CN114317678B - 一种生物纸芯片、高通量多联检测微孔板装置、制备方法及用于阴道炎症多联检测的试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本申请涉及生物检测领域，具体公开了一种生物纸芯片、高通量多联检测微孔板装置、制备方法及用于阴道炎症多联检测的试剂盒。一种生物纸芯片，包括亲水区和疏水区，所述亲水区包括定位区和若干检测区；所述疏水区围绕定位区和若干检测区设置，并形成疏水边界；若干所述检测区上均设有检测指标底物层，所述定位区上设有指示层，所述指示层用于指示检测区的位置。本申请的生物纸芯片可用于与多孔微孔板结合形成高通量多联检测微孔板装置，其具有高通量多联检测多指标，检测效率高、样本稀释量低、检测率高的优点；另外，本申请的高通量多联检测微孔板装置制备方法具有制备简单，适用于工业化量产的优点。
Description
技术领域
本申请涉及生物检测领域，更具体地说，它涉及一种生物纸芯片、高通量多联检测微孔板装置、制备方法及用于阴道炎症多联检测的试剂盒。
背景技术
阴道环境中微生物群落生态变化与女性健康息息相关。随着阴道微生态评价体系的日趋完善，阴道微生态相关检测服务已广泛在医院及检测机构开展。目前检测方法包括阴道分泌物形态学观察(即镜检)和功能指标检测两方面。镜检包括阴道菌群的密度、多样性、病原微生物(真菌及滴虫)、Nugent评分、白细胞计数等。功能指标包括过氧化氢、pH值及其他四至六种生物化学酶类的检测。
阴道中的微生物在生长繁殖的过程中会产生多种生长代谢相关的酶类，在体外利用这些酶类对特异性底物的降解、显色，可对阴道环境中存在的微生物进行初步判断。加德纳菌、普雷沃菌等厌氧菌可分泌唾液酸苷酶和脯氨酸氨基肽酶；金黄色葡萄球菌、粪肠球菌大肠杆菌等需氧菌可分泌凝固酶；B族链球菌和大肠埃希菌可分泌β-葡萄糖醛酸酶；白色念珠菌和滴虫可分泌乙酰氨基-β-葡萄糖苷酶。当阴道环境中有炎症时，白细胞会聚集，产生白细胞酯酶。正常的阴道环境由于乳酸杆菌的存在，偏酸性，并且乳酸杆菌可产生过氧化氢抑制阴道中的病原菌。当阴道发生感染，造成乳酸杆菌量减少，pH值会升高，过氧化氢分泌量减少。
目前市场上主流的阴道炎症多指标检测(六联检、八联检)所采用的方法为采用干化学法的试剂盒。该试剂盒包括将不同检测指标的显色试剂块分别风干到面积约30mm2的滤纸片上，然后将稀释后的样本依次滴入到放有含有试剂块的滤纸上，孵育后通过比色卡或阅读仪判断结果。在实际使用过程中，相关技术的加样过程繁琐，并且样品稀释大、损耗多，容易降低检测灵敏度，导致漏检率提升。
发明内容
为了提高检测效率，本申请提供一种生物纸芯片、高通量多联检测微孔板装置、制备方法及用于阴道炎症多联检测试剂盒。
第一方面，本申请提供一种生物纸芯片，采用如下的技术方案：
一种生物纸芯片，包括亲水区和疏水区，所述亲水区包括定位区和若干检测区；所述疏水区围绕定位区和若干检测区设置，并形成疏水边界；若干所述检测区上均设有检测指标底物层，所述定位区上设有指示层，所述指示层用于指示检测区的位置。
通过采用上述技术方案，由于纸芯片区分亲水区和疏水区，使用时试样在疏水区的推动下自动进入亲水区，简化加样程序；亲水区设置多个检测区，以便在不同的检测区设置不同的检测指标，实现多联检测提高检测效率；亲水区又设置了定位区，则可以快速定位每个检测区相对应的检测指标，降低误判率，进一步提高检测效率。
可选的，所述疏水区的厚度大于亲水区的厚度。
通过采用上述技术方案，由于疏水区的厚度大于亲水区的厚度，使亲水区形成低洼区，一方面便于检测底物层的铺设，另一方面促进样品快速进入亲水区，提升检测效率。
