CN114231420B - 一种促进植物生长的青霉组合物、菌剂及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种促进植物生长的青霉组合物、菌剂及其应用。本发明提供了一种促进植物生长的青霉组合物，包括宛氏拟青霉、指状青霉、岛青霉和变紫青霉。本发明所述青霉组合物能够提高植物的鲜重、干重、叶片数、株高、叶绿素和激素含量，可见所述菌株能够有效促进植物生长，而且对生物安全性高，无污染，可为今后生产生物有机肥提供理论基础。

Description

一种促进植物生长的青霉组合物、菌剂及其应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种促进植物生长的青霉组合物、菌剂及其应用。
背景技术
化学肥料的施用对于提高作物产量、解决粮食问题具有重要的意义。但是由于片面追求产量，造成了化学肥料的过量施用。长期过量施用化学肥料，不仅直接影响植物的正常生长和农产品的品质，还会导致土壤中养分过剩和污染物积累，给土壤环境造成巨大压力，带来严重的生态问题。
生防菌微由于具有无污染，无公害，价格低，效果好等特点，越来越受到农户的青睐，但采用微生物对植物的生长促进仍然只有很少的效果。可见如何生产出一种能够显著植物的生长且不会带来生态问题的菌剂是十分重要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种促进植物生长的青霉组合物、菌剂及其应用。本发明提供所述的菌株具有促生作用，生物安全性高，且无污染，可为今后生产生物有机肥提供理论基础。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明提供了一种促进植物生长的青霉组合物，包括宛氏拟青霉、指状青霉、岛青霉和变紫青霉。
优选的，还包括益生菌；所述益生菌包括枯草芽孢杆菌。
本发明提供了一种促进植物生长的菌剂，所述菌剂包括上述技术方案所述的青霉组合物的代谢产物。
优选的，所述菌剂中宛氏拟青霉代谢产物、指状青霉代谢产物、岛青霉代谢产物和变紫青霉代谢产物的质量比为(20～40)：(20～40)：(10～50)：(20～40)。
优选的，所述菌剂还包括上述技术方案所述的益生菌的发酵液；所述益生菌的发酵液包括枯草芽孢杆菌发酵液。
优选的，所述菌剂中青霉组合物的代谢产物和益生菌的发酵液的质量比为 (70～150)：(30～50)。
本发明提供了上述技术方案所述的青霉组合物或上述技术方案所述的菌剂在促进植物生长中的应用。
优选的，所述植物包括茄科植物和/或豆科植物。
本发明提供了一种促进植物生长的方法，包括以下步骤：
将上述技术方案所述的菌剂与土壤混合，种植植物。
优选的，所述菌剂的用量为60～300kg/亩。
有益效果：
本发明提供了一种促进植物生长的青霉组合物，包括宛氏拟青霉、指状青霉、岛青霉和变紫青霉。本发明所述青霉组合物能够提高植物的鲜重、干重、叶片数、株高、叶绿素和激素含量，可见所述菌株能够有效促进植物生长，而且对生物安全性高，无污染，可为今后生产生物有机肥提供理论基础。
另外，本发明将宛氏拟青霉、指状青霉、岛青霉、变紫青霉和芽孢杆菌混合使用能够强化宛氏拟青霉、指状青霉、岛青霉和变紫青霉的促生效果，达到协同增效的效果，还可以缓解环境压力。
具体实施方式
如无特殊要求，本发明所述菌株或组分均为本领域技术人员常规购买所得即可。
