CN114315923A - 一种柳兰水提物中获得月见草素b有效部位方法及应用 - Google Patents
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Abstract
一种柳兰水提物中获得月见草素B有效部位方法及应用，属于柳兰有效成分提取与应用技术领域。对柳兰全草依次进行乙醇水溶液回流提取、浓缩、干燥获得浸膏，浸膏经蒸馏水分散后依次采用乙酸乙酯萃取和异丁醇萃取，经两轮萃取后的剩余浸膏浓缩、干燥获得柳兰月见草素B有效部位，通过对柳兰乙醇水溶液的粗萃取，分离出乙酸乙酯有效部位与异丁醇有效部位后，将剩余的成分作为柳兰月见草素B有效部位，该部分未经过石油醚接触，月见草素B含量高，并且其中至少包含一种能够对月见草素B有显著增效作用的成分，两特征相辅相成，获得的月见草素B有效部位具有显著的调节免疫系统作用。
Description
技术领域
一种柳兰水提物中获得月见草素B有效部位方法及应用，属于柳兰有效成分提取与应用技术领域。
背景技术
柳兰水提物中的活性成分月见草素B能够激活单核细胞、巨噬细胞和中性粒细胞，导致细胞内钙离子外流增加，产生活性氧（ROS）和细胞因子，并导致白细胞产生趋化作用。月见草素B还能够诱导白细胞介素-8（IL-8）的产生以及小鼠腹膜中性粒细胞的募集，月见草素B在调节固有免疫系统中的吞噬细胞对病原体和肿瘤细胞的破坏发挥了关键的作用。因此，柳兰的水提物和月见草素B具有调节固有免疫的功能。此外，Spiridonov N A等报道柳兰中的酚类化合物能抑制小鼠移植瘤的生长。Kim等发现柳兰的水提物和乙醇提取物均具有除皱和改善肌肤弹性的作用。海因斯等报道柳兰的水提物和10%甘油提取物均具有抗痤疮的作用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：克服现有技术的不足，提供一种具有更强调节免疫作用与肿瘤细胞破坏效果，以及对大鼠性器官发育具有更强促进效果的柳兰水提物中获得月见草素B有效部位方法及应用。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种柳兰水提物中获得月见草素B有效部位的方法，其特征在于：对柳兰全草依次进行乙醇水溶液回流提取、浓缩、干燥获得浸膏，浸膏经蒸馏水分散后依次采用乙酸乙酯萃取和异丁醇萃取，经两轮萃取后的剩余浸膏浓缩、干燥获得柳兰月见草素B有效部位。
发明人在对柳兰有效成分的提取中发现，柳兰的水提物可影响雄性大鼠性器官的发育，经口服给药后，雄性大鼠的精囊重量减少，但是经石油醚（沸程60～90℃）提取的柳兰粗提物，对雄性大鼠的性器官无显著的影响，在此基础上，本申请通过对柳兰乙醇水溶液的粗萃取，分离出乙酸乙酯有效部位与异丁醇有效部位后，将剩余的成分作为柳兰月见草素B有效部位，该部分未经过石油醚接触，月见草素B含量高，并且其中至少包含一种能够对月见草素B有显著增效作用的成分，两特征相辅相成，获得的月见草素B有效部位具有显著的调节免疫系统作用，提高吞噬细胞对病原体和肿瘤细胞的破坏作用，得益于此，可应用于一直HIV-1病毒活性，同时可见效果中包括对大鼠性器官的发育促进作用。
优选的，所述的乙醇水溶液中乙醇体积浓度为78~98%。
进一步优选的，所述的乙醇水溶液中乙醇体积浓度为98%。
采用优选的浓度的乙醇水溶液能够更为精准的提取柳兰水提物中的月见草素B有效部位及其增效成分，并且在一定程度上能够抑制其他干扰酶或干扰成分的浸出，最终获得的有效部位具有更强的免疫促进作用。
优选的，所述的回流提取采用超声波辅助回流提取。
进一步优选的，所述的超声波辅助回流提取具体操作为：柳兰全草加入乙醇水溶液超声波提取0.5~3h，过滤，滤渣加入乙醇水溶液回流1~3次，合并提取液。
能够保证充分获得月见草素B有效部位。
优选的，所述的柳兰全草在回流提取前进行粉碎。提高提取率。
