CN114315954A - 一种活性大分子蚕丝胶蛋白液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于蚕丝胶蛋白技术领域，公开了一种活性大分子蚕丝胶蛋白液及其制备方法。所述制备方法包括将削口蚕茧与温热纯净水混合浸泡；将蚕茧和温热水一起用微波辐照加热搅拌至65～79℃后；启动超声波模组，并维持20～40分钟超声处理后，冷却抽出滤液，过滤后得到蚕丝胶蛋白水溶液；冷却后，将蚕丝胶蛋白水溶液冷冻凝胶；常温解冻化冰，并保留水液；取絮凝胶，加防腐剂，充分均质；测定蚕白质固含量到指定浓度，分装入桶，再灭菌得到活性大分子蚕丝胶蛋白液。本发明能提高提取效率，分离提取工艺简单易操作，又能得到大分子的蚕丝胶蛋白，并且保留了完整的结构，具有生物活性，可大批量规模化生产。
Description
技术领域
本发明涉及蚕丝胶蛋白技术领域，更具体地，涉及一种活性大分子蚕丝胶蛋白液及其制备方法。
背景技术
蚕茧主要由蚕丝胶蛋白和蚕丝素蛋白组成，蚕丝胶蛋白包裹在丝素纤维表层。蚕丝胶蛋白是一种天然的大分子蛋白，主要由蚕的丝腺分泌，促细胞粘附和增值活性，更低的免疫原性，以及独特的原位荧光性，被广泛应用于织物后整理涂层、化妆品添加剂、食品、医药、功能性生物材料领域。
蚕丝胶蛋白是球状蛋白，其多肽链通过紧密折叠，输水的氨基酸侧链位于分子内部，亲水的氨基酸侧链则暴露在外，因此具有很好的水溶性。蚕丝胶蛋白和水接触时会自动吸水而膨胀变软,经无限膨润后就能溶于水，一般情况下,蚕丝素蛋白在水中只能膨润而不溶解，这是蚕丝胶蛋白与蚕丝素蛋白的区别，现有技术常常根据该特征来分离这两种蛋白。另外蚕丝胶蛋白的分子量大小影响着其溶解性，小分子的蚕丝胶蛋白溶于冷水，大分子蚕丝胶蛋白溶于热水，利用该特点，可以控制分离提取的温度以得到大分子的蚕丝胶蛋白。
用于提取蚕茧中蚕丝胶蛋白的方法主要有高温高压法、加热煮沸法、碳酸氢钠法、尿素法、酶解法等等。
现有技术公开了一种桑蚕丝胶蛋白的提取工艺，先用双氧水和碳酸氢铵组成的清洗还有活性氧、活性氮组成的提取剂对桑蚕进行预处理，然后在70-80℃，pH8-9的条件下煮练脱胶，取得蚕丝，最后在低温的环境下进行凝胶静置，再离心或者调节丝胶水溶液pH值至6-7即可得到蚕丝胶蛋白凝胶。
现有技术公开了一种弱碱微波水解蚕茧的方法。该现有技术先将蚕茧进行清洗烘干、切割分离处理，然后进行一次水解脱胶得到丝胶肽蛋白，二次水解提取得到丝素肽蛋白。一次水解脱胶的条件是将蚕茧片与由碳酸氢钠和氯化钠混合的弱碱混合液混合，放入微波反应器中在80℃、常压下水解110-130min，接着抽出粗丝胶肽溶液进行超滤过滤。
现有技术公开了一种蚕丝蛋白的提取方法，分离提取得到蚕丝蛋白溶液和蚕丝蛋白胶体。该工艺先将蚕丝蛋白原料溶于95～100℃的CaCl2溶液中，得到溶解处理液，后过滤得到蚕丝蛋白/CaCl2水溶液和未溶胶状物。清洗未溶胶状物得到蚕丝蛋白胶体，即丝胶蛋白胶体，即蚕丝胶蛋白胶体。将蚕丝蛋白胶体进行加工制备得到成品。该方法提取条件温和，有利于提高蚕丝蛋白的提取率，减轻提取条件对蚕丝蛋白结构与性能的影响，但是提取温度为95～100℃，蚕丝胶蛋白于该温度下结构容易被破坏，失去生物活性。
现有的分离提取蚕丝胶蛋白的方法最后得到的大多是水解后的丝胶肽蛋白，肽链较短，没有保留住蚕丝胶蛋白的完整结构，得不到分子量大的蚕丝胶蛋白，在酸碱或高温的条件下，甚至会破坏蚕丝胶蛋白的生物活性，添加较多的化学原料，容易导致蚕丝胶蛋白不纯，蛋白活性散失。