本发明提供了一种促进植物生长的青霉组合物，包括宛氏拟青霉、指状青霉、岛青霉和变紫青霉。本发明对所述青霉的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员常规购买所得即可；在本发明中，所述青霉优选购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，所述宛氏拟青霉的菌株保藏编号优选为CICC2442，所述指状青霉的菌株保藏编号优选为CICC41757，所述岛青霉的菌株保藏编号优选为 CICC40637，所述变紫青霉的菌株保藏编号优选为CICC40687。
在本发明中，所述青霉组合物还优选包括益生菌；所述益生菌优选包括枯草芽孢杆菌。本发明对所述枯草芽孢杆菌的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员常规购买所得即可；在本发明中，所述枯草芽孢杆菌优选购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，所述枯草芽孢杆菌的菌株保藏编号为CICC10150。
本发明将宛氏拟青霉、指状青霉、岛青霉和变紫青霉搭配使用，能够提高植物的鲜重、干重、叶片数、叶面积、叶绿素和激素含量，再结合枯草芽孢杆菌混合使用，能够强化宛氏拟青霉、指状青霉、岛青霉和变紫青霉的促生效果，达到协同增效的效果，而且本发明所述菌株均为自然环境中存在的微生物，并不会对环境产生污染，进而到达缓解环境压力的效果。
本发明提供了一种促进植物生长的菌剂，所述菌剂包括上述技术方案所述的是青霉组合物的代谢产物。在本发明中，所述菌剂中宛氏拟青霉代谢产物、指状青霉代谢产物、岛青霉代谢产物和变紫青霉代谢产物的质量比为(20～40)： (20～40)：(10～50)：(20～40)，进一步优选为(23～37)：(22～36)：(15～35)： (25～35)，更优选为(25～33)：(26～34)：(20～30)：(28～32)。
本发明所述菌剂以质量份计，所述菌剂优选包括20～40份宛氏拟青霉代谢产物。进一步优选为23～37份，更优选为25～33份。
以宛氏拟青霉代谢产物的质量份为基准，本发明所述菌剂优选包括20～40 份指状青霉代谢产物，进一步优选为22～36份，更优选为26～34份。
以宛氏拟青霉代谢产物的质量份为基准，本发明所述菌剂优选包括10～50 份岛青霉代谢产物，进一步优选为15～35份，更优选为20～30份。
以宛氏拟青霉代谢产物的质量份为基准，本发明所述菌剂优选包括20～40 份变紫青霉代谢产物，进一步优选为25～35份，更优选为28～32。
在本发明中，所述菌剂还优选包括益生菌的发酵液；所述益生菌的发酵液优选包括枯草芽孢杆菌发酵液。当本发明所述菌剂包括是青霉组合物的代谢产物和枯草芽孢杆菌发酵液时，所述青霉组合物的代谢产物和枯草芽孢杆菌发酵液的质量比优选为(70～150)：(30～50)，进一步优选为(75～130)：(35～45)，更优选为(80～120)：(37～43)。
当本发明所述菌剂包括是青霉组合物的代谢产物和枯草芽孢杆菌发酵液时，所述菌剂优选包括青霉组合物的代谢产物70～150份，进一步优选为75～130 份，更优选为80～120份。本发明所述青霉组合物的代谢产物能够提高显著植物的鲜重、干重、叶片数、株高、叶绿素和激素含量。
以青霉组合物的代谢产物的质量份为基准，本发明所述菌剂优选包括枯草芽孢杆菌发酵液30～50份，进一步优选为35～45份，更优选为37～43份。本发明通过添加枯草芽孢杆菌，强化了宛氏拟青霉、指状青霉、岛青霉和变紫青霉的促生效果，达到协同增效的效果，还可以缓解环境压力。
在本发明中，所述青霉组合物的代谢产物的制备方法，优选包括以下步骤：
将所述青霉组合物中的各个青霉活化后发酵培养，得各个青霉的菌液；
将上述菌液依次进行高温灭活、干燥和磨碎，得青霉组合物的代谢产物，即青霉组合物的灭活干粉。