可选的，所述定位区和检测区矩阵分布，所述疏水边界向检测区和定位区的中心凹陷。
通过采用上述技术方案，定位区和检测区矩阵分布，相当于间距相等，有利于底物层的铺设；由于疏水边界向检测区和定位区的中心凹陷，用于引导样品由疏水区向亲水区流动，有利于疏水区将样品推向亲水区，使样品快速与各检测区的底物融合进行反应，进一步提升检测效率。
可选的，所述定位区和检测区沿纸芯片边缘呈圆周均匀分布，所述疏水边界向检测区和定位区的中心凹陷。
通过采用上述技术方案，由于定位区和检测区沿纸芯片边缘呈圆周均匀分布，意味着疏水区大部分位于纸芯片的中心区域，当样品滴入时，样品受到疏水区的作用力增加能快速从中心流向四周；同时由于疏水边界向检测区和定位区的中心凹陷，提供了样品流向方向和疏水区作用力方向，进一步利于样品快速进入检测区与底物层接触并反应，提高检测效率同时以减低各检测区液面重叠的可能。
可选的，所述检测区设有4个或5个或6个或8个，所述定位区设有1个；所述生物纸芯片的面积为36～40mm2，所述检测区和定位区的面积为1.7～2.0mm2。
通过采用上述技术方案，由于一个纸质芯片的面积为36～40mm2，相当于现有单项指标的检测面积，检测区的面积为1.7～2.0mm2，实现原来一个单孔的样品添加量可以同时测试4个或5个或6个或8个指标，纸芯片的微型化处理可以减少样品使用量进而降低样品的稀释度，从而提高灵敏度和检出率；同时降低多项指标逐一滴加样品的繁琐程度，提高多联检测效率；此外，微型化的检测区可以减少底物层的用量，从而降低成本。
可选的，所述检测指标底物层为针对过氧化氢、pH值、唾液酸酐酶、白细胞酯酶、乙酰氨基-β-葡萄糖苷酶、脯氨酸氨基肽酶、β-葡萄糖醛酸苷酶、凝固酶检测的底物层。
通过采用上述技术方案，通过利用致病菌产出特异性酶和底物进行特异性结合原理，以判断样本中存在的致病菌情况，提高检测的准确性和灵敏度；其中过氧化氢底物层用于检测样本中过氧化氢浓度判断样本乳杆菌的含量情况；白细胞酯酶底物层可以检测样品是否存在白细胞；唾液酸苷酶底物层或脯氨酸氨基肽酶底物层可以检测样本中是否存在加德纳菌、普雷沃菌等厌氧菌；凝固酶底物可以检测样本中是否含有金黄色葡萄球菌、粪肠球菌大肠杆菌等需氧菌；乙酰氨基-β-葡萄糖苷酶底物层可以检测样本中是否存在白色念珠菌；β-葡萄糖醛酸苷酶底物层用于判断样本中是否存在B族链球菌和大肠埃希菌；乙酰氨基-β-葡萄糖苷酶底物层可以检测样本中是否存在滴虫。
可选的，所述氧化氢底物层包括氧化物酶、4-氨基安替比林、2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸。
所述pH检测底物层为溴甲酚绿；
所述唾液酸苷酶检测底物层包括5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐和2-甲氧基-4-吗啉重氮苯氯化锌；
所述白细胞酯酶检测底物层为5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐；
所述乙酰氨基-β-葡萄糖苷酶底物层为4-硝基苯基-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷；
所述脯氨酸氨基肽酶底物层为L-脯氨酸对硝基苯胺三氟乙酸盐；
所述β-葡萄糖醛酸苷酶底物层为5-溴-4-氯-3-吲哚葡萄糖醛酸苷盐；
所述凝固酶检测底物层包括甘氨酰-精氨酰-4-甲氧基-β-萘酰胺盐酸盐和2-甲氧基-4-吗啉重氮苯氯化锌。
通过采用上述技术方案，通过酶和底物的特异性显色反应进行联合检测提高致病菌检出率，并减少显色剂的使用，进一步简化检测步骤，提高检测效率和降低产品成本。