特别是从茧壳一次性提取浓度一致的蚕丝胶蛋白水溶液，降低成本，提高低浓度活性蚕丝胶蛋白水溶液的防腐性，使之成为食品和日化日化洗护领域可批量的核心原料，具有重要的商业价值。
发明内容
本发明为克服上述现有技术所述的从蚕茧中分离提取蚕丝胶蛋白存在纯度不高，容易被水解成短肽链的丝胶肽蛋白，无法得到长肽链大分子结构的蚕丝胶蛋白，存在失去物理活性的风险等缺陷，提供一种活性大分子蚕丝胶蛋白液。
同时，提供一种活性大分子蚕丝胶蛋白液的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：
一种活性大分子蚕丝胶蛋白液的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、将洁净的削口蚕茧与温热纯净水混合浸泡2～3小时；
步骤二、将步骤一充分吸水的蚕茧和温热水一起倒入具有微波加热功能的搅拌炉中，用微波辐照加热搅拌至65～79℃后；启动超声波模组，并维持20～40分钟超声处理后，冷却至30～40℃，抽出滤液，过滤后得到蚕丝胶蛋白水溶液；
步骤三、冷却后，将蚕丝胶蛋白水溶液置于-15～-20℃冷库冷冻12～24小时凝胶；
步骤四、常温解冻化冰，并保留水液；
步骤五、取絮凝胶，充分均质；
步骤六、在均质后的蚕丝胶蛋白凝胶加入化冰水溶液，按需要的蛋白浓度比调制，充分均质，测定蚕白质固含量到指定浓度化冰水溶液；
步骤七、分装入桶，再灭菌得到活性大分子蚕丝胶蛋白液。
本发明创新使用微波加超声波的方式，在65～79摄氏度的温度下，加热和分离丝胶蛋白，更大幅的保留了丝胶蛋白在适当水浴温度，进行物理驳离，获得更多的天然大分子状态丝胶蛋白。
先将蚕茧壳表层的丝胶蛋白浸润在热水中，吸水微膨胀，再置于搅拌炉中，用微波加热到65-79℃，利用微波热效应，使吸水的丝胶吸收微波后，与丝素蛋白的分子结合力减小。在维持温度和搅拌状态下，启动超声波对水液做功，利用超声波空化效应，进一步充分从丝素蛋白表层剥离丝胶蛋白。
再通过冷凝浓缩蚕丝胶蛋白，将分离的蚕丝胶蛋白液分离成高浓度凝胶，和低浓度化冰丝胶水溶液；并在高浓度的蚕丝胶蛋白液中添加防腐剂，使防腐剂与蚕丝胶蛋白更充分结合，再兑入到低浓度化冻丝胶水溶液中，提高了在较低蛋白浓度溶液中，活性蛋白的防腐性；并通过高、低浓度的蚕丝蛋白液之间的勾兑，保证了蚕丝胶蛋白液浓度的出厂品质一致性。
优选地，步骤一将洁净的削口蚕茧置于与可保持45℃的恒温热浸池用温热纯净水混合浸泡2～3小时；
优选地，步骤一中温热纯净水的温度30～45℃。
优选地，步骤二搅拌炉的微波频率为915～2450MHz，超声波频率为20kHz～100Kh。
优选地，步骤二搅拌炉的微波频率为1850～2450MHz，超声波频率为20～60kHz，保持温度为65～70℃，超声波时间为20～30min。
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优选地，步骤二搅拌炉的微波频率为2450MHz，超声波频率为60kHz，保持温度为65℃，超声波时间为30min。
优选地，步骤二搅拌转速为10-30rpm。
优选地，步骤一中洁净的削口蚕茧和水的质量比为3：30～200。
优选地，步骤四中常温解冻温度为28℃。
优选地，步骤六、通过调节化冰水溶液与蚕丝胶蛋白凝胶比例，保证同一批次生产的蚕丝胶蛋白液的蛋白固含量出品一致性。
优选地，步骤五中加入防腐剂后充分均质；所述防腐剂为苯氧乙醇、植物防腐剂或对羟基苯乙酮加A19混合型防腐剂中的一种。
优选地，步骤七的灭菌方法为伽马射线低温辐照。
