CN114276364B - 蒙古蒿中的倍半萜类化合物及制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种蒙古蒿中的倍半萜类化合物及制备方法和用途，该化合物为蒙古蒿内酯A，蒙古蒿内酯C,蒙古蒿内酯G,以及一个已知的倍半萜化合物贝斯特烯内酯‑b，采用将蒙古蒿全草95%乙醇渗漉得到总提取物，用石油醚、乙酸乙酯依次萃取后，取乙酸乙酯萃取物用石油醚/乙酸乙酯，乙酸乙酯/甲醇，二氯甲烷/甲醇分别梯度洗脱，再用半制备高效液相色谱仪反复进行纯化，经过波谱和质谱数据分析表明从蒙古蒿全草中分离得到三个新的降倍半萜类化合物蒙古蒿内酯A,C,G，以及一个已知的倍半萜化合物贝斯特烯内酯‑b。经体外抗肿瘤活性研究表明，所提供的化合物贝斯特烯内酯‑b对人套细胞淋巴瘤细胞具有较明显的细胞毒活性，可应用于天然的低毒抗肿瘤药物，从而为研制抗肿瘤药物提供了新的先导化合物。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及一种蒙古蒿中的倍半萜类化合物及制备方法和用途。
背景技术
蒙古蒿(Artemisia mongolica(Fisch.ex Bess.)Nakai.)为多年生草本，茎直立，高达50～120cm厘米。据文献记载见于中国东北、华北和西北各省区、朝鲜、日本、蒙古、俄罗斯也有分布。全草入药，有温经、止血、散寒、祛湿等作用，主治感冒咳嗽、皮肤湿疮、疥癣、痛经、胎动不安等。
有关蒙古蒿的化学成分研究主要集中在全草挥发油部分以及提取物，除去油之后部分的化学成分研究并不多。查阅国内外文献发现，从蒙古蒿中分离得到的脂肪酸及其酯类除外的化合物类型主要包括倍半萜内酯类、黄酮类、三萜类、香豆素类等。
迄今对蒙古蒿的倍半萜类成分研究不多，1987年师治贤等人发现蒙古蒿精油中倍半萜烯和倍半萜含氧化合物含量比其它蒿属植物精油较高，并对其中的倍半萜烯和倍半萜含氧化合物进行了研究共鉴定了20个成分。其中包括榄烯、α-没药烯，β-没药烯，β-丁香烯，δ-杜松烯，β-杜松烯。1996年胡金峰从蒙古蒿中发现了一个新的桉烷类倍半萜化合物：6a，8a-二羟基不对称酸甲酯。董岩等人采用CO2超临界萃取法提取蒙古蒿挥发油，用GC-MS对蒙古蒿挥发油化学成分进行分离鉴定，结果共分离出了28种化学成分，发现蒙古蒿挥发油对白色葡萄球菌、福氏志贺菌、乙型副伤寒杆菌均有明显抑制作用，对金黄色葡萄球菌无明显抑制作用。
本发明从蒙古蒿全草中中寻找具有抗肿瘤活性的物质，为研制抗肿瘤药物提供新的先导化合物，为开发我国民族药用资源提供科学依据。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种蒙古蒿中的倍半萜类化合物及制备方法和用途，采用将蒙古蒿全草用乙醇渗漉得到提取物，再用石油醚、乙酸乙酯依次萃取后，将乙酸乙酯萃取物用石油醚/乙酸乙酯，乙酸乙酯/甲醇，二氯甲烷/甲醇分别梯度洗脱，再用半制备高效液相色谱仪反复进行纯化，经过波谱和质谱数据分析表明从蒙古蒿全草中分离得到三个新的降倍半萜类化合物蒙古蒿内酯A,C,G，以及一个已知的倍半萜化合物贝斯特烯内酯-b。经体外抗肿瘤活性研究表明，所提供的化合物贝斯特烯内酯-b对人细胞淋巴瘤细胞具有较明显的细胞毒活性，可应用于天然的低毒抗肿瘤药物，从而为研制抗肿瘤药物提供了新的先导化合物。
本发明所述一种蒙古蒿中的降倍半萜类化合物，该化合物结构式为：
其中：结构式1为蒙古蒿内酯A，结构式2为蒙古蒿内酯C,结构式3为蒙古蒿内酯G，结构式4为贝斯特烯内酯-b。
所述的蒙古蒿中的倍半萜类化合物的制备方法，按下列步骤进行：
a、将粉粹的蒙古蒿全草，用10倍量的浓度为95％乙醇渗漉提取，将提取液减压回收溶剂，得到提取物；
b、将步骤a得到的提取物，上硅胶柱，按体积比为100:0，90:1，50:1，20:1，10:1，5:1，3:1，1:1，0:100的石油醚:乙酸乙酯依次梯度洗脱，薄层色谱检识，合并相同斑点的流份，得到流份A-M；
c、取步骤b中的流份J，上硅胶柱，按体积比为100:0，80:1，60:1，40:1，20:1，10:1，0:100的二氯甲烷:甲醇，依次梯度洗脱，薄层色谱检识，合并相同斑点的流份，得到流份J1-J4；