第二方面，本申请提供一种高通量多联检测微孔板装置，采用如下的技术方案：
一种高通量多联检测微孔板装置，包括多孔微孔板和上述生物纸芯片，所述生物纸芯片嵌设在多孔微孔板的单微孔内。
通过采用上述技术方案，微孔板可以多联检测的生物芯片结合，可以实现同样本的重复测试和批量样本的同步检测，一方面减少样品使用量，另一方面提高检测操作效率。
第三方面，本申请提供一种高通量多联检测微孔板装置的制备方法，采用如下的技术方案：
绘图，绘制纸芯片图案；
打印，将绘制的图案通过喷蜡打印在空白滤纸上，图案区域为检测区和定位区；
融蜡，将打印含蜡的滤纸在进行加热，使蜡融化并渗透至滤纸，25-28℃冷却，得到含有亲水区和疏水区的预处理纸芯片；
加厚，沿疏水区再喷涂一层蜡，使疏水区的厚度大于亲水区的厚度；
组装，预处理纸芯片嵌置到微孔板的单微孔底部，配制检测底物试剂，并将检测底物试剂喷射在纸芯片上对应的检测区，形成所述检测底物层；将荧光粉或甲基紫喷射到定位区，形成所述指示层；得到上述生物纸芯片；
干燥，将组装好的微孔板放入37℃培养箱干燥30分钟，25-28℃冷却，得到上述高通量多联检测微孔板装置。
通过采用上述技术方案，高通量多联检测微孔板装置制备程序简单，工序步骤少，适用于工业量产。
第四方面，本申请还提供一种用于阴道炎症多联检测试剂盒，采用如下的技术方案：一种用于高通量多联阴道炎症检测试剂盒，包括上述生物纸芯片；或包括上述高通量多联检测微孔板装置，或包括使用上述方法制作的高通量多联检测微孔板装置。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
1、由于本申请的生物纸芯片采用微型化处理，一个生物纸芯片包括亲水区和疏水区，亲水区又包括定位区和多个检测区，每个检测区设有不同的检测指标底物，可以进行多联检测，提高检测效率，定位区可以指示检测区的位置，降低了误判率；
2、疏水边界的特殊处理，可以提升样品分区的速度，提升检测效率同时降低检测区样本重叠的几率，从而提升检测准确率和灵敏度；
3、本申请中优选采用多孔微孔板与生物纸芯片结合，由于每个微孔中都嵌设有一个可以多联检测的生物纸芯片，获得了可以同时对批量样品进行多联检测的效果；
4、本申请的方法，制作步骤简单，工序少，可线上数控和机械化操作，因此获得了适合批量工业化生产，成本低的效果；
5、本申请的试剂盒无需另加显示剂，节约成本的同时简化检测程序，提高检测效率。
附图说明
图1是本申请实施例1纸芯片的结构示意图。
图2是本申请实施例1纸芯片的剖视图。
图3是本申请实施例1高通量多联检测微孔板装置的结构示意图。
图4是本申请实施例2纸芯片的结构示意图。
图5是本申请实施例3纸芯片的结构示意图。
图6是本申请实施例1的阳性标准品测试结果和临床样本测试显色结果的示意图。
图7是图6中A1-A10微孔中生物纸芯片检测显色结果的示意图。
图8是图6中B1-B9微孔中生物纸芯片检测显色结果的示意图。
图9是对照试剂盒临床样本检测结果的示意图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本申请作进一步详细说明。予以特殊说明的是：以下实施例中未注明具体条件者按照常规条件或制造商建议的条件进行，以下实施例中所用原料除特殊说明外均可来源于普通市售。
制备例
制备例1
检测区底物层：
过氧化氢检测底物：称取0.5g氧化物酶，加入去离子水配制0.5g/L的氧化物酶溶液；称取5g的4-氨基安替比林，加入去离子水配制5g/L的4-氨基安替比林；称取10g的2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸，加入去离子水配制10g/L的2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸；将0.5g/L的氧化物酶溶液、5g/L的4-氨基安替比林和10g/L的2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸混合均匀，得到过氧化氢检测底物。