一种以上所述的柳兰水提物中获得的月见草素B有效部位的应用，其特征在于：在抗肿瘤药物中的应用。
优选的，所述的抗肿瘤药物为柳兰水提物中月见草素B有效部位与药物辅料制成微球注射剂或胶囊口服剂。
优选的药物应用方法能够保证月见草素B在靶向部位的释放，从而保护月见草素B，提高月见草素B及其增效成分的释放效果。
与现有技术相比，本发明所具有的有益效果是：通过所述萃取方法排出杂项的方式，精确留下月见草素B有效部位，同时还利用其它残留成分提高了月见草素B的效果，得以使其能够应用于肿瘤等治疗，或提高机体免疫力。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明，实施例1是本发明的最佳实施例。
实施例1
一种柳兰水提物中获得月见草素B有效部位的方法，对柳兰全草粉碎后，采用体积浓度98%的乙醇水溶液超声波辅助回流提取、浓缩、干燥获得浸膏，其中，超声波辅助回流提取具体操作为：超声波提取2h，过滤，滤渣加入乙醇水溶液回流2次，每次回流0.5h，合并提取液。
浸膏经蒸馏水分散后依次采用乙酸乙酯萃取和异丁醇萃取，经两轮萃取后的剩余浸膏浓缩、干燥获得柳兰月见草素B有效部位。
实施例2
一种柳兰水提物中获得月见草素B有效部位的方法，在实施例1的基础上，采用78%体积浓度的乙醇水溶液，超声波辅助回流提取阶段采用所述的回流采用3次。其他条件与实施例1相同。
实施例3
一种柳兰水提物中获得月见草素B有效部位的方法，在实施例1的基础上，采用体积浓度98%的乙醇水溶液，不采用超声波辅助，回流采用5次，每次1h，其他条件与实施例1相同。
对比例1
一种柳兰水提物中获得月见草素B有效部位的方法，在实施例1的基础上，浸膏经蒸馏水分散后依次采用石油醚、乙酸乙酯萃取和异丁醇萃取，其他条件与实施例1相同。
对比例2
一种柳兰水提物中获得月见草素B有效部位的方法，在实施例1的基础上，浸膏经蒸馏水分散后依次采用石油醚和乙酸乙酯萃取，其他条件与实施例1相同。
性能测试
对实施例与对比例获得的柳兰水提物中获得月见草素B有效部位作为受试药物进行性能测试。
采用MTT法检测月见草素B对人肿瘤细胞的抑制活性，取实施例所得月见草素B有效部位加入DMSO溶解，检测其对人结肠癌HCT-8和人卵巢癌A2780细胞生长抑制性能。
实验方法：将对数生长期的细胞，用0.25%胰酶-EDTA消化后，配制成一定浓度的单细胞悬液，根据细胞生长速度的差异，按800~2000个/孔接种于96孔板，每孔加入细胞悬液100µL。24h后，加入含不同浓度受试化合物及相应溶剂对照的新鲜培养基，每孔加100µL（DMSO终浓度<0.1%），每种受试化合物设5~7个剂量组，每组至少设3个平行孔，于37℃继续培养72h后，弃上清液，每孔加入100µL新鲜配制的含0.5mg/mL MTT的无血清培养基，继续培养4h，弃上清液后，每孔加入200µL DMSO溶解MTT甲簪沉淀，微型振荡器振荡混匀，用酶标仪在参考波长450nm，检测波长570nm条件下测定光密度值（OD），以溶剂对照处理的肿瘤细胞为对照组，用以下公式计算受试化合物对肿瘤细胞的抑制率，并按中效方程计算IC50：抑制率=（对照组平均OD值－给药组平均OD值）÷对照组平均OD值×100%。将实施例与对比例获得的月见草素B有效部位进行体外肿瘤细胞毒活性筛选，结果见表1。（μg/ml）
表1 性能测试结果
通过表2可以看出，柳兰水提物月见草素B有效部位对肿瘤细胞具有较好的抑制、破坏作用，而在对比例采用其他萃取方式，浸膏中残留大量其他多余有效成分情况下，反而会对月见草素B的抑制作用产生不利影响，证明本发明所述的柳兰水提物中获得月见草素B有效部位的方法具有特殊的筛选作用，特别适用于提高最终月见草素B的药物效果。
实施例4