d、取步骤c中的流份J1，上快速制备色谱系统，用反向C18色谱柱，按体积浓度为10％-85％的甲醇:水进行梯度洗脱，检测波长210nm，根据紫外吸收色谱图进行合并，得到流份J11-J16；
e、取步骤d J12中的体积浓度为30％-50％甲醇:水洗脱部位，用凝胶柱色谱以甲醇为洗脱剂洗脱，用薄层色谱检识，合并相同斑点的流份，；
f、取步骤e中分子量较大且薄层色谱上有明显灰色斑点的部位，用半制备高效液相色谱仪反复进行纯化，高效液相色谱纯化条件为23％乙腈:水，流速2.5-3ml/min，检测波长210nm，按色谱图收集，真空干燥后，经高分辨质谱以及一维和二维核磁鉴定，得到化合物蒙古蒿内酯C和蒙古蒿内酯G；
g、取步骤c中的流份J3，上flash快速制备系统，用反向C18色谱柱，按体积浓度为10％-85％的甲醇:水进行梯度洗脱，检测波长210nm，根据紫外吸收色谱图进行合并，得到流份J31-J38；
h、取步骤g J35中的体积浓度为30％-50％甲醇:水洗脱部位，用凝胶柱色谱以甲醇为洗脱剂洗脱，用薄层色谱检识，合并相同斑点的流份；
i、取步骤h中分子量较大且薄层色谱上有明显灰色斑点的部位，用半制备高效液相色谱仪反复进行纯化，高效液相色谱纯化条件为22％乙腈:水，流速2.5-3ml/min，检测波长210nm，按色谱图收集，真空干燥后，经高分辨质谱以及一维和二维核磁鉴定，得到化合物蒙古蒿内酯A和贝斯特烯内酯-b。
所述的蒙古蒿中倍半萜类化合物在制备抗人套细胞淋巴瘤药物中的用途。
通过本发明所述方法获得的化合物蒙古蒿内酯A,蒙古蒿内酯C,蒙古蒿内酯G，以及一个已知的倍半萜化合物贝斯特烯内酯-b，按常规经核磁共振(NMR)、高分辨质谱(HR-ESI-MS)、X-单晶衍射、电子圆二色谱(ECD)、红外(IR)等多种现代光谱技术，以及计算电子圆二色谱鉴定，蒙古蒿内酯A,蒙古蒿内酯C,蒙古蒿内酯G为新化合物，其结构式为：
通过本发明所述方法获得的化合物物蒙古蒿内酯A,蒙古蒿内酯C,蒙古蒿内酯G，以及一个已知的倍半萜化合物贝斯特烯内酯-b，经体外抗肿瘤活性试验表明，化合物贝斯特烯内酯-b对人套细胞淋巴瘤细胞有细胞毒活性，可用于制备抗肿瘤药物。
本发明为研制新的抗肿瘤药物提供了新的先导化合物，为开发利用维药资源具有重要意义。
附图说明
图1为本发明中蒙古蒿内酯A的高分辨质谱图；
图2为本发明中蒙古蒿内酯A的核磁共振氢谱；
图3为本发明中蒙古蒿内酯A的核磁共振碳谱；
图4为本发明中蒙古蒿内酯A的X-单晶衍射图；
图5为本发明中蒙古蒿内酯C的高分辨质谱图；
图6为本发明中蒙古蒿内酯C的核磁共振氢谱；
图7为本发明中蒙古蒿内酯C的核磁共振碳谱；
图8为本发明中蒙古蒿内酯C的X-单晶衍射图；
图9为本发明中蒙古蒿内酯G的高分辨质谱图；
图10为本发明中蒙古蒿内酯G的核磁共振氢谱；
图11为本发明中蒙古蒿内酯G的核磁共振碳谱；
图12为本发明中蒙古蒿内酯G的实验和计算圆二色谱图。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作详细描述，但并不仅限于所给出的实施例。
实施例1
制备化合物：蒙古蒿内酯A,蒙古蒿内酯C,蒙古蒿内酯G，贝斯特烯内酯-b:
制备蒙古蒿提取物浸膏：
a、将粉粹的蒙古蒿全草，用10倍量的浓度为95％乙醇渗漉提取，提取液减压回收溶剂，得到提取物；
b、将步骤a得到的提取物，上硅胶柱，按体积比为100:0，90:1，50:1，20:1，10:1，5:1，3:1，1:1，0:100的石油醚:乙酸乙酯依次梯度洗脱，薄层色谱检识，合并相同斑点的流份，得到流份A-M；
c、取步骤b中的流份J，上硅胶柱，按体积比为100:0，80:1，60:1，40:1，20:1，10:1，0:100的二氯甲烷:甲醇，依次梯度洗脱，薄层色谱检识，合并相同斑点的流份，得到流份J1-J4；
d、取步骤c中的流份J1，上flash快速制备系统，用反向C18色谱柱，按体积浓度为10％-85％的甲醇:水进行梯度洗脱，检测波长210nm，根据紫外吸收色谱图进行合并，得到流份J11-J16；
e、取步骤d J12中的体积浓度为30％-50％甲醇:水洗脱部位，用凝胶柱色谱以甲醇为洗脱剂洗脱，用薄层色谱检识，合并相同斑点的流份；