在本发明中，当活化宛氏拟青霉时，优选包括无菌水活化和培养基活化。在本发明中，所述无菌水活化的过程优选为刮宛氏拟青霉的菌落(采用竹签挑取一小块菌落即可)接种于盛有100mL无菌水的250mL三角瓶中，于温度为 28℃，转速为120r/min的条件下，振荡30min使孢子团充分散开后，用移液枪吸取孢子悬浮液置于血球计数板进行计数，最终得到浓度为108cfu/mL的孢子悬浮液；所述培养基活化的过程优选为将无菌水活化得到的孢子悬浊液接种于 5°Bé(5波美度)麦芽汁培养基活化；所述5°Bé麦芽汁培养基优选包括1.0L的5°Bé麦芽汁。在本发明中，所述培养基活化时，接种量优选为5°Bé麦芽汁培养基体积的3～5％，更优选为3％；所述培养基活化的温度优选为25～28℃，更优选为28℃；所述培养基活化的时间优选为2～5d，更优选为3～4d。在本发明中，所述培养基活化的程度优选为5°Bé麦芽汁培养基中布满菌球。在本发明中，所述活化的过程优选重复1～3次，即复壮的过程优选重复1～3次。
当活化指状青霉时，优选包括无菌水活化和培养基活化。在本发明中，所述无菌水活化的过程优选为刮取指状青霉的菌落(采用竹签挑取一小块菌落即可)接种于盛有100mL无菌水的250mL三角瓶中，于温度为25℃，转速为120 r/min的条件下，振荡30min使孢子团充分散开后，用移液枪吸取孢子悬浮液置于血球计数板进行计数，最终得到浓度为108cfu/mL的孢子悬浮液；所述培养基活化的过程优选为将无菌水活化得到的孢子悬浊液接种于PDA培养基活化；所述PDA培养基优选包括以下组分：每1.0L的马铃薯提取液含有20.0g的葡萄糖。在本发明中，所述培养基活化时，接种量优选为PDA培养基体积的3～5％，更优选为3％；所述培养基活化的温度优选为25～28℃，更优选为25℃；所述培养基活化的时间优选为2～5d，更优选为3～4d。在本发明中，所述培养基活化的程度优选为PDA培养基中布满菌球，即。在本发明中，所述活化的过程优选重复 1～3次，即复壮的过程优选重复1～3次。
当活化岛青霉时，优选包括无菌水活化和培养基活化。在本发明中，所述无菌水活化的过程优选为刮取岛青霉的菌落(采用竹签挑取一小块菌落即可) 接种于盛有100mL无菌水的250mL三角瓶中，于温度为25℃，转速为120r/min 的条件下，振荡30min使孢子团充分散开后，用移液枪吸取孢子悬浮液置于血球计数板进行计数，最终得到浓度为108cfu/mL的孢子悬浮液；所述培养基活化的过程优选为将无菌水活化得到的孢子悬浊液接种于麦芽膏培养基活化；所述麦芽膏培养基优选包括以下组分：每1.0L的自来水含有20.0g的麦芽膏。在本发明中，所述培养基活化时，接种量优选为麦芽膏培养基体积的3～5％，更优选为3％；所述培养基活化的温度优选为25～28℃，更优选为25℃；所述培养基活化的时间优选为2～5d，更优选为3～4d。在本发明中，所述活化的程度优选为麦芽膏培养基中布满菌球。在本发明中，所述活化的过程优选重复1～3次，即复壮的过程优选重复1～3次。
当活化变紫青霉时，优选包括无菌水活化和培养基活化。在本发明中，所述无菌水活化的过程优选为刮取变紫青霉的菌落(采用竹签挑取一小块菌落即可)接种于盛有100mL无菌水的250mL三角瓶中，于温度为25℃，转速为120 r/min的条件下，振荡30min使孢子团充分散开后，用移液枪吸取孢子悬浮液置于血球计数板进行计数，最终得到浓度为108cfu/mL的孢子悬浮液；所述培养基活化的过程优选为将无菌水活化得到的孢子悬浊液接种于麦芽膏培养基，所述麦芽膏培养基优选包括以下组分：1.0L的自来水和20.0g的麦芽膏。在本发明中，所述培养基活化时，接种量优选为麦芽膏培养基体积的3～5％，所述培养基活化的温度优选为25～28℃；所述培养基活化的时间优选为2～5d，更优选为3～4d。在本发明中，所述培养基活化的程度优选为麦芽膏培养基中布满菌球再进行发酵培养。在本发明中，所述活化的过程优选重复1～3次，即复壮的过程优选重复1～3次。