pH检测底物：称取1g溴甲酚绿，加入去离子水配制1g/L溴甲酚绿溶液；
唾液酸苷酶检测底物：称取2g 5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐，加入去离子水配制2g/L的5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐溶液；称取10g2-甲氧基-4-吗啉重氮苯氯化锌加入去离子水配制10g/L的2-甲氧基-4-吗啉重氮苯氯化锌溶液；将2g/L的5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐溶液和10g/L的2-甲氧基-4-吗啉重氮苯氯化锌溶液混合均匀，得到唾液酸苷酶检测底物。
白细胞酯酶检孔测底物：称取5g-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐，加入去离子水配制5g/L5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐溶液；
乙酰氨基-β-葡萄糖苷酶检测底物：称取10g 4-硝基苯基-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷；加入去离子水配制10g/L 4-硝基苯基-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷溶液；
脯氨酸氨基肽酶检测底物：称取10g L-脯氨酸对硝基苯胺三氟乙酸盐，加入去离子水配制10g/L L-脯氨酸对硝基苯胺三氟乙酸盐溶液；
β-葡萄糖醛酸苷酶检测区底物：称取10g 5-溴-4-氯-3-吲哚葡萄糖醛酸苷盐，加入去离子水配制10g/L 5-溴-4-氯-3-吲哚葡萄糖醛酸苷盐；
凝固酶检测区底物：称取10g甘氨酰-精氨酰-4-甲氧基-β-萘酰胺盐酸盐，加入去离子水配制10g/L甘氨酰-精氨酰-4-甲氧基-β-萘酰胺盐溶液；称取10g2-甲氧基-4-吗啉重氮苯氯化锌加入去离子水配制10g/L的固紫B盐溶液；将10g/L甘氨酰-精氨酰-4-甲氧基-β-萘酰胺盐溶液和10g/L的2-甲氧基-4-吗啉重氮苯氯化锌溶液混合均匀，得到凝固酶检测底物。
制备例2
定位区底物层：称取1g甲基紫，加入去离子水配制1g/L甲基紫溶液；
实施例
实施例1
一种高通量多联检测微孔装置制备方法，包括以下步骤：
S1计算机上利用利用Adobe Illustrator软件设计生物纸芯片的亲水区和疏水区图案，亲水区包括直径为1.5mm的圆形检测区，相邻两个检测检测区的距离为0.5mm，矩阵分布3×3共9个检测区，其中第三行第三列的检测区用作定位区；
S2将步骤S1得到图案通过施乐ColorQube8870喷蜡打印机矩阵打印在A4尺寸的空白滤纸上，得到空白纸芯片，其中空白滤纸为WhatmanTM 1号滤纸，每个空白纸芯片的长宽为6.4×6.4mm；
S3将步骤S2得到的空白纸芯片，放置金属浴100℃，2min，使蜡完全融化且渗入滤纸，再至于26℃室温下冷却，形成疏水区，得到预处理纸芯片，如图1所示；
S4将S3得到的预处理纸芯片，放入打印机，在疏水区4再喷印一层蜡，使疏水区4的厚度大于亲水区3，形成低洼检测区，如图2所示；