一种所述制备方法制备得到活性大分子蚕丝蛋白液。
与现有技术相比，本发明技术方案的有益效果是：
本发明采用微波和超声波提取蚕茧中的蚕丝胶蛋白，微波可以直接穿透蚕茧，使原料里外同时加热，降低蚕丝胶蛋白与丝素蛋白分子结合力；通过超声波可以空化效应可更充分的剥离蚕丝胶蛋；这种工艺结合可以在79摄氏度以下低温环境下剥离蚕丝胶蛋白，在低于破坏蛋白质活性的温度条件下迅速从蚕茧上剥离，与高压高温，酸碱提取等方法相比，既能缩短提取时间，提高提取效率，分离提取工艺简单易操作，成本低，又能得到大分子的蚕丝胶蛋白，并且保留了完整的结构，具有蛋白质活性，可大批量规模化生产。
本发明相比常规的分离方式，具有功耗低、防腐性强，蚕丝胶蛋白活性高，一次性加工即可获得指定浓度的蚕丝胶蛋白水溶液。解决了在生产蚕丝胶蛋白水溶液原料领域，提取易失活、浓度难均衡、功耗高、成本高、防腐难等一系列技术难题。
本发明在高浓度蚕丝胶蛋白凝胶中添加防腐剂，再与低浓度蚕丝胶化冰水混溶均质，既能降低防腐剂在低浓度蚕丝胶蛋白水溶液中，无法有效分散，又通过高浓度的丝胶凝胶与低浓度水液的比例调合，可配出按工业需业，指定浓度的、具有高活性的蚕丝胶蛋白液，更利于储存与运输，能直接应用于日化、医疗、食品等行业，例如在日化行业可以代替护发产品中的硅油，也可以用作护肤成分的蛋白载体，使产品更加亲肤，天然，安全。
在不添加防腐剂的情况，还可以做为新型蛋白食品原料添加，配制成各种啫喱与凝胶蛋白食品。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。以下实施例和对比例所使用的原料均来源于市购。
洁净的削口蚕茧由以下步骤制备得到：
S1，结茧步骤包括：在桑蚕即将结茧前，利用结茧架平躺悬于养蚕盘上端，距离养蚕盘的桑叶高度为0.5～2cm，便于强壮的熟蚕抬头结茧，同时避免蚕的粪便与桑叶残渣沾在蚕茧上，结茧的时候不使用任何的催熟剂，避免桑蚕丝腺体残留化学药剂而污染蚕丝蛋白。
S2，挑茧步骤包括：待桑蚕结茧完成后，将蚕茧从结茧架上取下，通过蚕茧透视灯对蚕茧进行挑选，将蚕茧中有粪便或黑点污染的挑出；
S3，削茧步骤包括：将挑选出来的蚕茧置于-5～-20℃环境下，冷冻1～24h后，分批去除，利用削茧机进行削口取出蚕蛹，得到削口蚕茧，在削茧的过程中，再次检测蚕茧壳是否有粪便或残渣污染，清洗干净，待用。采用冷冻法进行削茧，避免削茧时削到蚕蛹，导致蚕蛹体液污染蚕茧。
实施例1
一种活性大分子蚕丝胶蛋白液的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、将洁净的削口蚕茧与45℃的温热纯净水混合浸泡2小时，不断搅拌；其中，洁净的削口蚕茧和水的质量比为3：150。
步骤二、将步骤一充分吸水的蚕茧和温热水一起倒入具有微波加热功能的搅拌炉中，用微波辐照加热搅拌至65℃后；启动超声波模组，并维持30分钟超声处理后，冷却至30℃，抽出滤液，过滤后得到蚕丝胶蛋白水溶液；其中，搅拌炉的微波频率为2450MHz，超声波频率为60kHz，搅拌转速为30rpm。
步骤三、冷却后，将蚕丝胶蛋白水溶液置于-20℃冷库冷冻12小时凝胶；
步骤四、于28℃温度下解冻化冰，并保留水液；
步骤五、取絮凝胶，加防腐剂，充分均质；
步骤六、将加入苯氧乙醇防腐剂均质后的蚕丝胶蛋白凝胶与化冰水溶液，充分均质，测定蚕白质固含量到指定浓度0.4％；
步骤七、分装入桶，整桶放入伽马射线低温辐照舱灭菌，得到活性大分子蚕丝胶蛋白液。
取实施例1得到的活性大分子蚕丝胶蛋白液进行性能检测。