在本发明中，当培养宛氏拟青霉时，采用的培养基优选为5°Bé(5波美度) 麦芽汁培养基，所述5°Bé麦芽汁培养基优选包括1.0L的5°Bé麦芽汁。在本发明中，所述培养时，接种量优选为培养基体积的3～5％。在本发明中，所述培养的温度优选为25～28℃，培养的时间优选为3～7d，更优选为4～6d；培养所得宛氏拟青霉菌液中的活菌数优选为108cfu/mL～109cfu/mL。
当培养指状青霉时，采用的培养基优选为PDA培养基，所述PDA培养基优选包括以下组分：每1.0L的马铃薯提取液含有20.0g的葡萄糖。在本发明中，所述培养时，接种量优选为培养基体积的3～5％。在本发明中，所述培养的温度优选为25～28℃，培养的时间优选为3～7d，更优选为4～6d；培养所得指状青霉菌液中的活菌数优选为108cfu/mL～109cfu/mL。
当培养岛青霉时，采用的培养基优选为麦芽膏培养基，所述麦芽膏培养基优选包括以下组分：每1.0L的自来水含有20.0g的麦芽膏。在本发明中，所述培养时，接种量优选为培养基体积的3～5％。在本发明中，所述培养的温度优选为25～28℃，培养的时间优选为3～7d，更优选为4～6d；培养所得岛青霉菌液中的活菌数优选为108cfu/mL～109cfu/mL。
当培养变紫青霉时，采用的培养基优选为麦芽膏培养基，所述麦芽膏培养基优选包括以下组分：1.0L的自来水和20.0g的麦芽膏。在本发明中，所述培养时，接种量优选为培养基体积的3～5％。在本发明中，所述培养的温度优选为 25～28℃，培养的时间优选为3～7d，更优选为4～6d；培养所得变紫青霉菌液中的活菌数优选为108cfu/mL～109cfu/mL。
在本发明中，所述高温灭活的温度优选为140℃，时间优选为3h。在本发明中，所述干燥的方式优选为烘干；所述烘干的温度优选为55℃，时间优选为 48h。本发明所述粉碎后所得物料的粒径优选过200目筛。
所述粉碎后，本发明优选将粉碎后所得的干粉进行混合，得青霉组合物的代谢产物。本发明对所述混合的方式没有任何限定，采用本领域技术人员所熟知的方式即可。
在本发明中，所述益生菌的发酵液的制备方法，优选包括以下步骤：
将益生菌接种于NA培养基后培养，得益生菌的发酵液。
在本发明中，所述益生菌优选包括枯草芽孢杆菌；所述NA培养基优选包括以下浓度的组分：牛肉浸膏3.0g/L、蛋白胨5.0g/L和NaCl5.0g/L；所述NA 培养基的pH优选为7.0；所述接种时，接种量优选为NA培养基体积为2～5％，进一步优选为2.5％～3.5％，更优选为3％。在本发明中，所述培养的温度优选为 28℃，时间优选为3h，转速优选为125rpm。
在本发明中，所述益生菌的发酵液中活菌数优选≥109cfu/mL。
本发明所述菌剂能够提高显著植物的鲜重、干重、叶片数、株高、叶绿素和激素含量，而且通过添加枯草芽孢杆菌，强化了宛氏拟青霉、指状青霉、岛青霉和变紫青霉的促生效果，达到协同增效的效果，还可以缓解环境压力。
本发明提供了上述技术方案所述的青霉组合物或上述技术方案所述的菌剂在促进植物生长中的应用。
在本发明中，所述植物优选包括茄科植物和/或豆科植物。在本发明中，所述茄科植物优选包括番茄和/或烟草，所述豆科植物优选包括苜蓿，但不限于上述植物。在本发明中，所述促进植物生长优选包括促进植物的鲜重、干重、叶片数、株高、叶绿素和植物激素含量。