S5将S4得到的预处理纸芯片裁剪，并嵌入96孔板的单孔中，得到预制高通量多联检测微孔装置；
S6将S5得到的高通量多联检测微孔装置1放入到GESIM芯片点样系统，将制备例1的检测底物喷射到对应的检测区中，喷射量为2nL，形成检测指标底物层5，将制备例2的底物喷射到定位区，得到生物纸芯片2，如图2所示；
S7将S6得到喷覆底物的96孔板放入37℃培养箱干燥30min，再冷却至室温，得到高通量多联检测阴道炎症的微孔板装置1，如图3所示；
在本实施例中，S6步骤中的生物纸芯片的从左往右、从上之下分别为1-8号检测区、定位区；其中1号检测区对应的底物层为过氧化氢检测底物，2号检测区对应的底物层为pH底物；3号检测区对应的底物层为唾液酸苷酶检测底物；4号检测区对应的底物层为白细胞酯酶底物；5号检测区对应的底物层为乙酰氨基-β-葡萄糖苷酶底物；6号检测区对应的底物层为脯氨酸氨基肽酶底物；7号检测区对应的底物层为β-葡萄糖醛酸苷酶，8号检测区对应的底物层为凝固酶底物；9号检测区为定位区，对应的底物层为甲基紫。
在其他实施例中，检测区的图案可以为矩形、菱形、三角形等形状；检测区的直径可以是1.6mm、1.8mm、2mm；检测区的数量可以是2×2共4个，2×3共6个。首个检测区可以用作定位区；微孔板可以是12孔、24孔、48孔、384孔微孔板。多孔微孔板在本申请作为生物纸芯片的固定载体，又是检测反应腔室。
实施例2，
参照图4，实施例2与实施例1的区别在于，生物纸芯片的检测区和定位区的图案为四角星形，疏水边界分别向检测区和定位区的中心凹陷。
实施例3
参照图5，实施例3与实施例1的区别在于，生物纸芯片为圆形滤纸片，检测区和定位区均为四角星形并沿纸芯片圆周方向均匀布置，疏水边界分别向检测区和定位区的中心凹陷。
在本实施例中，共有9个检测区，其中首个检测区为定位区，其余8个检测区，顺时针方向对应的检测指标分别为过氧化氢检测、pH、唾液酸苷酶、白细胞酯酶、乙酰氨基-β-葡萄糖苷酶、脯氨酸氨基肽酶、β-葡萄糖醛酸苷酶、凝固酶。
实施例4
实施例4与实施例1的区别在于，省略步骤S4。
性能检测
应用本申请的高通量多联检测微孔装置进行阴道炎多联检测步骤如下：
S1取阴道分泌物，于100微升的0.9％生理盐水稀释，制得样本稀释液；
S2取出高通量多联检测微孔装置，向单微孔中滴加30微升样本稀释液，于37℃，孵育15分钟；
S3置于HPV-GenoCam-9600阅读仪中，进行结果判读。
其中过氧化氢：底物显粉红色为阴性，表明样本中的乳酸杆菌多；不显色即为阳性，则表示阴道环境处于病理或亚健康状态；
白细胞酯酶：底物显蓝色为阳性，表示有阴道炎；
唾液酸苷酶底物显紫红色为阳性、脯氨酸氨基肽酶底物显黄色为阳性；单一唾液酸苷酶阳性或结合脯氨酸氨基肽酶阳性表示：表示阴道炎由加德纳菌、普雷沃菌等厌氧菌导致；
凝固酶：底物显紫红色为阳性，表示阴道炎由金黄色葡萄球菌、粪肠球菌大肠杆菌等需氧细菌导致；
N-乙酰氨基葡萄糖苷酶：底物显黄色为阳性；其中脯氨酸氨基肽酶阳性结合N-乙酰氨基葡萄糖苷酶阳性，同时pH≥4.8显示蓝色，表示滴虫感染的滴虫型阴道炎；
脯氨酸氨基肽酶阳性结合N-乙酰氨基葡萄糖苷酶阳性，同时pH≤4.6显示黄色，表示白色念珠菌感染的真菌型的阴道炎；
β-葡萄糖醛酸苷酶：底物显蓝色为阳性，表示阴道炎由B族链球菌和大肠埃希菌导致。
阳性标准品检测
分别配制过氧化氢、HCl(pH≤4.6)、HCL(pH≥4.8)、唾液酸酐酶、白细胞酯酶、乙酰氨基-β-葡萄糖苷酶、脯氨酸氨基肽酶、β-葡萄糖醛酸苷酶、凝固酶标准品；按照上述检测步骤S2方法滴入微孔板A1-A10单孔中，其中A10单孔滴加的是所有阳性标准品的混合液，混合液pH>4.8。判读结果如结果如图6和图7所示。