经过SDS-PAGE电泳法对蚕丝胶蛋白分子量大小进行检测，检测结果如表4所示。
采用4～8摄氏度冷冻方法，对蚕丝胶蛋白的蛋白质凝胶活性进行检查，检测结果如表4所示。
采用凯氏定氮法测定蚕丝胶蛋白的含量，检测结果如表4所示。
经计算，蚕茧原料中提取得蚕丝胶蛋白的得率，结果如表4所示。
实施例2
一种活性大分子蚕丝胶蛋白液的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、将洁净的削口蚕茧与30℃温热纯净水混合浸泡3小时，持续搅拌；其中，洁净的削口蚕茧和水的质量比为3：30。
步骤二、将步骤一充分吸水的蚕茧和温热水一起倒入具有微波加热功能的搅拌炉中，用微波辐照加热搅拌至79℃后；启动超声波模组，并维持20分钟超声处理后，冷却至40℃，抽出滤液，过滤后得到蚕丝胶蛋白水溶液；其中，搅拌炉的微波频率为2450MHz，超声波频率为20kHz，搅拌转速为10rpm。
步骤三、冷却后，将蚕丝胶蛋白水溶液置于-15℃冷库冷冻24小时凝胶；
步骤四、于25℃解冻化冰，并保留水液；
步骤五、取絮凝胶，加防腐剂，充分均质；
步骤六、将加入植物防腐剂均质后的蚕丝胶蛋白凝胶与化冰水溶液，充分均质，测定蚕白质固含量到指定浓度2％；
步骤七、分装入桶，整桶放入伽马射线低温辐照舱灭菌，得到活性大分子蚕丝胶蛋白液。
取实施例2得到的活性大分子蚕丝胶蛋白液进行性能检测。
经过SDS-PAGE电泳法对蚕丝胶蛋白分子量大小进行检测，检测结果如表4所示。
采用4～8摄氏度冷冻方法，对蚕丝胶蛋白的蛋白质凝胶活性进行检查，检测结果如表4所示。
采用凯氏定氮法测定蚕丝胶蛋白的含量，检测结果如表4所示。
经计算，蚕茧原料中提取得蚕丝胶蛋白的得率，结果如表4所示。
实施例3
一种活性大分子蚕丝胶蛋白液的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、将洁净的削口蚕茧与35℃温热纯净水混合浸泡2小时，持续搅拌；其中，洁净的削口蚕茧和水的质量比为3：200。
步骤二、将步骤一充分吸水的蚕茧和温热水一起倒入具有微波加热功能的搅拌炉中，用微波辐照加热搅拌至70℃后；启动超声波模组，并维持20分钟超声处理后，冷却至30℃，抽出滤液，过滤后得到蚕丝胶蛋白水溶液；其中，搅拌炉的微波频率为1850MHz，超声波频率为60kHz，搅拌转速20rpm。
步骤三、冷却后，将蚕丝胶蛋白水溶液置于-15℃冷库冷冻24小时凝胶；
步骤四、于28℃解冻化冰，并保留水液；
步骤五、取絮凝胶，充分均质；
步骤六、将均质后的蚕丝胶蛋白凝胶与化冰水溶液，充分均质，测定蚕白质固含量到指定浓度0.4％；
步骤七、分装入桶，整桶放入伽马射线低温辐照舱灭菌，得到活性大分子蚕丝胶蛋白液。
取实施例3得到的活性大分子蚕丝胶蛋白液进行性能检测。
经过SDS-PAGE电泳法对蚕丝胶蛋白分子量大小进行检测，检测结果如表4所示。
采用4～8摄氏度冷冻方法，对蚕丝胶蛋白的蛋白质凝胶活性进行检查，检测结果如表4所示。
采用凯氏定氮法测定蚕丝胶蛋白的含量，检测结果如表4所示。
经计算，蚕茧原料中提取得蚕丝胶蛋白的得率，结果如表4所示。
实施例4
实施例4与实施例1的步骤和工艺条件相似，不同之处在于：
步骤二、将步骤一充分吸水的蚕茧和温热水一起倒入具有微波加热功能的搅拌炉中，用微波辐照加热搅拌至75℃后；启动超声波模组，并维持30分钟超声处理后，冷却至40℃，抽出滤液，过滤后得到蚕丝胶蛋白水溶液；其中，搅拌炉的微波频率为915MHz，超声波频率为100kHz，搅拌转速为30rpm。