本发明提供了一种促进植物生长的方法，包括以下步骤：
将上述技术方案所述的菌剂与土壤混合，种植植物。
在本发明中，所述菌剂的用量优选为60～300kg/亩，进一步优选为70～280kg/亩，更优选为100～250kg/亩。在本发明具体实施例中，优选以土壤的质量计，所述菌剂与土壤的质量比优选为(2～20)：(2500～6500)，进一步优选为(2.5～15)： (3300～4500)，更优选为(3～10)：(3500～4300)。
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种促进植物生长的青霉组合物、菌剂及其应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
(1)配制培养基：5°Bé麦芽汁培养基(宛氏拟青霉)：5°Bé麦芽汁1.0L，自然pH；PDA培养基(指状青霉)：马铃薯提取液1.0L，葡萄糖20.0g，pH自然；麦芽膏培养基(岛青霉、变紫青霉)：麦芽膏20.0g，自来水1.0L，自然pH；
(2)活化及发酵培养：刮取指状青霉的菌落(采用竹签挑取一小块菌落即可)接种于盛有100mL无菌水的250mL三角瓶中，于温度为25℃，转速为120 r/min的条件下，振荡30min使孢子团充分散开后，用移液枪吸取孢子悬浮液置于血球计数板进行计数，最终得到浓度为108cfu/mL的孢子悬浮液；上述得到的孢子悬浊液接种于含有100mLPDA培养基的三角瓶中，接种量为PDA培养基体积的3％，25℃活化5d后，待PDA培养基中布满菌球再进行发酵培养，得活化菌株；将活化菌株接种到含有100mLPDA培养基的三角瓶中，接种量为PDA 培养基体积的3％，25℃发酵培养5d，得活菌数为108cfu/mL的指状青霉菌液；
刮取宛氏拟青霉的菌落(采用竹签挑取一小块菌落即可)接种于盛有100mL 无菌水的250mL三角瓶中，于温度为28℃，转速为120r/min的条件下，振荡 30min使孢子团充分散开后，用移液枪吸取孢子悬浮液置于血球计数板进行计数，最终得到浓度为108cfu/mL的孢子悬浮液；上述得到的孢子悬浊液接种于含有100mL5°Bé麦芽汁培养基的三角瓶中，接种量为5°Bé麦芽汁培养基体积的 3％，28℃活化5d后，待5°Bé麦芽汁培养基中布满菌球再进行发酵培养，得活化菌株；将活化菌株接种到含有100mL5°Bé麦芽汁培养基的三角瓶中，28℃发酵培养5d，得活菌数为108cfu/mL的指状青霉菌液；
刮取岛青霉的菌落(采用竹签挑取一小块菌落即可)接种于盛有100mL无菌水的250mL三角瓶中，于温度为25℃，转速为120r/min的条件下，振荡30min 使孢子团充分散开后，用移液枪吸取孢子悬浮液置于血球计数板进行计数，最终得到浓度为108cfu/mL的孢子悬浮液；上述得到的孢子悬浊液接种于含有100 mL麦芽膏培养基的三角瓶中，接种量为麦芽膏培养基体积的3％，25℃活化5d 后接种到含有100mL麦芽膏培养基的三角瓶中，接种量为麦芽膏培养基体积的 3％，25℃培养3d，得活菌数为108cfu/mL的岛青霉菌液；
刮取变紫青霉的菌落(采用竹签挑取一小块菌落即可)接种于盛有100mL 无菌水的250mL三角瓶中，于温度为25℃，转速为120r/min的条件下，振荡 30min使孢子团充分散开后，用移液枪吸取孢子悬浮液置于血球计数板进行计数，最终得到浓度为108cfu/mL的孢子悬浮液；上述得到的孢子悬浊液接种于含有100mL麦芽膏培养基的三角瓶中，接种量为麦芽膏培养基体积的3％，25℃活化3d后，待麦芽膏培养基中布满菌球再进行发酵培养，得活化菌株；将活化菌株接种到含有100mL麦芽膏培养基的三角瓶中，接种量为麦芽膏培养基体积的3％，25℃发酵培养3d，得活菌数为108cfu/mL的变紫青霉菌液；
