CN104705347B - 一种花生慢生型根瘤菌剂，其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于花生的慢生型根瘤菌剂，其制备方法和用途。本发明进一步地涉及使用慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)、圆明慢生根瘤菌(Bradyrhizobium yuanmingense)或其组合物提高花生产量的用途。本发明根瘤菌剂，结瘤固氮性能强，能够改良土壤，增强作物抗病性、抗逆行，显著提高花生的品质和产量，属于节省氮肥的无公害微生物菌剂。

Description

一种花生慢生型根瘤菌剂，其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及一种高效固氮花生根瘤菌剂其制备方法和用途，上述根瘤菌剂中的活性成分是慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)、圆明慢生根瘤菌(Bradyrhizobium yuanmingense)或其组合物，该菌剂是一种用于花生的慢生根瘤菌剂。本发明进一步地涉及使用慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)、圆明慢生根瘤菌(Bradyrhizobium yuanmingense)或其组合物提高花生产量的用途。
背景技术
众所周知，豆科植物，在一定条件下，可直接将空气中的氮固定并转化为有机化合物。这种固定能力是由大豆根瘤菌或慢生型大豆根瘤菌细菌所产生，这些菌能与植物根茎形成根瘤。所以通过运用含有大量慢生根瘤菌菌属细菌的接种合剂对植物接种，就可获得更大的固氮能力。利用根瘤菌与豆科植物共生固氮提高土壤肥力和农作物产量是农业生产中重要的经验。
花生是一年生豆科植物，具有丰富的营养价值，富含维生素、蛋白质和脂肪，是世界上种植面积最大的油料作物，在我国各地均有种植。一般的大豆根瘤菌或大豆慢生型根瘤菌，能够增加大豆上根瘤菌的形成，提高大豆的产量。但是对花生的产量的提高并没有很好的效果。
本发明人意外地发现，将慢生型大豆慢生根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)、圆明慢生根瘤菌(Bradyrhizobium yuanmingense)菌株或其组合物使用到花生上，能够大大地提高花生的产量，由此完成了本发明。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于花生的慢生型根瘤菌剂，该慢生型根瘤菌剂的制备方法和用途。上述根瘤菌剂中的活性成分是慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)、圆明慢生根瘤菌(Bradyrhizobium yuanmingense)或 其组合物，该菌剂是一种用于花生的慢生根瘤菌剂。本发明进一步的目的是使用慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)、圆明慢生根瘤菌(Bradyrhizobium yuanmingense)或其组合物提高花生产量的用途。
本发明的慢生型根瘤菌剂，包含有效活菌数>＝4.0亿/ml的慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)、圆明慢生根瘤菌(Bradyrhizobium yuanmingense)或其组合物。慢生型大豆根瘤菌与圆明慢生根瘤菌的组合物中，上述两种根瘤菌在有效活菌数≥5.0亿/mL时可以任意体积比例混合。优选的配合体积比为1000:1～1:1000，更优选配合体积比100:1～1:100，最优选的配合体积比为1:1。在本发明的根瘤菌剂中，可以使用各种慢生型大豆根瘤菌或圆明慢生根瘤菌的菌株，优选使用慢生型大豆根瘤菌R412(Bradyrhizobium japonicum R412)，该菌株于2015年1月13日保藏于中国武汉武汉大学中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号CCTCC NO：M 2015034菌株，或圆明慢生根瘤菌R202(Bradyrhizobium yuanmingenseR202)，该菌株于2015年1月13日保藏于中国武汉武汉大学中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号CCTCC NO：M 2015035菌株。本发明的慢生型根瘤菌剂，优选包含有效活菌数>＝5.0亿/ml的慢生型根瘤菌。
本发明的花生根瘤菌剂为一种水剂剂型，其包含有效活菌数>＝4.0亿/ml的慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)、圆明慢生根瘤菌(Bradyrhizobiumyuanmingense)或其组合物，以及缓冲盐类和余量的水。本发明的花生根瘤菌剂，优选包含有效活菌数>＝5.0亿/ml的慢生型根瘤菌，以及缓冲盐类和余量的水。
本发明的根瘤菌剂，其中包含有效活菌数>＝4.0亿/ml的慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)、圆明慢生根瘤菌(Bradyrhizobium yuanmingense)或其组合物，磷酸氢二钾0.1－1重量％，硫酸镁0.05－0.5重量％，氯化钠0.05－0.5重量％，氯化铁0.05－0.3重量％，以及余量的水。上述本发明的花生根瘤菌剂，优选包含有效活菌数>＝5.0亿/ml的慢生型根瘤菌。
本发明还涉及上述慢生型根瘤菌剂的制备方法，其包含发酵培养慢生型根瘤菌，将发酵好的菌液与上述其他组分的缓冲液体混合，并在无菌的条件下分装密封。