一种实施例1柳兰水提物中获得的月见草素B有效部位的应用，将实施例所得月见草素B有效部位制备成微丸胶囊，微丸胶囊制备方法为：月见草素B有效部位与卵磷脂、牛黄胆酸钠和微晶纤维素混均，倒入78%体积浓度的乙醇水溶液搅匀获得软材，将软材倒入挤出机中挤出，经滚圆获得颗粒，挤出转速250r/min，滚圆转速800r/min，滚圆时间15min，干燥、过25目筛获得微丸，将微丸灌装入胶囊壳内，获得月见草素B有效部位微丸胶囊。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (8)
1.一种柳兰水提物中获得月见草素B有效部位的方法，其特征在于：对柳兰全草依次进行乙醇水溶液回流提取、浓缩、干燥获得浸膏，浸膏经蒸馏水分散后依次采用乙酸乙酯萃取和异丁醇萃取，经两轮萃取后的剩余浸膏浓缩、干燥获得柳兰月见草素B有效部位。
2.根据权利要求1所述的柳兰水提物中获得月见草素B有效部位的方法，其特征在于：所述的乙醇水溶液中乙醇体积浓度为78~98%。
3.根据权利要求2所述的柳兰水提物中获得月见草素B有效部位的方法，其特征在于：所述的乙醇水溶液中乙醇体积浓度为98%。
4.根据权利要求1所述的柳兰水提物中获得月见草素B有效部位的方法，其特征在于：所述的回流提取采用超声波辅助回流提取。
5.根据权利要求4所述的柳兰水提物中获得月见草素B有效部位的方法，其特征在于：所述的超声波辅助回流提取具体操作为：柳兰全草加入乙醇水溶液超声波提取0.5~3h，过滤，滤渣加入乙醇水溶液回流1~3次，合并提取液。
6.根据权利要求1所述的柳兰水提物中获得月见草素B有效部位的方法，其特征在于：所述的柳兰全草在回流提取前进行粉碎。
7.一种权利要求1~6任一项所述的柳兰水提物中获得的月见草素B有效部位的应用，其特征在于：在抗肿瘤药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的柳兰水提物中获得的月见草素B有效部位的应用，其特征在于：所述的抗肿瘤药物为柳兰水提物中月见草素B有效部位与药物辅料制成微球注射剂或胶囊口服剂。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2712495A1 (fr) * | 1993-11-16 | 1995-05-24 | Roussel Uclaf | Application de l'Óoenotheine B pour obtenir un médicament destiné au traitement des troubles liés à l'hyperandrogénie, et les compositions pharmaceutiques le contenant. |
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2022
- 2022-01-13 CN CN202210036315.6A patent/CN114315923A/zh not_active Withdrawn
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2712495A1 (fr) * | 1993-11-16 | 1995-05-24 | Roussel Uclaf | Application de l'Óoenotheine B pour obtenir un médicament destiné au traitement des troubles liés à l'hyperandrogénie, et les compositions pharmaceutiques le contenant. |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 曹素芳: "桉叶月见草素B的单体制备方法及其体内外稳定性研究" * |
| 田静: "柳兰化学成分与生物活性研究进展" * |
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