f、取步骤e中分子量较大且薄层色谱上有明显灰色斑点的部位，用半制备高效液相色谱仪反复进行纯化，高效液相色谱纯化条件为23％乙腈:水，流速2.5-3ml/min，检测波长210nm，按色谱图收集，真空干燥后，经高分辨质谱以及一维和二维核磁鉴定，得到化合物蒙古蒿内酯C 5.5mg和蒙古蒿内酯G 7.2mg；
g、取步骤c中的流份J3，上快速制备色谱系统，用反向C18色谱柱，按体积浓度为10％-85％的甲醇:水进行梯度洗脱，检测波长210nm，根据紫外吸收色谱图进行合并，得到流份J31-J38；
h、取步骤g J35中的体积浓度为30％-50％甲醇:水洗脱部位，用凝胶柱色谱以甲醇为洗脱剂洗脱，用薄层色谱检识，合并相同斑点的流份；
i、取步骤h中分子量较大且薄层色谱上有明显灰色斑点的部位，用半制备高效液相色谱仪反复进行纯化，高效液相色谱纯化条件为22％乙腈:水，流速2.5-3ml/min，检测波长210nm，按色谱图收集，真空干燥后，经高分辨质谱以及一维和二维核磁鉴定，得到化合物蒙古蒿内酯A 60.3mg和贝斯特烯内酯-b 3.1mg。
实施例2
将得到的蒙古蒿内酯A,蒙古蒿内酯C,蒙古蒿内酯G，贝斯特烯内酯-b进行结构鉴定：
按常规经核磁共振(NMR)、高分辨质谱(HR-ESI-MS)、X-单晶衍射，电子圆二色谱(ECD)、红外(IR)等多种现代光谱技术，以及运用计算圆二色谱确定蒙古蒿内酯A、C、G的化学结构及立体构型，其中蒙古蒿内酯A的立体构型为4R、6S、7S、10S、11S；蒙古蒿内酯C的立体构型为4S，6S，7S，10S，11S；蒙古蒿内酯G的立体构型为2R、7S、10S、11R；
蒙古蒿内酯A：[α]20D-64(c 0.1,MeOH)，UV(甲醇)λmax nm(logε)＝217.2nm；IR(KBr)υmax cm-1:3422,1752,1458,1370,1233,1166,1041,1016,916,887,757；(+)HR-ESI-MS给出m/z 281.1031[M–H]-，(计算值为C14H17O6,281.1103)，确定分子式为C14H18O6；经过核磁共振氢谱(1H-NMR)、核磁共振碳谱(13C-NMR)、质子相关谱(1H-1H COSY)、梯度场异核单量子相关谱(gHSQC)、异核多键相关(HMBC)、二维核奥弗豪泽效应谱(NOESY)以及X-单晶衍射(CCDC，2109744)的综合解析，确定蒙古蒿内酯A的结构为一种新的化合物；核磁共振氢谱(氘代氯仿,600MHz)和核磁共振碳谱(氘代氯仿,150MHz)数据见表1：
表1蒙古蒿内酯A的核磁共振数据
其中d：表示二重峰，s：表示单峰，m：表示多重峰；
蒙古蒿内酯C：[α]20D+5(c 0.1,MeOH)。UV(甲醇)λmax nm(logε)＝217.2nm；IR(KBr)υmax cm-1:3512,1786,1759,1456,1378,1279,1164,1058,1037,1015,915,892,755；(+)HR-ESI-MS给出m/z 333.1305[M+Na]+，(计算值为C16H22O6Na,333.1416)，确定分子式为C16H22O6；经过核磁共振氢谱(1H-NMR)、核磁共振碳谱(13C-NMR)、质子相关谱(1H-1H COSY)、梯度场异核单量子相关谱(gHSQC)、异核多键相关(HMBC)、二维核奥弗豪泽效应谱(NOESY)以及X-单晶衍射(CCDC，2110051)的综合解析，确定蒙古蒿内酯C的结构为一种新的化合物。核磁共振氢谱(氘代氯仿,600MHz)和核磁共振碳谱(氘代氯仿,150MHz)数据见表2：
表2蒙古蒿内酯C的核磁共振数据
其中d:表示二重峰，s：表示单峰，m：表示多重峰；
蒙古蒿内酯G：[α]20D-107(c 0.1,MeOH)。UV(甲醇)λmax nm(logε)＝212.2nm；IR(KBr)υmax cm-1:3393,1774,1708,1458,1372,1171,1092,1021；(+)HR-ESI-MS给出m/z333.1298([M+Na]+，(计算值为C16H22O6Na 333.1314)，确定分子式为C16H22O6；经过核磁共振氢谱(1H-NMR)、核磁共振碳谱(13C-NMR)、质子相关谱(1H-1H COSY)、梯度场异核单量子相关谱(gHSQC)、异核多键相关(HMBC)和二维核奥弗豪泽效应谱(NOESY)的综合解析，确定蒙古蒿内酯G的结构为一种新的化合物。核磁共振氢谱(氘代氯仿,600MHz)和核磁共振碳谱(氘代氯仿,150MHz)数据见表3：