本发明优选的慢生型根瘤菌剂的制备方法，包含以下步骤：
1、培养基培养，使用接种环将慢生型根瘤菌斜面菌种接种于液体培养基中；然后在温度25－30℃，转数180—200转/分钟的恒温摇床中培养7－9天。
2、种子罐培养，按8－12％的接种量，将菌种接种到种子罐，温度25-30℃，通气量0.2－0.8k/s，搅拌速度150－200转/分钟，培养5－7天。
3、发酵罐培养，按接种量10－20％，将种子罐中培养好的菌种接种到发酵罐中；温度28℃－30℃，通气量0.2－0.8k/s，搅拌速度150－200转/分钟，培养5－7天。
4、配制菌剂，将发酵好的菌液，与灭菌后的菌剂中包含的上述缓冲盐水溶液混合，配制成有效活菌数>＝4.0亿/ml，优选有效活菌数>＝5.0亿/ml的菌液，并分装。
根据本发明的一种优选的实施方式，所述培养基培养的液体培养基的制备方法是：将8－20份甘露醇，0.1－1.0份的磷酸氢二钾，0.05－0.5份的硫酸镁，0.05－0.5份的氯化钠，0.5－8份的酵母膏，0.05－0.3份的氯化铁，调整pH值为6.5－7.2，在温度121℃，压力0.1MPa条件下灭菌30分钟。
种子罐培养和发酵罐培养的成分为：葡萄糖1～3重量％，氯化钠0.005～0.01重量％，硫酸镁0.01～0.03重量％，磷酸氢二钾0.05～0.1重量％，酵母粉0.05～0.5重量％，氯化钙0.005～0.01重量％，余量的水。
采用常规的检验方法检测活菌的数量，一般采用显微镜检测的方法进行初步的检测，在进行平板计数法检测有效活菌数。
本发明还涉及一种慢生型根瘤菌剂的使用方法：将本发明的根瘤菌剂与花生种子一起拌种，然后阴干，在12小时内播种。应对每公斤的花生至少使用有效活菌数≥5.0亿/mL的根瘤菌菌液25mL。
本发明还涉及一种慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)、圆明慢生根瘤菌(Bradyrhizobium yuanmingense)或其组合物的用途，其特征在于将有效活菌数>＝5.0亿/ml的慢生型根瘤菌应用到花生上。本发明进一步地涉及，将上述根瘤菌与花生种子一起拌种，然后阴干，在12小时内播种，对每公斤的花生使用有效活菌≥5.0亿/mL的根瘤菌菌液20—30mL。优选对每公斤的花生使用有效活菌≥5.0亿/mL的根瘤菌菌液25mL。
本发明根瘤菌剂能够提高慢生根瘤菌在花生上的成活率，高数量的慢生根瘤菌的存活，提高了花生的固氮的能力，从而达到了提高花生产量的目的。本发明选用高活性的豆科根瘤菌株，结瘤固氮性能强，能够改良土壤，增强作物抗 病性、抗逆行，显著提高花生的品质和产量，属于节省氮肥的无公害微生物菌剂。将本发明的两种根瘤菌混合使用，即能够增加花生的固氮能力，同时还可以提高花生根系的生长，产生增效的叠加效果。
具体实施方式
结合本发明的具体内容提供以下实施例：
实施例1:慢生根瘤菌剂配制
1、培养基培养：先配制液体培养基将10克甘露醇，0.5克的磷酸氢二钾，0.2克的硫酸镁，0.2克的氯化钠，1克的酵母膏，0.1克的氯化铁，调整pH值为6.5－7.2，温度121℃、压力0.1MPa灭菌30分钟。使用接种环将慢生型根瘤菌斜面菌种接种于液体培养基中，然后在温度25－30℃，转数150—200转/分钟的恒温摇床中培养8天。
2、种子罐培养，按10％的接种量，将菌种接种到种子罐，温度25-30℃，通气量0.2－0.8k/s，搅拌速度150－200转/分钟，培养6天。
3、发酵罐培养，按接种量10％，将种子罐中培养好的菌种接种到发酵罐中；温度28℃－30℃，通气量0.2－0.8k/s，搅拌速度150－200转/分钟，培养6天。
种子罐培养和发酵罐培养的成分为：葡萄糖2重量％，氯化钠0.008重量％，硫酸镁0.02重量％，磷酸氢二钾0.07重量％，酵母粉0.2重量％，氯化钙0.008重量％，余量的水。
4、配制菌剂，将发酵好的菌液，与灭菌后的菌剂与缓冲盐水溶液混合，配制成有效活菌数5.5亿/ml的菌液，磷酸氢二钾0.5重量％，硫酸镁0.2重量％，氯化钠0.2重量％，氯化铁0.1重量％，以及余量的水根瘤菌剂。并在无菌的条件下分装。
实施例2:药效实施例
采用实施例1方法配制的药剂，有效活菌数≥5亿/ml。以25毫升/亩的使用剂量，使用到花生品种中花8号上。
本实验设7个处理，4次重复，采用完全随机区组设计。小区面积5.00米﹡6.00米＝30.00平方米。
试验处理：
处理1：常规施肥+慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)拌种，其它田间管理措施相同
处理2：常规施肥+圆明慢生根瘤菌(Bradyrhizobium yuanmingense)拌种，其它田间管理措施相同
处理3：常规施肥+慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)与圆明慢生根瘤菌(Bradyrhizobium yuanmingense)体积比1:1，其它田间管理措施相同。
处理4：常规施肥+清水，其它田间管理措施相同。
施用方法：将25毫升供试肥料与15公斤花生种混合，充分搅拌均匀后在阴凉处晾干。然后在12个小时内播种。
田间管理：该试验在当地常规施肥基础上进行，常规施肥为50％磷钾肥作基肥施入，剩下50％磷钾肥在初花期做追肥施入。
试验结果
1、不同处理对花生生物学性状的影响
该试验地施用供试肥料拌种后，对花生的生长有较大的影响，株高处理3较处理1增加4厘米，较处理2增加3厘米，较处理4增加5厘米；单株有效荚果处理3较处理1增加2个，较处理2增加2个，较处理4增加3个；百粒重处理3较处理1增加2.2克，较处理2增加1.39克，较处理4增加4.23。调查结果见表1.