样本分区速度评价
配制亮黄水溶液，然后分别滴加至实施例1-4获得的高通量多联检测微孔装置的单微孔中，置于放大镜下观察亮黄水溶液分布至生物纸芯片各检测区情况并通过XJ-894电子秒表计时器(精度0.01s)记录样本分区完成所需要的时间，以判断样本在生物纸芯片中分区的效率，如表2所示。
检出率评价
使用本申请得到实施例1的高通量多联检测微孔装置取9个临床样本(其中有一个为正常样本)进行检测，并与某品牌的七联检进行检出率比对。
制作8个临床样本稀释液和0.9％生理盐水空白对照，分别滴入B1～B9单孔，结果如图6和图8所示。
取9份某品牌七联检纸芯片，按照如下操作步骤进行加样：
(1)直接将取样的拭子放入含有300uL样本稀释液管中并反复挤压，使阴道分泌物充分释出﹔
2、撕开铝箔包装，取出检测卡，用吸管吸取上一步的样本液，在试纸上的7个检测区中央各加一滴，约30uL；7个检测区对应的检测指标从左往右依次是：H2O2、氧化酶OA、唾液酸酶(SNA)、白细胞酯酶(LEE)、脯氨酸氨基肽酶(PIP)、乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)。
3、将试纸放在常温下(20～25℃)，并依据表1中的孵育时间对照比色卡并记录结果至表4。
表1对照试剂盒的判读标准
表2亮黄水溶液在实施例1-4生物纸芯片中的分区效率结果
| 实施例 | 分区时间 |
| 实施例1 | 4.26s |
| 实施例2 | 3.14s |
| 实施例3 | 1.71s |
| 实施例4 | 7.78s |
参照表2，对比亮黄水溶液在实施例1-4的生物纸芯片上分区的效率，可以看出实施例3的样本分区效率最高，这是由于疏水区在中部位置占比面积大，疏水作用瞬间将亮黄溶液由纸芯片中心推向四周的检测区，并且由于疏水边界向检测区的中心凹陷，进一步起到引流推导作用，加快样本分区的完成。提升样本分区效率可以降低样本分层不均的情况发生，使每个检测区的样本浓度基本一致，从而减少因样本浓度不均导致检测率降低的情况发生。
参照图6和图7，阳性对照测试结果显示，本申请的检测底物层与酶具有特异性结合，能够指示9种检测指标的阳性情况，且当样本同时存在9种阳性标准品时，每个检测区依然能清晰指示，酶与底物一一对应，没有发生干扰，说明酶与底物的特异性强。
参照图6和图8，为利用本申请试剂盒对9个临床样本的检测结果，结果判读如表3所示：
表3本申请试剂盒测试临床样本判读结果
参照图9中C1-C9，为使用某品牌的七联试剂盒(下称：对照试剂盒)对同一批9个临床样本的进行检测的检测结果，结果判读如表4所示。
表4对照试剂盒测试临床样本判读结果
参照图8-9和表3-4，对比本申请试剂盒与某品牌的七联试剂盒的检测结果，可发现：
第一方面，本申请的样本稀释量为对照的1/3，样本一次稀释量可以测试3个重复值，降低结果误差。
第二方面，滴加同样量的样本稀释液，本申请试剂盒可以同时对8个指标进行同步检测且无需另加显示剂，加样方便快捷。而对照试剂盒只能测试一个指标，7个指标则需要滴加7次样本稀释液，并且剩余样本稀释液不足以进行重复测试，意味着如需要进行重复平行测试，稀释浓度增加3倍，将进一步降低对照试剂盒的检出率和灵敏度。
第三方面，本申请试剂盒孵育时间统一为15分钟，因此可以批量读取结果；而对照样品不同的检测指标所需要的孵育时间需要1～30分钟不等，需要分次读取结果，判读结果效率低下。
第四方面，对照试剂盒中无法检测需氧细菌的特异性酶，容易导致细菌性阴道炎假阴性，降低检出率。
本具体实施例仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (10)