(3)分别收集上述菌液，将收集所得菌液分别在140℃高温灭活3h后，放入55℃烘箱中烘48h，磨碎后过200目筛，制成干粉，得指状青霉干粉、宛氏拟青霉干粉、岛青霉干粉和变紫青霉干粉；
(3)取指状青霉干粉20份(20g)、宛氏拟青霉干粉20份(20g)、岛青霉干粉40份(40g)和变紫青霉按照20份(20g)进行混合，共100份，4种干粉的质量比为20:20:40:20，即1:1:2:1，得到真菌代谢产物灭活干粉，即促进植物生长的菌剂Ⅰ。
实施例2
将枯草芽孢杆菌接种到含有100mLNA培养基(牛肉浸膏3.0g，蛋白胨5.0g，NaCl5.0g，蒸馏水1L，pH调至7.0)的三角瓶上，接种量为培养基体积的3％， 28℃，125rpm，培养3d，菌体数量≥109cfu/mL，得枯草芽孢杆菌发酵液；
取实施例1得到促进植物生长的菌剂Ⅰ100份(100g)和枯草芽孢杆菌发酵液30份(30g)，得促进植物生长的菌剂Ⅱ。
实施例3
(1)将促进植物生长的菌剂Ⅰ与腐殖质基质(PINDSTRUP品氏营养土) 混合后作为处理组，每盆腐殖质基质的用量为3.5L，即3500g腐殖酸基质，促进植物生长的菌剂Ⅰ用量分别为2.50g/盆、5.00g/盆、10.00g/盆，依次记为处理1组、处理2组和处理3组，同时以不添加促进植物生长的菌剂Ⅰ作为对照组；
(2)将番茄的种子均匀播在塑料盆钵(上口径17.5cm，高度16cm，底直径14cm，1.5中加仑，容土量：3.5L)中，每个塑料盆钵播种5粒种子，并置于温室中进行培养。
实施例4
与实施例3的步骤相同，唯一的区别点在于本实施例采用的是烟草，依次记为处理4组、处理5组和处理6组。
实施例5
与实施例3的步骤相同，唯一的区别点在于本实施例采用的是苜蓿，依次记为处理7组、处理8组和处理9组。
实施例6
(1)将促进植物生长的菌剂Ⅱ与腐殖质基质(PINDSTRUP品氏营养土) 混合后作为处理组，每盆腐殖质基质的用量为3.5L，促进植物生长的菌剂Ⅱ用量分别为2.50g/盆、5.00g/盆、10.00g/盆，依次记为处理10组、处理11组和处理12组，以实施例3中不添加促进植物生长的菌剂Ⅰ作为对照组；
(2)将番茄的种子均匀播在塑料盆钵(1.5中加仑，容土量：3.5L)中，每个塑料盆钵播种5粒种子，并置于温室中进行培养。
实施例7
与实施例6的步骤相同，唯一的区别点在于本实施例采用的是烟草，依次记为处理13组、处理14组和处理15组。
实施例8
与实施例6的步骤相同，唯一的区别点在于本实施例采用的是苜蓿，依次记为处理16组、处理17组和处理18组。
对比例1
(1)将实施例2制备得到的枯草芽孢杆菌发酵液与腐殖质基质(PINDSTRUP品氏营养土)混合后作为处理组，每盆腐殖质基质的用量为3.5L，枯草芽孢杆菌发酵液用量分别为2.50g/盆、5.00g/盆、10.00g/盆，依次记为对比 1组、对比2组和对比3组，同时以不添加促进植物生长的菌剂Ⅰ作为对照组；
(2)将番茄的种子均匀播在塑料盆钵(1.5中加仑，容土量：3.5L)中，每个塑料盆钵播种5粒种子，并置于温室中进行培养。
对比例2
与对比例1的步骤相同，唯一的区别点在于本实施例采用的是烟草，依次记为对比4组、对比5组和对比6组。
对比例3
与对比例1的步骤相同，唯一的区别点在于本实施例采用的是苜蓿，依次记为对比7组、对比8组和对比9组。
待实施例3～8和对比例1～3中的幼苗，出苗后10d间苗，留下长势一致、无病害且无损伤的幼苗作试供材料；