表1 花生生物学性状调查
处理 株高(厘米) 单株有效荚果(个) 百粒重(克)
1 33 13 32.25
2 34 13 33.06
3 37 15 34.45
4 32 12 30.22
2、不同处理对花生产量及产值的影响
试验田不同处理对花生产量的影响调查见表2
表2小区产量统计表(产量单位：千克)
由上表可以看出，处理3比处理1亩增产38.7公斤，增产率18％；处理3比处理2亩增产37.4公斤，增产率17％；处里3比处理4亩增产40.1公斤，增产率19％。试验地花生在常规施肥的基础上施用本发明的混合根瘤菌剂拌种比常规施肥的基础上用本发明大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)单剂亩增产38.7公斤，增产率18％，增产效果极显著；比使用本发明花生根瘤菌(Bradyrhizobium yuanmingense)单剂亩增产37.4公斤，增产率17％，增产效果极显著；比使用清水拌种对照亩增产40.1公斤，增产率19％，增产效果极显著。

Claims (9)

1.一种慢生型根瘤菌剂，其中包含有效活菌数>＝5.0亿/ml的慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)和圆明慢生根瘤菌(Bradyrhizobium yuanmingense)的组合物，磷酸氢二钾0.1－1重量％，硫酸镁0.05－0.5重量％，氯化钠0.05－0.5重量％，氯化铁0.05－0.3重量％，以及余量的水，其中慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)与圆明慢生根瘤菌(Bradyrhizobium yuanmingense)的配合体积比为100：1～1：100。
2.根据权利要求1的根瘤菌剂，其中慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)与圆明慢生根瘤菌的配合体积比为1：1。
3.根据权利要求1或2的慢生型根瘤菌剂的制备方法，其特征在于发酵培养慢生型根瘤菌，将发酵好的菌液与磷酸氢二钾0.1－1重量％，硫酸镁0.05－0.5重量％，氯化钠0.05－0.5重量％，氯化铁0.05－0.3重量％，以及余量的水混合，并在无菌的条件下分装密封。
4.根据权利要求3的制备方法，其特征在于：
1)、培养基培养，使用接种环将慢生型根瘤菌斜面菌种接种于液体培养基中；然后在温度25－30℃，转数180—200转/分钟的恒温摇床中培养7－9天；
2)、种子罐培养，按8－12％的接种量，将菌种接种到种子罐，温度25-30℃，通气量0.2－0.8k/s，搅拌速度150－200转/分钟，培养5－7天；
3)、发酵罐培养，按接种量10－20％，将种子罐中培养好的菌种接种到发酵罐中；温度28℃－30℃，通气量0.2－0.8k/s，搅拌速度150－200转/分钟，培养5－7天；
4)、配制菌剂，将发酵好的菌液，与灭菌后的菌剂中包含的上述缓冲盐水溶液混合，配制成有效活菌数>＝5.0亿/ml菌液，并在无菌的条件下分装。
5.根据权利要求1或2的慢生型根瘤菌剂的使用方法，其特征在于将根瘤菌剂与花生种子一起拌种，然后阴干，在12小时内播种。
6.根据权利要求5的使用方法，其特征在于对每公斤的花生使用有效活菌≥5.0亿/mL的根瘤菌菌液20—30mL。
7.根据权利要求1或2的一种慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)和圆明慢生根瘤菌 (Bradyrhizobium yuanmingense)的组合物的用途，其特征在于将有效活菌数>＝5.0亿/ml的慢生型根瘤菌应用到花生上。
8.根据权利要求7的用途，其特征在于将上述根瘤菌与花生种子一起拌种，然后阴干，在12小时内播种，对每公斤的花生使用有效活菌≥5.0亿/mL的根瘤菌菌液20—30mL。
9.根据权利要求8的用途，其特征在于对每公斤的花生使用有效活菌≥5.0亿/mL的根瘤菌菌液25mL。
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