实施例5
实施例5与实施例1的步骤和工艺条件相似，不同之处在于：
步骤二、将步骤一充分吸水的蚕茧和温热水一起倒入具有微波加热功能的搅拌炉中，用微波辐照加热搅拌至72℃后；启动超声波模组，并维持30分钟超声处理后，冷却至40℃，抽出滤液，过滤后得到蚕丝胶蛋白水溶液；其中，搅拌炉的微波频率为2000MHz，超声波频率为65kHz，搅拌转速为30rpm。
对比例1
一种蚕丝胶蛋白的制备方法，包括如下步骤：
将洁净的削口蚕茧切割成物理性状为1～2mm的蚕茧片；将蚕茧片与由碳酸氢钠和氯化钠混合的弱碱混合液按1：8的质量比加入到微波反应器中，然后在80℃温度的常压下水解110min，水解后得到粗丝胶肽溶液和蚕丝蛋白纤维固体，抽出粗丝胶肽溶液并进行超滤过滤，得到蚕丝胶肽蛋白。
将蚕丝胶肽蛋白用于品质检测等，结果如表4所示。
对比例2
本对比例与实施例1的步骤和工艺条件相似，不同之处在于：
步骤二、将步骤一充分吸水的蚕茧和温热水一起倒入具有微波加热功能的搅拌炉中，用微波辐照加热搅拌至65℃后，维持30分钟后，冷却至40℃，抽出滤液，过滤后得到蚕丝胶蛋白水溶液；其中，搅拌炉的微波频率为2450MHz，搅拌转速为30rpm。
将蚕丝胶肽蛋白用于品质检测等，结果如表4所示。
对比例3-15
对比例3-6的方案和工艺与实施例1相似，不同之处在于如表1所示。
表1对比例3-6的工艺条件
备注：表1中“/”表示与实施例1相同
对比例7-15的方案和工艺与实施例1相似，不同之处在于如表1所示。
表2对比例7-15的工艺条件
备注：表2中“/”表示与实施例1相同
对比例16-21
对比例16-21的方案和工艺与实施例1相似，不同之处在于如表3所示。
表3对比例16-21的工艺条件
| 工艺条件 | 对比例16 | 对比例17 | 对比例18 | 对比例19 | 对比例20 | 对比例21 |
| 步骤二超声波频率kHz | 10 | 15 | 110 | 120 | / | / |
| 超声波时间min | / | / | / | / | 10 | 45 |
备注：表3中“/”表示与实施例1相同
对比例22
对比例22的方案和工艺与实施例1相似，不同之处在于：
步骤一、将洁净的削口蚕茧加热烘干至烘干率为55％；将烘干的削口蚕茧和水的质量比为3：150混合后，立即一起倒入具有微波加热功能的搅拌炉中等。
对比例23
对比例22的方案和工艺与实施例1相似，不同之处在于：
步骤二，将步骤一充分吸水的蚕茧和温热水一起倒入煮锅中进行煮练脱胶，浴比1：60，温度控制在70～80℃，pH8～9、保持8小时，脱胶过程需不断搅拌，降低丝胶水的浓度差，脱胶完毕取出蚕丝。
将蚕丝胶肽蛋白用于品质检测等，结果如表4所示。
表4实施例1-5与对比例1-23产品性能测试结果
由表4中实施例和对比例的结果可知，本发明的创新方案对蚕丝胶蛋白的提取率高达20.8％以上，且保留了完整的大分子结构与生物活性，分子量分布为75％的蚕丝胶蛋白分子量>5万Da。表4中所述丝胶蛋白凝胶浓度为丝胶蛋白活性检测方法中的丝胶蛋白凝胶浓度，在2％的凝胶浓度获得了良好的凝胶效果。
从对比例1可以看出，该方案制备的是丝胶肽溶液，分子量小，不可凝胶。
从对比例2的没有超声波处理的工艺结果来看，提取的丝胶蛋白分子量主要分布在大于5万以上的比例有显著下降，蚕丝胶蛋白的提取率仅为17.2％，可见，超声波处理对丝胶蛋白活性和得率有显著影响。