1.一种生物纸芯片，其特征在于：包括亲水区和疏水区，所述亲水区包括定位区和若干检测区；所述疏水区围绕定位区和若干检测区设置，并形成疏水边界；所述若干检测区上设有不同的检测指标底物层，所述定位区上设有指示层，所述指示层用于指示检测区的位置；所述指示层由荧光粉或甲基紫组成。
2.根据权利要求1所述的生物纸芯片，其特征在于：所述疏水区的厚度大于亲水区的厚度。
3.根据权利要求1所述的生物纸芯片，其特征在于：所述定位区和检测区矩阵分布，所述疏水边界向检测区和定位区的中心凹陷。
4.根据权利要求1所述的生物纸芯片，其特征在于：所述定位区和检测区沿纸芯片边缘呈圆周均匀分布，所述疏水边界向检测区和定位区的中心凹陷。
5.根据权利要求1所述的生物纸芯片，其特征在于：所述检测区设有4个或5个或6个或8个，所述定位区设有1个；所述生物纸芯片的面积为36-40mm2，所述检测区和定位区的面积均为1.7-2.0mm2。
6.根据权利要求1所述的生物纸芯片，其特征在于：所述检测指标底物层为针对过氧化氢、pH值、唾液酸酐酶、白细胞酯酶、乙酰氨基β葡萄糖苷酶、脯氨酸氨基肽酶、β葡萄糖醛酸苷酶、凝固酶检测的底物层。
7.根据权利要求6所述的生物纸芯片，其特征在于：
所述氧化氢底物层包括氧化物酶、4-氨基安替比林、2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸；
所述pH检测底物层为溴甲酚绿；
所述唾液酸苷酶检测底物层包括5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐和2-甲氧基-4-吗啉重氮苯氯化锌；
所述白细胞酯酶检测底物层为5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐；
所述乙酰氨基-β-葡萄糖苷酶底物层为4-硝基苯基-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷；
所述脯氨酸氨基肽酶底物层为L-脯氨酸对硝基苯胺三氟乙酸盐；
所述β葡萄糖醛酸苷酶底物层为5-溴-4-氯-3-吲哚葡萄糖醛酸苷盐；
所述凝固酶检测底物层包括甘氨酰精氨酰-4-甲氧基-β-萘酰胺盐酸盐和2-甲氧基-4-吗啉重氮苯氯化锌。
8.一种高通量多联检测微孔板装置，其特征在于，包括多孔微孔板和权利要求1-7任一所述的生物纸芯片，所述生物纸芯片嵌设在多孔微孔板的单微孔内。
9.一种高通量多联检测微孔板装置的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
绘图，绘制纸芯片图案；
打印，将绘制的图案通过喷蜡打印在空白滤纸上，图案区域为检测区和定位区；
融蜡，将打印含蜡的滤纸在进行加热，蜡融化并渗透至滤纸，2528℃冷却，得到含有亲水区和疏水区的预处理纸芯片；
加厚，沿疏水区再喷涂一层蜡，使疏水区的厚度大于亲水区的厚度；
组装，预处理纸芯片嵌置到微孔板的单微孔底部，配制检测底物试剂，并将检测底物试剂喷射在纸芯片上对应的检测区，形成所述检测底物层；将荧光粉或甲基紫喷射到定位区，形成所述指示层；得到权利要求1-7任一所述的生物纸芯片；
干燥，将组装好的微孔板放入37℃培养箱干燥30分钟，25-28℃冷却，得到权利要求8所述的高通量多联检测微孔板装置。
10.一种用于阴道炎症多联检测的试剂盒，包括权利要求1-7任一所述的生物纸芯片；或包含权利要求8所述的高通量多联检测微孔板装置，或包括权利要求9所述方法制作的高通量多联检测微孔板装置。
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