CN114315922A - 一种用hsccc分离大叶白蜡中女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷对照品的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于大叶白蜡树茎皮中化合物提取技术领域，公开了一种用HSCCC分离大叶白蜡树茎皮中女贞苷、橄榄苦苷和10‑羟基女贞苷的方法，包括以下步骤：将大叶白蜡树茎皮干燥粉碎；大叶白蜡树茎皮粉末甲醇回流提取，减压浓缩得提取物；提取物经RP‑C18色谱柱甲醇‑水梯度洗脱，合并相同组分得粗品；粗品继续纯化，溶剂体系氯仿‑正己烷‑甲醇‑水，进样，手动收集各个组分；各组分蒸干称重得到女贞苷、橄榄苦苷和10‑羟基女贞苷单体。本发明提供的方法可简单高纯度的制备得到单体化合物，比传统分离方法耗时短，重复性高。
Description
技术领域
本发明属于大叶白蜡树茎皮中化合物提取技术领域，具体涉及一种用 HSCCC分离大叶白蜡中女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷对照品的方法。
背景技术
大叶白蜡Fraxinus rhynchophylla，菊亚纲玄参目木犀科白蜡树属植物，又名亚生，木材硬而致密，为制家具的好材料。树生长较快，为城市绿化树种，全新疆均有分布。其皮性寒、味苦，具清热燥湿、收敛之效；其种子性温、味辛，具镇静安神之效，为常用维吾尔医药。研究表明，大叶白蜡主要化学成分为黄酮，香豆素，萜类，多酚等。目前其主要分离方法多采用传统色谱技术，硅胶柱色谱，凝胶柱色谱及大孔吸附树脂等。文献报道女贞苷和10-羟基女贞苷具有抗肿瘤活性，橄榄苦苷具有抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抑菌、降糖、降压、预防冠心病及动脉粥样硬化等方面的活性。
高速逆流色谱是一种新型液液配色谱，它的固定相和流动相都是液体，没有不可逆吸附，具有样品无损失、无污染、高效、快速和大制备量分离等优点。由于HSCCC与传统的分离纯化方法相比具有明显的优点，不需要固体支撑体，物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现，因而避免了因不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等，不仅使样品能够全部回收，回收的样品更能反映其本来的特性，特别适合于天然生物活性成分的分离。
综上，现有大叶白蜡所采用的传统色谱分离方法，耗时久，工作量大，重复性较差。利用HSCCC分离纯化可以弥补上述不足切未见此报道。
发明内容
本发明的目的是针对现有的问题，提供了一种用HSCCC分离大叶白蜡中女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷对照品的方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种用HSCCC分离大叶白蜡中女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷对照品的方法，包括如下步骤：
步骤一，将大叶白蜡树茎皮干燥粉碎得大叶白蜡树茎皮粉末备用；
步骤二，将大叶白蜡树茎皮粉末用甲醇回流提取，然后减压浓缩得提取物；
步骤三，将提取物经RP-C18色谱柱甲醇-水梯度洗脱，合并相同组分得粗品；
步骤四，粗品继续纯化，溶剂体系氯仿-正己烷-甲醇-水，进样，手动收集各个组分；
步骤五，将收集各组分蒸干称重得到女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷单体。
进一步地，步骤一中所述的干燥是在50℃的鼓风干燥箱中干燥至恒重。
进一步地，步骤二中所述的大叶白蜡树茎皮粉末用没过药材量的甲醇冷凝回流提取3次，每次1h，趁热纱布过滤，得提取液，40-50℃下用旋转蒸发仪浓缩得提取物。
进一步地，步骤三中所述的洗脱时，色谱柱上样后，依次用甲醇-水浓度为 20％、40％、60％、80％及纯甲醇洗脱。