从对比例3～6可知，茧水质量比例对提取率有显著的影响，当水量少时，蚕丝胶蛋白在水中的饱和度较高，影响了蚕丝胶蛋白在水中的溶析率。然而，也并用水含量越多越好，当用水量超过1:200后，对蛋白质得率出现了显著下降后维持稳定。
从对比例7-15可知，步骤二的炉内微波加热温度、微波频率，对蚕丝胶蛋白分子量、蛋白质得率等有显著影响，同时，丝胶蛋白凝胶浓度也发生了变化，活性显著变差。
从对比例16～21可知，步骤二中超声波频率和超声时间也在重要的工艺条件之一。在维持温度和搅拌状态下，启动超声波对水液做功，利用超声波空化效应，进一步充分从丝素蛋白表层剥离丝胶蛋白，然而，在对比例16-21的不适宜的工艺条件下，效果反而变差。
经对比例22的实验分析可知，将蚕茧加热烘干至烘干率为55％，在进行处理，其获得的蚕丝胶蛋白得率也并不理想，相比实施例1显著下降超过3.5％，且蛋白质的分子量也很差。
经对比例23的实验分析可知，在pH8～9的弱碱环境中长达8小时的加热煮练，并不能有效的提高蚕丝胶蛋白得率，蛋白质分子量和活性也显著下降等。
显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种活性大分子蚕丝胶蛋白液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、将洁净的削口蚕茧与温热纯净水混合浸泡2～3小时；
步骤二、将步骤一充分吸水的蚕茧和温热水一起倒入具有微波加热功能的搅拌炉中，用微波辐照加热搅拌至65～79℃后；启动超声波模组，并维持20～40分钟超声处理后，冷却至30～40℃，抽出滤液，过滤后得到蚕丝胶蛋白水溶液；
步骤三、冷却后，将蚕丝胶蛋白水溶液置于-15～-20℃冷库冷冻12～24小时凝胶；
步骤四、常温解冻化冰，并保留水液；
步骤五、取絮凝胶，充分均质；
步骤六、在均质后的蚕丝胶蛋白凝胶加入化冰水溶液，按需要的蛋白浓度比调制，充分均质，测定蚕白质固含量到指定浓度化冰水溶液；
步骤七、分装入桶，再灭菌得到活性大分子蚕丝胶蛋白液。
2.根据权利要求1所述活性大分子蚕丝胶蛋白液的制备方法，其特征在于，步骤一中温热纯净水的温度30～45℃。
3.根据权利要求1所述活性大分子蚕丝胶蛋白液的制备方法，其特征在于，步骤二搅拌炉的微波频率为915～2450MHz，超声波频率为20～100kHz。
4.根据权利要求1所述活性大分子蚕丝胶蛋白液的制备方法，其特征在于，步骤二搅拌炉的微波频率为1850～2450MHz，超声波频率为20～60kHz，保持温度为65～70℃，超声波时间为20～30min。
5.根据权利要求4所述活性大分子蚕丝胶蛋白液的制备方法，其特征在于，步骤二搅拌炉的微波频率为2450MHz，超声波频率为60kHz，保持温度为65℃，超声波时间为30min。
6.根据权利要求1所述活性大分子蚕丝胶蛋白液的制备方法，其特征在于，步骤二搅拌转速为10-30rpm。
7.根据权利要求1所述活性大分子蚕丝胶蛋白液的制备方法，其特征在于，步骤一中洁净的削口蚕茧和水的质量比为3：30～200。
8.根据权利要求1所述活性大分子蚕丝胶蛋白液的制备方法，其特征在于，步骤四中常温解冻温度为28℃。
9.根据权利要求1所述活性大分子蚕丝胶蛋白液的制备方法，其特征在于，步骤五中加入防腐剂后充分均质；所述防腐剂为苯氧乙醇、植物防腐剂或对羟基苯乙酮加A19混合型防腐剂中的一种。
10.根据权利要求1～9任意一项所述制备方法制备得到活性大分子蚕丝蛋白液。
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