表3蒙古蒿内酯G的核磁共振数据
其中d:表示二重峰，s：表示单峰，m：表示多重峰。
实施例3
所得到的蒙古蒿内酯A,蒙古蒿内酯C,蒙古蒿内酯G，贝斯特烯内酯-b体外抗肿瘤活性实验：
实验方法：将本发明获得的化合物蒙古蒿内酯A、蒙古蒿内酯C和蒙古蒿内酯G和贝斯特烯内酯-b进行体外对人细胞淋巴瘤的生长抑制的试验，试验方法运用MTS法检测细胞存活率；
肿瘤细胞株：人细胞淋巴瘤悬浮细胞(3天)，由中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库提供；
实验试剂、耗材和仪器：MTS试剂盒、二甲基亚砜(DMSO)，仪器：酶标仪(SpectraMAX340)；
实验用药：化合物蒙古蒿内酯A、蒙古蒿内酯C、蒙古蒿内酯G和贝斯特烯内酯-b，由实施例1制备，配成浓度为10mM的二甲基亚砜溶液，临用前稀释；
细胞培养：A549和PC-3细胞在DMEM/F12培养基中培养，HCT-15细胞培养于RPMI-1640培养基中，按照常规培养，四种细胞培养基中分别加入10％的胎牛血清(FBS)和1个单位的抗生素混合物(1×105U/L的青霉素和100mg/L的链霉素)，并置于温度37℃、5％二氧化碳/95％空气的细胞培养箱中培养3-4天；
细胞存活率测试：将生长在对数生长期的细胞，吸取培养基，轻轻吹打，计数；以相应的细胞密度接种在96孔板中90ul；加10ul化合物，每一化合物设浓度梯度，每一浓度设三复孔，每一浓度分别加入到对应孔中；二甲基亚砜(DMSO)的终浓度是0.2％，5％CO2温度37℃培养箱内培养3天，加入20ul的MTS；温度37℃孵育3小时后，使用酶标仪测490nm(L1)光吸收值，参考波长690nm(L2)，将(L1-L2)值对抑制剂不同浓度作图；
按下列公式计算不同浓度样品对细胞的存活率：
百分比活性(％)＝化合物OD值-空白OD值/二甲基亚砜OD值-空白OD*100％经公式拟合得IC50。
实验结果：蒙古蒿内酯A、蒙古蒿内酯C、蒙古蒿内酯G和贝斯特烯内酯-b以及阳性对照药CC-220的试验结果见表4：
表4.蒙古蒿内酯A、蒙古蒿内酯C、蒙古蒿内酯G和贝斯特烯内酯-b以及阳性对照药CC-220对肿瘤细胞的IC50值
实验结果表明：化合物贝斯特烯内酯-b对人套细胞淋巴瘤具有较明显的细胞毒活性，因此可以用于制备抗肿瘤药物或作为抗肿瘤药物的先导化合物。
Claims (1)
1.一种蒙古蒿中的倍半萜类化合物贝斯特烯内酯-b在制备抗人套细胞淋巴瘤药物中的用途。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| Al-Howiriny, Tawfeq A等.Beibersteneolide a and b: Two new sesquiterpene lactones from Achillea beiberstenii.Indian Journal of Chemistry.2005,第44B卷(第12期),第 2538-2544页. * |
| Beibersteneolide a and b: Two new sesquiterpene lactones from Achillea beiberstenii;Al-Howiriny, Tawfeq A等;Indian Journal of Chemistry;第44B卷(第12期);第 2538-2544页 * |
| Polyhydroxyl guaianolide terpenoids as potential NF-κB inhibitors induced cytotoxicity in human gastric adenocarcinoma cell line;Sun, Yi-wei等;Bioorganic Chemistry;第95卷;第1-7页 * |
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