进一步地，步骤四中所述的粗品继续纯化具体为：按照氯仿-正丁醇-甲醇- 水体积比为3-4:0.2-0.5:3:2配置溶液，充分震荡分层，上层为上相，上相为固定相，下层为下相，下相为流动相；取体积比1:1的上下两相溶剂5-10mL溶解粗品，过滤，进样，进行HSCCC分离，高速逆流色谱主机转速为800rpm，固定相的流速为30mL/min，流动相流速为2mL/min，分离温度为25℃，检测波长 280nm，收集各组分。
本发明相比现有技术具有以下优点：
本发明提供的采用HSCCC制备大叶白蜡树茎皮中女贞苷、橄榄苦苷和10- 羟基女贞苷的方法提取方法简单，成品纯度高。
附图说明
图1为本申请实施例1提供的逆流色谱图；
图2为本申请分离纯化得到的女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷的HPLC 色谱图。
具体实施方式
一种用HSCCC分离大叶白蜡中女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷对照品的方法，包括如下步骤：
步骤一，将大叶白蜡树茎皮在50℃的鼓风干燥箱中干燥至恒重，然后粉碎得大叶白蜡树茎皮粉末备用；
步骤二，将大叶白蜡树茎皮粉末用没过药材量的甲醇冷凝回流提取3次，每次1h，趁热纱布过滤，得提取液，40-50℃下用旋转蒸发仪浓缩得提取物；
步骤三，将提取物经RP-C18色谱柱甲醇-水梯度洗脱，依次用甲醇-水浓度为20％、40％、60％、80％及纯甲醇洗脱，合并相同组分得粗品；
步骤四，粗品继续纯化，按照氯仿-正丁醇-甲醇-水体积比为3-4:0.2-0.5:3:2 配置溶液，充分震荡分层，上层为上相，上相为固定相，下层为下相，下相为流动相；取体积比1:1的上下两相溶剂5-10mL溶解粗品，过滤，进样，进行 HSCCC分离，高速逆流色谱主机转速为800rpm，固定相的流速为30mL/min，流动相流速为2mL/min，分离温度为25℃，检测波长280nm，收集各组分；
步骤五，将收集各组分蒸干称重得到女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷单体。
为了对本发明做更进一步的解释，下面结合下述具体实施例进行阐述。
实施例1
一种用HSCCC分离大叶白蜡中女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷对照品的方法，包括如下步骤：
步骤一，将大叶白蜡树茎皮干燥粉碎；大叶白蜡树茎皮在50摄氏度鼓风干燥箱中干燥恒重；
步骤二，大叶白蜡树茎皮粉末甲醇回流提取，减压浓缩得提取物；大叶白蜡树茎皮粉末用没过药材量的甲醇冷凝回流提取3次，每次1h，趁热纱布过滤，得提取液，40-50℃下用旋转蒸发仪浓缩得提取物；
步骤三，提取物经RP-C18色谱柱甲醇-水梯度洗脱，合并相同组分得粗品。色谱柱甲醇水以此为20％、40％、60％、80％及纯甲醇洗脱，
步骤四，粗品经HSCCC纯化，溶剂体系氯仿-正己烷-甲醇-水，进样，手动收集各个组分，按照氯仿-正丁醇-甲醇-水体积比为4:0.2:3:2配置溶液，充分震荡分层，上层为上相，上相为固定相，下层为下相，下相为流动相；取体积比1:1的上下两相溶剂7.5mL溶解粗品，过滤，进样，进行HSCCC分离，高速逆流色谱主机转速为800rpm，固定相的流速为3mL/min，流动相流速为 2mL/min，分离温度为25℃，检测波长280nm，收集各组分，如图1所示，
步骤五，将收集各组分蒸干称重得到女贞苷(Ⅰ)、橄榄苦苷(Ⅱ)和10- 羟基女贞苷(Ⅲ)单体，HPLC图谱如图2所示。
实施例2
一种用HSCCC分离大叶白蜡中女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷对照品的方法，包括如下步骤：
步骤一，将大叶白蜡树茎皮干燥粉碎；大叶白蜡树茎皮在50摄氏度鼓风干燥箱中干燥恒重，
步骤二，大叶白蜡树茎皮粉末甲醇回流提取，减压浓缩得提取物；大叶白蜡树茎皮粉末用没过药材量的甲醇冷凝回流提取3次，每次1h，趁热纱布过滤，得提取液，40-50℃下用旋转蒸发仪浓缩得提取物，