定植后30d后采样，测定植株鲜重，干重，叶片数，株高，叶绿素含量、生长素和细胞分裂素含量，检测不同处理对植物生长的影响，调查结果见表1。
表1不同处理对植物生长的影响
Figure SMS_1
由表1记载的可知，与对照组相比，采用本发明所述促进植物生长的菌剂能增加番茄、烟草和苜蓿的鲜重、干重、叶片数、株高和叶绿素含量，并且能够提高植物内源生长素和细胞分裂素的含量，具有良好的促生长效果。
对比例4
(1)配制培养基：5°Bé麦芽汁培养基(宛氏拟青霉)：5°Bé麦芽汁1.0L，自然pH；PDA培养基(指状青霉)：马铃薯提取液1.0L，葡萄糖20.0g，pH自然；麦芽膏培养基(岛青霉和变紫青霉)：麦芽膏20.0g，自来水1.0L，自然pH；
(2)活化及培养：刮取指状青霉的菌落(采用竹签挑取一小块菌落即可) 接种于盛有100mL无菌水的250mL三角瓶中，于温度为25℃，转速为120r/min 的条件下，振荡30min使孢子团充分散开后，用移液枪吸取孢子悬浮液置于血球计数板进行计数，最终得到浓度为108cfu/mL的孢子悬浮液；上述得到的孢子悬浊液接种于含有100mLPDA培养基的三角瓶中，接种量为PDA培养基培养基体积的3％，25℃活化5d后，待PDA培养基中布满菌球再进行发酵培养，得活化菌株；将活化菌株接种到含有100mLPDA培养基的三角瓶中，接种量为 PDA培养基培养基体积的3％，25℃发酵培养5d，得活菌数为108cfu/mL的指状青霉菌液；
刮取宛氏拟青霉的菌落(采用竹签挑取一小块菌落即可)接种于盛有100mL 无菌水的250mL三角瓶中，于温度为28℃，转速为120r/min的条件下，振荡 30min使孢子团充分散开后，用移液枪吸取孢子悬浮液置于血球计数板进行计数，最终得到浓度为108cfu/mL的孢子悬浮液；上述得到的孢子悬浊液接种于含有100mL5°Bé麦芽汁培养基的三角瓶中，接种量为5°Bé麦芽汁培养基体积的 3％，28℃活化5d后，待5°Bé麦芽汁培养基中布满菌球再进行发酵培养，得活化菌株；将活化菌株接种到含有100mL5°Bé麦芽汁培养基的三角瓶中，接种量为5°Bé麦芽汁培养基体积的3％，28℃发酵培养5d，得活菌数为108cfu/mL的指状青霉菌液；
刮取岛青霉的菌落(采用竹签挑取一小块菌落即可)接种于盛有100mL无菌水的250mL三角瓶中，于温度为25℃，转速为120r/min的条件下，振荡30min 使孢子团充分散开后，用移液枪吸取孢子悬浮液置于血球计数板进行计数，最终得到浓度为108cfu/mL的孢子悬浮液；上述得到的孢子悬浊液接种于含有100 mL麦芽膏培养基的三角瓶中，接种量为麦芽膏培养基体积的3％，25℃活化5d 后，待麦芽膏培养基中布满菌球再进行发酵培养，得活化菌株；将活化菌株接种到含有100mL麦芽膏培养基的三角瓶中，接种量为麦芽膏培养基体积的3％， 25℃发酵培养3d，得活菌数为108cfu/mL的岛青霉菌液；
刮取淡紫拟青霉的菌落(采用竹签挑取一小块菌落即可)接种于盛有100mL 无菌水的250mL三角瓶中，于温度为25℃，转速为120r/min的条件下，振荡30min使孢子团充分散开后，用移液枪吸取孢子悬浮液置于血球计数板进行计数，最终得到浓度为108cfu/mL的孢子悬浮液；上述得到的孢子悬浊液接种于含有100mL麦芽膏培养基的三角瓶中，接种量为麦芽膏培养基体积的3％，25℃活化3d后，待麦芽膏培养基中布满菌球再进行发酵培养，得活化菌株；将活化菌株接种到含有100mL麦芽膏培养基的三角瓶中，接种量为麦芽膏培养基体积的3％，25℃发酵培养3d，得活菌数为108cfu/mL的淡紫拟青霉菌液；
