专利范围，凡是这些技术特征的组合不存在矛盾，利用本发明作的等效变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围之中。

Claims (6)

1.一种具有改善软骨健康的多肽组合物，其特征在于包含如下组份：

蛋白质：乳清蛋白、酪蛋白；肽类：牛骨胶原蛋白肽粉、鱼胶原蛋白肽、地龙蛋白肽；功效成分：酶解骨粉、软骨提取物；其他成分：壳聚糖、亚麻籽油微囊粉、牛磺酸、维生素K2和D3；辅料：低聚麦芽糖。

2.根据权利要求1所述的一种具有改善软骨健康的多肽组合物，其特征在于包含如下重量百分比的组份：

蛋白质：乳清蛋白15-30份、酪蛋白10-20份；肽类：牛骨胶原蛋白肽粉8-14份、鱼胶原蛋白肽7-12份、地龙蛋白肽8-11份；功效成分：酶解骨粉3-6份、软骨提取物0.5-2份；其他成分：壳聚糖1-4份、亚麻籽油微囊粉0.2-0.7份、牛磺酸0.3-0.6份、维生素K2和D3 0.1-0.4份；辅料：低聚麦芽糖10-15份。

3.根据权利要求1所述的一种具有改善软骨健康的多肽组合物，其特征在于包含如下重量百分比的组份：

蛋白质：乳清蛋白30份、酪蛋白20份；肽类：牛骨胶原蛋白肽粉10份、鱼胶原蛋白肽9份、地龙蛋白肽6份；功效成分：酶解骨粉5份、软骨提取物1份；其他成分：壳聚糖2份、亚麻籽油微囊粉0.5份、牛磺酸0.3份、维生素K2和D3 0.2份；辅料：低聚麦芽糖12份。

4.一种制备权利要求1-3任一项所述的一种具有改善软骨健康的多肽组合物的制备方法，其特征在于该制备方法包括如下步骤：

（1）称量步骤：将上述各个原料按照配方准确称量，称量过程中每种原料单独称量，控制称量偏差在标准之内；

（2）过筛步骤：在进行混合之前，对各组分分别进行粉碎并过30目筛；此步骤用来清除异物或者大型颗粒，确保物料颗粒大小均匀，颗粒流动性良好；

（3）混合步骤：将上述过完震动筛的各组分物料混合，采取等量递增方式通过混料机混合，所述等量递增混合指的是取小含量组分和等量的大含量组分，混合均匀，再加入同混合物等量的大含量组分混合均匀，如此倍量增加直至加完全部的大含量组分为止；

（4）包装步骤：将混合步骤中得到的复合营养粉用包装机按照一定重量分袋包装，严格控制包装精度，整个包装过程中保持充氮，控制样品中残余的氧含量，保持活性成分稳定。

5.如权利要求1至3任一项所述的一种具有改善软骨健康的多肽组合物在制备中用于改善包括关节酸痛、关节肿胀、关节僵硬、关节活动受限、颈项痛、腰痛、胸背痛、肢体麻木等骨关节炎和骨质疏松症人群，改善软骨健康。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的组合物制剂包括功能食品、补充剂、茶饮料、普通食品如咀嚼片、含片、袋泡茶等，还包括成药学上可以接受的产品形态如胶囊、片剂、口服液、颗粒剂、茶剂、牙膏剂或者饮料等。

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