步骤三，提取物经RP-C18色谱柱甲醇-水梯度洗脱，合并相同组分得粗品。色谱柱甲醇水以此为20％、40％、60％、80％及纯甲醇洗脱，
步骤四，粗品经HSCCC纯化，溶剂体系氯仿-正己烷-甲醇-水，进样，手动收集各个组分，按照氯仿-正丁醇-甲醇-水体积比为7:5:1:4配置溶液，充分震荡分层，上层为上相，上相为固定相，下层为下相，下相为流动相；取体积比 1:1的上下两相溶剂6mL溶解粗品，过滤，进样，进行HSCCC分离，高速逆流色谱主机转速为800rpm，固定相的流速为3mL/min，流动相流速为 2mL/min，分离温度为25℃，检测波长280nm，收集各组分，
步骤五，将收集各组分蒸干称重得到女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷单体。
实施例3
一种用HSCCC分离大叶白蜡中女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷对照品的方法，包括如下步骤：
步骤一，将大叶白蜡树茎皮干燥粉碎；大叶白蜡树茎皮在50摄氏度鼓风干燥箱中干燥恒重，
步骤二，大叶白蜡树茎皮粉末甲醇回流提取，减压浓缩得提取物；大叶白蜡树茎皮粉末用没过药材量的甲醇冷凝回流提取3次，每次1h，趁热纱布过滤，得提取液，40-50℃下用旋转蒸发仪浓缩得提取物；
步骤三，提取物经RP-C18色谱柱甲醇-水梯度洗脱，合并相同组分得粗品。色谱柱甲醇水以此为20％、40％、60％、80％及纯甲醇洗脱；
步骤四，粗品经HSCCC纯化，溶剂体系氯仿-正己烷-甲醇-水，进样，手动收集各个组分，按照氯仿-正丁醇-甲醇-水体积比为6:6:1:4配置溶液，充分震荡分层，上层为上相，上相为固定相，下层为下相，下相为流动相；取体积比 1:1的上下两相溶剂10mL溶解粗品，过滤，进样，进行HSCCC分离，高速逆流色谱主机转速为700rpm，固定相的流速为3mL/min，流动相流速为 2mL/min，分离温度为25℃，检测波长280nm，收集各组分；
步骤五，将收集各组分蒸干称重得到女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷单体。
实施例4
一种用HSCCC分离大叶白蜡中女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷对照品的方法，包括如下步骤：
步骤一，将大叶白蜡树茎皮干燥粉碎；大叶白蜡树茎皮在50摄氏度鼓风干燥箱中干燥恒重；
步骤二，大叶白蜡树茎皮粉末甲醇回流提取，减压浓缩得提取物；大叶白蜡树茎皮粉末用没过药材量的甲醇冷凝回流提取3次，每次1h，趁热纱布过滤，得提取液，40-50℃下用旋转蒸发仪浓缩得提取物；
步骤三，提取物经RP-C18色谱柱甲醇-水梯度洗脱，合并相同组分得粗品。色谱柱甲醇水以此为20％、40％、60％、80％及纯甲醇洗脱；
步骤四，粗品经HSCCC纯化，溶剂体系氯仿-正己烷-甲醇-水，进样，手动收集各个组分，按照氯仿-正丁醇-甲醇-水体积比为5:6:1:4配置溶液，充分震荡分层，上层为上相，上相为固定相，下层为下相，下相为流动相；取体积比1:1的上下两相溶剂5mL溶解粗品，过滤，进样，进行HSCCC分离，高速逆流色谱主机转速为800rpm，固定相的流速为3mL/min，流动相流速为 2mL/min，分离温度为25℃，检测波长280nm，收集各组分；
步骤五，将收集各组分蒸干称重得到女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷单体。
实施例5
一种用HSCCC分离大叶白蜡中女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷对照品的方法，包括如下步骤：
步骤一，将大叶白蜡树茎皮干燥粉碎；大叶白蜡树茎皮在50摄氏度鼓风干燥箱中干燥恒重；
步骤二，大叶白蜡树茎皮粉末甲醇回流提取，减压浓缩得提取物；大叶白蜡树茎皮粉末用没过药材量的甲醇冷凝回流提取3次，每次1h，趁热纱布过滤，得提取液，40-50℃下用旋转蒸发仪浓缩得提取物；