(3)分别收集上述菌液，将收集所得菌液分别在140℃高温灭活3h后，放入55℃烘箱中烘48h，磨碎后过200目筛，制成干粉，得指状青霉干粉、宛氏拟青霉干粉、岛青霉干粉和淡紫拟青霉干粉；
(3)取指状青霉干粉10份(10g)、宛氏拟青霉干粉20份(20g)、岛青霉干粉30份(30g)和淡紫拟青霉干粉按照20份(20g)进行混合，共80份， 4种干粉的质量比为1:2:3:2，得到真菌代谢产物灭活干粉，即菌剂Ⅲ。
将所得菌剂Ⅲ与腐殖质基质混合后作为处理组，每盆腐殖质基质的用量为 3.5L，菌剂Ⅲ用量为2.50g/盆、5.00g/盆、10.00g/盆，记为对比照10组，同时以不添加菌剂Ⅲ作为对照组；
(2)将烟草的种子均匀播在塑料盆钵(1.5中加仑，容土量：3.5L)中，每个塑料盆钵播种5粒种子，并置于温室中进行培养。
待对比例4中的幼苗，出苗后10d间苗，留下长势一致、无病害且无损伤的幼苗作试供材料；
出苗后30d后采样，测定植株鲜重，干重，叶片数，株高，叶绿素含量，生长素和细胞分裂素含量，检测不同处理对植物生长的影响，调查结果见表2。
表2不同处理对植物生长的影响
Figure SMS_2
由表2记载的可知，将宛氏拟青霉、指状青霉、岛青霉和淡紫拟青霉进行组合，获得的灭活干粉，施用到烟草上，与对照组相比无差异，并不会对烟草由促进生长的作用。
由上述实施例记载的可知，本发明所述青霉组合物能够提高植物的鲜重、干重、叶片数、株高、叶绿素和激素含量，可见所述菌株能够有效促进植物生长，而且对生物安全性高，无污染，可为今后生产生物有机肥提供理论基础。另外，本发明将宛氏拟青霉、指状青霉、岛青霉、变紫青霉和芽孢杆菌混合使用能够强化宛氏拟青霉、指状青霉、岛青霉和变紫青霉的促生效果，达到协同增效的效果，还可以缓解环境压力。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

Claims (4)

1.一种促进植物生长的菌剂，其特征在于，所述菌剂为青霉组合物的菌液和枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)发酵液；所述菌剂中青霉组合物的发酵液和枯草芽孢杆菌的发酵液的质量比为(70～150)：(30～50)；所述青霉组合物的菌液为宛氏拟青霉(Paecilomycesvariotii)菌液、指状青霉(Penicilliumdigitatum)菌液、岛青霉(Penicilliumislandicum)菌液和变紫青霉(Penicilliumpurpurascens)菌液；所述宛氏拟青霉菌液、指状青霉菌液、岛青霉菌液和变紫青霉菌液的质量比为(20～40)：(20～40)：(10～50)：(20～40)；
所述宛氏拟青霉的菌株保藏编号为CICC2442，所述指状青霉的菌株保藏编号为CICC41757，所述岛青霉的菌株保藏编号为CICC40637，所述变紫青霉的菌株保藏编号为CICC40687，所述枯草芽孢杆菌的菌株保藏编号为CICC10150。
2.权利要求1所述的菌剂在促进植物生长中的应用，其特征在于，所述植物为番茄、烟草或苜蓿。
3.一种促进植物生长的方法，其特征在于，包括以下步骤：
将权利要求1所述的菌剂与土壤混合，种植植物；所述植物为番茄、烟草或苜蓿。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述菌剂的用量为60～300kg/亩。
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GR01 Patent grant
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