步骤三，提取物经RP-C18色谱柱甲醇-水梯度洗脱，合并相同组分得粗品。色谱柱甲醇水以此为20％、40％、60％、80％及纯甲醇洗脱；
步骤四，粗品经HSCCC纯化，溶剂体系氯仿-正己烷-甲醇-水，进样，手动收集各个组分，按照氯仿-正丁醇-甲醇-水体积比为4:0.5:3:2配置溶液，充分震荡分层，上层为上相，上相为固定相，下层为下相，下相为流动相；取体积比1:1的上下两相溶剂9mL溶解粗品，过滤，进样，进行HSCCC分离，高速逆流色谱主机转速为900rpm，固定相的流速为3mL/min，流动相流速为 2mL/min，分离温度为25℃，检测波长280nm，收集各组分；
步骤五，将收集各组分蒸干称重得到女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷单体。
以上所述仅是对本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。
Claims (5)
1.一种用HSCCC分离大叶白蜡中女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷对照品的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，将大叶白蜡树茎皮干燥粉碎得大叶白蜡树茎皮粉末备用；
步骤二，将大叶白蜡树茎皮粉末用甲醇回流提取，然后减压浓缩得提取物；
步骤三，将提取物经RP-C18色谱柱甲醇-水梯度洗脱，合并相同组分得粗品；
步骤四，粗品继续纯化，溶剂体系氯仿-正己烷-甲醇-水，进样，手动收集各个组分；
步骤五，将收集各组分蒸干称重得到女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷单体。
2.根据权利要求1所述一种用HSCCC分离大叶白蜡中女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷对照品的方法，其特征在于，步骤一中所述的干燥是在50℃的鼓风干燥箱中干燥至恒重。
3.根据权利要求1所述一种用HSCCC分离大叶白蜡中女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷对照品的方法，其特征在于，步骤二中所述的大叶白蜡树茎皮粉末用没过药材量的甲醇冷凝回流提取3次，每次1h，趁热纱布过滤，得提取液，40-50℃下用旋转蒸发仪浓缩得提取物。
4.根据权利要求1所述一种用HSCCC分离大叶白蜡中女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷对照品的方法，其特征在于，步骤三中所述的洗脱时，色谱柱上样后，依次用甲醇-水浓度为20％、40％、60％、80％及纯甲醇洗脱。
5.根据权利要求1所述一种用HSCCC分离大叶白蜡中女贞苷、橄榄苦苷和10-羟基女贞苷对照品的方法，其特征在于，步骤四中所述的粗品继续纯化具体为：按照氯仿-正丁醇-甲醇-水体积比为3-4:0.2-0.5:3:2配置溶液，充分震荡分层，上层为上相，上相为固定相，下层为下相，下相为流动相；取体积比1:1的上下两相溶剂5-10mL溶解粗品，过滤，进样，进行HSCCC分离，高速逆流色谱主机转速为800rpm，固定相的流速为30mL/min，流动相流速为2mL/min，分离温度为25℃，检测波长280nm，收集各组分。
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| CN105154478A (zh) * | 2015-06-26 | 2015-12-16 | 中国林业科学研究院林产化学工业研究所 | 一种高速逆流色谱和高效液相色谱联用制备高纯度羟基酪醇的方法 |
| CN109369732A (zh) * | 2018-09-30 | 2019-02-22 | 中国林业科学研究院林产化学工业研究所 | 一种高品质橄榄油加工及废弃果渣循环利用方法 |
-
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